專利名稱：黃瓜谷胱甘肽硫轉移酶基因CsGSTZ及其編碼的氨基酸序列的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及黃瓜谷胱甘肽硫轉移酶基因及其編碼的氨基酸序列。
背景技術：
全球約有l(wèi)X109hm2的鹽堿地，我國鹽堿地約占全球鹽堿地總面積的10% (Flowers, 2004)，特別是我國東北地區(qū)的鹽堿地以蘇打土 (sodic soil)為主。絕大多數(shù)農(nóng) 作物對于鹽堿及重金屬的耐受性差，使單位面積的土地上作物減產(chǎn)，因此土壤鹽漬化已經(jīng) 成為制約農(nóng)業(yè)發(fā)展的重要因素，要改善那些具有農(nóng)用潛力的土地，目前只有兩種途徑可供 選擇其一是人工改善自然條件，利用淡水灌溉或其它改良土壤的方法；其二是通過篩選 能適應高鹽環(huán)境的優(yōu)良抗鹽品種來逐步地適應環(huán)境并最終達到改良土壤的目的。相比之 下，后者花費較少，在目前的情況下更加切實可行，因此對抗鹽、耐鹽植物的研究具有重要 意義，如何提高作物耐鹽性、有效利用鹽堿土資源已經(jīng)成為亟待解決的重大課題。但是通過 認為篩選等方式收效甚微，第一是具有脅迫耐受性的植物品種少，第二是脅迫耐受性性能 低。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明是為了解決現(xiàn)有農(nóng)作物抗鹽堿的能力差的問題，而提供黃瓜谷胱甘肽硫轉 移酶基因CsGSTZ及其編碼的氨基酸序列。 本發(fā)明的黃瓜谷胱甘肽硫轉移酶基因CsGSTZ的cDNA序列全長為710bp，編碼區(qū) cDNA序列長度為657bp，編碼218個氨基酸，5'非翻譯區(qū)為22bp，3'非翻譯區(qū)為31bp，序列 如SEQ ID No. 1所示。 本發(fā)明的黃瓜谷胱甘肽硫轉移酶基因CsGSTZ編碼的氨基酸序列包括218個氨基
酸，黃瓜谷胱甘肽硫轉移酶基因CsGSTZ編碼的氨基酸序列如SEQ IDNo. 2所示。 本發(fā)明的黃瓜谷胱甘肽硫轉移酶基因CsGSTZ構建的載體轉化到酵母菌中，轉化
后的酵母菌具有抗鹽堿脅迫以及抗重金屬脅迫的耐受性，說明本發(fā)明的黃瓜谷胱甘肽硫轉
移酶基因CsGSTZ賦予了酵母菌抗鹽堿脅迫以及抗重金屬脅迫的能力；為將來培育具有鹽
堿脅迫耐受性植物品種奠定了物質(zhì)基礎。


圖1為轉化CsGSTZ基因的RT-PCR電泳圖；圖2為轉化黃瓜CsGSTZ基因酵母及對 照酵母正常條件下生長對照效果圖；圖3為轉化黃瓜CsGSTZ基因酵母及對照酵母在濃度 為lmmol/L Na2C03脅迫處理4h后生長對照效果圖；圖4為轉化黃瓜CsGSTZ基因酵母及對 照酵母在濃度為lmmol/L Na2C03脅迫處理12h后生長對照效果圖；圖5為轉化黃瓜CsGSTZ 基因酵母及對照酵母在濃度為5mmol/L NaCl脅迫4h后生長對照效果圖；圖6為轉化黃瓜 CsGSTZ基因酵母及對照酵母在濃度為5mmol/L NaCl脅迫24h后生長對照效果圖；圖7為轉化黃瓜CsGSTZ基因酵母及對照酵母在濃度為5mmol/L NaCl脅迫48h后生長對照效果圖； 圖8為轉化黃瓜CsGSTZ基因的酵母對CuS04脅迫的耐受性效果圖；圖9為轉化黃瓜CsGSTZ 基因的酵母對CdS04脅迫的耐受性效果圖。
具體實施例方式
本發(fā)明技術方案不局限于以下所列舉具體實施方式
，還包括各具體實施方式
間的 任意組合。
具體實施方式
一 本實施方式的黃瓜谷胱甘肽硫轉移酶基因CsGSTZ的cDNA序列 全長為710bp，編碼區(qū)cDNA序列長度為657bp，編碼218個氨基酸，5'非翻譯區(qū)為22bp， 3'
CCAGCTAAATCTAAGATTACTGATAGAACCTACAGATCA。 本實施方式黃瓜谷胱甘肽硫轉移酶基因CsGSTZ提取方法按照如下步驟進行
