專利名稱：蛭弧菌蛭質(zhì)體作為除菌劑在清洗水果中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及蛭弧菌蛭質(zhì)體的應(yīng)用，特別是在消除水果表面及其加工過(guò)程中攜帶的 菌落總數(shù)和致病菌的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
食品安全已經(jīng)成為全世界共同關(guān)注的問(wèn)題，國(guó)內(nèi)外的各種資料和統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)表明微 生物是引起食源性疾病的罪魁禍?zhǔn)住ｋS著“生食療法”逐漸被視為一種健康的時(shí)尚，因生食 水果導(dǎo)致的大規(guī)模食物中毒頻繁爆發(fā)，其原因大多是沙門氏菌，大腸桿菌，、單核李斯特菌， 金黃色葡萄球菌等的污染。因此，通過(guò)清洗殺菌技術(shù)，清除或殺滅果蔬中的病原微生物，達(dá) 到預(yù)防和控制果蔬引起的傳染病的目的，對(duì)果蔬進(jìn)行保鮮非常重要。目前，水果的工業(yè)化清洗過(guò)程，主要是采用物理清洗和化學(xué)殺菌劑配合的方式，首 先根據(jù)水果的不同類型選擇不同的清洗設(shè)備，比如DT5A1型清洗機(jī)、鼓風(fēng)式清洗機(jī)、XGJ-2 型清洗機(jī)，主要原理是水果與清洗水之間的摩擦與相互作用，同時(shí)輔助于刷輥，將水果表面 污物洗凈；其次選擇適合的清洗劑，現(xiàn)市場(chǎng)上銷售的清洗劑種類很多，有洗滌、去污作用的， 有殺菌功能的，但傳統(tǒng)的清洗方法對(duì)除去果蔬中的泥土效果雖好，但對(duì)微生物的消除效果 不明顯。目前使用的水果殺菌劑多為氯系殺菌劑，但此類不僅不能殺滅水果表面存在的致 病菌比如大腸桿菌0157:H7菌株、沙門氏菌、志賀氏菌、單核李斯特菌、金黃色葡萄球菌等， 而且還會(huì)與食品中某些成份反應(yīng)生成氯化物，對(duì)人體產(chǎn)生危害，清洗過(guò)后的廢水中含有由 于氯的殘留，與水中有機(jī)物反應(yīng)生成三氯甲烷，不僅污染水體、大氣，還會(huì)對(duì)人體產(chǎn)生致癌 作用。因此開(kāi)發(fā)一種新型的除菌劑作為水果的清洗方法，從而保證水果加工的安全性， 是十分必要的。蛭弧菌是寄生于其他細(xì)菌，并能導(dǎo)致宿主細(xì)菌裂解的一類細(xì)菌；比一般細(xì)菌小，能 通過(guò)細(xì)菌濾器，有類似噬菌體的作用；革蘭氏染色呈陰性，可裂解(潛在)致病菌。蛭弧菌 的生活史可分為脫離宿主細(xì)菌、具有鞭毛、自由游泳的游泳體狀態(tài)和在宿主細(xì)菌內(nèi)生長(zhǎng)發(fā) 育的蛭質(zhì)體狀態(tài)。游泳體蛭弧菌侵入宿主的周質(zhì)空間的同時(shí)失去鞭毛，宿主細(xì)胞和蛭弧菌 一起，成為蛭質(zhì)體。與游泳體相比，蛭質(zhì)體具有制備、保存更為方便，環(huán)境耐受力強(qiáng)，作用時(shí) 間持久的特點(diǎn)，使得它可被應(yīng)用于保證食品的衛(wèi)生安全上。已有的研究表明，作為一種有益微生物制劑，無(wú)論是在食品工業(yè)還是在(海洋) 水產(chǎn)養(yǎng)殖等領(lǐng)域，蛭弧菌的應(yīng)用均是安全的。例如在國(guó)外，Lenz andHespel 1(1978)研 究發(fā)現(xiàn)，蛭弧菌及對(duì)動(dòng)物及人的細(xì)胞不具侵染性[Lenz R. W. ,Hespell R. B. Attempts to grow bedellovibrios micurgically-injected into animalcells. Archives of Microbiology, 1978,119(3) =245-248] 在國(guó)內(nèi)，林茂等(2006)研究了蛭弧菌對(duì)魚(yú)類細(xì) 胞的作用，發(fā)現(xiàn)它對(duì)魚(yú)類細(xì)菌沒(méi)有侵染作用[林茂，楊先樂(lè)，薛暉，曹海鵬，邱軍強(qiáng)。