專(zhuān)利名稱(chēng)：：一種促進(jìn)手術(shù)后傷口愈合的食品或藥品的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，特別是涉及海洋膠原肽和大豆肽在促進(jìn)手術(shù)后傷口愈合的保健食品或藥品。
背景技術(shù)：
：王正國(guó)主編《創(chuàng)傷愈合與修復(fù)》，山東科學(xué)技術(shù)出版社1998年第1版中論述了傷口愈合是組織生長(zhǎng)、再生的一種特殊生物學(xué)過(guò)程，所涉及的炎癥反應(yīng)細(xì)胞增殖、新生血管和淋巴管形成，以及細(xì)胞外基質(zhì)合成，是一個(gè)連續(xù)動(dòng)態(tài)過(guò)程，不能截然分開(kāi)。因此，凡是能促進(jìn)或抑制某一個(gè)環(huán)節(jié)的因素，均可影響傷口愈合的整個(gè)過(guò)程。傷口愈合過(guò)程中的某些環(huán)節(jié)可受一些營(yíng)養(yǎng)代謝因素的影響，如某些氨基酸缺乏或失衡會(huì)嚴(yán)重影響傷口蛋白質(zhì)合成和傷口愈合，碳水化合物和脂肪代謝紊亂對(duì)傷口愈合有直接和間接雙重作用，維生素C、微量元素是體內(nèi)許多金屬酶的基本輔助成分，參與蛋白質(zhì)合成過(guò)程中多聚體形成。朱兆明《皮膚儲(chǔ)存與應(yīng)用》，人民軍醫(yī)出版社2002第1版中論述了，膠原蛋白(也稱(chēng)膠原，Collagen)是細(xì)胞外基質(zhì)的主要成分，是一種白色、不透明、無(wú)支鏈的纖維蛋白質(zhì)。膠原是參與創(chuàng)傷愈合的主要結(jié)構(gòu)蛋白。同時(shí)膠原蛋白可促進(jìn)肉芽組織生成，加速創(chuàng)面的愈合。膠原分子對(duì)成纖維細(xì)胞的趨化反應(yīng)，使膠原在傷口愈合過(guò)程中起重要作用。關(guān)于促進(jìn)傷口愈合的藥物，申請(qǐng)?zhí)?8804333.5、97180607.1、97180613.6、98813966.9、97180606.3專(zhuān)利文獻(xiàn)中分別公開(kāi)了N—羥基一2—(烷基、芳基或雜芳基硫烷基、亞磺?；蚧酋；?一3—取代的垸基、芳基或雜芳基酰胺、鄰-亞磺酰氨基雜芳基異羥月虧酸、鄰亞磺酰氨基芳基異羥肟酸、N—羥基一2—(烷基、芳基或雜芳基硫烷基、亞磺?；蚧酋；?一3取代的烷基、芳基或雜基酰胺、e-亞磺酰氨基異羥肟酸等用于組織潰瘍、異常的傷口愈合，其機(jī)理為金屬蛋白酶抑制劑。關(guān)于低分子肽類(lèi)的藥物，申請(qǐng)?zhí)?00410022266.2專(zhuān)利文獻(xiàn)中公開(kāi)了c-ski基因及其多肽促進(jìn)損傷愈合又減輕瘢痕；申請(qǐng)?zhí)?1109400.1專(zhuān)利文獻(xiàn)中公開(kāi)了基因重組成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子一8a多肽具有上調(diào)細(xì)胞連接蛋白(Connexin43)表達(dá)，活化上皮功能，加速傷口愈合，以及促進(jìn)軟骨分化等生物活性；申請(qǐng)?zhí)?00610152684.2專(zhuān)利文獻(xiàn)中公開(kāi)了具有促進(jìn)血管形成、組織再生及傷口愈合作用的多肽組合制劑；申請(qǐng)?zhí)?00410098483.X專(zhuān)利文獻(xiàn)中公開(kāi)了一組具有促進(jìn)新血管形成、組織再生及傷口愈合作用的活性小分子多肽胸腺素fU6及其藥物組合物；申請(qǐng)?zhí)?00410015853.9專(zhuān)利文獻(xiàn)中公開(kāi)了促進(jìn)皮膚、結(jié)締組織、骨生長(zhǎng)的多肽組合物；申請(qǐng)?zhí)?1820299.3專(zhuān)利文獻(xiàn)中公開(kāi)了新的一類(lèi)多肽成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子具有促進(jìn)傷口愈合等作用；申請(qǐng)?zhí)?00610112159.8專(zhuān)利文獻(xiàn)中公開(kāi)了涉及用于加速傷口愈合的組合物，該組合物中包含有血栓調(diào)節(jié)蛋白的EGF樣區(qū)域之氨基酸序列的多肽或其中保守性變異體；申請(qǐng)?zhí)?0116910.6專(zhuān)利文獻(xiàn)中公開(kāi)了一種新的多肽一上皮形成素9.9和編碼這種多肽的多核苷酸用于促進(jìn)傷口愈合等；申請(qǐng)?zhí)?9816184.5專(zhuān)利文獻(xiàn)中公丌了取代的雜環(huán)?