專(zhuān)利名稱(chēng)：富含精氨酸的酵母提取物及其制造方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及以高濃度含有精氨酸的酵母提取物組合物、用于制造該酵母提取物的新型酵母以及該酵母提取物組合物的制造方法。
背景技術(shù)：
對(duì)于加工食品而言，總是要求風(fēng)味的改善、提高和差別化。作為提供特征性味道的 相關(guān)調(diào)味料，進(jìn)行了鮮味調(diào)味料、畜水產(chǎn)品提取物類(lèi)調(diào)味料、蛋白水解物、酵母提取物等多樣的開(kāi)發(fā)。特別是近年來(lái)，有高效價(jià)的要求，因而正在推進(jìn)高香型提取物和富含特定成分(例如，谷胱甘肽、核酸、谷氨酸)的酵母提取物等的開(kāi)發(fā)。但是，這些調(diào)味料雖然具有高效價(jià)，但另一方面，其特征性的風(fēng)味隨添加量而變得突出，有時(shí)反而使食品的嗜好性下降。另外，近年來(lái)還有健康方面的意向，因此，提供雖為高效價(jià)但不破壞食品的整體風(fēng)味的平衡、且不含有害物質(zhì)副產(chǎn)物和過(guò)敏原的天然調(diào)味料是今后調(diào)味料領(lǐng)域的課題之一。由調(diào)味料賦予的呈味大致分成含入口中后短時(shí)間尤其是3秒鐘以?xún)?nèi)感覺(jué)到的前味、繼前味之后感覺(jué)到的中味、中味之后感覺(jué)到的后味,對(duì)于重視沖擊感的飲食品所使用的調(diào)味料而言，要求增強(qiáng)前味。到目前為止，作為增強(qiáng)前味的方法，已經(jīng)報(bào)告了使用分子量為1000至30000的糖肽(專(zhuān)利文獻(xiàn)I :國(guó)際公開(kāi)第2006/104022號(hào)小冊(cè)子)、谷氨酸、精氨酸和堿性氨基酸的組合(專(zhuān)利文獻(xiàn)2 :國(guó)際公開(kāi)第2006/062181號(hào)小冊(cè)子)、含有大量谷氨酸的酵母提取物(專(zhuān)利文獻(xiàn)3 :日本特開(kāi)2009-261253號(hào)公報(bào))等的方法。但是，由于這些方法中使用小麥或大豆蛋白的水解物，因此，存在包含過(guò)敏原物質(zhì)、還賦予鮮味或苦味等其他呈味等問(wèn)題。對(duì)于解決安全方面的問(wèn)題而言，作為不含有害物質(zhì)副產(chǎn)物和過(guò)敏原、溯源性?xún)?yōu)良的調(diào)味料原材料的酵母提取物是有用的，但目前為止尚未得知能夠在不破壞食品的整體風(fēng)味的平衡的情況下增強(qiáng)前味的酵母提取物。另一方面，已知精氨酸不僅應(yīng)用于利用其生理功能的功能性食品，還被用作魚(yú)畜肉加工品的發(fā)色劑、肉食加工品的品質(zhì)改良劑等。另外，隨著近年來(lái)要求天然的意向提高，對(duì)上述用途(魚(yú)畜肉加工品的發(fā)色劑、肉食加工品的品質(zhì)改良劑等)中天然物來(lái)源的精氨酸的關(guān)注也正在提高(例如，專(zhuān)利文獻(xiàn)4 :日本特開(kāi)平9-234058號(hào)公報(bào))。為了獲得天然物來(lái)源的精氨酸或富含精氨酸的食品添加劑，想到了使富含精氨酸的原材料進(jìn)行酸分解的方法，但已知在酸分解的情況下，會(huì)生成3-氯-1，2-丙二醇(3-MCPD)等可能有害的物質(zhì)。另外，存在生成大量食鹽作為副產(chǎn)物等缺點(diǎn)。因此，期望得到具有通用性且富含安全的天然物來(lái)源的精氨酸的食品原材料。
