專利名稱：一種hfe基因多態(tài)性檢測特異性引物和液相芯片的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于分子生物學(xué)領(lǐng)域，涉及醫(yī)學(xué)和生物技術(shù)，具體的是涉及一種HFE基因多態(tài)性檢測特異性引物和液相芯片。
背景技術(shù)：
遺傳性血色素沉著癥(hereditary hemochromatosis,HH)是一種由于HFE基因突變造成的鐵負(fù)荷過量，是人體先天性對鐵代謝的破壞。HFE分子通過與轉(zhuǎn)鐵蛋白受體反應(yīng)影響轉(zhuǎn)鐵蛋白與轉(zhuǎn)鐵蛋白受體間的相互作用，從而調(diào)節(jié)體內(nèi)鐵平衡。遺傳性血鐵沉著癥因 HFE基因發(fā)生突變，將導(dǎo)致HFE蛋白異常，無法調(diào)控吸收鐵的蛋白?；颊呦牢砧F質(zhì)的調(diào)控機(jī)制失調(diào)，蓄積于肝臟，心臟，胰臟，關(guān)節(jié)等器官，而出現(xiàn)組織病變，大量吸收鐵質(zhì)，造成體內(nèi)鐵質(zhì)無法代謝而累積，逐步損傷身體組織。血色沉著癥基因HFE定位于第6條染色體長臂，編碼343個氨基酸大小的一種膜蛋白。IFE基因的突變將使HFE分子不能被微球蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞表面，從而失去對轉(zhuǎn)鐵蛋白和轉(zhuǎn)鐵蛋白受體作用的調(diào)節(jié)功能，因此，HFE基因突變會增加鐵的存儲，并提高患HH的風(fēng)險。本發(fā)明目標(biāo)檢測的HFE基因突變位點(diǎn)，如下表所示
權(quán)利要求
1.一種HFE基因多態(tài)性檢測液相芯片，其特征在于，主要包括有A.針對HFE基因的不同多態(tài)性位點(diǎn)分別設(shè)計(jì)的野生型和突變型特異性ASPE引物，每種 ASPE引物由5’端的tag序列和3’端的針對目的基因多態(tài)性位點(diǎn)的特異性引物序列組成， 所述特異性引物序列選自針對G83A的SEQ ID NO. 5及SEQ ID NO. 6、針對G100C的SEQ ID NO. 7及SEQ ID NO. 8中的一對以上；所述tag序列選自SEQ ID NO. 1 SEQ ID NO. 4中的序列；B.分別包被有特異的anti-tag序列的、具有不同顏色編碼微球，所述anti-tag序列選自SEQ ID NO. 9 SEQ ID NO. 12中的序列，且所述anti-tag序列能相應(yīng)地與A中所選 tag序列互補(bǔ)配對，所述anti-tag序列與微球連接中間還設(shè)有間隔臂序列；C.用于擴(kuò)增具有G83A和G100C中的一個以上多態(tài)性位點(diǎn)的HFE基因的目標(biāo)序列引物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的HFE基因多態(tài)性檢測液相芯片，其特征是，所述擴(kuò)增引物為 針對 G83A 的 SEQ ID N0. 13 及 SEQ ID N0. 14、和 / 或針對 G100C 的 SEQ ID N0. 15 及 SEQ ID N0. 16。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的HFE基因多態(tài)性檢測液相芯片，其特征在于，所述ASPE引物選自針對G83A的由SEQ ID NO. 1和SEQ ID N0. 5組成的序列及由SEQ ID N0. 2和SEQ ID N0. 6組成的序列、針對G100C的由SEQ ID N0. 3和SEQ ID N0. 7組成的序列及由SEQ ID N0. 4和SEQ ID N0. 8組成的序列中的一對以上。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的HFE基因多態(tài)性檢測液相芯片，其特征在于，A.所述ASPE引物為針對G83A的由SEQID NO. 1和SEQ ID N0. 5組成的序列及由SEQ ID N0. 2和SEQ ID N0. 6組成的序列、和針對G100C的由SEQ ID N0. 3和SEQ ID N0. 7組成的序列及由SEQ ID N0. 4和SEQ ID N0. 8組成的序列；B.分別包被有特異的anti-tag序列的、具有不同顏色編碼微球，所述anti-tag序列選自SEQ ID N0. 9 SEQ ID N0. 12中的序列，且所述anti-tag序列能相應(yīng)地與A中所選 tag序列互補(bǔ)配對，所述anti-tag序列與微球連接中間還設(shè)有間隔臂序列；C.所述擴(kuò)增引物為針對G83A的SEQID N0. 13及SEQ ID N0. 14、和針對G100C的SEQ ID N0. 15 及 SEQ ID N0. 16。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的HFE基因多態(tài)性檢測液相芯片，其特征在于，所述間隔臂序列為5-10個T。
6.一種用于HFE基因多態(tài)性檢測的特異性引物，其特征在于，所述特異性引物序列選自針對 G83A 的 SEQ ID N0. 5 及 SEQ ID N0. 6、針對 G100C 的 SEQ ID N0. 7 及 SEQ ID N0. 8 中的一對以上。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種HFE基因多態(tài)性檢測特異性引物和液相芯片，該液相芯片主要包括有由5’端的tag序列和3’端的特異性引物組成的ASPE引物，所述特異性引物序列選自針對G83A的SEQ ID NO.5及SEQ ID NO.6、針對G100C的SEQ ID NO.7及SEQ ID NO.8中的一對以上；分別包被有特異的anti-tag序列的微球；擴(kuò)增引物。所述的HFE基因多態(tài)性檢測液相芯片具有非常好的信號-噪聲比，并且所設(shè)計(jì)的探針以及anti-tag序列之間基本上不存在交叉反應(yīng)，tag標(biāo)簽序列、anti-tag標(biāo)簽序列的選取以及tag標(biāo)簽序列與具體ASPE引物的結(jié)合，能夠避免交叉反應(yīng)，實(shí)現(xiàn)多個多態(tài)性位點(diǎn)的并行檢測。
文檔編號C12Q1/68GK102304565SQ20111011066
公開日2012年1月4日 申請日期2011年4月29日 優(yōu)先權(quán)日2011年4月29日
發(fā)明者莊少嫻, 甘丹翠, 許嘉森 申請人:廣州益善生物技術(shù)有限公司