蛭弧菌 BDH2102對(duì)魚(yú)類細(xì)胞及病原菌的作用。微生物學(xué)通報(bào)，2006，33(1) :7_11]。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，提供一種蛭弧菌蛭質(zhì)體在消除水果 表面及其加工環(huán)境中攜帶的菌落總數(shù)和致病菌的應(yīng)用。為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下一種蛭弧菌，其特征在于，該菌株為蛭弧菌(Bdellovibrio sp. )BDM01，由中國(guó)典 型培養(yǎng)物保藏中心保藏，保藏編號(hào)為CCTCC NO :M208066，保藏日期為2008年4月28日。所述蛭弧菌BDMOl (CCTCC M208066)由蛭弧菌 BDJOl (CCTCCM208011)進(jìn)行紫外 誘變得到，對(duì)其進(jìn)行負(fù)染后于電子顯微鏡下形態(tài)觀察該蛭弧菌呈單細(xì)胞，弧形，大小為 1. 7 X 1. 0 μ m，端生鞭毛，鞭毛長(zhǎng)度為3. 5 μ m ；將其以雙層平板法于28°C培養(yǎng)三天可形成直 徑3-4mm的透明圓形噬菌斑。蛭弧菌BDMOl蛭質(zhì)體作為除菌劑在清洗水果中的應(yīng)用，將該蛭弧菌蛭質(zhì)體菌液作 為除菌劑添加在清洗用水中，然后對(duì)水果進(jìn)行清洗。優(yōu)選地，所述蛭弧菌蛭質(zhì)體菌液在清洗用水中的濃度至少為102pfu/mL。優(yōu)選地，所述蛭弧菌蛭質(zhì)體采用發(fā)酵方法進(jìn)行制備，具體步驟如下在含有IOmLX 101Qcfu/mL嗜水氣單胞菌的 IOOmL DNB(dilute nutrientbroth)液 體培養(yǎng)基(營(yíng)養(yǎng)肉湯0. 8g，酪蛋白酸水解物0. 5g，酵母精提物0. lg，溶于IOOOmL蒸餾水中， PH 值為 7. 2 7. 6)中接入 IOmL 103pfu/mL 蛭弧菌 BDM01，于 20 35°C、150 300rpm 培 養(yǎng)36 48h，培養(yǎng)液經(jīng)4°C 6000 8000rpm離心15 20min后，去除含蛭弧菌游泳體的上 清，沉淀即是蛭質(zhì)體；然后用5mL DNB液體培養(yǎng)基、無(wú)菌水、生理鹽水或0. 2mol/L pH值為 7. 2 7. 6的磷酸鹽緩沖液懸浮，得到的蛭弧菌蛭質(zhì)體菌液。優(yōu)選地，將蛭弧菌蛭質(zhì)體菌液加入清洗用水中，蛭弧菌蛭質(zhì)體的濃度范圍為IO2 109pfu/mLo優(yōu)選地，清洗時(shí)先將水果放入蛭弧菌蛭質(zhì)體菌液中浸泡20 40min，以消除水果 中的致病菌。蛭弧菌BDMOl蛭質(zhì)體作為除菌劑在水果加工環(huán)境中的應(yīng)用，將蛭弧菌蛭質(zhì)體菌液 作為除菌劑噴灑在水果加工環(huán)境中，使蛭弧菌蛭質(zhì)體的濃度至少達(dá)到102pfu/mL，使用量為 30-50mL/m2;水果加工環(huán)境包括水果的加工車間、清洗設(shè)備及水果的傳送帶及水果加工設(shè)備等。所述致病菌為大腸桿菌(Escherichia coli)、沙門氏菌(Salmonella)、金黃色葡 萄球菌(staphylococcus aureus)、單核李其jf特菌(Listeriamonocytogenes)等。所述沙 門氏菌包括鼠傷寒沙門氏菌(Salmonellatyphimurium)和豬霍亂沙門氏菌(Salmonella cholerae-suis)。