—、黃瓜總RNA的提取(1)將黃瓜快速用液氮研至粉末狀，然后在1. 5mL離心管 中加入SDS提取液(其中SDS的質(zhì)量濃度為2%，四硼酸鈉的濃度為0. 0125mmol/L，氯化鈉 的濃度為200mmol/L，尿素的濃度為4. Ommol/L， pH值為8. OTris-Cl的濃度為50mmol/L， pH值為8. OEDTA的濃度為lOmmol/L) 700 y L， Tris飽和酚350 y L，氯仿350 y L和0. lg黃 瓜研磨粉末，振蕩20 30min，以12000r/m的速度離心lOmin，取上清液；(2)向步驟(1) 得到的上清液中加入350 ii L的Tris飽和酚，350 y L的氯仿，振蕩10min，再以12000r/m的 速度離心5min，取上清液；(3)向步驟(2)得到的上清液中加入氯仿700 y L，振蕩lOmin， 再以12000r/m的速度離心5min，取上清液；(4)向步驟(3)得到的上清液中加入濃度為 8mmol/L的LiCl溶液350 y L和體積濃度為75%的乙醇350 y L，混勻，在_20°C的條件下 靜置30min，以12000r/m的速度離心20min，取沉淀，并用300 y L體積濃度為75%的乙醇 洗滌沉淀，再用移液器吸去殘余乙醇，并在室溫下氣干，將氣干后的沉淀用50 lOOii L的 DEPC(diethypyrocarbonate，焦碳酸二乙酯)水溶解，再加入等體積的氯仿，振蕩lOmin后 以12000r/m的速度離心5min，取上清液，重復用氯仿抽提直至上清液澄清，再向澄清的 上清液中加入體積為澄清的上清液2倍的無水乙醇和體積為澄清的上清液1/10、濃度為 3mol/L的NaAc溶液進行重沉，再以12000r/m的速度離心20min，取沉淀；(5)將步驟(5)得 到的沉淀用300 L體積濃度為75%的乙醇洗滌2次，用移液器吸去殘余乙醇，室溫氣干，采 用50 ii L的DEPC水將沉淀溶解，在_70°C的條件下保存黃瓜總RNA ; 二、基因的分離及序列分析(1)試驗試劑及引物采用Smart RACEcDNA Amplification Kit試劑盒，根據(jù)cDNA文庫的CsGSTZ的EST序列，在3'非翻譯區(qū)分別設計5' RACE引物及相應的巢式引物，引物設計如下巢式引物CsGSTZ N :5' -CTTGCTTTAGC TGGTGGCATCAGGTTG-3'禾P引物CsGSTZ :5' -CCAAGGAGATGGATGGCCTCAGATTC—3' ;(2)實驗所 涉及的酶類、工程菌及載體Powerscript為BD Biosciences公司產(chǎn)品；pGEM-T載體為 Promega公司產(chǎn)品；高純度型d證Mixture (lOmM each) ， Taq Plus DNAPolymerase， TOP10 感受態(tài)細胞為天根生化科技(北京)有限公司(TIANGEN公司)產(chǎn)品；(3)實驗過程[l] 反轉錄進行cDNA第一鏈的合成在離心管中加入1. 5 ii L濃度為lg/L的RNA、1 ii L濃度為 10 ii mol/L的RACE-CDS、 1 y L濃度為10 y mol/L的SMART OLIG禾P 1 y L的水，混合后瞬時 離心5s (Eppendorf5415d型離心機)，在72°C的條件下保溫3min后立即放入冰中，再加入 2 ii L的5 X第一鏈合成Buf f er、 1 y L濃度為20 y mol/L的DTT、 1 y L濃度為10 y mol/L的 dNTP、1ii L的Powerscript reverse transcript enzyme禾口 0. 5 u L的RNase inhibitor, 在42°C的條件下保溫1. 5h，然后在45°C的條件下保溫15min，再用90 y L的水稀釋產(chǎn)物， 在72t:的條件下保溫7min后于-2(TC保存；[2]PCR的擴增20 y L的PCR反應體系由2 y L 的10XBuffer、2ii L的UPM(10X) 、0. 5 ii L濃度為10mmol/L的dNTP Mix、0. 5ii L的RACE cDNA、0. 3 ii L的Taq酶、2 ii L濃度為10 ii mol/L的引物CsGSTZ和余量的PCR-Grade Water組 成；PCR反應條件94t:預變性lmin ;進行38個循環(huán)94"變性30s，62"退火30s，72t:延 伸lmin ;最后72t:延伸5min ; [3]巢式PCR :20y L的PCR反應體系由2 y L的10XBuffer、 0. 