專利名稱：磁性納米顆粒溶液、其制備方法及用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種磁性納米顆粒溶液，以及該磁性納米顆粒溶液的制備方法，磁性 生物傳感器的構(gòu)建方法，及該磁性納米顆粒溶液的用途。
背景技術(shù)：
社會各行業(yè)在生產(chǎn)、運(yùn)輸、使用和處置過程中，往往伴隨著大量具有環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)的污 染物殘留、泄露和排放。近年來，隨著我國工業(yè)、農(nóng)業(yè)和市政建設(shè)的快速發(fā)展，由上述污染 物所導(dǎo)致的環(huán)境污染事故層出不窮，受污染場地的數(shù)目與面積逐年擴(kuò)大，對人民生活健康 造成了重大威脅。在這些污染物中，以農(nóng)藥和石油化工產(chǎn)品為代表的復(fù)雜持久性有機(jī)污染 物具有痕量、廣泛存在和種類繁多等特點(diǎn)，給環(huán)境監(jiān)測與風(fēng)險(xiǎn)評價(jià)提出了巨大的挑戰(zhàn)?，F(xiàn) 有的傳統(tǒng)化學(xué)分析方法面對復(fù)雜持久性有機(jī)污染物，具有操作繁瑣(復(fù)雜的預(yù)處理過程)、 耗時(shí)較長(幾小時(shí)至幾天時(shí)間)、設(shè)備昂貴和成本較高等缺點(diǎn)，并且無法有效評價(jià)復(fù)合污 染條件下的生物毒性與環(huán)境生態(tài)風(fēng)險(xiǎn)。這些問題嚴(yán)重制約了相關(guān)污染場地的環(huán)境評估和 風(fēng)險(xiǎn)評價(jià)，限制了突發(fā)性環(huán)境應(yīng)急事故的快速評估，為新型檢測技術(shù)，特別是以生物傳感器 (biosensor)為代表的生物快速檢測技術(shù)的發(fā)展提供了良好的契機(jī)。據(jù)相關(guān)行業(yè)報(bào)告表明，英國環(huán)境監(jiān)測市場目前已達(dá)到5. 9億英鎊(60億人民幣) 的規(guī)模(Environmental KTN report, 2008) 0其中，快速檢測技術(shù)所涵蓋的市場份額達(dá)到 2億英鎊(20億人民幣)。而從全球范圍來看，最新的全球市場分析報(bào)告(GlobalIndustry Analysts, Inc.)預(yù)測生物傳感器市場價(jià)值在2012年之前可以達(dá)到61億美元(400億人民 幣)。現(xiàn)有中國經(jīng)濟(jì)的高速發(fā)展已經(jīng)付出了高昂的環(huán)境代價(jià)，這主要體現(xiàn)在污染場地帶來的 生態(tài)修復(fù)與人體健康問題、工業(yè)搬遷場地引發(fā)的二次開發(fā)問題和突發(fā)性環(huán)境事故導(dǎo)致的預(yù) 警應(yīng)急問題等。這些問題都伴隨著對環(huán)境監(jiān)測與風(fēng)險(xiǎn)評價(jià)的更高要求，表明中國政府對新 型環(huán)境檢測技術(shù)具有迫切的需求，預(yù)示著生物快速檢測技術(shù)在中國具有廣闊的市場。生物細(xì)胞傳感器以活體微生物細(xì)胞作為宿主，可以真實(shí)的評價(jià)環(huán)境中目標(biāo)物質(zhì)的 生物效應(yīng)(生物可利用性)，檢測方法簡單易行，可直接應(yīng)用于水樣，具有穩(wěn)定性和可靠性， 與傳統(tǒng)分析方法相比具有高度的準(zhǔn)確性。而其低成本和快速響應(yīng)的特點(diǎn)，可以滿足此領(lǐng)域 市場的需要，兼?zhèn)洳僮骱唵魏涂蓪?shí)現(xiàn)定量測定等優(yōu)點(diǎn)。但與此同時(shí)，生物細(xì)胞傳感器由于受 到自身特點(diǎn)的限制，具有難回收和難操控等問題。首先，由于活體生物細(xì)胞傳感器本身具備 生物活性，可以在自然環(huán)境中增殖與運(yùn)動，因此一旦投入被檢測或應(yīng)用環(huán)境中，難以同土著 微生物進(jìn)行區(qū)別，更難以回收，其自身攜帶的目標(biāo)基因、調(diào)控基因或報(bào)道基因存在巨大的環(huán) 境風(fēng)險(xiǎn)。其次，對于土壤等復(fù)雜環(huán)境樣品的分析，往往需要在檢測過程中將樣品與生物傳感 器分離，以避免復(fù)雜介質(zhì)對檢測信號的影響。磁性納米顆粒是一種有效的遠(yuǎn)距離操縱工具，通過將磁性納米顆粒與有機(jī)或無機(jī) 材料結(jié)合，可以實(shí)現(xiàn)通過磁場對相應(yīng)材料的運(yùn)動進(jìn)行遠(yuǎn)距離控制，已在微晶體和碳納米管 研究領(lǐng)域受到了廣泛關(guān)注。在微生物學(xué)領(lǐng)域，已有研究成功將磁性納米顆粒固定在活體酵 母細(xì)胞，但應(yīng)用于活體細(xì)菌細(xì)胞的研究尚未見報(bào)道，其面臨的技術(shù)問題主要包括如何在固定化過程中保持細(xì)胞活性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種可以與生物傳感器結(jié)合，同時(shí)保持該生物傳感器活性， 并使生物傳感器具有磁性，便于檢測回收的磁性納米顆粒溶液，其制備方法及應(yīng)用。為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明提供了一種磁性納米顆粒溶液，該磁性納米顆粒分散 在溶劑中，其特征在于所述的溶劑是聚丙烯胺的鹽酸鹽水溶液。本發(fā)明的磁性納米顆粒溶液，其特征在于所述的磁性納米顆粒是直徑為15-21nm 的氧化鐵。