作為制造肉食加工品的原材料之一，可舉出酵母提取物，但還不知道富含精氨酸的酵母提取物。專(zhuān)利文獻(xiàn)I :國(guó)際公開(kāi)第2006/104022號(hào)小冊(cè)子專(zhuān)利文獻(xiàn)2 :國(guó)際公開(kāi)第2006/062181號(hào)小冊(cè)子專(zhuān)利文獻(xiàn)3 :日本特開(kāi)2009-261253號(hào)公報(bào)專(zhuān)利文獻(xiàn)4 :日本特開(kāi)平9-234058號(hào)公報(bào)

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，通過(guò)對(duì)具有精氨酸類(lèi)似物耐性且具有不能在以精氨酸為唯一氮源的培養(yǎng)基中繁殖而能夠在以鳥(niǎo)氨酸為唯一氮源的培養(yǎng)基中繁殖的性質(zhì)的酵母進(jìn)行培養(yǎng)，并由得到的培養(yǎng)物制造酵母提取物，能夠得到以高濃度含有精氨酸的酵母提取物組合物。進(jìn)而，本發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)，該酵母提取物組合物作為飲食品用的風(fēng)味改良劑時(shí)效果優(yōu)良。本發(fā)明基于上述發(fā)現(xiàn)而完成。因此，本發(fā)明的目的在于提供以高濃度含有精氨酸的酵母提取物組合物、用于制造該酵母提取物的新型酵母以及該酵母提取物組合物的制造方法。本發(fā)明的進(jìn)一步的目的在于提供風(fēng)味改良劑及飲食品的風(fēng)味改良方法。本發(fā)明的酵母提取物組合物為含有相對(duì)于總固體成分為5質(zhì)量％以上的精氨酸的酵母提取物組合物。本發(fā)明的酵母為具有精氨酸類(lèi)似物耐性且具有不能在以精氨酸為唯一氮源的培養(yǎng)基中繁殖而能夠在以鳥(niǎo)氨酸為唯一氮源的培養(yǎng)基中繁殖的性質(zhì)的屬于酵母屬的酵母。本發(fā)明的酵母提取物組合物的制造方法例如包括下述工序(a)對(duì)具有精氨酸類(lèi)似物耐性且具有不能在以精氨酸為唯一氮源的培養(yǎng)基中繁殖而能夠在以鳥(niǎo)氨酸為唯一氮源的培養(yǎng)基中繁殖的性質(zhì)的酵母進(jìn)行培養(yǎng)的工序，(b)從通過(guò)所述(a)得到的培養(yǎng)物中分離出酵母菌體的工序，及(C)將分離出的酵母菌體供于自身消化處理、酶分解處理或熱水提取處理的工序。 本發(fā)明的風(fēng)味改良劑含有本發(fā)明的酵母提取物組合物。本發(fā)明的風(fēng)味改良方法包括將本發(fā)明的酵母提取物組合物添加到飲食品中。根據(jù)本發(fā)明，能夠提供富含精氨酸的酵母提取物。本發(fā)明的酵母提取物組合物能夠適合用于制造飲食品、例如肉食加工品。更具體而言，根據(jù)本發(fā)明，能夠在不破壞飲食品的風(fēng)味的平衡的情況下改良飲食品的風(fēng)味，尤其是能夠增強(qiáng)飲食品的前味。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明的酵母提取物組合物含有相對(duì)于總固體成分為5質(zhì)量％以上的精氨酸。這種酵母提取物組合物可以通過(guò)向?qū)ζ胀ń湍概囵B(yǎng)所得的培養(yǎng)物進(jìn)行自身消化處理、酶分解處理等處理而制備的酵母提取物或市售的酵母提取物等精氨酸含量相對(duì)于總固體成分低于5質(zhì)量％的酵母提取物中添加天然物來(lái)源的精氨酸等任意方法來(lái)制備，優(yōu)選使用具有在菌體內(nèi)蓄積高濃度精氨酸的能力的酵母來(lái)制備。