5 ii L的濃度為10 ii mol/L的NUP、0. 5 ii L濃度為10mmol/L的dNTP Mix、0. 5 ii L的步驟 [2]的PCR產(chǎn)物、0. 3 ii L的Taq酶、2 ii L濃度為10 ii mol/L的巢式引物CsGSTZN和余量的 PCR-Grade Water組成；PCR反應條件94。C預變性lmin ;進行36個循環(huán)94。C變性30s， 6(TC退火30s， 72。C延伸lmin ;最后72。C延伸5min ; [4]將步驟[3]的巢式PCR產(chǎn)物在1 %的 瓊脂糖凝膠電泳檢測，切取特異條帶，純化回收后(試劑盒為promega產(chǎn)品)連接到pGEM-T 載體上，轉化T0P10感受態(tài)細胞(天根生化科技(北京)有限公司產(chǎn)品)，經(jīng)過Amp抗性及 藍白斑篩選，選取陽性克隆置于LB液體培養(yǎng)中培養(yǎng)，菌液PCR檢測確認，測序工作由上海生 物工程技術服務有限公司完成；即確定了黃瓜谷胱甘肽硫轉移酶基因CsGSTZ。
三.轉CsGSTZ基因酵母的表達驗證
采用反轉錄PCR法進行，具體實施方式
如下 (1)材料處理分別將轉入pYES2、 pYES2-CsGSTZ質(zhì)粒的酵母菌于SC-U(葡萄糖) 的培養(yǎng)基中3(TC培養(yǎng)，直到0D6。。達到0. 5，離心收集菌體，將菌體重懸于SC-U(半乳糖)培 養(yǎng)基中48h時收集菌體。
(2)酵母總RNA的提取 ①將上述收集的酵母菌在溫度為fC、轉速為1500g的條件下離心3min，用lml冰 冷的無菌水重懸； ②在溫度為4t:、轉速為1500g的條件下離心3min，棄上清，沉淀用300 iURNA buffer重懸； ③加入等體積的酸洗玻璃珠，以及300 iU酚氯仿異戊醇混合溶液，顛倒并上下震 蕩以保證珠子懸浮，再渦旋器上高速劇烈震蕩2min，其中，酚氯仿異戊醇混合溶液是由酚、 氯仿異和戊醇按照25 : 24 : l的體積比組成； ④在溫度為4。C、轉速為1500g的條件下離心3min，取200-500 iil水相，加入等體 積的酚氯仿異戊醇混合溶液，劇烈震蕩10s，其中，酚氯仿異戊醇混合溶液是由酚、氯仿異和戊醇按照25 : 24 : i的體積比組成；⑤重復[4]，加入3倍體積冰冷的無水乙醇，-20°〇放置30min ; ⑥在溫度為fC、轉速為1500g的條件下離心3min，棄上清，用冰冷的70%乙醇洗
兩次； ⑦在溫度為4t:、轉速為1500g的條件下離心3min，棄上清，干燥沉淀，用50iU DEPC水重懸，貯存于-70°C備用。
(3) RT-PCR分析檢測 利用上述總RNA，采用T0Y0B0公司反轉錄試劑盒ReverTra Ace進行反轉 錄。采用特異性引物5' -CTGGTGGCATCAGGTTGCTTTT-3'進行反轉錄，利用上游引物 5' -ACTTGTGCCCAACGTGTTCGAA-3'和下游引物5' -ACTTGTGCCCAACGTGTTCGAA-3'進行PCR。 PCR反應體系為20 ii L體系，其中含有1 ii LcDNA， 1 ii LTaq DNA聚合酶(2. 5U ii L—0 ， 2iiL10XPCR緩沖液，2iiLdNTP(2.5mmo1 L-l)，liiLPsCSasel-S(lOiimol L—工)弓|物， liiLPsCSasel-A(10iimo1 L—0引物(表1) ， 12 y L去離子水。擴增條件為94。C預變性 4min， 94。C變性30s， 57。C退火30s， 72。C延伸lmin， 30個循環(huán)。擴增結束后，取5 y LPCR產(chǎn) 物用1.2%瓊脂糖凝膠電泳檢測。電泳結果表明，出現(xiàn)了 600bp左右的特異目的條帶，而轉 空載體的酵母未出現(xiàn)任何電泳條帶，說明CsGSTZ轉化到酵母菌中能夠穩(wěn)定表達。如圖l所 示，圖1的中間條帶為轉空載體對照，左側條帶為DL2000Marker，右側條帶為轉基因酵母， 從圖中可以看出CsGSTZ轉化到酵母菌中能夠穩(wěn)定表達。
