專利名稱：雞源熱休克蛋白及其編碼基因和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種雞源熱休克蛋白及其編碼基因和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
熱休克蛋白(HSPs)是一種高度保守的分子伴侶超家族，在維持細(xì)胞功能的過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用，主要是阻止新生多肽鏈的錯誤折疊和聚集，并幫助蛋白質(zhì)進(jìn)行正確折疊和運(yùn)輸。根據(jù)其大小、結(jié)構(gòu)和功能的不同，熱休克蛋白可以分為多個家族，包括小分子HSP、 HSP60、HSP70、HSP90、HSPllO和Gp96，其中HSP60和HSP70是大量存在于細(xì)胞質(zhì)中的分子伴侶，而Gp96則是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔中的主要分子伴侶。隨后，人們發(fā)現(xiàn)一些熱休克蛋白在機(jī)體的免疫反應(yīng)中發(fā)揮功能，如HSP60、HSP70和HSP90參與抗原遞呈過程，活化淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，激活樹突狀細(xì)胞(DC)并促進(jìn)其成熟。糖蛋白Gp96(Gp96)是HSP90的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)同源分子，又叫葡萄糖相關(guān)蛋白94 (Grp94)。 與其他熱休克蛋白一樣，Gp96含有兩個主要結(jié)構(gòu)域結(jié)合并水解ATP的結(jié)構(gòu)域和結(jié)合底物疏水殘基的結(jié)構(gòu)域。Gp96是定位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的跨膜蛋白，其C-端含有一個內(nèi)質(zhì)網(wǎng)滯留基序 (KDEL)，從而介導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)部的信號通路。除了分子伴侶功能之外，Gp96還在天然免疫和獲得性免疫反應(yīng)中發(fā)揮關(guān)鍵作用，如Gp96通過激活樹突狀細(xì)胞并促成熟，從而為體內(nèi)的獲得性免疫反應(yīng)提供合適的環(huán)境，且激活了效應(yīng)性NK細(xì)胞參與天然免疫反應(yīng)。除了定位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)外，1999年Robert等人發(fā)現(xiàn)Gp96在一些腫瘤細(xì)胞的表面也有表達(dá)，這也暗示了 Gp96可能在腫瘤免疫過程中發(fā)揮作用。隨后人們發(fā)現(xiàn)，腫瘤、病毒感染等均能誘發(fā)Gp96大量表達(dá)， 從腫瘤組織純化的Gp96能夠產(chǎn)生針對該腫瘤的免疫原性，并有抗腫瘤效果。除了這對腫瘤和病毒感染，Gp96對細(xì)菌病原感染也有免疫效果，Zuger等人發(fā)現(xiàn)從細(xì)菌感染的細(xì)胞中分離的Gp96也能誘發(fā)細(xì)胞毒性免疫反應(yīng)并產(chǎn)生保護(hù)作用。Binder等人于2000年發(fā)現(xiàn)，Gp96 結(jié)合抗原肽之后，能夠被巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞等抗原遞呈細(xì)胞表面的CD91識別并結(jié)合， 從而將抗原肽遞呈到MHC-I類分子，并激活⑶8+細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種雞源熱休克蛋白及其編碼基因和應(yīng)用。本發(fā)明所提供的蛋白(Chgp96N蛋白)，來自北京油雞，參與抗原呈遞，具有促進(jìn)免疫活性的功能，為如下(a)或(b)(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；(b)將序列1的氨基酸序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有促進(jìn)免疫活性的功能的由序列1衍生的蛋白質(zhì)。為了使(a)中的Chgp96N蛋白便于純化，可在由序列表中序列1所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)的氨基末端或羧基末端連接上如表1所示的標(biāo)簽。表1標(biāo)簽的序列
權(quán)利要求
1.一種蛋白質(zhì)，是如下(a)或(b)的蛋白質(zhì)(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；(b)將序列1的氨基酸序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有促進(jìn)免疫活性功能的由序列1衍生的蛋白質(zhì)。
2.編碼權(quán)利要求1所述蛋白的基因。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的基因，其特征在于所述基因是如下1)或2)或3)的DNA分 子1)序列表中序列2所示的DNA分子；2)在嚴(yán)格條件下與1)限定的DNA序列雜交且具有促進(jìn)免疫活性的功能的DNA分子；3)與1)或2)限定的DNA序列具有90%以上同源性，且具有促進(jìn)免疫活性的功能的 DNA分子。
4.含有權(quán)利要求2或3所述基因的重組表達(dá)載體、表達(dá)盒、轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系或重組菌。
5.如權(quán)利要求4所述的重組表達(dá)載體，其特征在于所述重組表達(dá)載體是將權(quán)利要求2 或3所述基因插入pPICZ α A的多克隆位點(diǎn)得到的重組質(zhì)粒。
6.如權(quán)利要求4所述的重組菌，其特征在于所述重組菌是將權(quán)利要求5所述重組質(zhì)粒導(dǎo)入畢赤酵母菌X33得到的重組菌。
7.權(quán)利要求1所述蛋白在制備免疫增強(qiáng)劑中的應(yīng)用。
8.一種免疫增強(qiáng)劑，其活性成分為權(quán)利要求1所述蛋白。
9.一種用于預(yù)防和/或治療雞新城疫病的復(fù)合型疫苗，它的活性成分由權(quán)利要求1所述蛋白和新城疫病疫苗組成。
10.權(quán)利要求1所述蛋白在制備用于預(yù)防和/或治療雞新城疫病的疫苗中的應(yīng)用；所述疫苗中所述蛋白作為免疫增強(qiáng)劑。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種雞源熱休克蛋白及其編碼基因和應(yīng)用。本發(fā)明所提供的蛋白為如下(a)或(b)(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；(b)將序列1的氨基酸序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有促進(jìn)免疫活性功能的由序列1衍生的蛋白質(zhì)。本發(fā)明所提供的蛋白可以作為免疫增強(qiáng)劑使用，增強(qiáng)表位肽和減毒或滅活疫苗產(chǎn)生的CTL水平和抗體水平，提高機(jī)體對外來抗原的免疫應(yīng)答。將本發(fā)明的蛋白與市售疫苗聯(lián)合免疫，可提高抗原免疫活性，增強(qiáng)雞群的體液免疫和細(xì)胞免疫，達(dá)到清除病毒、治療疾病的目的，非常適用于雞病毒病的預(yù)防，易于大范圍推廣應(yīng)用。
文檔編號C12N1/19GK102199204SQ20111006268
公開日2011年9月28日 申請日期2011年3月15日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月15日
發(fā)明者劉文軍, 李晶, 楊利敏, 瞿洪仁, 陳才偉 申請人:中國科學(xué)院微生物研究所