精氨酸的含量沒(méi)有特別的上限，越多越好，通常，相對(duì)于總固體成分為50質(zhì)量％以下、30質(zhì)量％以下或20質(zhì)量％以下。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式，本發(fā)明的酵母提取物組合物含有相對(duì)于總固體成分為5質(zhì)量％以上的精氨酸，并且不含除來(lái)源于酵母提取物的精氨酸以外的精氨酸。根據(jù)本發(fā)明的另一實(shí)施方式，本發(fā)明的酵母提取物組合物含有相對(duì)于總固體成分為5質(zhì)量％以上的精氨酸，并且含有除來(lái)源于酵母提取物的精氨酸以外的精氨酸。本說(shuō)明書(shū)中，表示精氨酸含量的百分率(質(zhì)量％)為相對(duì)于“總固體成分”的百分率。在此，該“總固體成分”是指通過(guò)酵母的培養(yǎng)得到的酵母提取物的總固體成分。酵母提取物的總固體成分可以通過(guò)如下方法來(lái)定量將該酵母提取物在105°C下干熱4小時(shí)以上，在干燥器中冷卻后，對(duì)殘?jiān)M(jìn)行稱(chēng)量。另外，精氨酸含量可以通過(guò)使用氨基酸分析儀、液相色譜儀等對(duì)酵母提取物進(jìn)行分析來(lái)測(cè)定。精氨酸含量的計(jì)算中使用的精氨酸含量的值是以游離精氨酸計(jì)的質(zhì)量。
根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，具有在菌體內(nèi)蓄積高濃度精氨酸的能力的酵母具有不能在以精氨酸為唯一氮源的培養(yǎng)基中繁殖而能夠在以鳥(niǎo)氨酸為唯一氮源的培養(yǎng)基中繁殖的性質(zhì)。具有這種性質(zhì)的酵母與普通的酵母相比，精氨酸酶活性降低或精氨酸酶活性缺失，從在菌體內(nèi)蓄積高濃度精氨酸的方面而言是優(yōu)選的。該精氨酸酶活性越低越好，例如，與普通的釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)(例如ATCC20017株或日本工業(yè)技術(shù)院微生物工業(yè)技術(shù)研究所(微工研)3533株)相比為80%以下，優(yōu)選為60%以下，更優(yōu)選為30%以下，進(jìn)一步優(yōu)選為10%以下，最優(yōu)選為3%以下。根據(jù)本發(fā)明的進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方式，具有在菌體內(nèi)蓄積高濃度精氨酸的能力的酵母具有精氨酸類(lèi)似物耐性，更優(yōu)選具有精氨酸異羥肟酸鹽耐性。作為酵母，可舉出釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)等屬于酵母(Saccharomyces)屬的酵母、解脂假絲酵母(Candida lipolytica)等屬于假絲酵母(Candida)屬的酵母、德?tīng)柌加墟邎A酵母(Torulaspora delbrueckii)等屬于有孢圓酵母(Torulaspora)屬的酵母、耐熱克魯維酵母(Kluyveromyces thermotolerans)等屬于克魯維酵母屬(Kluyveromyces)的酵母、膜酸畢赤酵母(Pichia membranaefaciens)等屬于畢赤酵母(Pichia)屬的酵母等。根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，酵母為屬于酵母屬的酵母，更優(yōu)選為屬于釀酒酵母的酵母。