專利名稱：分離抑制鏈孢霉生長的細(xì)菌的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及食用菌栽培領(lǐng)域，具體地說，涉及一種分離得到對(duì)食用菌栽培有危害
的鏈孢霉起抑制作用的細(xì)菌的方法。
背景技術(shù)：
鏈孢霉是一種頑強(qiáng)、速生的氣生霉，主要危害各種食用菌菌種，也發(fā)生在栽培過程 中，危害食用菌的菌絲體和子實(shí)體，極難防治，目前雖有化學(xué)藥劑防治，但尚未發(fā)現(xiàn)能有效 抑制鏈孢霉生長的微生物。 鏈孢霉廣泛分布在自然界的土壤中、禾本科植物以及富含淀粉的食物上，能產(chǎn)生
大量的分生孢子，靠氣流傳播。在培養(yǎng)室環(huán)境不衛(wèi)生；或菌袋高壓滅菌不徹底；或棉塞受
潮、過松；或菌袋破漏，是鏈孢霉初侵染的主要途徑。菌袋一旦受侵染后，所產(chǎn)生新的分生孢
子，是再侵染的主要來源。在高溫高濕條件下，能在l-2天內(nèi)傳遍整個(gè)培養(yǎng)室。 鏈孢霉是菌種生產(chǎn)期間危害最嚴(yán)重的一種病害。菌袋一經(jīng)污染很難徹底清除，常
弓I起整批菌種或菌袋報(bào)廢，經(jīng)濟(jì)上損失很大。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于提供一種分離抑制鏈孢霉生長的細(xì)菌的方法，達(dá) 到生物防治鏈孢霉的目的。
本發(fā)明的分離抑制鏈孢霉生長的細(xì)菌的方法，具體步驟為 (1)采集樣品在培養(yǎng)室里，根據(jù)房間大小，3-5個(gè)方位取點(diǎn)；采集的樣品于28t:培 養(yǎng)箱培養(yǎng)3天； (2)分離細(xì)菌分離得到單株的純的細(xì)菌； (3)篩選拮抗細(xì)菌在接種有鏈孢霉的培養(yǎng)基平皿上，分別劃線待篩選菌；培養(yǎng)3
天，若細(xì)菌和鏈孢霉之間存在拮抗線，則為能夠抑制鏈孢霉生長的細(xì)菌。 分離到的細(xì)菌可以通過16srDNA分子鑒定得出其種屬分類，具體方法為提取抑
制鏈孢霉的細(xì)菌基因組DNA后，PCR擴(kuò)增，測序，比對(duì)，得出種屬分類結(jié)果。 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)安全，無毒，方便快捷，只需要從采集的樣品中分離純化出細(xì)菌，進(jìn)
而篩選出能抑制鏈孢霉生長的細(xì)菌即可。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明的具體實(shí)施方案是這樣實(shí)現(xiàn)的
實(shí)施例1
(1)采集樣品 全過程采取無菌操作，穿白大褂，戴口罩，手套一次性手套(盡量減少自身攜帶 菌)，在培養(yǎng)室里，在東、西、南、北、中五個(gè)方位取點(diǎn)，每個(gè)點(diǎn)三個(gè)重復(fù)。將倒有約15mlLB培 養(yǎng)基(牛肉膏3g，蛋白胨5g，氯化鈉10g，瓊脂20g，調(diào)pH7. 0-7. 2，水1000ml， 121。C滅菌20分鐘)平皿打開靜置于這些采樣點(diǎn)5分鐘，蓋上皿蓋，封口，于2『C培養(yǎng)箱培養(yǎng)3天。 (2)分離細(xì)菌 平皿中采集的細(xì)菌樣品分類編號(hào)，用接種環(huán)劃線于新的LB培養(yǎng)基平皿，于2『C培 養(yǎng)箱培養(yǎng)3天，挑單菌落劃線于新的LB平皿。如此重復(fù)分離三次，得到純的細(xì)菌。 (3)篩選拮抗細(xì)菌 在LB培養(yǎng)基平皿中央接種鏈孢霉，于四周分別劃線待篩選菌，分別作距離中央約 lcm、2cm、3cm、不劃線四個(gè)處理。培養(yǎng)3天后，觀察細(xì)菌和鏈孢霉之間是否產(chǎn)生拮抗線，若 有，則為能夠抑制鏈孢霉生長的細(xì)菌。 最終發(fā)現(xiàn)3株細(xì)菌與鏈孢霉之間產(chǎn)生拮抗線。 16srDNA分子鑒定提取基因組DNA后，PCR擴(kuò)增，測序，比對(duì)，得出種屬分類結(jié)果 菌種1的種屬分類為 域細(xì)菌 門月元細(xì)菌 目假單胞菌目 科假單胞菌科 屬假單胞菌屬 種惡臭假單胞菌 命名Pseudomonas putida lww_0709 菌種2的種屬分類為 域細(xì)菌 門朊細(xì)菌 目假單胞菌目 科假單胞菌科 屬假單胞菌屬 種惡臭假單胞菌 命名Pseudomonas putida lww_1021 菌種3的種屬分類為 域細(xì)菌 門厚壁菌 綱芽孢桿菌 目芽孢桿菌 科芽孢桿菌 屬芽孢桿菌 種短小芽孢桿菌 命名Bacillus p咖ilus lww_0709
權(quán)利要求
一種分離抑制鏈孢霉生長的細(xì)菌的方法，其特征在于具體步驟為(1)采集樣品在培養(yǎng)室里，根據(jù)房間大小，3-5個(gè)方位取點(diǎn)；采集的樣品于28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)3天；(2)分離細(xì)菌分離得到單株的純的細(xì)菌；(3)篩選拮抗細(xì)菌在接種有鏈孢霉的培養(yǎng)基平皿上，分別劃線待篩選菌；培養(yǎng)3天，若細(xì)菌和鏈孢霉之間存在拮抗線，則為能夠抑制鏈孢霉生長的細(xì)菌。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種分離抑制鏈孢霉生長的細(xì)菌的方法，該方法只需要從采集的樣品中分離純化出細(xì)菌，進(jìn)而篩選出能抑制鏈孢霉生長的細(xì)菌即可。安全，無毒，方便快捷。
文檔編號(hào)C12Q1/04GK101717739SQ20091020199
公開日2010年6月2日 申請(qǐng)日期2009年12月18日 優(yōu)先權(quán)日2009年12月18日
發(fā)明者李玉, 林娓娓, 王瑞娟, 郭倩 申請(qǐng)人:上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院;上?？屏⑻剞r(nóng)科(集團(tuán))有限公司;上海國森生物科技有限公司