專利名稱：一種人腸病毒71型特異性多肽及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)學(xué)免疫領(lǐng)域，涉及一種人腸病毒71型特異性多肽及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
手足口病的主要病原體有腸道病毒71型(Enterovirus 71，EV71)、柯沙奇病毒 A16 (Coxsackieviruses A16, CAV16)等，但是引起神經(jīng)性癥狀和死亡的主要是EV71。EV71 是1969年首次從加利福尼亞患有中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的嬰兒糞便標(biāo)本中分離出來的。自 1974年首次報(bào)道以來，在1975，1978，1997和1998年分別在保加利亞，匈牙利，馬來西亞和 臺(tái)灣等國家和地區(qū)引起了不同程度的爆發(fā)，涉及數(shù)十人死亡。值得一提的是，發(fā)達(dá)國家包括 日本、美國等國家盡管偶爾也有零星的病例，但幾十年來卻沒有大規(guī)模流行和爆發(fā)的報(bào)道。 2008年3月，我國安徽省阜陽地區(qū)開始爆發(fā)手足口病疫情，導(dǎo)致23人死亡，3000多人感染。 之后，在北京、上海、浙江、廣東等地區(qū)也相繼有EV71感染的報(bào)道。到2008年底，中國手足 口病感染人數(shù)累計(jì)達(dá)48. 9萬多，死亡人數(shù)達(dá)126人。2009年繼河南省明泉縣報(bào)道手足口病 感染并有近十例病人死亡后，相繼在山東、北京、四川、廣西、云南、甘肅、貴州等多個(gè)省市流 行，患病人數(shù)和死亡人數(shù)超過了 2008年(將近兩倍)。從近幾年的情況看，我國每隔幾年就 有局部爆發(fā)，患者人數(shù)多，分布廣，大部分還在不發(fā)達(dá)地區(qū)，給國家和人民帶來了巨大損失， 同時(shí)也影響著國家的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)安全。手足口病等流行性疾病成了民眾關(guān)注的焦點(diǎn)，有效 的控制疫情對(duì)國家和社會(huì)都有著重要的意義。正因如此，衛(wèi)生部從去年開始已經(jīng)將其列入 法定丙級(jí)傳染病，以更好的監(jiān)控疫情，為防控和治療提供必要的資料和信息。EV71是屬于微小病毒科(picornaviridae)中的腸病毒群(enterovirus)。微小 病毒科的病毒包括很多引起人和動(dòng)物疾病的病毒如口蹄疫病毒、腸道病毒以及引起肝炎的 甲型肝炎病毒(HAV)。其中腸病毒屬的病毒包括脊髓灰質(zhì)炎病毒(Polioviruses ；具有3種 型別)、柯沙奇病毒(A型23種型別、B型6種型別)、?？刹《?Echoviruses ；具有31種型 別)及腸病毒(Enteroviruses 68 72型)。脊髓灰質(zhì)炎病毒同EV71病毒是同一病毒屬； 據(jù)發(fā)明人的分析，二者的全序列蛋白組的相似性可達(dá)70%左右，它們之間極有可能存在交 叉免疫反應(yīng)。而目前全世界很多國家包括我國都實(shí)行全民接種脊髓灰質(zhì)炎病毒疫苗，這樣 用傳統(tǒng)全病毒檢測(cè)抗體的方法檢測(cè)人腸病毒71型的檢測(cè)可能會(huì)出假陽性。因此篩選一種 可以有效區(qū)分人腸病毒71型感染的多肽可以方便快速準(zhǔn)確的檢測(cè)人腸病毒71型的感染。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的上述不足，提供一種可以有效區(qū)分人腸病毒71 型感染的多肽；本發(fā)明的另一目的是提供該多肽在制備預(yù)防或者治療EV71感染的藥物組 合物中的應(yīng)用。本發(fā)明的又一目的是提供編碼該多肽的核苷酸序列。本發(fā)明的目的可通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)一種人腸病毒71型特異性多肽，選自下述(a) ⑴中的任一種(a)氨基酸序列為SEQ ID NO. 1的多肽1 ；