本發(fā)明還提供了一種制備磁性納米顆粒溶液的方法，該方法包括下列步驟a.利用共沉積法合成磁性納米顆粒；b.利用超聲分散法在溶劑中分散磁性納米顆粒，得到磁性納米顆粒溶液；其特征在于所述的溶劑為聚丙烯胺的鹽酸鹽水溶液。本發(fā)明的制備磁性納米顆粒溶液的方法，其進(jìn)一步特征在于所述的磁性納米顆 粒是直徑為15-2 Inm的氧化鐵。本發(fā)明的制備磁性納米顆粒溶液的方法，其進(jìn)一步特征在于步驟b所述的超聲 分散法在溶劑中分散磁性納米顆粒包括下列步驟向步驟a所制得的磁性納米顆粒中加純 水，制得磁性納米顆粒水溶液，在聚丙烯胺的鹽酸鹽水溶液中加入磁性納米顆粒水溶液，在 超聲條件下震蕩，離心，棄去上清液，加入等體積純水，在超聲條件下震蕩，離心，棄去上清 液，再次加入等體積純水，獲得磁性納米顆粒溶液。本發(fā)明的制備磁性納米顆粒溶液的方法，其進(jìn)一步特征在于步驟b所述的超聲 分散法在溶劑中分散磁性納米顆粒包括下列步驟向步驟a所制得的磁性納米顆粒中加純 水，制得磁性納米顆粒水溶液，在聚丙烯胺的鹽酸鹽水溶液中加入磁性納米顆粒水溶液，在 20KHz至120KHz超聲條件下震蕩5_20分鐘，2000rpm至6000rpm下離心5_20分鐘，棄去上 清液，加入等體積純水，在20KHz至120KHz超聲條件下震蕩5_20分鐘，2000rpm至6000rpm 下離心5-20分鐘，棄去上清液，再次加入等體積純水，獲得磁性納米顆粒溶液。本發(fā)明還提供了一種磁性生物傳感器的構(gòu)建方法，該方法包括下列步驟a.接種生物傳感器的單菌落于液體培養(yǎng)基中，獲得細(xì)胞懸浮液；b.利用共沉積法合成磁性納米顆粒；c.利用超聲分散法在溶劑中分散磁性納米顆粒，獲得磁性納米顆粒溶液；d.將步驟a制得的細(xì)胞懸浮液與步驟c制得的磁性納米顆粒溶液共培養(yǎng)，磁體回 收已經(jīng)結(jié)合磁性納米顆粒的生物傳感器，制得磁性生物傳感器；其特征在于步驟c中所述的溶劑為聚丙烯胺的鹽酸鹽水溶液。本發(fā)明的磁性生物傳感器的構(gòu)建方法，其進(jìn)一步特征在于所述的磁性納米顆粒 是直徑為15-21nm的氧化鐵。本發(fā)明的磁性生物傳感器的構(gòu)建方法，其進(jìn)一步特征在于步驟c所述的超聲分 散法在溶劑中分散磁性納米顆粒包括下列步驟向步驟b中所制得的磁性納米顆粒中加純 水，制得磁性納米顆粒水溶液，在聚丙烯胺的鹽酸鹽水溶液中加入磁性納米顆粒水溶液，在 超聲條件下震蕩，離心，棄去上清液，加入等體積純水，在超聲條件下震蕩，離心，棄去上清液，再次加入等體積純水，獲得磁性納米顆粒溶液。本發(fā)明的磁性生物傳感器的構(gòu)建方法，其進(jìn)一步特征在于步驟c所述的超聲分 散法在溶劑中分散磁性納米顆粒包括下列步驟向步驟b中所制得的磁性納米顆粒中加純 水，制得磁性納米顆粒水溶液，在聚丙烯胺的鹽酸鹽水溶液中加入磁性納米顆粒水溶液，在 20KHz至120KHz超聲條件下震蕩5_20分鐘，2000rpm至6000rpm下離心5_20分鐘，棄去上 清液，加入等體積純水，在20KHz至120KHz超聲條件下震蕩5_20分鐘，2000rpm至6000rpm 下離心5-20分鐘，棄去上清液，再次加入等體積純水，獲得磁性納米顆粒溶液。本發(fā)明的磁性生物傳感器的構(gòu)建方法，其進(jìn)一步特征在于所述的的生物傳感器 自云力ff (Acinetobacter sp,)ADPWH_lux>^sj]ff (Acinetobacter sp. )ADPWH_ Tol 和不動桿菌(Acinetobacter sp.) ADPWH_alk。進(jìn)一步，本發(fā)明還提供了磁性納米顆粒溶液用于制備磁性生物傳感器的應(yīng)用。本 發(fā)明的磁性生物傳感器檢測水體或土壤樣品中污染物的應(yīng)用，是將所述的磁性生物傳感器 與水體或土壤樣品混合，培養(yǎng)所述磁性生物傳感器，通過檢測報(bào)道基因表達(dá)產(chǎn)物的發(fā)光強(qiáng) 度來直接定量檢測土壤樣品污染物含量。其中使用多功能酶標(biāo)儀作為檢測儀器，使用磁體 回收磁性生物傳感器，所述培養(yǎng)溫度為30°C。本發(fā)明的磁性納米顆粒溶液與生物傳感器結(jié)合，制備磁性生物傳感器，可以同時(shí) 保持該生物傳感器活性達(dá)到99. 95% -99. 97%，可保留原生物傳感器對特定底物的定量響 應(yīng)強(qiáng)度和檢測靈敏度，同時(shí)可以通過磁體回收的方法將磁性生物傳感器從水體或土壤樣品 中分離，有效增強(qiáng)了生物傳感器的使用范圍，為生物傳感器在環(huán)境檢測與醫(yī)藥領(lǐng)域的應(yīng)用 提供了技術(shù)支持。為了更好地理解本發(fā)明，現(xiàn)在結(jié)合附圖及具體實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)地說明。在此需要說明的是本發(fā)明所用的生物材料、試劑、儀器如無特別說明均屬于本領(lǐng) 域常規(guī)的生物材料、試劑、儀器，均可以通過商業(yè)途徑購得。本發(fā)明中所使用的培養(yǎng)基及方 法如無特別說明，均為本領(lǐng)域常規(guī)的培養(yǎng)基及方法。


