專利名稱：檢測豬脂肪沉積能力的引物及其方法與應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種檢測豬脂肪沉積能力的引物及其方法與應(yīng)用。
背景技術(shù)：
隨著社會經(jīng)濟(jì)和人們消費(fèi)水平的提高，改善肉質(zhì)已經(jīng)成為適應(yīng)消費(fèi)需求和應(yīng)對畜 禽業(yè)提高質(zhì)量與尋求發(fā)展的重要議題之一。脂肪含量是影響肉質(zhì)性狀的一個(gè)重要的因素， 且在動物維持正常的生理代謝和生理功能中起著非常重要的作用。脂肪是機(jī)體的主要成分 之一，是維持正常生命活動所必需的物質(zhì)基礎(chǔ)。合理的脂肪儲備是必須的，但當(dāng)所攝入的能 量超過維持身體正常需要時(shí)，多余的能量便被轉(zhuǎn)化為體脂而沉積下來。在動物體內(nèi)，脂肪蓄 積的組織主要是脂肪組織，維持適當(dāng)含量的皮下脂肪，可以使胴體的外觀比較好，提高產(chǎn)品 等級；適當(dāng)?shù)募￠g脂肪(IMF)可以提高口感，產(chǎn)品的風(fēng)味、嫩度和多汁性。因此，如何控制 胴體脂肪沉積已經(jīng)成為畜禽遺傳育種學(xué)研究的熱點(diǎn)之一。目前利用FSH0輔助選擇豬產(chǎn)仔 數(shù)、矮小基因輔助選擇雞的體型等已經(jīng)取得實(shí)質(zhì)性進(jìn)展，獲得畜禽經(jīng)濟(jì)性狀的功能基因及 其標(biāo)記，并利用其來加速畜禽重要經(jīng)濟(jì)性狀的育種進(jìn)展是動物遺傳育種領(lǐng)域的重要創(chuàng)新。 由于豬胴體脂肪和瘦肉含量是影響豬肉品種和消費(fèi)的重要因素，采用分子生物學(xué)方法獲得 低脂肪、高瘦肉率的豬育種方法沒有實(shí)質(zhì)性突破。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種可用于檢測豬脂肪沉積能力的弓I物及其方法與應(yīng)用。本發(fā)明所提供的檢測豬脂肪沉積能力的引物，其核苷酸序列如序列表中序列1和 序列2所示。本發(fā)明所提供的檢測豬脂肪沉積能力的方法，是以待測豬基因組DNA為模板，以 序列表中序列1和序列2所示的DNA分子為引物，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，F(xiàn)nu4H I限制性內(nèi)切酶酶 切PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，檢測Fnu4H I限制性內(nèi)切酶酶切產(chǎn)物的大??；當(dāng)酶切產(chǎn)物含有三條DNA片段，大小分別在200 300bp、100 150bp和小于 lOObp，待測豬為TP526CC基因型；當(dāng)酶切產(chǎn)物含有三條DNA片段，大小分別在200 300bp、150 200bp和小于 lOObp，待測豬為TP526TT基因型；當(dāng)酶切產(chǎn)物含有四條DNA片段，一條DNA片段大小在200 300bp、另一條DNA片 段大小小于lOObp，其余兩條DNA片段的大小在100 200bp，待測豬為TP526CT基因型；所述TP526TT基因型的豬脂肪沉積能力小于所述TP526CC基因型的豬或所述 TP526CT基因型的豬。本發(fā)明的檢測豬脂肪沉積能力的方法，其中所述檢測Fnu4H I限制性內(nèi)切酶酶 切產(chǎn)物的大小的方法為瓊脂糖凝膠電泳。本發(fā)明所提供的培育瘦肉型豬的方法，是用所述檢測豬脂肪沉積的方法方法檢測 豬，獲得TP526TT基因型的豬，以所述TP526TT基因型的豬為親本進(jìn)行育種獲得瘦肉型的
3豬。本發(fā)明檢測豬脂肪沉積的方法，能通過簡單的PCR擴(kuò)增和酶切確定待測豬的基因 型，TP526TT基因型豬的背膘顯著低于TP526CC基因型和TP526CT基因型(P < 0. 01)，以 TP526TT基因型的豬進(jìn)行育種可獲得候選的瘦肉型的豬品系。


圖1為Fnu4H I限制性內(nèi)切酶對PCR產(chǎn)物進(jìn)行酶切的圖譜。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例、一、鑒定 TP526T/C 基因型提取定遠(yuǎn)豬、長白豬等豬基因組DNA。以提取的基因組DNA為模板，TPS和TPA為 引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，引物TPS和TPA的核苷酸序列如下TPS 5' -CACAGCTGGGAAATTGCAG-3‘TPA 5' -CACAATTTCCACGCTGCTAT-3‘卩0 擴(kuò)增體系總體系25111^1011]\1/1TPS l.OuL, lOuM/L TPA, 1. Ou L 10 XPCR 緩沖液 2. 5 ii L，2mM/L dNTPs 2. 0 u L, 5U/u L Taq DNA 聚合酶 0. 5 ii L，lOOng/ii L 模板 I.OpL，其余用超純水補(bǔ)齊。PCR 擴(kuò)增條件 94°C預(yù)變性 5min ；94°C變性 30s，56°C退火 15s，72°C延伸 45s，35 個(gè) 循環(huán)，最后72°C延伸10min，4°C保存。 用Fnu4H I限制性內(nèi)切酶對PCR產(chǎn)物進(jìn)行酶切。15iiL酶切反應(yīng)體系100ng PCR產(chǎn)物，3U的Fnu4H I限制性內(nèi)切酶，1. 5 y L的 10X緩沖液，加超純水至15uL037°C過夜消化，3%的瓊脂糖凝膠電泳檢測，凝膠成像儀分析和拍照，統(tǒng)計(jì)基因型。