專(zhuān)利名稱(chēng)：基于適體-金納米-酶復(fù)合物的凝血酶電化學(xué)傳感器檢測(cè)法的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及基于適配體-金納米粒子-辣根過(guò)氧化物酶信號(hào)放大的電化學(xué)技術(shù)測(cè)定凝血酶的方法，屬于分析化學(xué)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
近年來(lái)，蛋白質(zhì)的檢測(cè)在疾病診斷、基礎(chǔ)研究等諸多生物領(lǐng)域引起了廣泛關(guān)注。在眾多蛋白質(zhì)檢測(cè)中，傳統(tǒng)的技術(shù)都是通過(guò)抗體來(lái)識(shí)別蛋白質(zhì)的。然而，以適配體為識(shí)別元件的新型識(shí)別技術(shù)正在不斷地發(fā)展研究中。適配體，是一類(lèi)通過(guò)指數(shù)富集配基系統(tǒng)進(jìn)技術(shù)篩選得到的具有3-D結(jié)構(gòu)的特殊序列的寡聚核苷酸片段，可以是RNA，也可以是DNA。目前，用該技術(shù)所篩選出的適配體能特異性識(shí)別不同的目標(biāo)物，主要包括離子、有機(jī)小分子、縮氨酸、蛋白質(zhì)以及完整的細(xì)胞等。與抗體相比，適配體具有化學(xué)穩(wěn)定性好、易于化學(xué)修飾、高度親和力和易儲(chǔ)存等優(yōu)點(diǎn)?；谶m配體技術(shù)檢測(cè)蛋白質(zhì)的方法已經(jīng)研究了很多，如比色法，熒光法，石英晶體微天平，化學(xué)發(fā)光，SPR，試劑條和電化學(xué)檢測(cè)等。在這些技術(shù)中，電化學(xué)方法由于它的靈敏度高，儀器簡(jiǎn)單，成本低，響應(yīng)快，可攜帶以及便宜等特點(diǎn)而備受關(guān)注。臨床檢測(cè)中，病人體內(nèi)的關(guān)鍵蛋白質(zhì)的濃度往往很低，為實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)的超靈敏檢測(cè)，發(fā)展新的具有信號(hào)放大作用的檢測(cè)方法很有必要。目前，電化學(xué)適配體傳感器中有很多基于標(biāo)記的方法而使信號(hào)放大。(1)電活性物質(zhì)直接標(biāo)記在生物分子上作為電化學(xué)標(biāo)簽來(lái)放大電化學(xué)響應(yīng)(如二茂鐵、亞甲基藍(lán))。(2)納米材料也可用作電活性物質(zhì)標(biāo)記來(lái)放大生物分子的檢測(cè)信號(hào)(包括金屬納米粒子和半導(dǎo)體納米晶等)。(3)酶作為電活性標(biāo)記，通過(guò)酶的催化反應(yīng)來(lái)放大信號(hào)。然而，在正常情況下，血液中不存在凝血酶，但當(dāng)在血液凝固過(guò)程中凝血酶的濃度能達(dá)到低微摩爾，故在止血初期產(chǎn)生的低水平的凝血酶(低至納摩爾) 在整個(gè)過(guò)程中都起著非常重要的作用。而上述所介紹的蛋白質(zhì)檢測(cè)方法的靈敏度都還未達(dá)到納摩爾和皮摩爾水平。因此，迫切需要滿(mǎn)足生物分子電化學(xué)檢測(cè)的高靈敏度的新方案。目前，電活性和光活性分子標(biāo)記的納米粒子已成功用于提高生物分析的靈敏度， 在這些納米材料中，金納米粒子由于具有極好的電子傳遞能力，大的比表面積以及對(duì)生物分子有強(qiáng)的吸附能力，同時(shí)具有良好的生物相容性，而受到廣泛的關(guān)注。很多光或電活性分子如二茂鐵、亞甲基藍(lán)和酶能夠固定在金納米粒子上從而起到信號(hào)放大的作用。另外，磁性納米粒子在生物分析領(lǐng)域也有廣泛的應(yīng)用。如金包!^e3O4磁性納米粒子它既可以用作固相載體，體系分離，也可以富集樣品，為構(gòu)造靈敏的傳感器提供了前景。另外，它可以通過(guò)外部的磁場(chǎng)被固定在電極表面，能夠很大程度地簡(jiǎn)化分析過(guò)程。

發(fā)明內(nèi)容
基于金納米粒子具有大的比表面積、強(qiáng)的吸附能力和很好的生物相容性以及辣根過(guò)氧化物酶良好的催化性能，本發(fā)明提供了一種基于適配體-金納米粒子-辣根過(guò)氧化物酶信號(hào)放大的電化學(xué)技術(shù)測(cè)定凝血酶的方法。