(b)在(a)中的氨基酸序列經(jīng)過取代、缺失或者添加1-10個(gè)氨基酸殘基而形成的 具有引發(fā)EV71免疫應(yīng)答功能的由多肽1衍生的多肽；(c)多肽1中至少15個(gè)連續(xù)氨基酸殘基構(gòu)成的具有引發(fā)EV71免疫應(yīng)答功能的多 肽片段；(d)在(C)中的多肽片段經(jīng)過取代、缺失或者添加1-3個(gè)氨基酸殘基而形成的具有 引發(fā)EV71免疫應(yīng)答功能的多肽；(e) 一種以上(C)及(d)所述多肽片段以任意先后次序和重復(fù)次數(shù)組合而成的具 有引發(fā)EV71免疫應(yīng)答功能的多肽；(f)氨基酸序列為SEQ ID NO. 7的多肽7與(e)所述多肽或(a)所述的多肽1組 合得到的具有引發(fā)EV71免疫應(yīng)答功能的多肽；其中多肽7的序列可以在(e)中任一多肽片 段或多肽1之前或者之后，并且中間間隔0-3個(gè)任意氨基酸殘基。其中，(c)中所述的多肽片段優(yōu)選多肽2 =SEQ ID NO. 2，多肽3 =SEQ ID NO. 3，多肽 4 =SEQ ID NO. 4，多肽 5 :SEQ ID N05 ；多肽 6 :SEQ ID NO. 6。(e)所述的多肽優(yōu)選自多肽2、3、4、5或6中的任意2種、3種、4種或者5種多肽按 照任意先后次序組合得到的氨基酸序列。所述的取代是指用性質(zhì)相似或者相近的氨基酸進(jìn)行替換，優(yōu)選根據(jù)表1進(jìn)行。表1.優(yōu)選的氨基酸取代 在已知氨基酸序列或核苷酸序列的情況下，可通過本領(lǐng)域的常規(guī)蛋白質(zhì)化學(xué)合成 方法或通過基因工程方法獲得本發(fā)明多肽。與權(quán)利要求1所述的多肽特異性結(jié)合的抗體。其中，所述的抗體可以是完整的單克隆抗體、完整的多克隆抗體、抗血清或者具有 免疫活性的抗體片段、抗體重鏈、抗體輕鏈、嵌合抗體或人源化抗體。所述的抗體可以特異 性的與本發(fā)明所述的多肽結(jié)合。所述的抗體可以通過本領(lǐng)域內(nèi)技術(shù)人員已知的各種技術(shù)進(jìn)行制備。例如，純化的 本發(fā)明多肽，可被施用于動(dòng)物以誘導(dǎo)多克隆抗體產(chǎn)生；或者通過本領(lǐng)域眾所周知的雜交瘤 技術(shù)制備單克隆抗體；或者通過重組方法將所屬抗體的可變區(qū)與人抗體的不可邊區(qū)或恒定 區(qū)結(jié)合而制備嵌合抗體。本發(fā)明所述的多肽在制備檢測(cè)人腸病毒71型的檢測(cè)試劑中的應(yīng)用。一種檢測(cè)人腸病毒71型的檢測(cè)試劑，該檢測(cè)試劑包括容器以及位于容器內(nèi)的本 發(fā)明多肽，對(duì)應(yīng)的抗血清以及其它必要化學(xué)物質(zhì)。該檢測(cè)試劑可用于檢測(cè)標(biāo)本血清是否被 EV71感染過。本發(fā)明所述的多肽在制備預(yù)防或者治療EV71感染的藥物組合物中的應(yīng)用。所述的藥物組合物優(yōu)選疫苗組合物。所述的疫苗組合物含有免疫有效量的本發(fā)明所述多肽以及藥學(xué)上可接受的載體。本發(fā)明的疫苗組合物優(yōu)選包含本發(fā)明所述多肽，如SEQ ID NO. 1 SEQ ID NO. 6 中的至少一種多肽和藥學(xué)上可接受的載體，進(jìn)一步優(yōu)選序列為SEQ ID NO. 1的多肽1和藥 學(xué)上可接受的載體。這些載體包括本身不誘導(dǎo)產(chǎn)生對(duì)該組合物的個(gè)體有害的抗體的任何載 體。合適的載體通常是大的、代謝緩慢的大分子，如多糖、聚乳酸、聚乙醇酸、氨基酸聚合物、 脂質(zhì)凝集物以及無活性的病毒顆粒以及增強(qiáng)組合物效果的佐劑。這些載體是本領(lǐng)域普通技 術(shù)人員所熟知的。另外，抗原或免疫原可以和細(xì)菌類毒素偶聯(lián)。其中，所述的增強(qiáng)組合物效果的佐劑包括但并不局限于1鋁鹽，如氫氧化鋁、磷 酸鋁、硫酸鋁等；2水包油性乳劑配方，如MF69 (Novartis Vaccines and Diagnostics)、 Syntex adjuvant formulation (SAF)、Freund 完全佐劑和不完全佐劑等等。