；蝗脑趥谟虾头乐寡“迥壑械挠猛尽：Ｑ竽z原肽是以海洋魚(yú)皮作主要原料，用酶解法生產(chǎn)的、相對(duì)分子質(zhì)量低于1000的低聚肽(短肽)為主要成分的粉末狀產(chǎn)品。彭宏斌《海洋膠原肽輔助降血糖和免疫營(yíng)養(yǎng)功能的效果研究》，CHKD博碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)2008年博士論文中報(bào)導(dǎo)海洋膠原肽具有輔助降血糖功能，可改善糖尿病患者胰島素敏感性和改善胰島素分泌功能，縮短糖尿病患者的血糖調(diào)整期，降低夜間低血糖的發(fā)生率。海洋膠原肽短期干預(yù)手術(shù)后患者可以改善營(yíng)養(yǎng)狀況、提高免疫能力、縮短平均住院日。劉桂琴等《海洋膠原肽對(duì)2型糖尿病大鼠過(guò)氧化應(yīng)激標(biāo)志物表達(dá)的影響》，中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù)，2008，12(23)中報(bào)導(dǎo)體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)海洋膠原肽具有抗氧化等生物活性。海洋膠原肽可能具有一定的抗炎癥效應(yīng)。關(guān)于海洋膠原肽的用途，申請(qǐng)?zhí)?00710157641.8專(zhuān)利文獻(xiàn)中公開(kāi)了海洋膠原肽作為制備降血糖藥物、保健食品或食品的用途，申請(qǐng)?zhí)?00710157643.7專(zhuān)利文獻(xiàn)中海洋膠原肽作為制備抗氧化藥物、保健食品、食品或化妝品的用途，申請(qǐng)?zhí)?00610086812.8專(zhuān)利文獻(xiàn)中公開(kāi)了海洋膠原肽在制備免疫調(diào)節(jié)藥物或食品中的用途。大豆肽是以大豆、豆粕或大豆蛋白為主要原料，用酶解法或微生物發(fā)酵法生產(chǎn)的，主要成分為肽，且分子量分布在10000Dalton以下的粉末狀產(chǎn)品。大豆肽含有的八種必需氨基酸，除蛋氨酸為限制氨基酸以外，甘氨酸、脯氨酸等其它氨基酸均超過(guò)或接近世界衛(wèi)生組織(wro)的推薦標(biāo)準(zhǔn)，因此具有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。分子量小于1000的肽吸收率高達(dá)90°/。以上。優(yōu)質(zhì)大豆肽的分子量分布以小于1000的為主，分子量主要在300700范圍內(nèi)。大豆肽能促進(jìn)礦物質(zhì)吸收、降低血壓，大豆肽能促進(jìn)脂肪代謝，大豆肽還有免疫功能，抗氧化功能，降低血糖作用。關(guān)于大豆肽的用途，申請(qǐng)?zhí)?00510077612.1專(zhuān)利文獻(xiàn)中公開(kāi)了具有解酒護(hù)肝功能的產(chǎn)品及制備方法和用途，申請(qǐng)?zhí)?00610026655.1專(zhuān)利文獻(xiàn)中公開(kāi)了一種促進(jìn)肥牛肌腱發(fā)育的多肽及微生物制劑及制備方法，以上專(zhuān)利均未述及肽用于促進(jìn)手術(shù)后傷口愈合的用途?，F(xiàn)有天然來(lái)源的短肽類(lèi)產(chǎn)品中有同仁堂牌短肽特殊營(yíng)養(yǎng)食品，分別有供產(chǎn)后人群食用、腎病患者、瘤患者、肝病患者、糖尿病患者、骨傷患者、術(shù)后患者食用的相應(yīng)產(chǎn)品。