本發(fā)明相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)，具有如下的優(yōu)點(diǎn)及效果1、本發(fā)明蛭弧菌蛭質(zhì)體作為消毒劑在消除水果攜帶的總菌、致病菌中效果顯著， 如圖1、2所示，致病菌的消除率達(dá)93%以上。2、在加工或食用前用蛭弧菌消除水果表面致病菌安全性好蛭弧菌消除水果攜帶的致病菌的方法是生物的方法，蛭弧菌可侵染、裂解宿主細(xì) 菌的特性使之適合作為抑止或清除生物體及其環(huán)境中致病菌的生物凈化因子，且其在裂解 完宿主細(xì)菌后，會(huì)因饑餓而自動(dòng)消亡，因此對(duì)人和動(dòng)物無(wú)毒副作用，也為水果的綠色加工生產(chǎn)提供保障。3、本發(fā)明應(yīng)用于水果的加工環(huán)境、加工與清洗設(shè)備消毒殺菌，方便、安全且效果 好。4、本發(fā)明為消除水果所攜帶的食源性致病菌提供一種新的方法，并適合推廣應(yīng)用 于水果的從農(nóng)田到餐桌的整個(gè)產(chǎn)業(yè)鏈，特別有利于減少或消除化學(xué)藥物如殺菌劑的殘留， 確保水果的優(yōu)質(zhì)，從根本上避免水果食物中毒事件的發(fā)生，保證消費(fèi)者的健康。5、與蛭弧菌游泳體相比，蛭質(zhì)體具有制備、保存更為方便，環(huán)境耐受力強(qiáng)，殺菌作 用時(shí)間更久等優(yōu)點(diǎn)。這些優(yōu)點(diǎn)使得蛭弧菌蛭質(zhì)體作為抑止或清除生物體及其環(huán)境中致病菌 的生物凈化因子，能在水果加工前完成致病菌的生物消除工作，同時(shí)也可以減少或消除食 物中毒的機(jī)率，減少或消除藥物殘留的可能，提高產(chǎn)品質(zhì)量安全系數(shù)，保護(hù)消費(fèi)者的健康。


圖1為不同濃度蛭弧菌蛭質(zhì)體作為除菌劑在消除蘋果表面菌落總數(shù)的試驗(yàn)效果 比較圖。圖2為不同濃度蛭弧菌蛭質(zhì)體作為除菌劑在消除蘋果表面致病菌的試驗(yàn)效果比 較圖。圖3為不同濃度蛭弧菌蛭質(zhì)體作為除菌劑在消除香瓜表面菌落總數(shù)的試驗(yàn)效果 比較圖。圖4為不同濃度蛭弧菌蛭質(zhì)體作為除菌劑在消除香瓜表面致病菌的試驗(yàn)效果比 較圖。圖5為清洗用水中加入不同的除菌劑后殺菌效果比較。圖6為102pfU/mL蛭弧菌蛭質(zhì)體對(duì)加工環(huán)境、加工與清洗設(shè)備的除菌效果。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步具體詳細(xì)描述，但本發(fā)明的實(shí)施方式不限 于此，對(duì)于未特別注明的工藝參數(shù)，可參照常規(guī)技術(shù)進(jìn)行。所述方法對(duì)大腸桿菌、沙門氏菌、單增李斯特菌、金黃色葡萄球菌等致病菌均有 效，但為實(shí)驗(yàn)結(jié)果及圖表數(shù)據(jù)表達(dá)清晰，致病菌以大腸桿菌、鼠傷寒沙門氏菌、單增李斯特 菌和金黃色葡萄球菌為例。實(shí)施例1蘋果表面常見(jiàn)致病菌的消除(1)消除蘋果表面致病菌的蛭弧菌蛭質(zhì)體的制備所述蛭弧菌BDMOl由蛭弧菌BDJOl進(jìn)行紫外誘變得到，對(duì)其進(jìn)行負(fù)染后于電子顯 微鏡下形態(tài)觀察蛭弧菌BDMOl呈單細(xì)胞，弧形，大小為1. 7 X 1.0 μ m，端生鞭毛，鞭毛長(zhǎng)度 為3. 5 μ m ；將其以雙層平板法于28°C培養(yǎng)三天可形成直徑3_4mm的透明圓形噬菌斑。蛭弧菌蛭質(zhì)體制備在1個(gè)裝有IOOmL NB (Nutrient broth)液體培養(yǎng)基的錐形瓶 中接種IOmLX 10lclcfu/mL嗜水氣單胞菌(Aeromonas hydrophila，購(gòu)于廣東省微生物所菌 種保藏中心，編號(hào)GIM1. 