具有在菌體內(nèi)蓄積高濃度精氨酸的能力的酵母可以通過(guò)例如下述(I廣(VII)的連續(xù)工序來(lái)獲取。(I)酵母的突變處理利用紫外線(xiàn)照射、誘變劑(例如，N-甲基-N’-硝基-N-亞硝基胍、甲磺酸乙酯等)等對(duì)酵母進(jìn)行突變處理。(II)精氨酸酶活性降低或缺失的菌株的獲取從上述(I)的工序中得到的菌株中，分離出不能在以精氨酸為唯一氮源的基本培養(yǎng)基(基本培養(yǎng)基的組成參考例如The Yeast, A Taxonomic Study, Fourthedition，p. 93-94(1998)，下同)中繁殖而能夠在以鳥(niǎo)氨酸為唯一氮源的基本培養(yǎng)基中繁殖的菌株，作為精氨酸酶活性降低或缺失的菌株。(III)酵母的培養(yǎng)將上述(II)中分離出的菌株接種到包含糖蜜(以糖分計(jì)相當(dāng)于3%的量)、I. Hg/L磷酸二氫鉀、O. 45g/L尿素和水的培養(yǎng)基中，在30°C下培養(yǎng)24 48小時(shí)。(IV)熱水提取
向?qū)ι鲜?III)中得到的培養(yǎng)液進(jìn)行離心分離而回收的酵母濕菌體中加入與其質(zhì)量相等的蒸餾水，充分混合后，在90°C下進(jìn)行30分鐘高壓滅菌，以3000rpm離心分離5分鐘后回收上清。另一方面，向沉淀物中加入等量的蒸餾水，混合后，再次在相同條件下離心分離，并將所得到的上清加入到上述上清中(V)固體成分含量的定量將Iml上述(IV)中得到的上清在105°C下干熱4小時(shí)以上，在干燥器中冷卻后，進(jìn)
行稱(chēng)量。(VI)精氨酸含量的定量將上述(IV)中得到的上清供于氨基酸分析儀、液相色譜儀等，測(cè)定上清中的精氨
酸含量。(VII)本發(fā)明中使用的酵母的選擇分離出[上述(VI)中求出的精氨酸含量]/[上述(V)中求出的固體成分含量]X 100的值達(dá)到5以上的菌株。精氨酸酶活性降低或缺失且對(duì)精氨酸類(lèi)似物(例如精氨酸異羥肟酸鹽)具有耐性的菌株可以通過(guò)例如下述方式來(lái)獲取將通過(guò)上述(I)的工序得到的菌株接種到含有精氨酸類(lèi)似物的基本培養(yǎng)基(例如，參考日本特開(kāi)昭52-143288號(hào)公報(bào))中，獲取能夠繁殖的菌株作為精氨酸類(lèi)似物耐性株，根據(jù)需要對(duì)該精氨酸類(lèi)似物耐性株進(jìn)行上述(I)的工序，然后進(jìn)行上述(II)的工序。作為以上述方式得到的酵母的一例，可舉出釀酒酵母ARG2株。釀酒酵母ARG2株于2009年12月11日作為NITE BP-849保藏于日本獨(dú)立行政法人產(chǎn)品評(píng)價(jià)技術(shù)基礎(chǔ)機(jī)構(gòu)專(zhuān)利微生物保藏中心(日本千葉縣木更津市上總鐮足2-5-8)。本發(fā)明的酵母提取物組合物的制造中使用的酵母的培養(yǎng)物可以通過(guò)將上述工序中得到的酵母在固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基等能夠使酵母繁殖的培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)而得到。培養(yǎng)基只要是含有碳源、無(wú)機(jī)鹽類(lèi)以及根據(jù)需要使用的氨基酸、維生素等有機(jī)微量營(yíng)養(yǎng)素的普通的營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基，則可以使用合成培養(yǎng)基或天然培養(yǎng)基中的任意一種。