專利名稱：一株解淀粉芽孢桿菌及其應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一株解淀粉芽孢桿菌及其應用。
背景技術：
谷物是人們攝取營養(yǎng)、賴以生存的能量來源，是平衡膳食金字塔中比例最大、最為重要的物質基礎。而因發(fā)霉、害蟲危害導致的儲糧品質劣變和損失嚴重危害著我國儲糧安全。據聯合國糧農組織(FAO)統計，每年約有25%糧食因真菌毒素污染影響食用。目前發(fā)現危害糧食儲藏的真菌有150多種，并可產生200多種真菌毒素。人體攝入這些毒素之后能夠導致嘔吐、消化系統和神經系統癥狀、多種原發(fā)性癌癥、甚至急性中毒死亡等。因此防止糧食霉變是保持糧食品質的重要方法之一。目前所用的防霉方法主要是通過降低儲藏水分、溫度等物理作用處理糧食及其制品以防止霉菌生長，或通過添加化學防霉劑的方法控制儲糧及糧食產品霉變。但是這些方法具有破壞營養(yǎng)、效果持續(xù)時間短、防霉不徹底和成本高等缺陷，從而造成實際防控效果不理想，另外有些化學防霉劑，本身具有一定毒性，使用不當反而會影響食用安全和污染環(huán)境。而利用一些有著抗真菌作用又對人體無害的微生物防霉則有成本低、增值快、作用效果持久、安全高效、綠色環(huán)保等優(yōu)點。因此研究、開發(fā)生物防霉和利用微生物及其代謝產物防霉等技術，是提高防霉效率、減少營養(yǎng)損失、降低儲存成本的好方法。另外某些微生物的代謝過程還可以降解糧食和飼料中的不容易被機體消化吸收的大分子，使其降解成可以被機體直接吸收利用的小分子，從而在提高糧食利用率的同時，并提升了產品價值。目前，生防菌在很多國家都已經獲得使用批準，并且在很多方面都取得了實際效果。

發(fā)明內容
本發(fā)明要解決的技術問題是提供一種對儲糧真菌具有抑制作用，并且對真菌毒素有削減作用的解淀粉芽孢桿菌。為解決上述技術問題，本發(fā)明采用如下技術方案
本發(fā)明提供一株解淀粉芽孢桿菌(Macillus amyloliquefaciens )，命名為ASAGl，經鑒定為解淀粉芽孢桿菌iBacillus amyloliquefaciens)的一個株系，是從糧庫儲藏玉米中分離得到，已于2009年5月08日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心 (簡稱CGMCC，地址為北京市朝陽區(qū)大屯路，中國科學院微生物研究所，郵編100101)，其保藏編號為 CGMCC No. 3056。本發(fā)明還提供一種菌劑，它的活性成分為解淀粉芽孢桿菌(ifeciBm 卯e/acieas)ASAGl，其保藏編號為CGMCC No. 3056。該菌劑可以通過現有技術中的
制備方法來制備，還可以根據需要，添加可接受的輔料。進一步地，本發(fā)明還提供了所述解淀粉芽孢桿菌ASAGl或所述菌劑在抑制儲糧有害真菌中的應用，其中，所述儲糧有害真菌為黑曲霉菌、黃曲霉菌、煙曲霉菌、炭黑曲霉菌、 疣孢青霉菌、赭曲霉菌、黃綠青霉菌、三線鐮刀菌、半裸鐮刀菌、尖孢鐮刀菌、灰綠曲霉菌或赤曲霉菌。更進一步地，本發(fā)明還提供了所述解淀粉芽孢桿菌ASAGl或所述菌劑在削減儲糧真菌毒素中的應用，其中，所述儲糧真菌毒素為黃曲霉毒素、赭曲霉毒素或玉米赤霉烯酮。本發(fā)明的優(yōu)點是
1.本發(fā)明所述的解淀粉芽孢桿菌是一種生防細菌，它對儲糧真菌具有顯著抑制作用， 對真菌毒素具有消減作用，是良好的防霉劑和真菌毒素脫毒劑。2.現有技術中分離出來的解淀粉芽孢桿菌菌株主要是防治大田里的真菌，沒有涉及倉儲，特別是儲糧中的真菌，而儲糧真菌，特別是霉菌與大田中的真菌有很大的不同。 本發(fā)明主要針對儲糧中的真菌進行防控，目前還沒報道。