其中術(shù)后患者食用的短肽特殊營(yíng)養(yǎng)食品配方為海洋膠原肽、海洋骨原肽、乳清蛋白肽、卵白蛋白肽、山藥提取物、大棗提取物、桑椹提取物、低聚異麥芽糖、復(fù)合維生素、復(fù)合礦物質(zhì)，產(chǎn)品特征在于短肽分子量小于1000D，適用于各種外科手術(shù)圍手術(shù)期、燒傷病人、營(yíng)養(yǎng)不良以及體弱者。李英杰等《枸杞多糖免疫調(diào)節(jié)作用機(jī)制研究進(jìn)展》中國(guó)新藥雜志，2004，13(10))研究表明枸杞多糖能人體增強(qiáng)免疫力；楊海軍，功能性食品配料——水溶性膳食纖維，中國(guó)食物與營(yíng)養(yǎng)，2003，(9)報(bào)導(dǎo)水溶性膳食纖維能增強(qiáng)胃腸蠕動(dòng)；黃祥元，酪蛋白磷酸肽及其促進(jìn)礦物質(zhì)吸收的因素，食品與機(jī)械，2008，(3)報(bào)導(dǎo)酪蛋白磷酸肽能增強(qiáng)鈣、鐵等微量元素的吸收。綜上所述，目前還沒(méi)有關(guān)于分子量在10000以下的天然來(lái)源的肽與葡萄糖酸鋅、維生素C組成的應(yīng)用于促進(jìn)手術(shù)后傷口愈合方面藥品或食品的報(bào)道，也沒(méi)有在其中加入枸杞多糖、水溶性膳食纖維、酪蛋白磷酸肽的藥品或食品的報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的提供一種促進(jìn)手術(shù)后傷口愈合的保健食品或藥品及其制備方法。本發(fā)明的技術(shù)方案是該促進(jìn)手術(shù)后傷口愈合的食品或藥品，它的活性成分主要由下列重量份的原料制成的口服制劑大豆肽l-100g、海洋膠原肽1-100g。優(yōu)選的技術(shù)方案可以是上述的主要活性成份中加入下述重量份的葡萄糖酸鋅o.01-0.5g、維生素CO.1-lg、枸杞多糖0.1-10g、水溶性膳食纖維l-100g、酪蛋白磷酸肽0.1-10g中的一種或多種原料。較優(yōu)選的方案是由大豆肽20-60g、海洋膠原肽20-60g、葡萄糖酸鋅O.1-0.3g、維生素CO.2-0.8g組成。更較優(yōu)選的方案是由大豆肽30g、海洋膠原肽30g、葡萄糖酸鋅0.3g、維生素C0.4g組成。本發(fā)明中枸杞多糖可以增強(qiáng)免疫力；加入水溶性膳食纖維增強(qiáng)胃腸蠕動(dòng)；加入酪蛋白磷酸肽可增強(qiáng)鈣、鐵等微量元素的吸收。本發(fā)明可采用保健食品或藥品上可接受的制備工藝和輔料制成的包括但不限于顆粒劑、口服液等常規(guī)口服制劑。本產(chǎn)品具有成本低，療效好，天然來(lái)源無(wú)毒副作用特點(diǎn)。具體實(shí)施例方式下面通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步說(shuō)明實(shí)施例l:取海洋膠原肽300g、大豆肽300g、水溶性膳食纖維100g、糖粉258.4g、酪蛋白磷酸肽5g、葡萄糖酸鋅3g、維生素C4g、枸杞多糖10g、檸檬酸10g、阿斯巴甜2g、固體香精5g,將所有原輔料分別過(guò)100目篩，用等比遞增的方法混合均勻。將混勻的物料用聚維酮K30的10%水溶液作粘合劑進(jìn)行沸騰制粒，控制霧化壓力為0.15MPa,物料溫度為45'C，進(jìn)風(fēng)溫度為75'C;所得顆粒用20目篩整粒。用紙鋁包裝，每袋10克。實(shí)施例2:取海洋膠原肽300g、大豆肽300g、糖粉400g，將原輔料分別過(guò)100目篩，混合均勻。將混勻的物料用聚維酮K30的10%水溶液作粘合劑進(jìn)行沸騰制粒，控制霧化壓力為0.15MPa，物料溫度為45'C，進(jìn)風(fēng)溫度為75。C;所得顆粒用20目篩整粒。用紙鋁包裝，每袋10克。實(shí)施例3:取海洋膠原肽400g、大豆肽200g、糖粉400g，將原輔料分別過(guò)100目篩，混合均勻。將混勻的物料用聚維酮K30的10%水溶液作粘合劑進(jìn)行沸騰制粒，控制霧化壓力為0.15MPa，物料溫度為45。C，進(jìn)風(fēng)溫度為75。C;所得顆粒用20目篩整粒。用紙鋁包裝，每袋10克。實(shí)施例4:取海洋膠原肽200g、大豆肽400g、糖粉400g，將原輔料分別過(guò)100目篩，混合均勻。