172)，250印111、301搖床培養(yǎng)24小時(shí)，培養(yǎng)液分別于41、5000印111離 心15min，棄上清。沉淀菌體用5mL無(wú)菌水重新懸浮，之后加入到1個(gè)裝有IOOmL DNB液體培養(yǎng)基(dilute nutrientbroth)液體培養(yǎng)基(營(yíng)養(yǎng)肉湯0. 8g，酪蛋白酸水解物0. 5g，酵母 精提物0. lg，溶于IOOOmL蒸餾水中，pH值為7. 2 7. 6)的錐形瓶中，菌液再加入IOmL濃 度為103pfu/mL蛭弧菌BDM01，恒溫?fù)u床250rpm、30°C培養(yǎng)36h。培養(yǎng)液分別于4°C 6000rpm 離心20min，去除含蛭弧菌游泳體的上清，沉淀即是蛭弧菌蛭質(zhì)體；然后用5mL DNB液體培 養(yǎng)基懸浮，得到濃度IOllPfuAiL的蛭弧菌蛭質(zhì)體菌液。(2)蘋果攜帶的常見(jiàn)致病菌的制備于4瓶各含IOOmL普通營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，分別接種IOmL X 1010cfu/mL大腸 桿菌(Escherichia coli，購(gòu)于廣東省微生物研究所，編號(hào)GIM1. 137)、鼠傷寒沙門氏菌 (Salmonella typhimurium，購(gòu)于廣東省微生物研究所，編號(hào)GIM1. 237)、單增李斯特菌 (Listeria monocytogenes，購(gòu)于廣東省微生物研究所，編號(hào)GIM1. 228)和金黃色葡萄球 菌(Staphylococcusaureus，購(gòu)于廣東省微生物研究所，編號(hào)GIM1. 142)，搖床培養(yǎng)，160rpm 28°C，培養(yǎng)12-16h。增殖培養(yǎng)液經(jīng)6000rpm、4°C離心20min，棄上清液，沉淀菌體用5mL無(wú)菌 PH7. 2的PBS (磷酸鹽緩沖溶液)懸浮，得到濃度為109CfU/ml的原液，最后制備上述四種菌 的混合液，使混合液中每種菌的終濃度為103CfU/ml。(3)蛭弧菌蛭質(zhì)體應(yīng)用消除加工前蘋果攜帶的菌落總數(shù)及致病菌實(shí)驗(yàn)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。所有對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組的蘋果先經(jīng)75%酒精殺菌后浸泡到步驟(2)制備好的混合 菌液中l(wèi)min，取出后浙干，然后對(duì)照組三個(gè)蘋果，為三個(gè)平行樣，將蘋果浸泡在自來(lái)水中，30min ；實(shí)驗(yàn)組將蘋果分別浸泡在A、B、C、D、E五組自來(lái)水中，并向五組自來(lái)水中分別 添加蛭弧菌蛭質(zhì)體，并且其濃度分別達(dá)到102pfu/mL、103pfu/mL、104pfu/mL、106pfu/mL、 108pfu/mL，浸泡30min，每個(gè)濃度設(shè)三個(gè)平行樣。然后檢測(cè)菌落總數(shù)，致病菌的數(shù)目。檢測(cè)方法取蘋果，放入無(wú)菌絞碎機(jī)中，同時(shí)加入50mL的無(wú)菌磷酸鹽緩沖液，攪 碎，蘋果攪碎后取出IOmL混合液放于無(wú)菌離心管中。根據(jù)GB4789. 2-2010菌落總數(shù)用營(yíng)養(yǎng) 瓊脂培養(yǎng)基檢測(cè)、根據(jù)國(guó)標(biāo)4789. 38-2008大腸桿菌用VRB_MUG(中性紅-膽鹽培養(yǎng)基)培 養(yǎng)基檢測(cè)、根據(jù)國(guó)標(biāo)4789. 