本發(fā)明的目的是提供基于適配體-金納米粒子-辣根過(guò)氧化物酶信號(hào)放大的電化學(xué)技術(shù)測(cè)定凝血酶的方法。該方法可用于凝血酶的靈敏、特異性檢測(cè)，從0. Inmol · L—1到 60pmol · L—1濃度范圍內(nèi)對(duì)凝血酶檢測(cè)呈現(xiàn)良好的線(xiàn)性響應(yīng)，檢測(cè)限為30fmol · Γ1。圖1為基于適配體-金納米粒子-辣根過(guò)氧化物酶信號(hào)放大的電化學(xué)技術(shù)測(cè)定凝血酶的示意圖。從圖1可知，適配體I固定在磁性納米粒子上作為捕獲探針，金納米粒子作為載體負(fù)載大量的辣根過(guò)氧化物酶及固定適配體II (A)。當(dāng)凝血酶存在時(shí)，兩段適配體與凝血酶結(jié)合形成三明治結(jié)構(gòu)復(fù)合物；通過(guò)磁性分離將得到的三明治結(jié)構(gòu)復(fù)合物富集至電極表面，用差分脈沖伏安法檢測(cè)電極表面辣根過(guò)氧化物酶的催化信號(hào)，可對(duì)凝血酶進(jìn)行靈敏檢測(cè)(B)。相反，當(dāng)不存在凝血酶時(shí)，適配體-金納米粒子-辣根過(guò)氧化物酶復(fù)合物就不會(huì)連接到磁性納米粒子上，從而不能被分離，故不會(huì)產(chǎn)生電化學(xué)信號(hào)。這樣，根據(jù)電化學(xué)信號(hào)實(shí)現(xiàn)對(duì)凝血酶的高靈敏檢測(cè)。利用電化學(xué)技術(shù)檢測(cè)凝血酶的步驟如下(1)參考文獻(xiàn)方法合成金包磁性納米粒子并固定凝血酶適配體I捕獲探針。此適配體I的序列為5' SH-(CH2)6-GGTTGGTGT GGTTGG。取50 μ L金包磁性納米粒子懸浮液， 用三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖溶液(ρΗ 7. 4，包含IOOmmol · L—1氯化鈉，5mmol · L—1氯化鉀，Immol · L—1氯化鎂，5mmol · L—1氯化鈣)洗三次，再重新分散到495 μ L三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖溶液中超聲30min。5 μ L巰基修飾的適配體I (100 μ mol · Γ1)加入到其中， 室溫下溫和攪拌池。磁性分離，再用三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖溶液洗三次，除去未反應(yīng)的適配體I。然后將固定有適配體I的金包磁性納米粒子分散到500 μ Llmmol -L"1的6-巰基己醇中封閉40min，磁性分離用三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖溶液洗三次后得到的納米粒子分散到500 μ L三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖溶液中，保存于4°C低溫下。(2)參考文獻(xiàn)方法合成金納米粒子并制備適配體-金納米粒子-辣根過(guò)氧化物酶檢測(cè)探針。此適配體 II 的序列為 5' SH-(CH2)6-(T)^lAGTCCGTGGTAGGGCAGGTTGGGGTGACTt5 首先，將5 μ L(100 μ mol -L"1)帶巰基的適配體II溶解于500 μ L的5倍濃度的金納米粒子溶液中，4°C下靜置Mh，使適配體II中巰基與金納米粒子充分自組裝。然后，將適配體II 探針標(biāo)記的金納米粒子溶液在12000轉(zhuǎn)速離心分離20min，離心分離后棄去上層清液，用三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖溶液洗滌沉淀并重新分散到三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖溶液中，再離心分離，以除去未反應(yīng)的過(guò)量適配體II，所制得的適配體II探針標(biāo)記的金納米粒子再次分散到ImL三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖溶液中，向其中加入50 μ L辣根過(guò)氧化物酶(lmgmr1)反應(yīng)lh，再將混合物12000轉(zhuǎn)離心分離15min，取出上層清液，紅色沉淀用包含2%牛血清白蛋白的三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖溶液洗滌，再離心分離，以除去未反應(yīng)的辣根過(guò)氧化物酶，所得的適配體II-金納米粒子-辣根過(guò)氧化物酶復(fù)合物分散到包含2% 牛血清白蛋白的三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖溶液中，保存于4°C低溫下。