四.轉CsGSTZ基因酵母的抗鹽能力驗證 將本實施方式的黃瓜谷胱甘肽硫轉移酶基因CsGSTZ轉化到酵母菌中進行抗鹽能 力的驗證 (1)轉化黃瓜CsGSTZ基因酵母對Na^03和NaCl脅迫的耐受性[l]在正常條件下 培養(yǎng)轉化pYES2-CsGSTZ和pYES2空載體的酵母菌，接種到SC-U篩選培養(yǎng)液中，在30°C的 條件下以200r/min的速度振蕩培養(yǎng)24h，分布測0D6。。值，分別計算所需的菌液量，使20mL 的誘導培養(yǎng)基中，菌液的0D6。。值均為0. 4，在3(TC的條件下誘導表達30h ;[2]取誘導的 100 ii L酵母菌體，瞬時離心10s，棄上清，菌體分別重懸于lmL濃度為lmmol/L的Na2C03和 lmL濃度為5mmol/L的NaCl中，置于3(TC下脅迫，脅迫后，用無菌水重懸菌體，涂布于SC-U 培養(yǎng)基中(2%葡萄糖為碳源)，結果如圖2 7所示，從圖中看出在正常條件下(圖2所 示)，轉基因酵母和對照酵母的存活率都很高，而在濃度為lmmol/L Na2C03脅迫處理4h后 (圖3所示)，對照酵母的存活率稍低于轉基因酵母，在濃度為lmmol/L Na2C03脅迫處理12h 后(圖4所示)，對照酵母的存活率顯著低于轉基因酵母的存活率，另外通過濃度為5mmo1/ LNaCl脅迫4h后(圖5所示)，對照酵母的存活率和轉基因酵母無顯著差異，濃度為5mmo1/ LNaCl脅迫24h后(圖6所示)，對照酵母的存活率顯著低于轉基因酵母，在脅迫48h后(圖 7所示)對照酵母的存活率只有3個，而轉基因酵母依然有一部分存活，說明在半乳糖的誘 導下，CsGSTZ基因賦予了轉基因酵母菌株抗Na2C03和NaCl的能力。 (2)轉化黃瓜CsGSTZ基因的酵母對CuS04脅迫的耐受性[1]在正常條件下培養(yǎng) 轉化pYES2-CsGSTZ和pYES2空載體的酵母菌，接種到SC-U篩選培養(yǎng)液中，在30°C的條件 下以200r/min的速度振蕩培養(yǎng)24h，分布測0D6。。值，分別計算所需的菌液量，使20mL的誘 導培養(yǎng)基中，菌液的0D6。。值均為0. 4，在30°C的條件下誘導表達30h ; [2]取誘導的100 y L酵母菌體，瞬時離心10s，棄上清，菌體分別重懸于lmL濃度為lmmol/L的CuS04、 lmL濃度為3mmol/L的CuS04和lmL濃度為5mmol/L的CuS04中，置于3(TC下脅迫，脅迫后，用無菌水重懸菌體，涂布于SC-U培養(yǎng)基中(2%葡萄糖為碳源)；實驗結果如圖8所示，從圖8中看出，在濃度為lmmol/L的CuS04脅迫條件6h時，對照菌成活率稍低于轉基因酵母菌的存活率，在脅迫處理18h時，濃度為3mmol/L CuS04和5mmol/L CuS04脅迫處理下對照酵母菌落存活非常低，而轉基因酵母的存活率仍然很高，在脅迫出來48h時，3mmol/L CuS0j辦迫處理下對照酵母菌落存活為O，而轉基因酵母仍有存活，說明CsGSTZ基因表達的蛋白均具有耐受CuS04的能力。 (3)轉化黃瓜CsGSTZ基因的酵母對CdS04脅迫的耐受性[1]在正常條件下培養(yǎng)轉化pYES2-CsGSTZ和pYES2空載體的酵母菌，接種到SC-U篩選培養(yǎng)液中，在30°C的條件下以200r/min的速度振蕩培養(yǎng)24h，分布測0D6。。值，分別計算所需的菌液量，使20mL的誘導培養(yǎng)基中，菌液的0D6。。值均為0. 4，在30°C的條件下誘導表達30h ; [2]取誘導的100 y L酵母菌體，瞬時離心10s，棄上清，菌體分別重懸于lmL濃度為lmmol/L的CdS04、 lmL濃度為3mmol/L的CdS04和lmL濃度為5mmol/L的CdS04中，置于30。C下脅迫，脅迫后，用無菌水重懸菌體，涂布于SC-U培養(yǎng)基中(2%葡萄糖為碳源)；實驗結果如圖9所示，從圖9中看出，在濃度為lmmol/L的CdS04脅迫條件6h時，轉基因酵母菌生長和對照菌成活率無差異，在脅迫處理18h時，濃度為5mmol/LCdS0j辦迫處理下對照酵母菌存活率非常低，而轉基因酵母的存活率仍然很高，在脅迫出來48h時，濃度為lmmol/L CdS04和3mmol/L CdS04脅迫處理下對照酵母菌落存活為O，而轉基因酵母仍有存活，說明CsGSTZ基因表達的蛋白均具有耐受CdS04的能力。