4-2010沙門氏菌用BS(亞硫酸鉍瓊脂)培養(yǎng)基檢測(cè)、根據(jù)國(guó)標(biāo) 4789. 30-2010單核李斯特菌用李斯特氏菌顯色培養(yǎng)基檢測(cè)、根據(jù)國(guó)標(biāo)4789. 10-2010金黃 色葡萄球菌用Baird-Parker瓊脂平板檢測(cè)。檢測(cè)結(jié)果如圖1，2所示蛭弧菌蛭質(zhì)體消除實(shí)驗(yàn)組總菌與致病菌的殘留量要遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于單純用自來(lái)水沖洗 的殘留量，而且蛭弧菌濃度越高，消除總菌與致病菌的效果越好，最低濃度102pfU/mL對(duì)于 致病菌的消除率已經(jīng)達(dá)到93%，而且蛭弧菌在水果表面通過(guò)裂解而消除病原菌，不會(huì)對(duì)水 果的質(zhì)量產(chǎn)生影響，也不會(huì)導(dǎo)致除菌劑在水果中的殘留。除菌快速，高效，安全使得蛭弧菌 在消除水果攜帶的致病菌方面應(yīng)用潛力巨大，將其作為一種水果的新型的清洗方法既能達(dá) 到除菌的目的，也能保護(hù)水果制品的食用安全。實(shí)施例2香瓜表面常見(jiàn)致病菌的消除步驟(1)、(2)和(3)均同實(shí)施例1檢測(cè)結(jié)果如圖3，4所示
利用蛭弧菌蛭質(zhì)體作除菌劑消除實(shí)驗(yàn)組的菌落總數(shù)與致病菌后的殘留量要遠(yuǎn)遠(yuǎn) 低于單純用自來(lái)水沖洗的殘留量，而且蛭弧菌濃度越高，消除菌落總數(shù)與致病菌的效果越 好，最低濃度102pfU/mL對(duì)于致病菌的消除率已經(jīng)達(dá)到94%。而蛭弧菌在水果表面通過(guò)裂 解而消除病原菌，不會(huì)對(duì)水果的質(zhì)量產(chǎn)生影響，也不會(huì)導(dǎo)致除菌劑在水果中的殘留。除菌快 速，高效，安全使得蛭弧菌在消除水果攜帶的致病菌方面應(yīng)用潛力巨大，將其作為一種水果 的新型的清洗方法既能達(dá)到除菌的目的，也能保護(hù)水果制品的食用安全。實(shí)施例3新型除菌劑與傳統(tǒng)除菌劑除菌效果的比較步驟(1) (2)均同實(shí)施例1步驟(3)不同除菌劑對(duì)致病菌的消除試驗(yàn)選用李子作為作用水果，分為實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組。所有對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組的李子先經(jīng)75%酒精殺菌后浸泡到步驟(2)制備好的混合 菌液中l(wèi)min，取出后浙干，然后采用不同除菌劑進(jìn)行除菌處理。對(duì)照組取三個(gè)李子，為三個(gè)平行樣，將李子浸泡在自來(lái)水中；實(shí)驗(yàn)組分四組，每小組取三個(gè)李子，為三個(gè)平行樣(1)將李子浸泡在含有濃度為102pfU/mL蛭弧菌蛭質(zhì)體的清洗用水；(2)將李子浸泡在加入過(guò)氧化氫的清洗用水，濃度達(dá)到5% ；(3)將李子浸泡在通入臭氧的清洗用水，濃度達(dá)到0. 8mg/L ；(4)將李子浸泡在加入次氯酸鈉的清洗用水，濃度達(dá)到80mg/L ；浸泡30min后取出浙干，然后每30min檢測(cè)李子表面殘留的致病菌的總菌數(shù)。檢測(cè)結(jié)果如圖5所示最初的殺菌效果為過(guò)氧化氫 > 臭氧 > 次氯酸鈉> 蛭弧菌蛭質(zhì)體，但是隨著時(shí)間的 延長(zhǎng)，過(guò)氧化氫、臭氧、次氯酸鈉的除菌效果逐漸減弱，致病菌又再次滋生，而蛭弧菌則持續(xù) 消除致病菌，原因是蛭弧菌制劑通過(guò)菌裂解消除致病菌需要一個(gè)過(guò)程，所以起效慢，但是較 為持久，可以預(yù)防致病菌的再次寄居和繁殖。