圖1是本發(fā)明制得的磁性納米顆粒溶液的透射電子顯微鏡(TEM)照片。圖2是懸浮狀態(tài)(左圖)與磁體吸附狀態(tài)(右圖)的本發(fā)明制得的磁性生物傳感 器不動桿菌(Acinetobacter sp.) ADPWH_lux。圖3是本發(fā)明制得的磁性生物傳感器不動桿菌(Acinetobacter sp)ADPWH_lux薄 片法的透射電子顯微鏡(TEM)照片。圖4是圖3部分區(qū)域的放大圖像。圖5是本發(fā)明制得的磁性生物傳感器不動桿菌(Acinetobacter sp. )ADPWH_lux 的表面電子能譜(EDX)。圖6是在瓊脂糖板上菌落計(jì)數(shù)磁性生物傳感器不動桿菌(Acinetobacter sp.) ADPWH_lux數(shù)量的圖示。圖7是磁性生物傳感器不動桿菌(Acinetobacter sp. ) ADPWH_lux細(xì)胞的生長和 分裂的圖示。圖8是磁性生物傳感器不動桿菌(Acinetobacter sp. ) ADPWH_lux對水中不同濃度水楊酸的響應(yīng)。圖9A和9B是磁性生物傳感器不動桿菌(Acinetobacter sp. )ADPWH_alk對海水 中不同濃度石油的響應(yīng)。圖10是磁性生物傳感器不動桿菌(Acinetobactersp. )ADPWH_Tol對水中不同濃 度甲苯的響應(yīng)。圖11是磁性生物傳感器不動桿菌(Acinetobactersp. )ADPWH_lux對土壤不同水 楊酸含量的響應(yīng)。
具體實(shí)施例方式實(shí)施1 磁性納米顆粒溶液的制備將2. OmL濃度為1. OM的FeCl3溶液加入到試管中，緩慢加入0. 5mL濃度為2. OM的 FeCl2溶液，攪拌均勻。逐滴緩慢加入25mL濃度為1. OM的氯化銨溶液，同時(shí)IOOOrpm轉(zhuǎn)速 快速攪拌，直至出現(xiàn)黑色沉淀。使用磁體回收該沉淀，棄去上清液，加入等體積純水。反復(fù) 重復(fù)磁體回收過程，直至上清液PH值為7. 0，獲得含有磁性納米顆粒水溶液。取IOOmg 聚烯丙基胺鹽酸鹽(Poly (allylamine)Hydrochloride，PAH )，加入至 10. OmL純水中，配置濃度為10. 0g/L的聚烯丙基胺鹽酸鹽水溶液。取IOmL該聚烯丙基胺鹽 酸鹽水溶液，加入1. OmL上述步驟中制備得到的磁性納米顆粒水溶液，40KHz超聲波條件下 振蕩10分鐘，3000rpm條件下離心10分鐘，棄去上清液。加入等體積純水，重復(fù)上述超聲、 離心、棄去上清液過程。再次加入等體積純水，獲得磁性納米顆粒溶液。實(shí)施2 磁性納米顆粒溶液的制備將2. OmL濃度為1. OM的FeCl3溶液加入到試管中，緩慢加入0. 5mL濃度為2. OM的 FeCl2溶液，攪拌均勻。逐滴緩慢加入25mL濃度為1. OM的氯化銨溶液，同時(shí)IOOOrpm轉(zhuǎn)速 快速攪拌，直至出現(xiàn)黑色沉淀。使用磁體回收該沉淀，棄去上清液，加入等體積純水。反復(fù) 重復(fù)磁體回收過程，直至上清液PH值為7. 0，獲得含有磁性納米顆粒的水溶液。取IOOmg 聚烯丙基胺鹽酸鹽(Poly (allylamine)Hydrochloride，PAH)，加入至 10. OmL純水中，配置濃度為10. 0g/L的聚烯丙基胺鹽酸鹽水溶液。取IOmL該聚烯丙基胺鹽 酸鹽水溶液，加入1. OmL上述步驟中制備得到的磁性納米顆粒水溶液，20KHz超聲波條件下 振蕩5分鐘，2000rpm條件下離心5分鐘，棄去上清液。加入等體積純水，重復(fù)上述超聲、離 心、棄去上清液過程。再次加入等體積純水，獲得磁性納米顆粒溶液。實(shí)施3 磁性納米顆粒溶液的制備將2. OmL濃度為1. OM的FeCl3溶液加入到試管中，緩慢加入0. 5mL濃度為2. OM的 FeCl2溶液，攪拌均勻。逐滴緩慢加入25mL濃度為1. OM的氯化銨溶液，同時(shí)IOOOrpm轉(zhuǎn)速 快速攪拌，直至出現(xiàn)黑色沉淀。使用磁體回收該沉淀，棄去上清液，加入等體積純水。反復(fù) 重復(fù)磁體回收過程，直至上清液PH值為7. 0，獲得含有磁性納米顆粒的水溶液。取IOOmg 聚烯丙基胺鹽酸鹽(Poly (allylamine)Hydrochloride，PAH)，加入至 10. OmL純水中，配置濃度為10. 0g/L的聚烯丙基胺鹽酸鹽水溶液。取IOmL該聚烯丙基胺鹽 酸鹽水溶液，加入1. OmL上述步驟中制備得到的磁性納米顆粒水溶液，120KHz超聲波條件 下振蕩20分鐘，6000rpm條件下離心20分鐘，棄去上清液。加入等體積純水，重復(fù)上述超 聲、離心、棄去上清液過程。再次加入等體積純水，獲得磁性納米顆粒溶液。
參考圖1，實(shí)施例1-3中所制得的磁性納米顆粒溶液的透射電子顯微鏡(TEM)照片 顯示該磁性納米顆粒幾乎都是球形形狀并且氧化鐵顆粒的大小分布是15-21nm之間，包括端值。實(shí)施4 磁性生物傳感器不動桿菌(Acinetobacter sp. )ADPWH_lux的制備1)細(xì)胞培養(yǎng)生物傳感器不動桿菌(Acinetobacter sp. )ADPWH_lux(購自惟馨雨生物技術(shù)有限 公司或根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)公開的文獻(xiàn) Huang W. E. et al. Chromosomally located genefusions constructed in Acinetobacter sp.ADPl for the environmental detection of salicylate. Environ. Microbiol. 7，1339-1348，2005 所述方法構(gòu)建)單菌落接種至 LB 液體 培養(yǎng)基(LB)，30°C培養(yǎng)過夜后，取 IOmL 菌液(CFU = 5 X 108cells/mL), 3000rpm 離心 10 分 鐘，棄去上清液，加入等體積純水。使用渦旋振蕩器使細(xì)胞混合均勻，再次3000rpm離心10 分鐘，棄去上清液，加入ImL純水濃縮，該細(xì)胞懸浮液濃度約為5X109cells/mL。2)磁性納米顆粒溶液制備如實(shí)施例1所述。另取IOmL聚烯丙基胺鹽酸鹽水溶液，加入1. OmL純水，40KHz超聲波條件下振蕩 10分鐘，3000rpm條件下離心10分鐘，棄去上清液。加入等體積純水，重復(fù)上述超聲、離心、 棄去上清液過程。