專利名稱：一種以豆餅粉為主要原料生產(chǎn)枯草芽孢桿菌菌劑的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于工業(yè)微生物發(fā)酵工程技術(shù)領(lǐng)域，具體地說(shuō)涉及一種枯草芽孢桿菌菌劑的生產(chǎn)方法。
背景技術(shù)：
近年來(lái)，養(yǎng)殖業(yè)飛速發(fā)展，抗生素及其它化學(xué)藥物在集約化大規(guī)模生產(chǎn)過程中的大量使用，雖然達(dá)到了增產(chǎn)與抗病目的，但抗生素的長(zhǎng)期濫用不僅引起了病原菌的抗藥性， 而且抗生素殘留直接威脅著人類的健康?？股貧埩粢殉蔀槲覈?guó)多種養(yǎng)殖產(chǎn)品的國(guó)際貿(mào)易壁壘，使我國(guó)出口企業(yè)蒙受巨大的經(jīng)濟(jì)損失。近年來(lái)國(guó)家采取嚴(yán)厲的手段，嚴(yán)格限制抗生素或禁止某些抗生素的使用，并積極尋求其替代品?？股靥娲?如微生態(tài)制劑、寡糖、抗菌肽等)的研制成為各國(guó)學(xué)者的研究熱點(diǎn)。微生態(tài)制劑很早就開始使用，二十世紀(jì)以來(lái)在世界各地得到迅速發(fā)展，到80年代初已有多種微生態(tài)制品投放市場(chǎng)，而且數(shù)量和品種不斷擴(kuò)大。同一時(shí)期我國(guó)研制成功的芽孢桿菌類、乳酸菌類和酵母菌類的獸用微生態(tài)制劑，作為飼料添加劑被廣泛使用?？莶菅挎邨U菌是一種好氧菌，除了能產(chǎn)生蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶等，還可以分泌抗菌素，是我國(guó)農(nóng)業(yè)部允許可以作為飼料級(jí)微生態(tài)添加劑的兩種芽孢桿菌之一，其已被越來(lái)越多地研制成飼用微生態(tài)制劑。除此之外，枯草芽孢桿菌更作為一種重要的工業(yè)菌種已經(jīng)被廣泛的使用于畜牧業(yè)、醫(yī)藥工業(yè)、植物病害防治以及環(huán)境保護(hù)等領(lǐng)域，故具有廣泛的發(fā)展前景，顯示出巨大的社會(huì)效益和生態(tài)效益。目前，生產(chǎn)枯草芽孢桿菌菌劑均以淀粉、玉米粉等糧食作物為主要原料，經(jīng)過發(fā)酵過程生產(chǎn)出微生態(tài)制劑。在專利一種地衣芽孢桿菌菌株及其所產(chǎn)生的細(xì)菌素的用途 (CN200510061554. 3)中，生產(chǎn)細(xì)菌素的培養(yǎng)基為L(zhǎng)B培養(yǎng)基，其主要成分是價(jià)格昂貴的蛋白胨和酵母提取物。但是，近年來(lái)，由于糧食作物價(jià)格不斷上升，導(dǎo)致發(fā)酵產(chǎn)品成本上漲。本申請(qǐng)發(fā)明人通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)農(nóng)副產(chǎn)品豆餅粉對(duì)生產(chǎn)微生態(tài)制劑的各種桿菌和霉菌有促進(jìn)生長(zhǎng)作用，用作生產(chǎn)原料，可大大減少淀粉、葡萄糖、玉米粉、酵母提取物/酵母浸膏、蛋白胨等糧食的用量，使其生產(chǎn)成本降低。

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)以上技術(shù)中原料成本過高的不足之處，本發(fā)明的目的在于采用廉價(jià)的豆餅粉為主要發(fā)酵原料生產(chǎn)枯草芽孢桿菌菌劑，使本方法不但保持了上述技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)，而且使生產(chǎn)成本大幅度下降?！N采用豆餅粉為主要發(fā)酵原料生產(chǎn)枯草芽孢桿菌菌劑的方法，其特征在于發(fā)酵過程包括以下步驟1、以豆餅粉為主要原料制成培養(yǎng)基溶液；2、將枯草芽孢桿菌菌種接入所說(shuō)的培養(yǎng)基溶液中培養(yǎng)；其特征在于所說(shuō)的培養(yǎng)基溶液中還包括葡萄糖和氯化銨。