同時(shí)由于過(guò)氧化氫的強(qiáng)氧化性有損水果的 品質(zhì)，臭氧殺菌裝置耗費(fèi)過(guò)大而次氯酸鈉則對(duì)熱不穩(wěn)定且容易與有機(jī)物反應(yīng)生成氯化物殘 留，因此蛭弧菌蛭質(zhì)體可以成為理想的水果殺菌劑，其通過(guò)裂解消除致病菌屬于生物防治， 使用安全不會(huì)對(duì)環(huán)境造成污染，也不會(huì)對(duì)水果品質(zhì)造成影響。實(shí)施例4蛭弧菌蛭質(zhì)體在消除水果的加工環(huán)境、清洗設(shè)備攜帶的常見(jiàn)致病菌的應(yīng)用試驗(yàn)試驗(yàn)包括以下具體步驟及其條件步驟(1)及(2)均同實(shí)施例1步驟(3)致病菌的消除試驗(yàn)由于不同水果的加工采用的加工生產(chǎn)線是相同的所以本發(fā)明的應(yīng)用方法，可適合 于各種水果的加工。采用本發(fā)明的應(yīng)用方法，分成多個(gè)不同試驗(yàn)組，對(duì)水果加工車間地面和墻體、運(yùn)輸 水果的傳送帶及水果清洗設(shè)備的表面，均勻噴灑清水和最低濃度102pfU/mL的蛭弧菌游泳 體，噴灑使用量則按試驗(yàn)組的不同分別為1 OmL/m2、30mL/m2、、50mL/m2、70mL/m2、或1 OOmL/ m2，每天噴灑一次，連續(xù)噴灑兩天，在隨后的環(huán)境病菌檢測(cè)結(jié)果如圖6所示，僅在噴灑量為10mL/m2試驗(yàn)組中檢測(cè)到少量的鼠傷寒沙門氏菌，其他噴灑量的試驗(yàn)組沒(méi)有檢測(cè)到沙門氏 菌，單核李斯特菌，金黃色葡萄球菌及大腸桿菌等常見(jiàn)致病菌。本試用研究的結(jié)果表明蛭弧 菌在較低濃度消除水果加工過(guò)程中致病菌方面的效果十分顯著，同時(shí)考慮到清洗水果的成 本，30-50mL/m2可以作為最適宜的噴灑范圍。由此可見(jiàn)，蛭弧菌作為除菌劑可以廣泛地推廣 應(yīng)用于水果的清洗加工過(guò)程中。 上述實(shí)施例為本發(fā)明較佳的實(shí)施方式，但本發(fā)明的實(shí)施方式并不受上述實(shí)施例的 限制，其他的任何未背離本發(fā)明的精神實(shí)質(zhì)與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡(jiǎn)化， 均應(yīng)為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
蛭弧菌蛭質(zhì)體作為除菌劑在清洗水果中的應(yīng)用，其特征在于，將蛭弧菌蛭質(zhì)體菌液作為除菌劑添加在清洗用水中，然后對(duì)水果進(jìn)行清洗；所述蛭弧菌為蛭弧菌(Bdellovibrio sp.)BDM01，由中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，其簡(jiǎn)稱為CCTCC，保藏編號(hào)為CCTCC NOM208066，保藏日期為2008年4月28日。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述蛭弧菌蛭質(zhì)體在清洗用水中的濃度 至少為 102pfu/mL。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述蛭弧菌蛭質(zhì)體菌液的制備步驟如下 在含有IOmLX 1010cfu/mL嗜水氣單胞菌的IOOmL DNB液體培養(yǎng)基中接入IOmL 103pfu/mL。mL 蛭弧菌 BDMOl，于 20 35 °C、150 300rpm 培養(yǎng) 36 48h，培養(yǎng)液經(jīng) 4°C 6000 8000rpm 離心15 20min后，去除含蛭弧菌游泳體的上清，沉淀即是蛭弧菌蛭質(zhì)體；然后用DNB液體 培養(yǎng)基、無(wú)菌水、生理鹽水或0. 