具體實施方式
二 本實施方式黃瓜谷胱甘肽硫轉移酶基因CsGSTZ編碼的氨基酸序列包括218個氨基酸，黃瓜谷胱甘肽硫轉移酶基因CsGSTZ編碼的氨基酸序列為 序列表 〈110〉哈爾濱學院 〈120〉黃瓜谷胱甘肽硫轉移酶基因CsGSTZ及其編碼的氨基酸序列 〈160>7 〈210>1 〈211>710 〈212>DNA 〈213>葫戸科黃瓜屬(C腦rbitaceae C腦mis L ) 〈220〉 〈221>CDS 〈222>(23). . (679) 〈400〉 1 agacgtagac atcgtagtca cc atg gca gtg gac g朋g朋tct cca ttg朋g 52
Met Ala Val Asp Glu Glu Ser Pro Leu Lys
1 5 10 etc tac tea ttc tgg gec age act tgt gec caa cgt gtt cga att gec 100 Leu Tyr Ser Phe Trp Ala Ser Thr Cys Ala Gin Arg Val Arg lie Ala 15 20 25 etc aac eta aaa gga eta aac ttt cag tat aaa get gtt gat att ttg 148 Leu Asn Leu Lys Gly Leu Asn Phe Gin Tyr Lys Ala Val Asp lie Leu 30 35 40 aag gga gag cat ttg get cct gaa tat eta aag etc aat cct gtt ggt 196 Lys Gly Glu His Leu Ala Pro Glu Tyr Leu Lys Leu Asn Pro Val Gly 45 50 55 ttt gta cct act ctt gtg gat gga gat gtt gtt att get gac tct ttt 244 Phe Val Pro Thr Leu Val Asp Gly Asp Val Val lie Ala Asp Ser Phe
60 65 70 get ata ata atg tat ttg gag gaa aag tat cct gag cgt cct ttg ctg 292 Ala lie lie Met Tyr Leu Glu Glu Lys Tyr Pro Glu Arg Pro Leu Leu 75 80 85 90 cct act gat ctt gtt aaa agg get att aat cac cag gtt gca aat act 340 Pro Thr Asp Leu Val Lys Arg Ala lie Asn His Gin Val Ala Asn Thr 95 100 105 gtt tct tea age ata cag cct ctt caa aat tta att gtt gag aaa tac 388 Val Ser Ser Ser lie Gin Pro Leu Gin Asn Leu lie Val Glu Lys Tyr 110 115 120 att gag g朋3朋tgt ggt act gag gag 3朋ctt tct tgg gtt cac atg 436 lie Glu Glu Lys Cys Gly Thr Glu Glu Lys Leu Ser Trp Val His Met 125 130 135 ate att gga 3朋ggt ttt tta gca eta g朋朋g ttg eta sea gtt g朋484 lie lie Gly Lys Gly Phe Leu Ala Leu Glu Lys Leu Leu Thr Val Glu 140 145 150 get gga aat ttt get act gga gac caa att