作為碳源，可以使用葡萄糖、甘油、甘露醇、乙醇、正烷烴等。另外，也可以單獨(dú)使用乳酸、檸檬酸等有機(jī)酸或者與其他碳源并用來(lái)使用。作為氮源，可以使用尿素、氨、硫酸銨、硝酸銨、氯化銨、磷酸銨、乙酸銨等。作為有機(jī)微量營(yíng)養(yǎng)素，可以使用氨基酸、維生素、脂肪酸、核酸以及含有上述物質(zhì)的蛋白胨、酪蛋白水解物、酵母提取物、大豆蛋白分解物等。作為無(wú)機(jī)鹽類(lèi)，可以使用磷酸鹽、鎂鹽、鐵鹽、鋅鹽、鈣鹽等。培養(yǎng)通過(guò)在2(T37°C的培養(yǎng)溫度下將pH控制于3 8來(lái)進(jìn)行，根據(jù)需要進(jìn)行通氣培養(yǎng)。培養(yǎng)中，可以使用碳酸鈣、氨水、氨氣、氫氧化鈉水溶液等堿對(duì)pH進(jìn)行調(diào)節(jié)。通過(guò)進(jìn)行約10小時(shí) 約4天的培養(yǎng)，在菌體內(nèi)蓄積精氨酸。在使用固體培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)的情況下，可以將固體培養(yǎng)基中繁殖的菌體連同固體培養(yǎng)基一起直接作為培養(yǎng)物來(lái)使用，也可以將通過(guò)從固體培養(yǎng)基上刮取等方法收集得到的菌體作為培養(yǎng)物來(lái)使用。在使用液體培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)的情況下，可以直接將培養(yǎng)液作為培養(yǎng)物來(lái)使用，也可以進(jìn)行離心分離或過(guò)濾等固液分離操作而從培養(yǎng)液中分離出菌體，將該菌體作為培養(yǎng)物來(lái)使用。酵母的培養(yǎng)物可以直接用于后續(xù)處理，也可以根據(jù)需要懸濁于水、氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣等無(wú)機(jī)鹽水溶液、磷酸緩沖液、檸檬酸緩沖液等緩沖液等中而將該懸濁液作為酵母的培養(yǎng)物用于后續(xù)處理。作為酵母提取物組合物的制造中對(duì)酵母的培養(yǎng)物進(jìn)行自身消化處理的方法，可舉出將酵母的培養(yǎng)物在35飛(TC下加熱6 72小時(shí)的方法。自身消化處理后，可以將所得到的處理物直接作為本發(fā)明的酵母提取物組合物來(lái)使用，也可以將進(jìn)行離心分離、過(guò)濾等固液分離操作而除去不溶性固體成分后的處理物作為本發(fā)明的酵母提取物組合物。作為酵母提取物組合物的制造中對(duì)酵母的培養(yǎng)物進(jìn)行酶分解處理的方法，可舉出向酵母的培養(yǎng)物中添加蛋白酶、淀粉酶、細(xì)胞壁溶解酶、脫氨酶、核酸酶等而使其進(jìn)行酶反應(yīng)的方法。酶可以單獨(dú)使用，也可以組合使用。酶例如以終濃度達(dá)到0.01飛質(zhì)量％、優(yōu)選達(dá)到O. Γ3質(zhì)量％的方式添加到酵母的培養(yǎng)物中。酶反應(yīng)的溫度、pH、反應(yīng)時(shí)間因各酶而異，優(yōu)選在各酶的最適溫度、最適PH下進(jìn)行反應(yīng)。酶分解處理后，可以將所得到的處理物直接作為本發(fā)明的酵母提取物組合物來(lái)使用，也可以將進(jìn)行離心分離、過(guò)濾等固液分離操作而除去不溶性固體成分后的處理物作為本發(fā)明的酵母提取物組合物。酵母提取物組合物也可以通過(guò)依據(jù)上述(IV)中記載的方法對(duì)酵母的培養(yǎng)物進(jìn)行熱水提取來(lái)制造。