凝膠成像結(jié)果如圖1所示，酶切后的PCR產(chǎn)物，在瓊脂糖凝膠上呈現(xiàn)三條帶，三條 帶的大小分別在200 300bp、100 150bp和小于100bp,該豬為TP526CC基因型(圖1的 泳道1，3，5和7) ；PCR產(chǎn)物經(jīng)過測序與預(yù)期結(jié)果一致。酶切后的PCR產(chǎn)物，在瓊脂糖凝膠上呈現(xiàn)四條帶，一條帶的大小在200 300bp、另 一條帶的大小小于lOObp，其余兩條帶的大小在100 200bp，該豬為TP526CT基因型(圖 1的泳道2，4，6和9) ；PCR產(chǎn)物經(jīng)過測序與預(yù)期結(jié)果一致。酶切后的PCR產(chǎn)物，在瓊脂糖凝膠上呈現(xiàn)三條帶，三條帶的大小分別在200 300bp、150 200bp和小于100bp，該豬為TP526TT基因型(圖1的泳道8和10) ；PCR產(chǎn)物
經(jīng)過測序與預(yù)期結(jié)果一致。二、TP526T/C基因型與豬脂肪沉積和瘦肉率的相關(guān)性脂肪型定遠(yuǎn)豬107頭(體重為80 85kg的肥育豬)、瘦肉型長白豬、瘦肉型大白 豬和瘦肉型杜洛克豬共89頭(體重為95 100kg的肥育豬)，同一飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)，用步驟(一) 的方法鑒定基因型，用Piglogl05測膘器檢測三點(diǎn)平均背膘厚，結(jié)果見表1。表明，TP526TT基因型豬的背膘顯著低于TP526CC基因型和TP526CT基因型(P < 0. 01)，
在實(shí)際的豬育種中，選擇TP526TT基因型的豬進(jìn)行育種可獲得候選的瘦肉型的豬品系。表1.不同基因型與豬背膘厚之關(guān)聯(lián)性 以上的實(shí)施例僅僅是對本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式進(jìn)行描述，并非對本發(fā)明的范圍進(jìn) 行限定，在不脫離本發(fā)明設(shè)計(jì)精神的前提下，本領(lǐng)域普通工程技術(shù)人員對本發(fā)明的技術(shù)方 案作出的各種變形和改進(jìn)，均應(yīng)落入本發(fā)明的權(quán)利要求書確定的保護(hù)范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
一種檢測豬脂肪沉積能力的引物，其核苷酸序列如序列表中序列1和序列2所示。
2.一種檢測豬脂肪沉積能力的方法，是以待測豬基因組DNA為模板，以序列表中序列 1和序列2所示的DNA分子為引物，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，F(xiàn)nu4H I限制性內(nèi)切酶酶切PCR擴(kuò)增產(chǎn) 物，檢測Fnu4H I限制性內(nèi)切酶酶切產(chǎn)物的大??；當(dāng)酶切產(chǎn)物含有三條DNA片段，大小分別在200 300bp、100 150bp和小于lOObp， 待測豬為TP526CC基因型；當(dāng)酶切產(chǎn)物含有三條DNA片段，大小分別在200 300bp、150 200bp和小于lOObp， 待測豬為TP526TT基因型；當(dāng)酶切產(chǎn)物含有四條DNA片段，一條DNA片段大小在200 300bp、另一條DNA片段大 小小于lOObp，其余兩條DNA片段的大小在100 200bp，待測豬為TP526CT基因型；所述TP526TT基因型的豬脂肪沉積能力小于所述TP526CC基因型的豬或所述TP526CT 基因型的豬。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述檢測Fnu4HI限制性內(nèi)切酶酶切產(chǎn) 物的大小的方法為瓊脂糖凝膠電泳。
4.培育瘦肉型豬的方法，是用權(quán)利要求2或3所述的方法檢測豬，獲得TP526TT基因型 的豬，以所述TP526TT基因型的豬為親本進(jìn)行育種獲得瘦肉型的豬。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種檢測豬脂肪沉積能力的引物及其方法與應(yīng)用。檢測豬脂肪沉積能力的引物，其核苷酸序列如序列表中序列1和序列2所示。檢測豬脂肪沉積能力的方法，是以待測豬基因組DNA為模板，以序列表中序列1和序列2所示的DNA分子為引物，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，F(xiàn)nu4H I限制性內(nèi)切酶酶切PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，檢測Fnu4H I限制性內(nèi)切酶酶切產(chǎn)物的大??；所述TP526TT基因型的豬脂肪沉積能力小于所述TP526CC基因型的豬或所述TP526CT基因型的豬。本發(fā)明檢測豬脂肪沉積能力的方法，能通過簡單的PCR擴(kuò)增和酶切確定待測豬的基因型，以TP526TT基因型的豬進(jìn)行育種可獲得候選的瘦肉型的豬品系。
文檔編號C12Q1/68GK101864487SQ20101019694
公開日2010年10月20日 申請日期2010年6月10日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月10日
發(fā)明者陳華, 陳宏權(quán) 申請人:安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)