將混勻的物料用聚維酮K30的10%水溶液作粘合劑進(jìn)行沸騰制粒，控制霧化壓力為0.15MPa，物料溫度為45。C，進(jìn)風(fēng)溫度為75。C;所得顆粒用20目篩整粒。用紙鋁包裝，每袋10克。實(shí)施例5:取海洋膠原肽30g、大豆肽30g、水溶性膳食纖維30g、酪蛋白磷酸肽0.5g、葡萄糖酸鋅0.3g、維生素C0.4g、枸杞多糖lg、檸檬酸2g、三氯蔗糖O.lg、麥芽糖醇150g、乙二胺四乙酸二鈉0.2g、香精(MANEW0826602)0.51g，在配制罐中加入500ml純化水，依次加入海洋膠原肽、大豆肽、乙二胺四乙酸二鈉、枸杞多糖、檸檬酸和水溶性膳食纖維，攪拌使溶解。用板框過(guò)濾器過(guò)濾，得到濾液。將三氯蔗糖、維生素C、酪蛋白磷酸肽、葡萄糖酸鋅用適量純化水溶解后，加入到濾液中，再加入麥芽糖醇，加水至1000ml,攪拌15分鐘，加入香精，再攪拌10分鐘，用2um濾芯過(guò)濾。灌裝，每瓶100ml，105'C滅菌30分鐘，即得。實(shí)施例6:取海洋膠原肽30g、大豆肽30g、葡萄糖酸鋅0.3g、維生素C0.4g，在配制罐屮加入500ml純化水，依次加入海洋膠原肽、大豆肽，攪拌使溶解。用板框過(guò)濾器過(guò)濾，得到濾液。將維生素C、葡萄糖酸鋅用適量純化水溶解后，加入到濾液中，加水至1000ml，攪拌15分鐘，用2"m濾芯過(guò)濾。灌裝，每瓶100ml，105。C滅菌30分鐘，即得。實(shí)施例7:取海洋膠原肽lg、大豆肽99g,在配制罐中加入500ml純化水，依次加入海洋膠原肽、大豆肽，攪拌使溶解。用板框過(guò)濾器過(guò)濾，得到濾液，加水至1000ml，攪拌15分鐘，用2um濾芯過(guò)濾。灌裝，每瓶100ml，105。C滅菌30分鐘，即得。實(shí)施例8:取海洋膠原肽99g、大豆肽lg，在配制罐中加入500ml純化水，依次加入海洋膠原肽、大豆肽，攪拌使溶解。用板框過(guò)濾器過(guò)濾，得到濾液，加水至1000ml，攪拌15分鐘，用2ym濾芯過(guò)濾。灌裝，每瓶100ml，105'C滅菌30分鐘，即得。一、促進(jìn)手術(shù)后大鼠傷口愈合的功效研究1.材料與方法1.1原料實(shí)施例l-4樣品、海洋膠原肽粉。1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康雄性二級(jí)SD大鼠，體重230250克。1.3實(shí)驗(yàn)條件清潔級(jí)動(dòng)物室，溫度范圍21-23'C，相對(duì)濕度50%—60%。1.4實(shí)驗(yàn)方法1.4.1動(dòng)物模型建立方法大鼠經(jīng)1%戊巴比妥鈉麻醉后，剃去背部皮膚，常規(guī)皮膚消毒，背部?jī)蓚?cè)分別切一個(gè)2cm長(zhǎng)的縱行切口，同時(shí)切開(kāi)肌肉，深達(dá)腹腔，然后逐層縫合肌肉和皮膚。整個(gè)過(guò)程模擬臨床手術(shù)過(guò)程，同時(shí)手術(shù)當(dāng)天計(jì)為術(shù)后第O天(PODO)，以此類(lèi)推。1.4.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組取144只體重為230-250g的大鼠，隨即分為6組，每組24只，分別為空白組、實(shí)施例樣品1-4(0.667g/kg.bw)、海洋膠原肽粉(0.667g/kg.bw)。手術(shù)當(dāng)天開(kāi)始，每日灌胃。分別于第3、7、14天處死大鼠，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)各8只動(dòng)物。1.4.3傷口愈合觀察1.4.3.1肉眼觀察每隔日用放大鏡觀察切口變化情況。各組于術(shù)后第3天觀察傷口及其周?chē)M織的創(chuàng)傷反應(yīng)，第7、14天觀察傷口的恢復(fù)情況。術(shù)后創(chuàng)傷反應(yīng)及傷口恢復(fù)情況統(tǒng)一按本實(shí)驗(yàn)室自制標(biāo)準(zhǔn)評(píng)定。1.4.3丄i傷口及其周?chē)M織的創(chuàng)傷反應(yīng)評(píng)定①i期反應(yīng)。