所述的藥物組合物通常還包括稀釋劑，如水，鹽水，甘油，乙醇等，以及輔助性物 質(zhì)，如潤滑劑或者乳化劑、PH緩沖物質(zhì)等。所述的免疫有效量指以單劑或者連續(xù)劑一部分給予個(gè)體的量對(duì)治療或者預(yù)防是 有效的。該用量根據(jù)所治療的個(gè)體健康狀況和生理狀況、所治療個(gè)體的類別、個(gè)體免疫系統(tǒng) 合成抗體的能力、所需的保護(hù)程度、疫苗的配制、治療醫(yī)師對(duì)治療狀況的評(píng)估及其它相關(guān)因 素而定。所述的疫苗組合物可制成注射劑，如液體溶液或混懸液；還可制成在注射前適合 配入溶液或者混懸液、液體賦形劑的固體形式。該制劑還可乳化或者包封在脂質(zhì)體中，與上 述藥學(xué)上可接受的載體結(jié)合增強(qiáng)佐劑效果。
所述藥物組合物的常規(guī)給藥方法是從腸胃外(皮下或肌肉)途徑通過注射給予免 疫原性組合物。適合其它給藥方式的其他配方包括口服等。劑量可以是單劑方案或多劑方 案。疫苗可以結(jié)合其它免疫調(diào)節(jié)劑一起給予。以本發(fā)明多肽計(jì)，其用量為每天約lOOng/Kg 體重-10mg/Kg體重。此外本發(fā)明多肽還可與佐劑或其它治療劑一起使用。本發(fā)明的抗體可用于制備治療或預(yù)防人腸病毒71型感染的藥物組合物。所述的 組合物包含有a安全有效劑量的本發(fā)明多肽、偶聯(lián)物或其組合物；以及b藥學(xué)上可以接受的 載體或賦形劑。這里載體包括但不限于鹽水、緩沖液、葡萄糖、水、甘油、乙醇、佐劑及其組 合。該組合物通過常規(guī)方法進(jìn)行制備。本發(fā)明的有益效果本發(fā)明提供的多肽可以特異的與腸病毒71型患者血清產(chǎn)生反應(yīng)，同時(shí)不會(huì)對(duì)脊 髓灰質(zhì)炎病毒產(chǎn)生交叉反應(yīng)。因此可以用于臨床檢測(cè)、診斷人腸病毒71型的感染。由本發(fā) 明多肽所制備的試劑盒能特異性的檢測(cè)出人腸病毒71型，而不會(huì)檢測(cè)到其它類似病毒如 脊髓灰質(zhì)炎病毒。由于該多肽制備的抗體可以有效與人腸病毒71型作用，本發(fā)明的多肽還 可用于疫苗的制備，所制備的疫苗能只針對(duì)人腸病毒71型產(chǎn)生良好的免疫應(yīng)答。由本發(fā)明 多肽制備的藥物組合物能夠有效刺激機(jī)體產(chǎn)生專門針對(duì)EV71病毒的免疫應(yīng)答，很好地保 護(hù)細(xì)胞不被EV71病毒感染。編碼本發(fā)明所述多肽的核苷酸序列，可應(yīng)用于制備單抗或核酸 疫苗等，在診斷和治療人腸病毒71型感染中發(fā)揮積極的作用。


圖1本發(fā)明多肽的SDS-聚丙烯酰胺電泳圖。圖2多肽1抗體的ELISA檢測(cè)結(jié)果。圖3抗多肽1的血清對(duì)EV71感染的保護(hù)作用；A 細(xì)胞對(duì)照，加入1 4陰性對(duì)照血清，無病毒；B 加入1 4陰性對(duì)照血清和1 百萬TCID EV71病毒；C:1 4倍稀釋的抗本發(fā)明多肽1的血清和1百萬TCID EV71病毒； D :1 8倍稀釋的抗本發(fā)明多肽1的血清和1百萬TCID EV71病毒；E :1 16倍稀釋的抗 本發(fā)明多肽1的血清和1百萬TCID EV71病。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1a多肽的合成合成SEQ ID NO. 1 SEQ ID NO. 6的多肽使用的方法為常規(guī)的化學(xué)合成方法。b多肽的篩選按照每個(gè)孔10 μ g的上述多肽的量溶于100 μ 1包被溶液(每升含1. 59g Na2CO3, 2. 