再次加入等體積純水，獲得聚烯丙基胺鹽酸鹽水溶液陰性對照。3)磁性生物傳感器構(gòu)建取500 μ L步驟1)中制備的細(xì)胞懸浮液，加入4. 5mL步驟2)中制備的磁性納米顆 粒溶液。30°C條件下震蕩培養(yǎng)30分鐘。使用磁體置于試管側(cè)壁10分鐘，回收已結(jié)合磁性 納米顆粒的生物傳感器，棄去上清液，加入等體積純水，使用漩渦振蕩器是細(xì)胞混合均勻。 上述磁體回收步驟重復(fù)三次，最后將所獲得磁性物質(zhì)溶解于等體積液體礦質(zhì)培養(yǎng)基(1升 液體礦物質(zhì)培養(yǎng)基含有 2. 5g Na2HPO4,2. 5g KH2PO4U. OgNH4CUO. IgMgSO4 ·7Η20、10 μ L 飽和 CaCl2溶液、10 μ L飽和FeSO4溶液和ImL Bauchop & Elsden溶液)中，獲得磁性生物傳感 器不動桿菌(Acinetobacter sp.) ADPWH_lux。另取500 μ L步驟1)中獲得的生物傳感器細(xì)胞懸浮液，加入4. 5mL步驟2)中制備 的聚烯丙基胺鹽酸鹽水溶液陰性對照。30°C條件下震蕩培養(yǎng)30分鐘。使用3000rpm離心 10分鐘，加入等體積純水，使用漩渦振蕩器是細(xì)胞混合均勻。上述離心回收步驟重復(fù)三次， 最后將所獲得沉淀溶解于等體積液體礦質(zhì)培養(yǎng)基中，獲得無磁性納米顆粒的生物傳感器不 動桿菌(Acinetobacter sp. )ADPWH_lux 陰性對照。實(shí)施5 磁性生物傳感器不動桿菌(Acinetobacter sp. )ADPWH_alk的制備1)細(xì)胞培養(yǎng)生物傳感器不動桿菌(Acinetobacter sp. )ADPWH_alk(購自惟馨雨生物技術(shù)有 限公司)單菌落接種至含有10mg/L卡那霉素的LB液體培養(yǎng)基(LBK)，30°C培養(yǎng)過夜后，取 IOmL菌液(CFU = 5 X 108cells/mL)，3000rpm離心10分鐘，棄去上清液，加入等體積純水。 使用渦旋振蕩器使細(xì)胞混合均勻，再次3000rpm離心10分鐘，棄去上清液，加入ImL純水濃 縮，該細(xì)胞懸浮液濃度約為5X109cellS/mL。2)磁性納米顆粒溶液制備如實(shí)施例2所述。
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3)磁性生物傳感器構(gòu)建取500 μ L步驟1)中獲得的生物傳感器細(xì)胞懸浮液，加入4. 5mL步驟2)制備的磁 性納米顆粒溶液。30°C條件下震蕩培養(yǎng)30分鐘。使用磁體置于試管側(cè)壁10分鐘，回收已結(jié) 合磁性納米顆粒的生物傳感器，棄去上清液，加入等體積純水，使用漩渦振蕩器是細(xì)胞混合 均勻。上述磁體回收步驟重復(fù)三次，最后將所獲得磁性物質(zhì)溶解于等體積液體礦質(zhì)培養(yǎng)基 (1 升液體礦物質(zhì)培養(yǎng)基含有 2. 5g Na2HPO4,2. 5gKH2P04、l. OgNH4CUO. IgMgSO4 · 7Η20、10 μ L 飽和CaCl2溶液、10 μ L飽和FeSO4溶液和ImL Bauchop & Elsden溶液)中，獲得磁性生物 傳感器不動桿菌(Acinetobacter sp.) ADPffH alk。另取500 μ L步驟1)中獲得的生物傳感器細(xì)胞懸浮液，加入4. 5mL實(shí)施例4步 驟2)中制備的聚烯丙基胺鹽酸鹽水溶液陰性對照。30°C條件下震蕩培養(yǎng)30分鐘。使用 3000rpm離心10分鐘，加入等體積純水，使用漩渦振蕩器是細(xì)胞混合均勻。上述離心回收步 驟重復(fù)三次，最后將所獲得沉淀溶解于等體積液體礦質(zhì)培養(yǎng)基(1升液體礦物質(zhì)培養(yǎng)基含 有 2. 5g Na2HPO4,2. 5g KH2PO4U. Og NH4Cl、0. Ig MgSO4 · 7H20、10 μ L 飽和 CaCl2 溶液、10 μ L 飽和FeSO4溶液和lmLBauchop&Elsden溶液)中，獲得無磁性納米顆粒的生物傳感器不動 桿菌(Acinetobacter sp.) ADPWH_alk 陰性對照。實(shí)施例6 磁性生物傳感器不動桿菌(Acinetobacter sp. )ADPWH_Tol的制備1)細(xì)胞培養(yǎng)磁性生物傳感器不動桿菌(Acinetobacter sp. ) ADPWH_Tol (購自惟馨雨 生物技術(shù)有限公司或根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)公開的文獻(xiàn)Huang W. Ε. et al. Characterizing the regulationof the Pu promoter in Acinetobacter baylyi ADP1. Environ. Microbiol. 10，1668-1680,2008所述方法構(gòu)建)單菌落接種至含有10mg/L卡那霉素的LB 液體培養(yǎng)基(LBK)，30°C培養(yǎng)過夜后，取IOmL菌液(CFU = 5 X 108cells/mL)，3000rpm離心 10分鐘，棄去上清液，加入等體積純水。使用渦旋振蕩器使細(xì)胞混合均勻，再次3000rpm離 心10分鐘，棄去上清液，加入ImL純水濃縮，該細(xì)胞懸浮液濃度約為5X 109cells/mL。2)磁性納米顆粒溶液制備如實(shí)施例3所述。3)磁性生物傳感器構(gòu)建取500 yL步驟1)中獲得的生物傳感器懸浮液，加入4. 5mL步驟2)中制備的磁性 納米顆粒溶液。30°C條件下震蕩培養(yǎng)30分鐘。