(3)取30 μ L固定有適配體I的金包磁性納米粒子懸浮液于離心管中，各加入 50 μ L不同濃度的凝血酶溶液，再加入20 μ L適配體II-金納米粒子-辣根過(guò)氧化物酶探針溶液，用三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖溶液調(diào)整到200 μ L，在4°C下培育反應(yīng)30min。凝血酶蛋白與適配體I和適配體II特異性結(jié)合形成[金包磁性納米粒子-適配體I] /凝血酶/ [適配體II-金納米粒子-辣根過(guò)氧化物酶]三明治結(jié)構(gòu)。然后，磁性分離沉淀，用200 μ L 三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖溶液洗滌三次，以除去未與凝血酶結(jié)合的適配體II-金納米粒子-辣根過(guò)氧化物酶探針，再分散到100 μ L含有2 %牛血清白蛋白的三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖溶液中。(4)取30 μ L[金包磁性納米粒子-適配體I]/凝血酶/[適配體II-金納米粒子-辣根過(guò)氧化物酶]三明治結(jié)構(gòu)的懸浮液滴到處理好的金電極表面，電極后面置放磁鐵以將三明治結(jié)構(gòu)的磁性復(fù)合物固定到金電極上，再將其插入到對(duì)苯二酚Ommol · Γ1)和雙氧水(1.5mm0l · L—1)的底物溶液中，插入?yún)⒈入姌O和對(duì)電極。5min后采用差示脈沖伏安法掃描(電位范圍:0. IV -0. 3V(vs. SCE)，振幅0. 05V，脈沖寬度0. 05s)。利用本發(fā)明的電化學(xué)方法對(duì)凝血酶檢測(cè)的表征如圖2所示。從圖2數(shù)據(jù)可以看出，本發(fā)明提供的方法對(duì)凝血酶有很好的電化學(xué)響應(yīng)，該方法對(duì)凝血酶的檢出限為30fmol · L—1，線(xiàn)性范圍為0. Inmol · Γ1到60pmol · Γ1。為考察該方法的特異性，按步驟如下進(jìn)行了對(duì)比試驗(yàn)同樣的實(shí)驗(yàn)條件下用四種其他蛋白質(zhì)(人血清蛋白、溶菌酶、纖維原蛋白、免疫球蛋白G)來(lái)替代凝血酶作用后測(cè)定它的電化學(xué)響應(yīng)，以及四種蛋白質(zhì)分別與凝血酶共存時(shí)的電化學(xué)響應(yīng)。利用本發(fā)明的電化學(xué)方法對(duì)凝血酶檢測(cè)的特異性如圖3所示。從圖3數(shù)據(jù)可以看出，其它蛋白對(duì)該方法檢測(cè)凝血酶沒(méi)有干擾，這證明該方法對(duì)凝血酶檢測(cè)有好的特異性。本發(fā)明的有益效果本發(fā)明利用金納米粒子和辣根過(guò)氧化物酶，實(shí)現(xiàn)了信號(hào)放大。該方法具有如下優(yōu)勢(shì)1)金納米粒子具有大的比表面積、強(qiáng)的吸附生物分子的性能和很好的生物相容性，可以吸附大量的信號(hào)分子辣根過(guò)氧化物酶并保持其高活性；2)磁性納米粒子作為載體既有好的分離效果，又有富集作用；3)電化學(xué)方法具有快速、便捷、靈敏等優(yōu)勢(shì)。


圖1為利用適配體-金納米粒子-辣根過(guò)氧化物酶信號(hào)放大的電化學(xué)技術(shù)測(cè)定凝血酶的示意圖。圖2為電流與凝血酶濃度的關(guān)系圖。凝血酶的濃度從a到j(luò)依次為0，0. 1，1,5, 15，20，25，30，40，60pmol .Γ1，底物溶液為包含 2mmol · L—1 對(duì)苯二酚、1. 5mmol .171 雙氧水和0. Imol · L4PH = 7.0的磷酸鹽緩沖溶液。圖3為該傳感器的特異性圖。