傷口有輕度腫脹。②n期反應(yīng)。傷口及周?chē)M織輕度水腫，皮下有散在淤血斑。(DIII期反應(yīng)。切口有少量血痂附著，傷口及周?chē)M織明顯水腫。L4.3丄2傷口恢復(fù)情況評(píng)定①優(yōu)。傷口組織無(wú)腫脹，皮膚青紫現(xiàn)象消失。②良。傷口組織輕度腫脹，皮下淤血斑消失，青紫現(xiàn)象逐漸消退。③差。傷口及周?chē)M織腫脹。1.4.3.2切口愈合的組織病理學(xué)觀察各組大鼠分別于術(shù)后第3、7、14天于傷口處距切口邊緣約0.5cm取全層皮膚組織。左側(cè)傷口所取組織的一半用4%多聚甲醛固定，保存待做石蠟切片及HE、Masson染色，另一半用于抗拉力檢測(cè)，右側(cè)傷口皮膚用于羥脯氨酸測(cè)定和其他指標(biāo)的檢測(cè)。1.4.3.3膠原纖維染色(Masson染色)組織切片脫蠟至蒸餾水，蘇木素染色510分鐘，鹽酸酒精分化，流水藍(lán)化，蒸餾水洗，麗春紅酸性品紅液中染58分鐘，蒸餾水，1%磷鉬酸中染13分鐘，直接入苯胺藍(lán)液或亮綠液5分鐘，水速洗，置6(TC溫箱中烘干，二甲苯透明，封固。結(jié)果膠原纖維綠色，肌纖維、纖維素紅色。1.4.3.4切口的抗張強(qiáng)度檢測(cè)術(shù)后第7、14天，沿切口垂直方向切取以切口為中線，寬為0.5cm長(zhǎng)為中線雙側(cè)各0.5cm，并包含切口在內(nèi)的皮膚試件組織，去除皮下脂肪組織，于長(zhǎng)方形短邊以絲線縫合作為牽引線，將皮條置于帶有張力感受器的裝置中間，張力感受器另一端連接于多功能生物信號(hào)采集系統(tǒng)，采用帶有游標(biāo)卡尺的微調(diào)裝置手動(dòng)逐漸拉伸皮條，記錄皮條被拉斷時(shí)的張力。測(cè)微尺測(cè)量皮膚的厚度，每平方毫米面積的張力即為切口的抗張強(qiáng)度。1.4.3.5羥脯氨酸測(cè)定切取大鼠切口周?chē)?-3毫米的皮膚用于測(cè)定羥脯氨酸，方法依據(jù)南京建成生物工程公司的羥脯氨酸檢測(cè)試劑盒進(jìn)行操作。1.4.4統(tǒng)計(jì)方法采用SPSS軟件進(jìn)行單因素方差分析。2.結(jié)果2.1大鼠術(shù)后傷口愈合的肉眼觀察結(jié)果肉眼觀察表現(xiàn)，術(shù)后第3天，各組創(chuàng)傷反應(yīng)比較好，但是沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表1)。術(shù)后第7和14天，各組大鼠傷口愈合好，并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表2)。表I各組傷口創(chuàng)傷反應(yīng)情況比較例(％)組別例數(shù)I期II期in期<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>實(shí)施例3組249(37.5)8(25)7(29,2)實(shí)施例4組247(29.2)9(37.5)8(33.3)表2各組傷口恢復(fù)情況比較例(％)第7天(共16只)第14天(共8只)優(yōu)良差優(yōu)良差空白組3(18.75)6(37.5)7(43.75)4(50)2(25)2(25)膠原肽組6(37.5)(31.25)5(31.25)(62.5)2(25)1(12.5)實(shí)施例1組6(37.5)6(37.5)4(25)(62.5)(37.5)0實(shí)施例2組6(37.5)(31.25)5(31.25)(62.5)(37.5)0實(shí)施例3組6(18.75)(37.5)3(43.75)(62.5)2(25)1(12.5)實(shí)施例4組5(31.25)6(37.5)4(25)5(62.5)2(25)1(12.5)2.2肽對(duì)大鼠術(shù)后傷口皮膚愈合的組織學(xué)觀察結(jié)果組織學(xué)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，術(shù)后第7天組織切片觀察各組傷口表皮、瘢痕組織、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、成纖維細(xì)胞和毛細(xì)血管相當(dāng)，與海洋膠原肽組無(wú)顯著差異。