使用磁體置于試管側(cè)壁10分鐘，回收已結(jié) 合磁性納米顆粒的生物傳感器，棄去上清液，加入等體積純水，使用漩渦振蕩器是細(xì)胞混合 均勻。上述磁體回收步驟重復(fù)三次，最后將所獲得磁性物質(zhì)溶解于等體積液體礦質(zhì)培養(yǎng)基 中，獲得磁性生物傳感器不動桿菌(Acinetobacter sp. )ADPWH_Tol。另取500 μ L步驟1)中獲得的生物傳感器懸浮液，加入4. 5mL實(shí)施例4步驟2)中 制備的聚烯丙基胺鹽酸鹽水溶液陰性對照。30°C條件下震蕩培養(yǎng)30分鐘。使用3000rpm 離心10分鐘，加入等體積純水，使用漩渦振蕩器是細(xì)胞混合均勻。上述離心回收步驟重復(fù) 三次，最后將所獲得沉淀溶解于等體積液體礦質(zhì)培養(yǎng)基(1升液體礦物質(zhì)培養(yǎng)基含有2. 5g Na2HPO4,2. 5g KH2PO4,1. Og NH4CUO. Ig MgSO4 · 7H20、10 μ L 飽和 CaCl2 溶液、10 μ L 飽和 FeSO4溶液和lmLBauchop&Elsden溶液)中，獲得無磁性納米顆粒的生物傳感器不動桿菌 (Acinetobacter sp. )ADPWH_Tol 陰性對照。
實(shí)施例7 磁性生物傳感器不動桿菌(Acinetobacter sp. )ADPWH_lux的特性對實(shí)施例4的磁性生物傳感器不動桿菌(Acinetobacter sp. )ADPWH_lux做如下 實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)過程及結(jié)果如下磁性生物傳感器不動桿菌(Acinetobacter sp. )ADPWH_lux懸浮狀態(tài)(圖2左圖) 與普通細(xì)胞懸濁液無顯著差異，在磁體吸附狀態(tài)(圖2右圖)下，磁性生物傳感器不動桿菌 (Acinetobacter sp.) ADPWH_lux可被有效富集和回收。證明了磁性納米顆粒溶液使得生物 傳感器不動桿菌(Acinetobacter sp. ) ADPWH_lux具有了磁性。如圖3所示，薄片法的磁性生物傳感器不動桿菌(Acinetobacter sp)ADPWH_lux 的透射電子顯微鏡照片顯示磁性納米顆粒粘附于細(xì)胞表面。如圖4所示，圖3中部分放大 的圖像顯示磁性納米顆粒都粘附于細(xì)胞外壁上，在胞質(zhì)中沒有發(fā)現(xiàn)磁性納米顆粒。此外， 如圖5所示，磁性生物傳感器不動桿菌(Acinetobacter sp. )ADPWH_lux的表面電子能譜 (EDX)證實(shí)了細(xì)胞壁上氧化鐵納米顆粒的存在。然后用磁性和非磁性的生物傳感器不動桿菌(Acinetobacter sp. )ADPWH_lux的 平板計(jì)數(shù)來估測該磁性生物傳感器不動桿菌(Acinetobacter sp. )ADPWH_lux的效率。計(jì)數(shù)結(jié)果是磁性生物傳感器不動桿菌(Acinetobacter sp. ) ADPWH_lux的數(shù)量是 2. 22士0. 10X 108CUF/ml，非磁性生物傳感器不動桿菌(Acinetobacter sp. )ADPWH_lux 細(xì) 胞數(shù)量是8. 00士0. 51X104CUF/ml (圖6)，表明磁性化生物傳感器不動桿菌(Acinetobacter sp. )ADPWH_lux的效率是99. 96士0. 01%。因?yàn)?，通過在瓊脂糖板上菌落計(jì)數(shù)來計(jì)數(shù)磁性生 物傳感器不動桿菌(Acinetobacter sp. )ADPWH_lux的數(shù)量，因此，該實(shí)驗(yàn)也表明磁性化的 細(xì)菌細(xì)胞還是活的，因此該磁性生物傳感器是生物相容性的。在PAH中分散的磁性納米顆 粒不能進(jìn)入胞質(zhì)解釋了高水平存活率的原因。并且我們也檢查了磁性化細(xì)胞的生長和分 裂，圖7表明在30°C溫育120分鐘期間，非磁性化的細(xì)胞數(shù)量從0增加到12%，這證明了磁 性化的細(xì)胞能夠正常分裂和生長。對實(shí)施例5和6中制得的磁性生物傳感器不動桿菌(Acinetobacter sp. )ADPWH_ alk和不動桿菌(Acinetobacter sp. )ADPWH_Tol做了相同的實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)過程及結(jié)果相同。實(shí)施例8 磁性生物傳感器不動桿菌(Acinetobacter sp. )ADPWH_lux對水中水楊 酸含量的檢測1)樣品準(zhǔn)備稱取160. Img水楊酸鈉，加入到IOOmL純水中，得到濃度為IOmM的水楊酸鈉儲備 溶液。分別上述獲得的水楊酸鈉溶液按比例用純水稀釋，配置濃度為50nM、IOOnMU μ M、 10 μ M和100 μ M的水楊酸鈉溶液。稱取27. 02g六水合丁 二酸鈉，加入到IOOmL純水中，使用0. 22 μ m濾膜 (Millipore)過濾，得到無菌丁二酸鈉儲備溶液，該溶液丁二酸鈉濃度為1M。2)樣品測試取176 μ L實(shí)施例4中獲得的磁性生物傳感器和無磁性陰性對照的生物傳感器，加 入黑色底透的96孔酶標(biāo)板(美國Corning Costar公司)孔內(nèi)。每孔內(nèi)分別加入4 μ L 丁 二酸那儲備溶液和20 μ L上述系列水楊酸鈉溶液，使用純水作為陰性對照(control)，每組 測試包括三個(gè)平行樣。使用多功能酶標(biāo)儀(型號Synergy 2，美國BioTek公司)對96孔酶標(biāo)板內(nèi)生物發(fā)光強(qiáng)度進(jìn)行測量。培養(yǎng)溫度為30°C，每10分鐘進(jìn)行一次測量，每次測量前振蕩1分鐘以保 證細(xì)胞混合均勻。