93g NaHCO3)中并包被酶標(biāo)板，包被12小時(shí)，棄去包被液，用去離子水洗滌2兩次，每次洗 滌均在吸水紙上拍干；每孔加入250 μ 1封阻液(PBS，0· 05% Tween-20，5%，脫脂奶粉)室 溫放置2小時(shí)；棄去封阻液，加入用100 μ 1封阻液1 50稀釋的血清，所用血清分別為免疫 有EV71 VPl蛋白的鼠抗血清、免疫有PV VPl蛋白的鼠抗血清和未免疫的對(duì)照血清；室溫放 置1小時(shí)；棄去液體；用去離子水洗滌5次；加入100 μ 1封阻液1 5000稀釋的生物素標(biāo) 記的抗鼠IgG抗體的二抗，室溫放置半個(gè)小時(shí)；棄去液體，加入100 μ 1封阻液1 5000稀釋的AP-標(biāo)記的str印tavidin，室溫放置半個(gè)小時(shí)；洗滌5次，加入50 μ 1顯色液(ρΗ9. 8， 9. 7%二乙醇氨lmg/mL pNPP) ； 15分鐘后用分光光度計(jì)測(cè)定405nm處的OD值；與對(duì)照相比， OD值低于5倍為陰性；高于5倍為陽性；檢測(cè)結(jié)果如表2所示，結(jié)果表明本發(fā)明多肽可以特 異性的和抗EV71VP1抗血清反應(yīng)而不與抗PVVPl抗血清反應(yīng)。表2多肽的篩選 實(shí)施例2多肽的基因工程表達(dá)。SEQ ID NO. 8為編碼本發(fā)明多肽1的核苷酸序列，以該序列合成目的基因，并在兩 端分別引入BamHI和HindIII的酶切位點(diǎn)。該基因被插入到載體pQE_80L(凱杰生物技術(shù) (上海)有限公司)的BamHI和HindIII位點(diǎn)中。載體pQE_80L中含有編碼SEQ ID NO. 7 所述多肽的基因序列。將該能準(zhǔn)確表達(dá)SEQ ID NOl和SEQ ID N07融合蛋白的重組載體轉(zhuǎn) 化到大腸桿菌BL21(DE3)中，得到的基因工程菌株可用于表達(dá)本發(fā)明多肽。表達(dá)的條件如下挑選單克隆接種于IOmL的LB培養(yǎng)基中，37°C搖床培養(yǎng)過夜。將 該菌液接種于自誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，37 °C培養(yǎng)8-36小時(shí)。收獲菌體。菌體超聲破碎后，用M-NTA樹脂按照常規(guī)方法進(jìn)行親和層析。洗脫后即可得到本 發(fā)明多肽。本發(fā)明多肽經(jīng)12%濃度SDS-聚丙烯酰胺電泳分離，并采用考馬斯亮藍(lán)-G-250 染色，得本發(fā)明多肽的SDS-聚丙烯酰胺電泳圖譜(如圖1)。實(shí)施例3將多肽1按照每個(gè)孔10 μ g的量溶于100 μ 1包被溶液(每升含1. 59g Na2CO3, 2. 93gNaHC03)中包被酶標(biāo)板，包被12小時(shí)，棄去包被液，用去離子水洗滌2兩次，每次洗滌 均在吸水紙上拍干；每孔加入250 μ 1封阻液(PBS，0. 05% Tween-20，5%，脫脂奶粉)室溫 放置2小時(shí)；棄去封阻液，加入用ΙΟΟμΙ封阻液1 50稀釋的血清，其中所用血清分別為 被檢出EV71感染的病人血清、普通健康人血清、孕婦的血清及對(duì)照血清(一已知的健康人 血清)；室溫放置1小時(shí)；棄去液體；用去離子水洗滌5次；加入100 μ 1封阻液1 5000稀 釋的生物素標(biāo)記的抗人IgM抗體的二抗，室溫放置半個(gè)小時(shí)；棄去液體，加入100 μ 1封阻液 1 5000稀釋的AP-標(biāo)記的str印tavidin，室溫放置半個(gè)小時(shí)；洗滌5次，加入50 μ 1顯色 液(ρΗ9. 8,9. 7%二乙醇氨lmg/mL pNPP) ；15分鐘后用分光光度計(jì)測(cè)定405nm處的OD值； 與對(duì)照相比，OD值低于5倍為陰性㈠；不低于5倍且不高于10倍為陽性⑴；高于10倍 為強(qiáng)陽性(++)。結(jié)果見表4。結(jié)果證明本發(fā)明多肽與病人血清反應(yīng)時(shí)均顯陽性。而孕婦均 顯示為陰性。普通的健康人也均顯示為陰性；說明本發(fā)明多肽能夠特異性的檢測(cè)EV71。表3 多肽IELISA檢測(cè)結(jié)果