2mol/LpH值為7. 2 7. 6的磷酸鹽緩沖液懸浮，得到的蛭弧 菌蛭質(zhì)體菌液。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3所述的應(yīng)用，其特征在于，將所述蛭弧菌游泳體菌液加入到 清洗用水中，蛭弧菌蛭質(zhì)體的濃度范圍為IO2 109pfu/mL。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3所述的應(yīng)用，其特征在于，所述清洗時(shí)先將水果放入蛭弧菌 蛭質(zhì)體菌液中浸泡20 40min。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，將蛭弧菌蛭質(zhì)體菌液作為除菌劑噴灑在 水果加工環(huán)境中，使蛭弧菌蛭質(zhì)體的濃度至少達(dá)到102pfu/mL，使用量為30-50mL/m2。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，所述蛭弧菌蛭質(zhì)體菌液的濃度IO2 109pfu/mLo
8.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的應(yīng)用，其特征在于，所述蛭弧菌蛭質(zhì)體菌液的制備步驟如下在含有IOmL 10lclcfu/mL嗜水氣單胞菌的IOOmL DNB液體培養(yǎng)基中接入10mL103pfu/mL 蛭弧菌BDMOl，于20 35"C、150 300rpm培養(yǎng)36 48h，培養(yǎng)液經(jīng)4°C 6000 8000rpm 離心15 20min后，去除含蛭弧菌游泳體的上清，沉淀即是蛭弧菌蛭質(zhì)體；然后用5mL DNB 液體培養(yǎng)基、無(wú)菌水、生理鹽水或0. 2mol/L pH值為7. 2 7. 6的磷酸鹽緩沖液懸浮，得到 的蛭弧菌BDMOl蛭質(zhì)體菌液。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于，在加入蛭弧菌游泳體菌液的清洗用水中 還可加入去污劑組成清洗劑，所述清洗劑中蛭弧菌蛭質(zhì)體的濃度范圍為IO2 109pfu/mL。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種蛭弧菌蛭質(zhì)體作為除菌劑在清洗水果中的應(yīng)用，其特征在于，將蛭弧菌蛭質(zhì)體菌液作為除菌劑添加在清洗用水中，然后對(duì)水果進(jìn)行清洗；或者將蛭弧菌蛭質(zhì)體菌液噴灑在水果加工環(huán)境中，對(duì)加工環(huán)境進(jìn)行清洗；所述蛭弧菌為蛭弧菌(Bdellovibrio sp.)BDM01，由中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，保藏編號(hào)為CCTCC NOM208066，保藏日期為2008年4月28日。該蛭弧菌蛭質(zhì)體對(duì)水果表面的常見(jiàn)致病菌有很強(qiáng)的消除作用，致病菌的消除率達(dá)93％以上，且蛭質(zhì)體具有制備、保存更為方便，環(huán)境耐受力強(qiáng)，殺菌作用時(shí)間更久等優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)C12N1/20GK101961083SQ201010270820
公開(kāi)日2011年2月2日 申請(qǐng)日期2010年8月31日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月31日
發(fā)明者蔡俊鵬, 陳麗蕓 申請(qǐng)人:華南理工大學(xué)