3)數(shù)據(jù)處理計(jì)算步驟2)中測試過程所獲得的每種生物傳感器三組平行樣均值，獲得每種生 物傳感器陰性對照與誘導(dǎo)組不同時(shí)刻生物發(fā)光強(qiáng)度。每種生物傳感器誘導(dǎo)組不同時(shí)刻生物 發(fā)光強(qiáng)度除以對應(yīng)時(shí)刻陰性對照組生物發(fā)光強(qiáng)度，獲得每種生物傳感器誘導(dǎo)組不同時(shí)刻生 物發(fā)光相對倍數(shù)。取每種生物傳感器誘導(dǎo)組不同時(shí)刻生物發(fā)光相對倍數(shù)峰值及其前后各2 個(gè)時(shí)間點(diǎn)生物發(fā)光相對倍數(shù)，計(jì)算平均值，獲得該生物傳感器生物發(fā)光響應(yīng)倍數(shù)。磁性生物傳感器不動桿菌(Acinetobacter sp. )ADPWH_lux對水中不同濃度水 楊酸的響應(yīng)如圖8所示。測試結(jié)果表明，磁性生物傳感器不動桿菌(Acinetobactersp.) ADPWH_lux與原生物傳感器均對水楊酸有顯著響應(yīng)，生物發(fā)光響應(yīng)倍數(shù)隨水楊酸濃度增加 而增強(qiáng)。兩種生物傳感器對相同濃度水楊酸溶液的響應(yīng)無顯著差異，表明磁性生物傳感器 不動桿菌(Acinetobacter sp.) ADPWH_lux可以有效識別并對水溶液中水楊酸產(chǎn)生定量響 應(yīng)。實(shí)施例8 磁性生物傳感器不動桿菌(Acinetobacter sp. ) ADP_alk對海水中石油 含量的檢測。1)樣品準(zhǔn)備分別12. 5 μ L英國北海布倫特原油和伊朗錫里島原油，溶解于IOOmL海水中，使用 40Κ-Ηζ超聲波振蕩30秒，搖勻，該乳濁液含有石油濃度為100mg/L。將該乳濁液按不同比 例使用海水稀釋，配制濃度為0. 1,0. 2、l、2、10、20、100mg/L的系列石油海水溶液。稱取27. 02g六水合丁 二酸鈉，加入到IOOmL純水中，使用0. 22 μ m濾膜 (Millipore)過濾，得到無菌丁二酸鈉儲備溶液，該溶液丁二酸鈉濃度為1M。2)樣品測試取20 μ L實(shí)施例5中制得的磁性生物傳感器和無磁性陰性對照生物傳感器的懸浮 液，加入黑色底透的96孔酶標(biāo)板(美國Corning Costar公司)孔內(nèi)。每孔內(nèi)分別加入4 μ L 丁二酸那儲備溶液和176 μ L上述系列石油水溶液，使用純水作為陰性對照(control)，每 組測試包括三個(gè)平行樣。使用多功能酶標(biāo)儀(型號Synergy 2，美國BioTek公司)對96孔酶標(biāo)板內(nèi)生物發(fā) 光強(qiáng)度進(jìn)行測量。培養(yǎng)溫度為30°C，每10分鐘進(jìn)行一次測量，每次測量前振蕩1分鐘以保 證細(xì)胞混合均勻。3)數(shù)據(jù)處理計(jì)算步驟2)中測試過程所獲得的每種生物傳感器三組平行樣均值，獲得每種生 物傳感器陰性對照與誘導(dǎo)組不同時(shí)刻生物發(fā)光強(qiáng)度。每種生物傳感器誘導(dǎo)組不同時(shí)刻生物 發(fā)光強(qiáng)度除以對應(yīng)時(shí)刻陰性對照組生物發(fā)光強(qiáng)度，獲得每種生物傳感器誘導(dǎo)組不同時(shí)刻生 物發(fā)光相對倍數(shù)。取每種生物傳感器誘導(dǎo)組不同時(shí)刻生物發(fā)光相對倍數(shù)峰值及其前后各2 個(gè)時(shí)間點(diǎn)生物發(fā)光相對倍數(shù)，計(jì)算平均值，獲得該生物傳感器生物發(fā)光響應(yīng)倍數(shù)。磁性生物傳感器不動桿菌(Acinetobacter sp. ) ADPWH_alk對海水中不同濃度石 油的響應(yīng)如圖9A、9B所示。測試結(jié)果表明，磁性生物傳感器不動桿菌(Acinetobacter sp.) ADPWH_alk與原生物傳感器均對海水中不同濃度的原油有顯著響應(yīng)，生物發(fā)光響應(yīng)倍數(shù)隨原油濃度增加而增強(qiáng)。相同石油濃度條件下，磁性生物傳感器生物發(fā)光響應(yīng)倍數(shù)顯著低于 原生物傳感器，這可能是由于磁性生物傳感器表面聚丙烯基胺高分子膜對非極性分子傳質(zhì) 的陽礙作用，但兩種生物傳感器對原油的檢測限相同，表明磁性生物傳感器Acinetobacter sp. ADPWH_alk可以有效識別并對海水中原油產(chǎn)生定量響應(yīng)。實(shí)施例9:磁性生物傳感器(Acinetobacter sp) ADPWH_Tol對水中甲苯含量的檢 測1)樣品準(zhǔn)備取甲苯20 μ L加入到IOOmL純水中，40Κ-Ηζ超聲波30秒，得到甲苯飽和儲備溶液， 濃度為600 μ Μ。將該乳濁液按不同比例使用純水稀釋，配制濃度為6、60和600 μ M的系列
甲苯溶液。稱取27. 02g六水合丁 二酸鈉，加入到IOOmL純水中，使用0. 22 μ m濾膜 (Millipore)過濾，得到無菌丁二酸鈉儲備溶液，該溶液丁二酸鈉濃度為1M。2)樣品測試取20 μ L實(shí)施例6中獲得的磁性生物傳感器和無磁性陰性對照生物傳感器懸浮 液，加入黑色底透的96孔酶標(biāo)板(美國Corning Costar公司)孔內(nèi)。每孔內(nèi)分別加入4 μ L 丁二酸那儲備溶液和176 μ L上述系列甲苯水溶液，使用純水作為陰性對照(control)，每 組測試包括三個(gè)平行樣。使用多功能酶標(biāo)儀(型號Synergy 2，美國BioTek公司)對96孔酶標(biāo)板內(nèi)生物發(fā) 光強(qiáng)度進(jìn)行測量。培養(yǎng)溫度為30°C，每10分鐘進(jìn)行一次測量，每次測量前振蕩1分鐘以保 證細(xì)胞混合均勻。