圖1為本發(fā)明的菌株的染色鏡像；
圖2發(fā)酵24h、48h、72h時AFT殘留含量變化趨勢圖； 圖3發(fā)酵24h、48h、72h時OTA殘留含量變化趨勢圖； 圖4發(fā)酵24h、48h、72h時ZEN殘留含量變化趨勢圖。
具體實施例方式下面結合具體實施例對本發(fā)明做進一步說明，但并不是限定本發(fā)明。下述實施例中的實驗方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實施例中所用的試驗材料，如無特殊說明，均為常規(guī)生化試劑供應商購買得到。實施例1解淀粉芽孢桿菌ASAGl獲得與鑒定一、解淀粉芽孢桿菌ASAGl的獲得與鑒定
本發(fā)明所述的解淀粉芽孢桿菌，是從糧庫儲藏玉米中分離得到。其菌株的形態(tài)如下革蘭氏陽性菌，細胞形態(tài)桿狀，形成芽孢，接觸酶和氧化酶反應均為陽性。利用碳水化合物產酸試驗淀粉水解、水解酪素及水解明膠均為陽性。最佳培養(yǎng)基配方馬鈴薯200 g/L、葡萄糖20 g/L、瓊脂20 g/L，瓊脂15克，自然pH。培養(yǎng)溫度28 32 °C。本發(fā)明所述的ASAGl菌株其16S rDNA序列如序列表SEQ ID No 1所示。二、解淀粉芽孢桿菌ASAGl的保藏
通過上述鑒定結果，確認菌株ASAGl為解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)的一個株系，命名為ASAGl，于2009年05月08日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC，地址為北京市朝陽區(qū)大屯路，中國科學院微生物研究所，郵編100101)，其保藏編號為CGMCC No. 3056。實施例2解淀粉芽孢桿菌ASAGl的培養(yǎng)
(1)斜面培養(yǎng)培養(yǎng)時間2 3天，培養(yǎng)基成分(1升)馬鈴薯200 g/L、葡萄糖20 g/L、 瓊脂20 g/L,瓊脂15克，自然pH，培養(yǎng)溫度28 32 °C。(2)種子培養(yǎng)超凈工作臺中從斜面挑取經活化的單菌落接入種子培養(yǎng)液中，28°C 搖菌廣2天，轉速200 r/min，得到種子液；
種子培養(yǎng)液成分(1升)葡萄糖20g/L、牛肉膏5g/L、7水合硫酸鎂lg/L、硫酸銨lg/L、 碳酸鈣3g/L、磷酸二氫鉀0. 6g/L、馬鈴薯200g/L，pH值7. (Γ7. 2。
(3)發(fā)酵按5%接種量，將上步驟獲得的種子液接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，28°C振蕩培養(yǎng) 2 3天，轉速200 r/min，得到解淀粉芽孢桿菌ASAGl發(fā)酵液。其中，發(fā)酵培養(yǎng)基的配方同種
子培養(yǎng)基。實施例3解淀粉芽孢桿菌ASAGl對真菌的拮抗實驗
將實施例2制備的解淀粉芽孢桿菌ASAGl發(fā)酵液以12000 r/min離心10 min，上清液用0. 2 μ m無菌微孔濾膜過濾除菌后，采用牛津杯定量法做抑制試驗，測量抑菌圈直徑大小，以確定該菌株對12種常見儲糧有害真菌的抑菌效果。其中黑曲霉菌、黃曲霉菌、煙曲霉菌、炭黑曲霉菌、疣孢青霉菌、赭曲霉菌、黃綠青霉菌使用察氏培養(yǎng)基，三線鐮刀菌、半裸鐮刀菌、尖孢鐮刀菌使用PDA培養(yǎng)基，灰綠曲霉菌使用高鹽察氏培養(yǎng)基，赤曲霉菌使用濃糖察氏培養(yǎng)基做抑菌試驗。試驗所用菌種來源