a，b，c，d，e分別為Ιμπιο 人血清蛋白、 1 μ mol · Γ1溶菌酶、Ιμ ο · Γ1纖維原蛋白、Ιμ ο · L-1IgG^Opmol · Γ1凝血酶，灰色為這些蛋白單純存在時(shí)的電流響應(yīng)，黑色代表這些蛋白分別與凝血酶共存時(shí)的電流響應(yīng)。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1利用基于適配體-金納米粒子-辣根過(guò)氧化物酶復(fù)合物信號(hào)放大的電化學(xué)方法檢測(cè)凝血酶的步驟如下(1)合成金包磁性納米粒子并固定凝血酶適配體I捕獲探針(此適配體I的序列為5' SH-(CH2)6-GGTTGGTGT GGTTGG)。取50 μ L金包磁性納米粒子懸浮液，用三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖溶液(pH 7. 4，包含IOOmmol · L-1氯化鈉，5mmol · L-1氯化鉀，Immol · L-1 氯化鎂，5mmol 氯化鈣)洗三次，再重新分散到495 μ L三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖溶液中超聲30min。5 μ L巰基修飾的適配體I (100 μ mol · Γ1)加入到其中，室溫下溫和攪拌池。磁性分離，再用三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖溶液洗三次，除去未反應(yīng)的適配體I。 然后將固定有適配體I的金包磁性納米粒子分散到500 μ Llmmol · Γ1的6-巰基己醇中封閉40min，磁性分離用三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖溶液洗三次后得到的納米粒子分散到 500 μ L三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖溶液中，保存于4°C低溫下。(2)合成金納米粒子并制備適配體-金納米粒子-辣根過(guò)氧化物酶檢測(cè)探針 (此適配體 ii 的序列為 5 ‘ sh-(ch2)6- (t)20agtccgtggtagggcaggttggggtgact)。首先，將 5 μ L(100 μ mol · Γ1)帶巰基的適配體II溶解于500 μ L的5倍濃度的金納米粒子溶液中， 4°C下靜置Mh，使適配體II中巰基與金納米粒子充分自組裝。然后，將適配體II探針標(biāo)記的金納米粒子溶液在12000轉(zhuǎn)速離心分離20min，離心分離后棄去上層清液，用三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖溶液洗滌沉淀并重新分散到三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖溶液中， 再離心分離，以除去未反應(yīng)的過(guò)量適配體ii，所制得的適配體ii探針標(biāo)記的金納米粒子再次分散到ImL三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖溶液中，向其中加入50 μ L辣根過(guò)氧化物酶 (lmg -mr1)反應(yīng)lh，再將混合物12000轉(zhuǎn)離心分離15min，取出上層清液，紅色沉淀用包含 2%牛血清白蛋白的三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖溶液洗滌，再離心分離，以除去未反應(yīng)的辣根過(guò)氧化物酶，所得的適配體II-金納米粒子-辣根過(guò)氧化物酶復(fù)合物分散到包含2%牛血清白蛋白的三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖溶液中，保存于4°C低溫下。(3)取30 μ L固定有適配體I的金包磁性納米粒子懸浮液于離心管中，各加入 50 μ L不同濃度的凝血酶溶液，再加入20 μ L適配體II-金納米粒子-辣根過(guò)氧化物酶探針溶液，用三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖溶液調(diào)整到200 μ L，在4°C下培育反應(yīng)30min。凝血酶蛋白與適配體I和適配體II特異性結(jié)合形成[金包磁性納米粒子-適配體I] /凝血酶/ [適配體II-金納米粒子-辣根過(guò)氧化物酶]三明治結(jié)構(gòu)。