3)數(shù)據(jù)處理計(jì)算步驟2)中測試過程所獲得的每種生物傳感器三組平行樣均值，獲得每種生 物傳感器陰性對照與誘導(dǎo)組不同時(shí)刻生物發(fā)光強(qiáng)度。每種生物傳感器誘導(dǎo)組不同時(shí)刻生物 發(fā)光強(qiáng)度除以對應(yīng)時(shí)刻陰性對照組生物發(fā)光強(qiáng)度，獲得每種生物傳感器誘導(dǎo)組不同時(shí)刻生 物發(fā)光相對倍數(shù)。取每種生物傳感器誘導(dǎo)組不同時(shí)刻生物發(fā)光相對倍數(shù)峰值及其前后各2 個(gè)時(shí)間點(diǎn)生物發(fā)光相對倍數(shù)，計(jì)算平均值，獲得該生物傳感器生物發(fā)光響應(yīng)倍數(shù)。磁性生物傳感器不動桿菌(Acinetobacter sp. )ADPWH_Tol對水中不同濃度甲苯 的響應(yīng)如圖10所示。測試結(jié)果表明，磁性生物傳感器Acinetobacter sp. ADPWH_Tol與原生 物傳感器均對甲苯有顯著響應(yīng)，生物發(fā)光響應(yīng)倍數(shù)隨甲苯濃度增加而增強(qiáng)。兩種生物傳感 器對相同濃度甲苯溶液的響應(yīng)無顯著差異，表明磁性生物傳感器不動桿菌(Acinetobacter sp. )ADPWH_lux可以有效識別并對水溶液中甲苯產(chǎn)生定量相應(yīng)。實(shí)施例10 磁性生物傳感器不動桿菌(Acinetobacter sp. )ADPWH_lux對土壤水 楊酸含量的檢測1)細(xì)胞培養(yǎng)不動桿菌(Acinetobacter sp.)ADPWH_lux單菌落接種至LB液體培養(yǎng)基(LB)， 30°C培養(yǎng)過夜后，取IOmL菌液(CFU = 5 X 108cells/mL)，3000rpm離心10分鐘，棄去上清 液，加入等體積純水。使用渦旋振蕩器使細(xì)胞混合均勻，再次3000rpm離心10分鐘，棄去上 清液，加入ImL純水濃縮，該細(xì)胞懸浮液濃度約為5X109cells/mL。2)磁性生物傳感器構(gòu)建
取500 μ L步驟1)中獲得的細(xì)胞懸浮液，加入4. 5mL實(shí)施例1中制備的磁性納米顆 粒溶液。30°C條件下震蕩培養(yǎng)30分鐘。使用磁體置于試管側(cè)壁10分鐘，回收已結(jié)合磁性納 米顆粒的生物傳感器，棄去上清液，加入等體積純水，使用漩渦振蕩器是細(xì)胞混合均勻。上 述磁體回收步驟重復(fù)三次，最后將所獲得磁性物質(zhì)溶解于1/10體積純水中，獲得磁性生物 傳感器不動桿菌(Acinetobacter sp.) ADPWH_lux。3)樣品準(zhǔn)備稱取160. Img水楊酸鈉，加入到IOOmL純水中，得到濃度為IOmM的水楊酸鈉儲備 溶液。分別上述獲得的水楊酸鈉溶液按比例用純水稀釋，配置濃度為0、0. 1、1、10和ΙΟΟμΜ 的水楊酸鈉溶液。分別取上述水楊酸鈉溶液2. OmL加入到2. Og干凈土壤中，室溫條件下震 動攪拌24小時(shí)以保證水楊酸與土壤混合均勻，該土壤水楊酸含量分別為0. 0,0. 14,1. 4,14 和140mg/g。上述土壤分別加入8mL純水，40K_Hz超聲波300秒后，加入ImL步驟2)中獲得 的磁性生物傳感器不動桿菌(Acinetobacter sp.) ADPWH_lux和ImL液體LB培養(yǎng)基。該土 壤/生物傳感器混合液30°C條件下培養(yǎng)20分鐘，靜置2分鐘后取2mL上清液。使用磁體置 于含上述上清液的試管側(cè)壁10分鐘，回收磁性生物傳感器不動桿菌(Acinetobacter sp.) ADPWH_lux,小心移去上清液和土壤顆粒沉淀，加入1. 8mL純水和200 μ L新鮮液體LB培養(yǎng) 基，振蕩搖勻。4)樣品測試取200 μ L步驟2)中獲得的磁性生物傳感器Acinetobacter sp. ADPWH_lux懸浮 液，加入黑色底透的96孔酶標(biāo)板(美國Corning Costar公司)孔內(nèi)，每組測試包括三個(gè)平 行樣。使用多功能酶標(biāo)儀(型號Synergy 2，美國BioTek公司)對96孔酶標(biāo)板內(nèi)生物發(fā) 光強(qiáng)度進(jìn)行測量。培養(yǎng)溫度為30°C，每10分鐘進(jìn)行一次測量，每次測量前振蕩1分鐘以保 證細(xì)胞混合均勻。5)數(shù)據(jù)處理計(jì)算步驟4)中測試過程所獲得的每種生物傳感器三組平行樣均值，獲得每種生 物傳感器陰性對照與誘導(dǎo)組不同時(shí)刻生物發(fā)光強(qiáng)度。每種生物傳感器誘導(dǎo)組不同時(shí)刻生物 發(fā)光強(qiáng)度除以對應(yīng)時(shí)刻陰性對照組生物發(fā)光強(qiáng)度，獲得每種生物傳感器誘導(dǎo)組不同時(shí)刻生 物發(fā)光響應(yīng)倍數(shù)。磁性生物傳感器不動桿菌(Acinetobacter sp. ) ADPWH_lux對土壤不同水楊 酸含量的響應(yīng)如圖11所示。測試結(jié)果表明，經(jīng)磁體回收的磁性生物傳感器不動桿菌 (Acinetobacter sp. )ADPWH_lux對土壤中水楊酸有顯著響應(yīng)，生物發(fā)光響應(yīng)倍數(shù)隨水楊酸 含量增加而增強(qiáng)。磁性生物傳感器不動桿菌(Acinetobacter sp.)ADPWH_lux對土壤不同 水楊酸含量的響應(yīng)峰值出現(xiàn)在120分鐘左右，但與土壤混合培養(yǎng)后已對水楊酸產(chǎn)生響應(yīng)， 表現(xiàn)為多功能酶標(biāo)儀0分鐘時(shí)刻不同水楊酸含量土壤對應(yīng)生物發(fā)光響應(yīng)倍數(shù)不同。