術(shù)后第14天組織切片觀察顯示，各組傷口表皮完整，瘢痕組織明顯少于對(duì)照組，炎性細(xì)胞明顯減少，與海洋膠原肽組無(wú)顯著差異。2.3Masson染色光鏡組織學(xué)觀察Masson染色將結(jié)締組織和膠原纖維染成綠色，平滑肌染成紅色，細(xì)胞核染成褐色。術(shù)后第7天結(jié)果發(fā)現(xiàn)，各組大鼠切口膠原纖維數(shù)量相當(dāng)，與海洋膠原肽組無(wú)顯著差異。術(shù)后第14天同樣發(fā)現(xiàn)各組膠原纖維數(shù)量相當(dāng)，與海洋膠原肽組無(wú)顯著差異。2.4術(shù)后不同時(shí)間傷口抗張力比較術(shù)后第7、14天各組傷口抗張力值見(jiàn)表3。從表3可見(jiàn)，第7天和第14天各組之間傷口的抗張力強(qiáng)度與海洋膠原肽組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。表3術(shù)后各組傷口抗張力值(g/mm2,、X0SD)時(shí)間空白組海洋膠原肽實(shí)施例l實(shí)施例2實(shí)施例3實(shí)施例4術(shù)后第15.49CB.2319.75d3.62*20.87d5.03*19.33口3.85*19.98口4.03*18.6804.42*7曰術(shù)后第47.15Q5.8353.59D6.28*54.47口5.43*54.8705.33*54.21口5,52*53.21Q4.59*14曰注*表示與對(duì)照組比較，尸<^052.5切口肉芽組織羥脯氨酸結(jié)果術(shù)后第7、14天各組傷口羥脯氨酸檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表4。從表4可見(jiàn)，第7天和第14天各組之間傷口的羥脯氨酸表達(dá)無(wú)差異(P>0.05)。表4術(shù)后各組羥脯氨酸結(jié)果(Mg/mg，XDSD)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>注*表示與對(duì)照組比較，尸<0.053.結(jié)論本研究發(fā)現(xiàn)經(jīng)口給予術(shù)后大鼠相同濃度的本發(fā)明樣品后，能提高術(shù)后傷口的抗張力值、膠原纖維數(shù)量、羥脯氨酸的表達(dá)水平、傷口恢復(fù)的效果，各給藥組無(wú)顯著性差異，都具有臨床實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。二、低聚肽含量測(cè)定1.方法提要低分子量的蛋白質(zhì)水解物(包含肽類(lèi)及游離氨基酸)可溶于三氯乙酸溶液；高分子量的蛋白質(zhì)在三氯乙酸溶液中易沉淀。樣品經(jīng)三氯乙酸溶液溶解后，離心分離出沉淀蛋白質(zhì)物質(zhì)，測(cè)定出離心清液中的酸溶蛋白質(zhì)含量，清液中的酸溶蛋白質(zhì)含量減去游離氨基酸含量即為低聚肽的含量。2.分析歩驟2.1酸溶蛋白質(zhì)含量的測(cè)定稱(chēng)取2g(精確至lmg)樣品，加入10mL15。/。三氯乙酸溶液，混合均勻，靜置10min。將樣品溶液在4000rpm下離心10min后，取全部清液，按GB/T5009.5規(guī)定的方法測(cè)定清液中的酸溶蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)換算系數(shù)為6.25。檢驗(yàn)結(jié)果根據(jù)樣品的干燥失重，折算為干基。2.2游離氨基酸含量的測(cè)定樣品前處理稱(chēng)取2030mg樣品，精確到0.0001g，用3%磺基水楊酸溶液溶解均勻。將樣品溶液轉(zhuǎn)移至50ml容量瓶中，定容。將樣品溶液在轉(zhuǎn)速為4000r/min離心機(jī)上離心5min得清液，再用0.45iim微孔濾膜過(guò)濾清液，將濾液轉(zhuǎn)移至50ml容量瓶中，定容后作為儀器檢測(cè)用樣品。其余操作同GB12292水果、蔬菜汁游離氨基酸含量的測(cè)定規(guī)定的方法。