專利名稱：一種殼聚糖的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物發(fā)酵領(lǐng)域，更具體的說，是涉及一種殼聚糖的制備方法。
背景技術(shù)：
殼聚糖是甲殼素經(jīng)濃堿溶液處理后脫去乙?；漠a(chǎn)物，化學(xué)名為聚(1，4)-2-氨基-2-脫氧-D-葡萄糖。殼聚糖的生物相容性良好，在生物醫(yī)學(xué)及制藥等方面的應(yīng)用極其廣泛，可用作燒傷敷料及傷口愈合劑，包扎紗布用殼聚糖處理后，傷口愈合速度可提高 75%。用殼聚糖制成的可吸收性手術(shù)縫線，機(jī)械強(qiáng)度高，可長期貯存，能用常規(guī)方法消毒，可染色，可摻入藥劑，能被組織降解吸收，免除患者拆線的痛苦。殼聚糖能抑制胃酸和潰瘍，具有降解膽固醇及三甘油脂的作用。肝素是一種帶有磺酸基、羧基的極有效的抗凝血劑，硫酸酯化的殼聚糖在結(jié)構(gòu)上與肝素相似，這種類肝素衍生物一般具有相當(dāng)甚至超過肝素活性， 為提供合成廉價的抗凝血劑提供了有效的途徑。此外，殼聚糖還可用于制作人工腎透析膜和隱形眼鏡。由殼聚糖制備出的微膠囊，是一種生物降解型的高分子膜材料，是優(yōu)良且極具發(fā)展前途的醫(yī)用緩釋體系。此外，殼聚糖在食品上可用作保鮮膜。將其水溶液涂于果蔬表面，可人為在果蔬表面形成一個低氧高二氧化碳的密閉環(huán)境，抑制果蔬呼吸，同時抑菌繁殖，提高果蔬光澤度， 提高果樹的感官品質(zhì)。殼聚糖的制備方法大都耗時長、對設(shè)備要求高，且產(chǎn)率普遍很低。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明就是針對上述問題，提供了一種制備簡單、耗時短、產(chǎn)率高的殼聚糖的制備方法。為了實現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，本發(fā)明的制備步驟為1.黑曲霉發(fā)酵斜面培養(yǎng)基制備4%瓊脂、2%酵母膏、2%蛋白胨、4%蔗糖，加熱過濾后裝入試管，于121°C高壓滅菌20min ；在無菌操作臺上進(jìn)行接種，于22 34°C電熱恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng) 0 IlOh ；用接種環(huán)刮取新鮮斜面上的黑髓霉孢子，轉(zhuǎn)入裝有無菌水和裝有玻璃珠的具塞三角瓶中，充分振蕩后用血球計數(shù)板計算懸液濃度，并用無菌水稀釋至所需濃度(7108 9X 108個孢子/mL)；在500mL錐形瓶中用多層紗布及牛皮紙包住錐形瓶瓶口，于121°C高壓滅菌20min ；滅菌后在無菌操作臺按量接入孢子懸液，恒溫?fù)u床發(fā)酵，搖床轉(zhuǎn)速為120 210r/min ；2.殼聚糖的制備取發(fā)酵液，離心洗滌菌體至上清液無色，取所得沉淀加入7%氫氧化鈉溶液(菌體堿液=1 10w/v)，50°c下處理: 后離心，水洗滌沉淀至上清液無色；取上述沉淀，力口入乙醇水=1 1的20%氫氧化鈉溶液(菌體堿液=1 10W/V)，于480W功率下微波處理15min后離心，洗滌沉淀至上清液呈中性；取上述沉淀，加入5%乙酸溶液于100°C下
3處理5h，離心分離，調(diào)節(jié)pH值為8 10，此時出現(xiàn)大量白色絮狀沉淀，離心，無離子水洗滌沉淀至上清液呈中性；轉(zhuǎn)移沉淀至平皿中，50°C下真空干燥，所得固體即為殼聚糖。本發(fā)明的有益效果1.本發(fā)明工藝簡單、便于生產(chǎn)；2.本發(fā)明產(chǎn)率較高。


圖1、圖2、圖3為三因素對殼聚糖產(chǎn)率的影響圖。