然后，磁性分離沉淀，用200 μ L 三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖溶液洗滌三次，以除去未與凝血酶結(jié)合的適配體II-金納米粒子-辣根過(guò)氧化物酶探針，再分散到100 μ L含有2 %牛血清白蛋白的三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖溶液中。(4)取30 μ L[金包磁性納米粒子-適配體I]/凝血酶/[適配體II-金納米粒子-辣根過(guò)氧化物酶]三明治結(jié)構(gòu)的懸浮液滴到處理好的金電極表面，電極后面置放磁鐵以將三明治結(jié)構(gòu)的磁性復(fù)合物固定到金電極上，再將其插入到對(duì)苯二酚Ommol · Γ1)和雙氧水(1.5mm0l · L—1)的底物溶液中，插入?yún)⒈入姌O和對(duì)電極。5min后采用差示脈沖伏安法掃描(電位范圍:0. IV -0. 3V(vs. SCE)，振幅0. 05V，脈沖寬度0. 05s)。實(shí)施例2同樣的實(shí)驗(yàn)條件下用四種其他蛋白質(zhì)(人血清蛋白、溶菌酶、纖維原蛋白、免疫球 g)來(lái)替代凝血酶作用后測(cè)定它的電化學(xué)響應(yīng)，以及四種蛋白質(zhì)分別與凝血酶共存時(shí)的電化學(xué)響應(yīng)。
權(quán)利要求
1.首先參考文獻(xiàn)(Lyon,J. L. , Fleming, D. Α. , Stone, Μ. B. , et al. Synthesis of Fe Oxide Core/Au Shell Nanoparticles by Iterative Hydroxylamine Seeding. Nano Letters, 2004,4 (4) :719-723)的方法合成金包磁性納米粒子，然后將凝血酶適配體I捕獲探針(此適配體I的序列為5' SH-(CH2)6-GGTTGG T GTGGTTGG)固定在金包磁性納米粒子上。具體做法是取50yL金包磁性納米粒子懸浮液，用三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖溶液 (pH 7. 4，包含 IOOmmol · Γ1 氯化鈉，5mmol · Γ1 氯化鉀，Immol · Γ1 氯化鎂，5mmol · Γ1 氯化鈣)洗三次，再重新分散到495yL三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖溶液中超聲30min。5yL 巰基修飾的適配體I (100 μ mol · Γ1)加入到其中，室溫下溫和攪拌濁。磁性分離，再用三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖溶液洗三次，除去未反應(yīng)的適配體I。然后將固定有適配體I的金包磁性納米粒子分散到500 μ L Immol · L—1的6-巰基己醇中封閉40min，磁性分離用三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖溶液洗三次后得到的納米粒子分散到500 μ L三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖溶液中，保存于4°C低溫下。
2.# # # i； K (Storhoff, J. J. ， Elghanian, R. ， Mucic, R. C. ， et al. One-Pot Colorimetric Differentiation of Polynucleotides with Single Base Imperfections Using Gold Nanoparticle Probes. Journal of the American Chemical Society,1998, 120(9) :1959-1964.)的方法合成金納米粒子，然后用該金納米粒子進(jìn)一步制備適配體-金納米粒子-辣根過(guò)氧化物酶檢測(cè)探針(此適配體II的序列為5' SH-(CH2)6-(T)20AGTCCGT GGTAGGGCAGGTTGGGGTGA CT)。具體做法是首先，將5 μ L (100 μ mol ·廠1)帶巰基的適配體 II溶解于500 μ L的5倍濃度的金納米粒子溶液中，4°C下靜置Mh，使適配體II中巰基與金納米粒子充分自組裝。