實(shí)施例4抗體的制備4. 1多肽1 (80 μ g/只小鼠)添加Freud完全佐劑(50 μ 1/只小鼠)，將混合物以 皮下注射的方法免疫小鼠(6-8周的Balb/c小鼠)。每隔兩周免疫一次，共免疫兩次，在最 后一次免疫14天后取血，分離血清，用于ELISA檢測(cè)。4. 2多肽1按照每個(gè)孔10 μ g的量溶于100 μ 1包被溶液(每升含1. 59g Na2CO3, 2. 93gNaHC03)中包被酶標(biāo)板，包被12小時(shí)；棄去包被液，用去離子水洗滌2兩次，每次洗滌 均在吸水紙上拍干；每孔加入250 μ 1封阻液(PBS，0. 05% Tween-20，5%，脫脂奶粉)室溫 放置2小時(shí)；棄去封阻液，加入用100 μ 1封阻液1 50稀釋的血清，其中對(duì)照血清為未經(jīng) 免疫的小鼠血清；室溫放置1小時(shí)；棄去液體；用去離子水洗滌5次；加入100 μ 1封阻液 1 5000稀釋的生物素標(biāo)記的羊抗鼠IgG抗體的二抗，室溫放置半個(gè)小時(shí)；棄去液體，加入 100 μ 1封阻液1 5000稀釋的AP-標(biāo)記的Str印tavidin，室溫放置半個(gè)小時(shí)；洗滌5次， 加入50 μ 1顯色液(ρΗ9. 8,9. 7%二乙醇氨lmg/mL pNPP) ；15分鐘后終止反應(yīng)，用分光光度 計(jì)測(cè)定405nm處的OD值；結(jié)果見圖2。由圖2可見，該血清具有很好的免疫效價(jià)。實(shí)施例5基于本發(fā)明多肽1的疫苗組合物。5.1 80μ g 多肽 1 溶于 50μ 1PBS(0. 8 % NaCl，0. 02 % KC1，0. 144 % Na2HP04， 0. 024% KH2P04 ；pH7. 4)，加入50 μ 1氫氧化鋁佐劑，通過常規(guī)的混合法制備成一疫苗組合 物。
5. 2用5. 1中制備的疫苗組合物免疫6-8周的Balb/c小鼠，背部皮下注射，劑量 為100 μ 1，2周后再次注射同樣劑量的疫苗組合物，再過2周后處死小鼠，取小鼠血，分離血 清，用于中和試驗(yàn)。按不同比例用無血清培養(yǎng)基稀釋5. 2中制備的血清后與1百萬個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)感染劑 量(TCID)的EV71病毒液孵育60分鐘。將中和后的病毒液與RD細(xì)胞一起孵育72小時(shí)，觀 察其對(duì)RD細(xì)胞的保護(hù)作用，結(jié)果如圖3所示，其中圖3C，圖3D，圖3Ε與健康細(xì)胞對(duì)照?qǐng)D3Α 相比沒有明顯差異，與病毒對(duì)照?qǐng)D3Β相比病毒的數(shù)量和密度明顯偏低，說明圖3C，圖3D，圖 3Ε沒有明顯病變?？梢钥闯?，用該疫苗組合物免疫的小鼠，其抗血清含有的抗體可以較好地 中和1百萬TCID EV71病毒并保護(hù)RD細(xì)胞不被感染。本發(fā)明實(shí)施例中所用抗體購自Abcam公司；其它化學(xué)試劑購自國藥集團(tuán)。本發(fā)明說明書中未詳細(xì)描述的實(shí)驗(yàn)操作同現(xiàn)有技術(shù)。此外應(yīng)理解，在閱讀了本范明的上述講授內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對(duì)本發(fā) 明做各種改動(dòng)或者修改，這些等價(jià)形式同樣落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求書所限定的范圍。
權(quán)利要求
一種人腸病毒71型特異性多肽，選自下述(a)～(f)中的任一種(a)氨基酸序列為SEQ ID NO.1的多肽1；(b)在(a)中的氨基酸序列經(jīng)過取代、缺失或者添加1 10個(gè)氨基酸殘基而形成的具有引發(fā)EV71免疫應(yīng)答功能的由多肽1衍生的多肽；(c)多肽1中至少15個(gè)連續(xù)氨基酸殘基構(gòu)成的具有引發(fā)EV71免疫應(yīng)答功能的多肽片段；(d)在(c)中的多肽片段經(jīng)過取代、缺失或者添加1 3個(gè)氨基酸殘基而形成的具有引發(fā)EV71免疫應(yīng)答功能的多肽；(e)一種以上(c)及(d)所述多肽片段以任意先后次序和重復(fù)次數(shù)組合而成的具有引發(fā)EV71免疫應(yīng)答功能的多肽；(f)氨基酸序列為SEQ ID NO.7的多肽7與(e)所述多肽或(a)所述的多肽1組合得到的具有引發(fā)EV71免疫應(yīng)答功能的多肽；其中多肽7的序列可以在(e)中任一多肽片段或多肽1之前或者之后，并且中間間隔0 3個(gè)任意氨基酸殘基。