酵母提取物中的固體成分含量和精氨酸含量可以分別依據(jù)上述(V)和(VI)中記載的方法來(lái)定量。另外，對(duì)于現(xiàn)有的酵母提取物，可以在根據(jù)需要將酵母提取物懸濁于水等中后進(jìn)行(V)和(VI)的操作來(lái)定量。酵母提取物組合物的制造中，在向酵母提取物中添加精氨酸的情況下，所添加的精氨酸可以是L型、D型以及L型與D型的混合物中的任意一種，優(yōu)選為L(zhǎng)型。另外，所添加的精氨酸可以是酸加成鹽、金屬鹽、銨鹽、有機(jī)胺加成鹽、氨基酸加成鹽等鹽。作為酸加成鹽，可舉出鹽酸鹽、硫酸鹽、硝酸鹽、磷酸鹽等無(wú)機(jī)酸鹽以及乙酸鹽、馬來(lái)酸鹽、富馬酸鹽、檸檬酸鹽、蘋(píng)果酸鹽、乳酸鹽、α -酮戊二酸鹽、葡糖酸鹽、辛酸鹽等有機(jī)酸鹽。作為金屬鹽，可舉出鈉鹽、鉀鹽等堿金屬鹽、鎂鹽、鈣鹽等堿土金屬鹽、鋁鹽、鋅鹽
坐寸ο作為銨鹽，可舉出與銨、四甲基銨等之間形成的鹽。作為氨基酸加成鹽，可舉出與甘氨酸、苯丙氨酸、賴(lài)氨酸、天冬氨酸、谷氨酸等之間形成的鹽。本發(fā)明的酵母提取物組合物可以通過(guò)根據(jù)需要進(jìn)行加熱濃縮、減壓濃縮等濃縮處理、加熱干燥、冷凍干燥等干燥處理而制成濃縮物或干燥物來(lái)進(jìn)行制造。本發(fā)明的酵母提取物組合物可以與普通的酵母提取物同樣地在飲食品的制造時(shí)或食用時(shí)使用，從而能夠得到口感改良、風(fēng)味改良等效果。 特別地，在本說(shuō)明書(shū)中證實(shí)了 通過(guò)添加本發(fā)明的酵母提取物組合物，飲食品的風(fēng)味得到改良，尤其是飲食品的前味得到增強(qiáng)。因此，根據(jù)本發(fā)明，提供含有本發(fā)明的酵母提取物組合物的風(fēng)味改良劑。并且，根據(jù)本發(fā)明，提供改良飲食品的風(fēng)味的方法及制造風(fēng)味得到改良的飲食品的方法，上述方法包括將本發(fā)明的酵母提取物組合物添加到飲食品中。另外，上述的風(fēng)味改良方法中，在使用通過(guò)向酵母提取物中添加精氨酸而制造的酵母提取物組合物的情況下，可以分別向飲食品中添加酵母提取物和精氨酸來(lái)代替上述組合物。因此，根據(jù)本發(fā)明，提供改良飲食品的風(fēng)味的方法及制造風(fēng)味得到改良的飲食品的方法，上述方法包括將酵母提取物和精氨酸添加到飲食品中，該酵母提取物中的精氨酸的質(zhì)量與所添加的精氨酸的質(zhì)量的總計(jì)相對(duì)于該酵母提取物的總固體成分為5質(zhì)量％以上。本發(fā)明的風(fēng)味的改良中，可以根據(jù)需要向飲食品中添加能夠用于食品的其他添加物，另外，本發(fā)明的風(fēng)味改良劑可以含有這樣的添加物。作為這樣的能夠用于食品的其他添加物，可舉出氯化鈉、氯化鉀等無(wú)機(jī)鹽，谷氨酸鈉、甘氨酸、丙氨酸等氨基酸，肌苷酸鈉、鳥(niǎo)苷酸鈉等核酸，蔗糖、葡萄糖、乳糖等糖，醬油、味噌、畜肉提取物、家禽提取物、魚(yú)貝提取物、 蛋白質(zhì)水解物等天然調(diào)味料，香料類(lèi)、香草(U )類(lèi)等香辛料，水、糊精、各種淀粉等賦形劑等。作為飲食品，可舉出火腿、香腸等肉食加工品，拉面、面調(diào)味汁、清湯(- >夂J^ 一 7 )、蛋湯、咖喱、奶油燉菜、漢堡等一般的飲食品等。實(shí)施例以下，列舉實(shí)施例對(duì)本發(fā)明更具體地進(jìn)行說(shuō)明。