黑曲霉菌(Aspergillus, niger CGMCC3. 4463) 黃曲霉菌(Aspergillus, flavus CGMCC3. 4410) 赭曲霉菌(Aspergillus, ochraceus CGMCC3. 4520) 灰綠曲霉菌(Aspergillus, glaucus CGMCC3. 3980) 煙曲霉菌(Aspergillus, fumigatus CGMCC3. 3552) 赤曲霉菌(Aspergillus, ruber CGMCC3. 3956) 黃綠青霉菌(Penicillium. citreo-viride CGMCC3. 4038) 疣孢青霉菌(Penicillium. verruculosum CGMCC3. 4297) 半裸鐮刀菌(Fusarium. semitectum CGMCC3. 0719) 尖孢鐮刀菌(Fusarium. oxysporum CGMCC3. 2830) 三線鐮刀菌(Fusarium. tricinetum CGMCC3. 4731)
以上菌種均購自中國普通微生物菌種保藏管理中心，其中黃曲霉菌、赭曲霉菌、三線鐮刀菌為產毒株。炭黑曲霉菌(Aspergillus, carbonarius)由中國農業(yè)大學贈予。所述察氏培養(yǎng)配方硝酸鈉3 g/L、磷酸氫二鉀1 g/L、7水合硫酸鎂0.5 g/L、氯化鉀0.5 g/L、硫酸亞鐵0.01 g/L、蔗糖30 g/L、瓊脂20 g/L。所述高鹽察氏培養(yǎng)基硝酸鈉3 g/L、磷酸二氫鉀1 g/L、7水合硫酸鎂0.5 g/L、氯化鉀0.5 g/L、硫酸亞鐵0.01 g/L、蔗糖30 g/L、氯化鈉60 g/L、瓊脂20 g/L。所述濃糖察氏培養(yǎng)基硝酸鈉3 g/L、磷酸氫二鉀1 g/L、7水合硫酸鎂0.5 g/L、氯化鉀0.5 g/L、硫酸亞鐵0.01 g/L、蔗糖200 g/L、瓊脂20 g/L。牛津杯定量法對除菌發(fā)酵液的抑菌試驗結果，如表1所示，解淀粉芽孢桿菌ASAGl 發(fā)酵液對以上12種真菌都有明顯的抑制作用。表1除菌發(fā)酵液對12種儲糧有害真菌抑制作用
權利要求
1.一株解淀粉芽孢桿菌(Macillus amyloliquefaciens)ASAG1，其保藏編號為CGMCC No.3056。
2.一種菌劑，它的活性成分為解淀粉芽孢桿菌(Macillus amyloliquefaciens ) ASAG1，其保藏編號為 CGMCC No. 3056。
3.權利要求1所述解淀粉芽孢桿菌ASAGl或權利要求2所述菌劑在抑制儲糧有害真菌中的應用。
4.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，所述儲糧有害真菌為黑曲霉菌、黃曲霉菌、煙曲霉菌、炭黑曲霉菌、疣孢青霉菌、赭曲霉菌、黃綠青霉菌、三線鐮刀菌、半裸鐮刀菌、 尖孢鐮刀菌、灰綠曲霉菌或赤曲霉菌。
5.權利要求1所述解淀粉芽孢桿菌ASAGl或權利要求2所述菌劑在削減儲糧真菌毒素中的應用。
6.根據權利要求5所述的應用，其特征在于，所述儲糧真菌毒素為黃曲霉毒素、赭曲霉毒素或玉米赤霉烯酮。
全文摘要
本發(fā)明公開了一株解淀粉芽孢桿菌及其應用。該解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)ASAG1，其保藏編號為CGMCC No.3056，是一株生防細菌。本發(fā)明還提供了含有該保藏菌株的菌劑。本發(fā)明所述解淀粉芽孢桿菌或所述菌劑對儲糧真菌具有顯著抑制活性，并且對儲糧真菌毒素具有消減作用。
文檔編號A23L3/3571GK102191200SQ20111008041
公開日2011年9月21日 申請日期2011年3月31日 優(yōu)先權日2011年3月31日
發(fā)明者伍松陵, 吳子丹, 孫長坡 申請人:國家糧食局科學研究院