權(quán)利要求
一種磁性納米顆粒溶液，該磁性納米顆粒分散在溶劑中，其特征在于所述的溶劑是聚丙烯胺的鹽酸鹽水溶液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的磁性納米顆粒溶液，其特征在于所述的磁性納米顆粒是直 徑為15-2 Inm的氧化鐵。
3.一種制備磁性納米顆粒溶液的方法，該方法包括下列步驟a.利用共沉積法合成磁性納米顆粒；b.利用超聲分散法在溶劑中分散磁性納米顆粒，得到磁性納米顆粒溶液；其特征在于所述的溶劑為聚丙烯胺的鹽酸鹽水溶液。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備磁性納米顆粒溶液的方法，其特征在于所述的磁性納 米顆粒是直徑為15-21nm的氧化鐵。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備磁性納米顆粒溶液的方法，其特征在于步驟b的超聲 分散法在溶劑中分散磁性納米顆粒包括下列步驟向步驟a中制得的磁性納米顆粒中加純 水，制得磁性納米顆粒水溶液，在聚丙烯胺的鹽酸鹽水溶液中加入磁性納米顆粒水溶液，在 超聲條件下震蕩，離心，棄去上清液，加入等體積純水，在超聲條件下震蕩，離心，棄去上清 液，再次加入等體積純水，獲得磁性納米顆粒溶液。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備磁性納米顆粒溶液的方法，其特征在于步驟b的超聲 分散法在溶劑中分散磁性納米顆粒包括下列步驟向步驟a中制得的磁性納米顆粒中加純 水，制得磁性納米顆粒水溶液，在聚丙烯胺的鹽酸鹽水溶液中加入磁性納米顆粒水溶液，在 20KHz至120KHz超聲條件下震蕩5_20分鐘，2000rpm至6000rpm下離心5_20分鐘，棄去上 清液，加入等體積純水，在20KHz至120KHz超聲條件下震蕩5_20分鐘，2000rpm至6000rpm 下離心5-20分鐘，棄去上清液，再次加入等體積純水，獲得磁性納米顆粒溶液。
7.—種磁性生物傳感器的構(gòu)建方法，該方法包括下列步驟a.接種生物傳感器的單菌落于液體培養(yǎng)基中，獲得細(xì)胞懸浮液。b.利用共沉積法合成磁性納米顆粒；c.利用超聲分散法在溶劑中分散磁性納米顆粒，得到磁性納米顆粒溶液；d.將步驟a制得的細(xì)胞懸浮液與步驟c制得的磁性納米顆粒溶液共培養(yǎng)，磁體回收已 經(jīng)結(jié)合磁性納米顆粒的生物傳感器，得到磁性生物傳感器；其特征在于步驟c中所述的溶劑為聚丙烯胺的鹽酸鹽水溶液。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的磁性生物傳感器的構(gòu)建方法，其特征在于所述的磁性納米 顆粒是直徑為15-21nm的氧化鐵。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的磁性生物傳感器的構(gòu)建方法，其特征在于步驟c的超聲分 散法在溶劑中分散磁性納米顆粒包括下列步驟向步驟b中制得的磁性納米顆粒中加純 水，制得磁性納米顆粒水溶液，在聚丙烯胺的鹽酸鹽水溶液中加入磁性納米顆粒水溶液，在 超聲條件下震蕩，離心，棄去上清液，加入等體積純水，在超聲條件下震蕩，離心，棄去上清 液，再次加入等體積純水，獲得磁性納米顆粒溶液。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的磁性生物傳感器的構(gòu)建方法，其特征在于步驟c的超聲 分散法在溶劑中分散磁性納米顆粒包括下列步驟向步驟b中制得的磁性納米顆粒中加純 水，制得磁性納米顆粒水溶液，在聚丙烯胺的鹽酸鹽水溶液中加入磁性納米顆粒水溶液，在 20KHz至120KHz超聲條件下震蕩5_20分鐘，2000rpm至6000rpm下離心5_20分鐘，棄去上清液，加入等體積純水，在20KHz至120KHz超聲條件下震蕩5_20分鐘，2000rpm至6000rpm 下離心5-20分鐘，棄去上清液，再次加入等體積純水，獲得磁性納米顆粒溶液。
11.根據(jù)權(quán)利要求7至10中任一權(quán)利要求所述的磁性生物傳感器的構(gòu)建方法，其特 征在于所述的生物傳感器選自不動桿菌(Acinetobacter sp.) ADPWH_lux、不動桿菌 (Acinetobacter sp.) ADPWH_Tol 和不動桿菌(Acinetobacter sp. )ADPWH_alk0
12.權(quán)利要求1或2所述的磁性納米顆粒溶液用于制備磁性生物傳感器的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種分散在聚丙烯胺的鹽酸鹽水溶液中的磁性納米顆粒溶液。制備磁性納米顆粒溶液的方法，包括下列步驟利用共沉積法合成磁性納米顆粒；利用超聲分散法在溶劑中分散磁性納米顆粒，得到磁性納米顆粒溶液；其特征在于所述的溶劑為聚丙烯胺的鹽酸鹽水溶液。本發(fā)明也公開了利用該磁性納米顆粒溶液制備磁性生物傳感器的方法及在制備磁性生物傳感器的應(yīng)用。本發(fā)明磁性納米顆粒溶液制備的磁性生物傳感器，保持該生物傳感器活性達(dá)到99.95％-99.97％，可保留原生物傳感器對特定底物的定量響應(yīng)強(qiáng)度和檢測靈敏度，同時(shí)可以通過磁體回收將生物傳感器從水體或土壤樣品中分離，為生物傳感器在環(huán)境檢測與醫(yī)藥領(lǐng)域的應(yīng)用提供了技術(shù)支持。
文檔編號C12Q1/02GK101982420SQ201010513790
公開日2011年3月2日 申請日期2010年10月20日 優(yōu)先權(quán)日2010年10月20日
發(fā)明者張大奕, 拉威爾·法克魯林, 曾雨, 穆斯塔法·奧茲曼, 維塞林·保諾夫, 黃巍 申請人:北京惟馨雨生物科技有限公司