2.3結(jié)果的表述低聚肽的含量尸2按式(1)計(jì)算尸2□《□爿(1)式中-尸2——樣品中低聚肽含量(以干基計(jì))，％;S——樣品中酸溶蛋白質(zhì)含量(以干基計(jì))，％;j——樣品中游離氨基酸含量(以干基計(jì))，％。2.4測(cè)定結(jié)果實(shí)施例1-5測(cè)定低聚肽含量，結(jié)果見(jiàn)表5。表5、低聚肽含量測(cè)定結(jié)果樣品實(shí)施例1實(shí)施例2實(shí)施例3實(shí)施例4實(shí)施例5低聚肽含量49.7%59.8%50.3%49.2%4.9%3.相對(duì)分子質(zhì)量小于1000的肽所占比例(高效凝膠過(guò)濾色譜法)3.1方法提要采用高效凝膠過(guò)濾色譜法測(cè)定。即以多孔性填料為固定相，依據(jù)樣品組分分子體積大小的差別進(jìn)行分離，在肽鍵的紫外吸收波長(zhǎng)220nm條件下檢測(cè)，使用凝膠色譜測(cè)定相對(duì)分子質(zhì)量分布的專(zhuān)用數(shù)據(jù)處理軟件(即GPC軟件)，對(duì)色譜圖及其數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，計(jì)算得到低聚肽的相對(duì)分子質(zhì)量大小及分布范圍。3.2試劑乙腈色譜純；三氟醋酸分析純；水超純水或二次蒸餾水。相對(duì)分子質(zhì)量校正曲線所用標(biāo)準(zhǔn)品細(xì)胞色素C(cyyochrorae，MW12500);抑酞酶(aproUnin,麗6500);桿菌酶(bacitracin,匿1450);乙氨酸一乙氨酸一酪氨酸一精氨酸(MW451);乙氨酸一乙氨酸一乙氮酸(MW189)3.3儀器和設(shè)備高效液相色譜儀配有紫外檢測(cè)器和含有GPC數(shù)據(jù)處理軟件的色譜工作站或積分儀；流動(dòng)相真空抽濾脫氣裝置；超聲波振蕩器；分析天平感量O.0001g。3.4色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)色譜柱TSKgelG2000SWXL300mmX7.8咖或性能與此相近的同類(lèi)型其他適用于測(cè)定蛋白質(zhì)和多肽的凝膠柱；流動(dòng)相乙腈水三氟乙酸，45:55:0.1(體積比)檢測(cè)波長(zhǎng)UV220nm;流速0.5ml/min;柱溫3(TC;進(jìn)樣體積10wl。為使色譜系統(tǒng)符合檢測(cè)要求，規(guī)定在上述色譜條件下，凝膠色譜柱的柱效即理論塔板數(shù)(N)按三肽標(biāo)準(zhǔn)品(乙氨酸一乙氨酸一乙氨酸)峰計(jì)算不低于5000，低聚肽的分配系數(shù)(Kd)應(yīng)在01之間。3.5相對(duì)分子質(zhì)量校正曲線制作分別用流動(dòng)相配制成0.1%(W/V)的上述不同相對(duì)分子質(zhì)量的肽標(biāo)準(zhǔn)品溶液，用孔徑為0.2-0.5tim聚四氟乙烯或尼龍過(guò)濾膜過(guò)濾后分別進(jìn)樣，得到系列標(biāo)準(zhǔn)品的色譜圖。以相對(duì)分子質(zhì)量的對(duì)數(shù)(lgMW)對(duì)保留時(shí)間作圖或作線性回歸得到相對(duì)分子質(zhì)量校正曲線及其方程。3.6樣品制備稱(chēng)取樣品20.0mg于10mL容量瓶中，用流動(dòng)相定容至刻度，超聲振蕩10min，使樣品充分溶解混勻，用孔徑為0.2-0.5ym聚四氟乙烯或尼龍過(guò)濾膜過(guò)濾后，上機(jī)進(jìn)樣。3.7相對(duì)分子質(zhì)量的計(jì)算將3.6制備的樣品溶液在上述色譜條件下分析。然后用GPC數(shù)據(jù)處理軟件，將樣品的色譜數(shù)據(jù)代入校正曲線方程中進(jìn)行計(jì)算，即可得到樣品中肽的相對(duì)分子質(zhì)量及其分布范圍。用峰面積歸一化法計(jì)算相對(duì)分子質(zhì)量范圍在1000以下的肽的峰面積相對(duì)百分比之和。3.8測(cè)定結(jié)果取實(shí)施例1-5樣品測(cè)定分子量分布范圍，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表6-10。