然后，將適配體II探針標(biāo)記的金納米粒子溶液在12000轉(zhuǎn)速離心分離20min，離心分離后棄去上層清液，用三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖溶液洗滌沉淀并重新分散到三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖溶液中，再離心分離，以除去未反應(yīng)的過(guò)量適配體II， 所制得的適配體II探針標(biāo)記的金納米粒子再次分散到ImL三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖溶液中，向其中加入50 μ L辣根過(guò)氧化物酶(Img · πιΓ1)反應(yīng)lh，再將混合物12000轉(zhuǎn)離心分離15min，取出上層清液，紅色沉淀用包含2%牛血清白蛋白的三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖溶液洗滌，再離心分離，以除去未反應(yīng)的辣根過(guò)氧化物酶，所得的適配體II-金納米粒子-辣根過(guò)氧化物酶復(fù)合物分散到包含2%牛血清白蛋白的三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖溶液中，保存于4°C低溫下。
3.凝血酶?jìng)鞲衅鞯臉?gòu)建取30μ L固定有適配體I的金包磁性納米粒子懸浮液于離心管中，各加入50 μ L不同濃度的凝血酶溶液，再加入20 μ L適配體II-金納米粒子-辣根過(guò)氧化物酶探針溶液，用三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖溶液調(diào)整到200 μ L，在4°C下培育反應(yīng) 30min。凝血酶蛋白與適配體I和適配體II特異性結(jié)合形成[金包磁性納米粒子_適配體 I]/凝血酶/[適配體II-金納米粒子-辣根過(guò)氧化物酶]三明治結(jié)構(gòu)。然后，磁性分離沉淀，用200 μ L三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖溶液洗滌三次，以除去未與凝血酶結(jié)合的適配體II-金納米粒子-辣根過(guò)氧化物酶探針，再分散到100 μ L含有2%牛血清白蛋白的三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖溶液中。
4.電化學(xué)檢測(cè)取30μ L[金包磁性納米粒子-適配體I]/凝血酶/[適配體II-金納米粒子-辣根過(guò)氧化物酶]三明治結(jié)構(gòu)的懸浮液滴到處理好的金電極表面，電極后面置放磁鐵以將三明治結(jié)構(gòu)的磁性復(fù)合物固定到金電極上，再將其插入到對(duì)苯二酚Ommol · Γ1)和雙氧水(1.5mm0l · L—1)的底物溶液中，插入?yún)⒈入姌O和對(duì)電極。5min后采用差示脈沖伏安法掃描(電位范圍:0. IV -0. 3V(vs. SCE)，振幅0. 05V，脈沖寬度0. 05s)。
全文摘要
本發(fā)明涉及基于適配體-金納米粒子-辣根過(guò)氧化物酶復(fù)合物信號(hào)放大的電化學(xué)適配體傳感器檢測(cè)凝血酶的方法，屬于分析化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。凝血酶的適配體I固定在金包磁性納米粒子上作為捕獲探針，適配體II用金納米粒子和辣根過(guò)氧化物酶雙標(biāo)記形成[適配體-金納米粒子-辣根過(guò)氧化物酶]復(fù)合物作為檢測(cè)探針。二者與凝血酶結(jié)合形成[金包磁性納米粒子-適配體I]/凝血酶/[適配體II-金納米粒子-辣根過(guò)氧化物酶]三明治結(jié)構(gòu)。將三明治結(jié)構(gòu)固定到電極表面，通過(guò)酶的催化反應(yīng)來(lái)檢測(cè)凝血酶。本方法操作簡(jiǎn)單，響應(yīng)快，靈敏度高，特異性強(qiáng)，對(duì)于凝血酶的檢出限為30fmol·L-1，線(xiàn)性范圍為0.1-60pmol·L-1。
文檔編號(hào)C12Q1/28GK102352311SQ20111017186
公開(kāi)日2012年2月15日 申請(qǐng)日期2011年6月24日 優(yōu)先權(quán)日2011年6月24日
發(fā)明者劉美玲, 張友玉, 曾躍, 趙潔 申請(qǐng)人:湖南師范大學(xué)