具體實施例方式本發(fā)明以黑曲霉為原料，利用發(fā)酵法制備殼聚糖，本發(fā)明的工藝步驟為1.黑曲霉發(fā)酵斜面培養(yǎng)基制備4%瓊脂、2%酵母膏、2%蛋白胨、4%蔗糖，加熱過濾后裝入試管，于121°C高壓滅菌20min ；在無菌操作臺上進(jìn)行接種，于22 34°C電熱恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng) 0 IlOh ；用接種環(huán)刮取新鮮斜面上的黑髓霉孢子，轉(zhuǎn)入裝有無菌水和裝有玻璃珠的具塞三角瓶中，充分振蕩后用血球計數(shù)板計算懸液濃度，并用無菌水稀釋至所需濃度(7108 9X 108個孢子/mL)；在500mL錐形瓶中用多層紗布及牛皮紙包住錐形瓶瓶口，于121°C高壓滅菌20min ；滅菌后在無菌操作臺按量接入孢子懸液，恒溫?fù)u床發(fā)酵，搖床轉(zhuǎn)速為120 210r/min ；2.殼聚糖的制備取發(fā)酵液，離心洗滌菌體至上清液無色，取所得沉淀加入7%氫氧化鈉溶液(菌體堿液=1 10w/V)，50°C下處理池后離心，水洗滌沉淀至上清液無色；取上述沉淀，力口入乙醇水=1 1的20%氫氧化鈉溶液(菌體堿液=1 10W/V)，于480W功率下微波處理15min后離心，洗滌沉淀至上清液呈中性；取上述沉淀，加入5%乙酸溶液于100°C下處理5h，離心分離，調(diào)節(jié)pH值為8 10，此時出現(xiàn)大量白色絮狀沉淀，離心，無離子水洗滌沉淀至上清液呈中性；轉(zhuǎn)移沉淀至平皿中，50°C下真空干燥，所得固體即為殼聚糖。本發(fā)明選擇發(fā)酵溫度、發(fā)酵時間、搖床轉(zhuǎn)速為影響殼聚糖產(chǎn)率的因素，影響情況可見圖1、圖2、圖3。由圖2可以看到，菌株在培養(yǎng)過程中，殼聚糖的產(chǎn)量和相對分子質(zhì)量都在變化。培養(yǎng)初期菌絲體迅速生長，殼聚糖量也迅速增加。隨著培養(yǎng)時間的增加，殼聚糖量逐漸達(dá)到飽和，菌絲體的量不再增加；另一方面，殼聚糖的相對分子質(zhì)量隨著培養(yǎng)期的延長而迅速下降。作為一種最佳方案，本發(fā)明的制備步驟為發(fā)酵溫度為^°C，搖床轉(zhuǎn)速為180r/ min，發(fā)酵時間為80h。
權(quán)利要求
1.一種殼聚糖的制備方法，其特征在于，本發(fā)明的制備步驟為(1)黑曲霉發(fā)酵斜面培養(yǎng)基制備4%瓊脂、2%酵母膏、2%蛋白胨、4%蔗糖，加熱過濾后裝入試管，于 121°C高壓滅菌20min ；在無菌操作臺上進(jìn)行接種，于22 34°C電熱恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)0 IlOh;用接種環(huán)刮取新鮮斜面上的黑髓霉孢子，轉(zhuǎn)入裝有無菌水和裝有玻璃珠的具塞三角瓶中，充分振蕩后用血球計數(shù)板計算懸液濃度，并用無菌水稀釋至所需濃度(7108 9X 108個孢子/mL)；在500mL錐形瓶中用多層紗布及牛皮紙包住錐形瓶瓶口，于121°C高壓滅菌20min ；滅菌后在無菌操作臺按量接入孢子懸液，恒溫?fù)u床發(fā)酵，搖床轉(zhuǎn)速為120 210r/ min ；(2)殼聚糖的制備取發(fā)酵液，離心洗滌菌體至上清液無色，取所得沉淀加入7%氫氧化鈉溶液(菌體堿液=i 10w/V)，5(TC下處理池后離心，水洗滌沉淀至上清液無色；取上述沉淀，加入乙醇水=1 1的20%氫氧化鈉溶液(菌體堿液=1 10W/V)，于480W功率下微波處理15min后離心，洗滌沉淀至上清液呈中性；取上述沉淀，加入5%乙酸溶液于100°C下處理 5h，離心分離，調(diào)節(jié)pH值為8 10，此時出現(xiàn)大量白色絮狀沉淀，離心，無離子水洗滌沉淀至上清液呈中性；轉(zhuǎn)移沉淀至平皿中，50°C下真空干燥，所得固體即為殼聚糖。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種殼聚糖的制備方法，其特征在于，本發(fā)明的制備步驟為 發(fā)酵溫度為^°C，搖床轉(zhuǎn)速為180r/min，發(fā)酵時間為80h。
全文摘要
一種殼聚糖的制備方法屬于生物發(fā)酵領(lǐng)域，更具體的說，是涉及一種殼聚糖的制備方法。本發(fā)明提供了一種制備簡單、耗時短、產(chǎn)率高的殼聚糖的制備方法。本發(fā)明的制備步驟為黑曲霉發(fā)酵；甲殼素的制備。
文檔編號C12P19/04GK102453739SQ20101051603
公開日2012年5月16日 申請日期2010年10月21日 優(yōu)先權(quán)日2010年10月21日
發(fā)明者朱竺 申請人:朱竺