本發(fā)明所采用的技術(shù)方案為把傳統(tǒng)的發(fā)酵培養(yǎng)基(LB培養(yǎng)基)更改為以豆餅粉為主要原料添加適量的葡萄糖和氯化銨，多次分批發(fā)酵實(shí)驗(yàn)證明，該發(fā)酵液中的活菌數(shù)平均為3. 68億cfu/ml，與LB培養(yǎng)基中的活菌數(shù)平均數(shù)3. 8億cfu/ml相差不大，而且菌體生長(zhǎng)狀態(tài)一致。本發(fā)明培養(yǎng)基中各組分的重量百分含量分別為豆餅粉2-4%葡萄糖0.1-0. 5%氯化銨0.05-0. 15%余量為水實(shí)驗(yàn)證明，發(fā)酵培養(yǎng)基(即豆餅粉2-4 % ；葡萄糖0. 1-0. 5 % ；氯化銨 0. 05-0.15% ；余量為水)中各組分的改變對(duì)發(fā)酵水平影響不大，且菌體粗壯整齊，使5L發(fā)酵罐的發(fā)酵水平達(dá)到平均3. 75億cfu/ml的水平，在產(chǎn)品質(zhì)量不變的情況下，大大降低了生產(chǎn)成本。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例一采用如下配比的(以重量計(jì))培養(yǎng)基豆餅粉2%葡萄糖0.1%氯化銨0.05%余量為水培養(yǎng)條件溫度為^°C，pH為7.0-7. 5，攪拌速度為150_180rpm，通氣量為2L/ min，發(fā)酵周期為36小時(shí)，在5L的發(fā)酵罐中發(fā)酵，采用平板稀釋法測(cè)定活菌數(shù)，重復(fù)三次取平均值，活菌數(shù)可達(dá)3. 68億cfu/ml，而LB培養(yǎng)基的活菌數(shù)為3. 75億cfu/ml，而且菌體生長(zhǎng)狀態(tài)一致，大小均勻，粗壯整齊。實(shí)施例二采用如下配比的(以重量計(jì))培養(yǎng)基豆餅粉4%葡萄糖0.5%氯化銨0.15%余量為水培養(yǎng)條件溫度為^°C，pH為7.0-7. 5，攪拌速度為150_180rpm，通氣量為2L/ min，發(fā)酵周期為36小時(shí)，在5L的發(fā)酵罐中發(fā)酵，采用平板稀釋法測(cè)定活菌數(shù)，重復(fù)三次取平均值，活菌數(shù)可達(dá)3. 7億cfu/ml，而LB培養(yǎng)基的活菌數(shù)為3. 8億cfu/ml，而且菌體生長(zhǎng)狀態(tài)一致，大小均勻，粗壯整齊。實(shí)施例三采用如下配比的(以重量計(jì))培養(yǎng)基豆餅粉3%葡萄糖0.3%
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氯化銨0. 1 %余量為水培養(yǎng)條件溫度為^°C，pH為7.0-7. 5，攪拌速度為150_180rpm，通氣量為2L/ min，發(fā)酵周期為36小時(shí)，在5L的發(fā)酵罐中發(fā)酵，采用平板稀釋法測(cè)定活菌數(shù)，重復(fù)三次取平均值，活菌數(shù)可達(dá)3. 75億cfu/ml，而LB培養(yǎng)基的活菌數(shù)為3. 82億cfu/ml，而且菌體生長(zhǎng)狀態(tài)一致，大小均勻，粗壯整齊。
權(quán)利要求
1.一種以豆餅粉為主要原料生產(chǎn)枯草芽孢桿菌菌劑的方法，其特征在于包括以下步驟1)以豆餅粉為主要原料制成培養(yǎng)基溶液；2)將枯草芽孢桿菌菌種接入所述的培養(yǎng)基溶液中培養(yǎng)，其特征在于所述的培養(yǎng)基溶液中同時(shí)需要加入葡萄糖和氯化銨。
2.如權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)基，其特征在于，以重量百分比計(jì)，該培養(yǎng)基中各組分的重量百分含量為豆餅粉2-4% ；葡萄糖0. 1-0. 5% ；氯化銨0. 05-0. 15% ；余量為水。
3.如權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)基，其特征在于，以重量百分比計(jì)，豆餅粉的含量最好是 3% ；葡萄糖的含量最好0.3% ；氯化銨的含量最好0. 1% ；余量為水。
全文摘要
本發(fā)明屬于工業(yè)微生物，發(fā)酵工程技術(shù)領(lǐng)域。具體涉及一種以豆餅粉為主要原料生產(chǎn)枯草芽孢桿菌菌劑的發(fā)酵培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基中各組分的重量百分含量為豆餅粉2-4％；葡萄糖0.1-0.5％；氯化銨0.05-0.15％；余量為水。本發(fā)明培養(yǎng)基能夠促進(jìn)枯草芽孢桿菌在生長(zhǎng)期的大量繁殖，使菌體粗壯整齊，保持產(chǎn)品質(zhì)量不變的情況下，降低了生產(chǎn)成本。
文檔編號(hào)C12N1/20GK102250791SQ20111016140
公開日2011年11月23日 申請(qǐng)日期2011年5月28日 優(yōu)先權(quán)日2011年5月28日
發(fā)明者李俊峰, 李峰, 李紅芳, 渠慶忠 申請(qǐng)人:中國(guó)煙草山東進(jìn)出口有限責(zé)任公司, 青島科技大學(xué)