表6、實(shí)施例1<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>表7、實(shí)施例2分子量范圍開(kāi)始時(shí)間min結(jié)束時(shí)間rain重均分子量峰面積％(入220nm)1000-1000013.96618.99515029.3846500-100018.99520.50967726.7128140-50020.50923.28931758.544570-14023.28924.8021064.2667表8、實(shí)施例3分子量范圍開(kāi)始時(shí)間min結(jié)束時(shí)間min重均分子量峰面積％(入220nm)1000-1000013,96618.995166810.6283500-100018.99520.50967826.3129140-50020.50923.28931757.649070-14023.28924.8021064.2885表9、實(shí)施例4分子量范圍開(kāi)始時(shí)間min結(jié)束時(shí)間min重均分子量峰面積％(入220nm)1000-1000013.96618.99515789.8223500-100018.99520.50967526.3309140-50020.50923.28931759.388370-14023.28924.8021064.4585表10、實(shí)施例5分子量范圍開(kāi)始時(shí)間min結(jié)束時(shí)間min重均分子量峰面積％(A220nm)1000-1000013.96618.99516088.7142500-100018.99520.50967722.7149140-50020.50923.28931864.860970-14023.28924.8021053.7100以上結(jié)果表明，本發(fā)明制備的保健食品主要成分的分子量主要集中在140-1000，占10000分子量以下物質(zhì)中的80%以上。權(quán)利要求1.一種促進(jìn)手術(shù)后傷口愈合的食品或藥品，其特征在于它的活性成分主要由下列重量份的原料制成的口服制劑大豆肽1-100g、海洋膠原肽1-100g組成。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的保健食品或藥品，其特征在于原料中還包括下述重量份的葡萄糖酸鋅0.01-0.5g、維生素CO.l-lg、枸杞多糖0.l-10g、水溶性膳食纖維l-100g、酪蛋白磷酸肽0.1-10g中的一種或多種原料。3.根據(jù)權(quán)利要求1-2任一所述的保健食品或藥品，其特征在于它是由大豆肽20-60g、海洋膠原肽20-60g、葡萄糖酸鋅0.1-0.3g、維生素C0.2-0.8g組成。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的保健食品或藥品，其特征在于它是由大豆肽30g、海洋膠原肽30g、葡萄糖酸鋅0.3g、維生素C0.4g組成。5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一所述的保健食品或藥品的制備方法，其特征在于可采用食品或藥品上常規(guī)的制備工藝和輔料制成的常規(guī)口服制劑。全文摘要本發(fā)明涉及一種促進(jìn)手術(shù)后傷口愈合的食品或藥品，其特征在于它的活性成分主要由下列重量份的原料制成大豆肽1-100g、海洋膠原肽1-100g。原料中還包括下述重量份的葡萄糖酸鋅0.01-0.5g、維生素C0.1-1g、枸杞多糖0.1-10g、水溶性膳食纖維1-100g、酪蛋白磷酸肽0.1-10g中的一種或多種；本發(fā)明可采用保健食品或藥品上可接受的制備工藝和輔料制成的包括但不限于顆粒劑、口服液等常規(guī)口服制劑。文檔編號(hào)A23L1/305GK101455405SQ20091011480公開(kāi)日2009年6月17日申請(qǐng)日期2009年1月4日優(yōu)先權(quán)日2009年1月4日發(fā)明者付玉梅,盧建中,呂毅斌,萍喻,堯梅香,群廖,易敏之,勇李,李詒光申請(qǐng)人:江中藥業(yè)股份有限公司