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多肽，其特征在于(c)中所述的多肽片段為多肽2:SEQ IDN0. 2，多肽 3 =SEQ ID NO. 3，多肽 4 :SEQ ID NO. 4，多肽 5 :SEQ ID N05 ；多肽 6 :SEQ IDNO. 6。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多肽，其特征在于(e)所述的多肽為選自多肽2、3、4、5或6 中的任意2種、3種、4種或者5種多肽按照任意先后次序組合得到的氨基酸序列。
4.與權(quán)利要求1所述的多肽特異性結(jié)合的抗體。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的抗體，其特征在于所述的抗體是完整的單克隆抗體、完整的 多克隆抗體、抗血清或者具有免疫活性的抗體片段、抗體重鏈、抗體輕鏈、嵌合抗體或人源 化抗體，所述抗體可以特異性的與本發(fā)明所述的多肽結(jié)合。
6.權(quán)利要求4所述的抗體在制備預(yù)防或治療人腸病毒71型感染的藥物組合物中的應(yīng)用。
7.權(quán)利要求1所述的多肽在制備檢測(cè)人腸病毒71型的檢測(cè)試劑中的應(yīng)用。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于所述的檢測(cè)試劑包含容器以及位于容器內(nèi) 的本發(fā)明多肽，對(duì)應(yīng)的抗血清以及其它必要化學(xué)物質(zhì)。
9.權(quán)利要求1所述的多肽在制備預(yù)防或者治療EV71感染的藥物組合物中的應(yīng)用。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于所述的藥物組合物是指疫苗組合物。
11.根據(jù)權(quán)利要求9或10所述的應(yīng)用，其特征在于所述的藥物組合物含有免疫有效量 的權(quán)利要求1所述多肽以及藥學(xué)上可接受的載體和/或稀釋劑。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的應(yīng)用，其特征在于所述的載體包括具有增強(qiáng)組合物效果的 佐劑。
13.編碼權(quán)利要求1所述多肽的核苷酸序列。全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)學(xué)免疫領(lǐng)域，公開了一種人腸病毒71型特異性多肽及其應(yīng)用。本發(fā)明的人腸病毒71型特異性多肽的氨基酸序列為SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.1中的氨基酸序列經(jīng)過取代、缺失或者添加1-10個(gè)氨基酸殘基而形成的具有引發(fā)針對(duì)EV71免疫應(yīng)答的由多肽1衍生的多肽；或者SEQ ID NO.1中長(zhǎng)度至少為15個(gè)連續(xù)氨基酸殘基，并具有引發(fā)EV71免疫應(yīng)答功能的多肽片段。本發(fā)明提供的多肽可以特異性與腸病毒71型患者血清產(chǎn)生反應(yīng)，同時(shí)不會(huì)對(duì)脊髓灰質(zhì)炎病毒產(chǎn)生交叉反應(yīng)。因此可以用于臨床檢測(cè)、診斷人腸病毒71型的感染。
文檔編號(hào)C12N15/41GK101891805SQ20101017440
公開日2010年11月24日 申請(qǐng)日期2010年5月18日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月18日
發(fā)明者冷啟彬, 吳洪流, 胡廣, 金明飛 申請(qǐng)人:北京凱悅寧科技有限公司