實(shí)施例I :酵母突變株的制作及使用該突變株的酵母提取物組合物的制造(I)酵母突變株的制作在5ml的YPD培養(yǎng)基(含有2%葡萄糖、1%酵母提取物及2%多聚蛋白胨的培養(yǎng)基)中，接種一白金環(huán)的對(duì)釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)ATCC20017株賦予精氨酸異羥肟酸鹽耐性而得到的釀酒酵母微工研3533株，在30°C下振蕩培養(yǎng)24小時(shí)。將O. Iml得到的培養(yǎng)液接種到三角燒瓶中的IOOml的YPD培養(yǎng)基中，在30°C下振蕩培養(yǎng)12小時(shí)。收集菌體后，將菌體用無(wú)菌水清洗兩次，懸濁于O. 067摩爾/升的磷酸二氫鉀溶液中，以使660nm下的OD (光密度，Optical Density)達(dá)到I. O (約I X IO7個(gè)細(xì)胞/ml)。將該懸濁液分注到塑料培養(yǎng)皿中，在攪拌的同時(shí)照射45飛O秒的紫外線(xiàn)。紫外線(xiàn)照射后，將O. Iml菌體懸濁液接種到5ml的YPD培養(yǎng)基中，在30°C下培養(yǎng)12 36小時(shí)。收集菌體后，分離出4株具有下述性質(zhì)的菌株不能在以精氨酸為唯一氮源的基本培養(yǎng)基[在I升水中含有11. 7g的BACTO酵母碳源基礎(chǔ)(A夕卜4 一 7卜力一術(shù)X —^ ) ( rM 7 ^公司制造)、10g的精氨酸、Ig的磷酸二氫鉀和O. 5g的硫酸鎂的培養(yǎng)基]中繁殖，但能夠在以鳥(niǎo)氨酸為唯一氮源的基本培養(yǎng)基[在I升水中含有11. 7g的BACTO酵母碳源基礎(chǔ)(7 4 7 2公司制造)、10g的鳥(niǎo)氨酸、Ig的磷酸二氫鉀和O. 5g的硫酸鎂的培養(yǎng)基]中繁殖。使用玻璃珠將分尚出的各菌株及作為它們的未本株的微工研3533株分別進(jìn)行粉碎而提取出內(nèi)容物，利用精氨酸酶活性測(cè)定試劑盒(才7 77 f Λ <公司制造)來(lái)測(cè)定精氨酸酶活性，結(jié)果挑選出與微工研3533株相比顯示出2. 9%的精氨酸酶活性的菌株I株，將其命名為“ARG2”株。(2)酵母提取物組合物的制造在5ml的YPD培養(yǎng)基(含有2%葡萄糖、1%酵母提取物和2%多聚蛋白胨的培養(yǎng)基)中接種一白金環(huán)的微工研3533株和ARG2株，在30°C下振蕩培養(yǎng)24小時(shí)。
將所得到的培養(yǎng)液(全部)接種到300ml的含有糖蜜(以糖計(jì)含有3%的量)、
O.34g磷酸二氫鉀、O. 13g尿素和I滴消泡劑的培養(yǎng)基中，在30°C下振蕩培養(yǎng)63小時(shí)。培養(yǎng)中，在培養(yǎng)開(kāi)始后第21小時(shí)添加O. 9g的葡萄糖和O. 3g的磷酸二氫鉀。將所得到的培養(yǎng)液離心分離而收集菌體，加入與濕菌體質(zhì)量相等的蒸餾水，充分混合后，在90°C下進(jìn)行30分鐘的高壓滅菌處理。高壓滅菌處理后，以3000rpm離心分離5分鐘，得到上清。另外，加入與沉淀物等量的蒸餾水，混合后，再次在相同條件下離心分離。將得到的上清加入到先前的上清中，由此得到來(lái)自酵母的熱水提取物作為酵母提取物。將Iml該酵母提取物在105°C下干熱4小時(shí)以上，在干燥器中冷卻后進(jìn)行稱(chēng)量，對(duì)固體成分含量進(jìn)行定量。
另外，將該酵母提取物供于氨基酸分析儀(AminoTac JLC-500/V ;日本電子株式會(huì)社制造)，對(duì)精氨酸含量進(jìn)行定量。精氨酸含量/固體成分含量X 100的值不于表I中。表I
權(quán)利要求
1.一種酵母提取物組合物，其含有相對(duì)于總固體成分為5質(zhì)量％以上的精氨酸。
2.如權(quán)利要求I所述的酵母提取物組合物，其由具有在菌體內(nèi)蓄積高濃度精氨酸的能力的酵母得到。
3.如權(quán)利要求2所述的酵母提取物組合物，其中，所述酵母具有不能在以精氨酸為唯一氮源的培養(yǎng)基中繁殖而能夠在以鳥(niǎo)氨酸為唯一氮源的培養(yǎng)基中繁殖的性質(zhì)。
4.如權(quán)利要求3所述的酵母提取物組合物，其中，所述酵母具有精氨酸類(lèi)似物耐性。
5.如權(quán)利要求2所述的酵母提取物組合物，其中，所述酵母為釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae) ARG2 株,其保藏編號(hào)為 NITE BP-849。
6.一種屬于酵母屬的酵母，其具有精氨酸類(lèi)似物耐性，并且具有不能在以精氨酸為唯一氮源的培養(yǎng)基中繁殖而能夠在以鳥(niǎo)氨酸為唯一氮源的培養(yǎng)基中繁殖的性質(zhì)。
7.釀酒酵母ARG2株，其保藏編號(hào)為NITEBP-849。
8.—種制造酵母提取物組合物的方法，其包括下述工序 (a)對(duì)具有精氨酸類(lèi)似物耐性且具有不能在以精氨酸為唯一氮源的培養(yǎng)基中繁殖而能夠在以鳥(niǎo)氨酸為唯一氮源的培養(yǎng)基中繁殖的性質(zhì)的酵母進(jìn)行培養(yǎng)的工序， (b)從通過(guò)所述(a)得到的培養(yǎng)物中分離出酵母菌體的工序，及 (C)將分離出的酵母菌體供于自身消化處理、酶分解處理或熱水提取處理的工序。
9.如權(quán)利要求8所述的方法，其中，所述酵母為釀酒酵母ARG2株，其保藏編號(hào)為NITEBP-849。
10.一種風(fēng)味改良劑，其含有權(quán)利要求1飛中任一項(xiàng)所述的酵母提取物組合物。
11.一種改良飲食品的風(fēng)味的方法，其包括將權(quán)利要求廣5中任一項(xiàng)所述的酵母提取物組合物添加到飲食品中。
12.一種改良飲食品的風(fēng)味的方法，其包括將酵母提取物和精氨酸添加到飲食品中，該酵母提取物中的精氨酸的質(zhì)量與所添加的精氨酸的質(zhì)量的總計(jì)相對(duì)于該酵母提取物的總固體成分為5質(zhì)量％以上。
13.—種制造風(fēng)味得到改良的飲食品的方法，其包括將權(quán)利要求f 5中任一項(xiàng)所述的酵母提取物組合物添加到飲食品中。
14.一種制造風(fēng)味得到改良的飲食品的方法，其包括將酵母提取物和精氨酸添加到飲食品中，該酵母提取物中的精氨酸的質(zhì)量與所添加的精氨酸的質(zhì)量的總計(jì)相對(duì)于該酵母提取物的總固體成分為5質(zhì)量％以上。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種含有相對(duì)于總固體成分為5質(zhì)量%以上的精氨酸的酵母提取物組合物。這種酵母提取物組合物優(yōu)選利用具有精氨酸類(lèi)似物耐性且具有不能在以精氨酸為唯一氮源的培養(yǎng)基中繁殖而能夠在以鳥(niǎo)氨酸為唯一氮源的培養(yǎng)基中繁殖的性質(zhì)的屬于酵母屬的酵母來(lái)制造。該酵母提取物組合物可以適合用作飲食品的風(fēng)味改良劑。
文檔編號(hào)C12N1/16GK102656262SQ20108005726
公開(kāi)日2012年9月5日 申請(qǐng)日期2010年11月11日 優(yōu)先權(quán)日2009年12月17日
發(fā)明者佐佐木繪美, 宮內(nèi)大介, 小笠原正志, 川崎秀紀(jì), 藤田陽(yáng)平, 高野利奈子 申請(qǐng)人:麒麟?yún)f(xié)和食品株式會(huì)社