tat atg gca gac ttg ttt 532 Ala Gly Asn Phe Ala Thr Gly Asp Gin lie Tyr Met Ala Asp Leu Phe 155 160 165 170 ttg gca cct caa ctt cat egg gec att gaa aca ttc aat ctt gac atg 580 Leu Ala Pro Gin Leu His Arg Ala lie Glu Thr Phe Asn Leu Asp Met 175 180 185 aat caa ttc cct act ctg ttg agg gta tat aag get tac caa gag ctg 628 Asn Gin Phe Pro Thr Leu Leu Arg Val Tyr Lys Ala Tyr Gin Glu Leu 190 195 200 ccc get ttc cag gat get atg cca gaa aag caa cct gat gec acc age 676 Pro Ala Phe Gin Asp Ala Met Pro Glu Lys Gin Pro Asp Ala Thr Ser
205210215teaatcteagatt 3ctgateg朋cctecagatc〈210>2〈211>218〈212>PRT〈213>葫戸禾斗黃瓜屬(Cucurbitaceae Cucumis L )〈400>2MetAlaValAsp Glu Glu SerProLeuLysLeuTyrSerPheTrpAla151015SerThrCysAla Gin Arg ValArglieAlaLeuAsnLeuLysGlyLeu202530AsnPheGinTyr Lys Ala ValAsplieLeuLysGlyGluHisLeuAla354045ProGluTyrLeu Lys Leu AsnProValGlyPheValProThrLeuVal505560AspGlyAspVal Val lie AlaAspSerPheAlalielieMetTyrLeu65707580GluGluLysTyr Pro Glu ArgProLeuLeuProThrAspLeuValLys859095ArgAlalieAsn His Gin ValAlaAsnThrValSerSerSerlieGin100105110ProLeuGinAsn Leu lie ValGluLysTyrlieGluGluLysCysGly115120125ThrGluGluLys Leu Ser TrpValHisMetlielieGlyLysGlyPhe130135140LeuAlaLeuGlu Lys Leu LeuThrValGluAlaGlyAsnPheAlaThr145150155160GlyAspGinlie Tyr Met AlaAspLeuPheLeuAlaProGinLeuHis165170175ArgAlalieGlu Thr Phe AsnLeuAspMetAsnGinPheProThrLeu180185190LeuArgValTyr Lys Ala TyrGinGluLeuProAlaPheGinAspAla195200205MetProGluLys Gin Pro AspAlaThrSer210215〈210>3〈211>27〈212>DNA〈213〉人工序列9
〈220〉 〈223〉根據(jù)3'非翻譯區(qū)設計的巢式引物CsGSTZN。 〈400>3 cttgctttag ctggtggcat caggttg 27 〈210>4 〈211>26 〈212>DNA 〈213>人工序列 〈220〉 〈223〉根據(jù)3'非翻譯區(qū)設計的引物CsGSTZ。 〈400>4 ccaaggagat ggatggcctc agattc 26 〈210>5 〈211>22 〈212>DNA 〈213>人工序列 〈220〉 〈223>RT-PCR分析檢測特異性引物。 〈400>5 CTGGTGGCAT CAGGTTGCTT TT 22 〈210>6 〈211>22 〈212>DNA 〈213>人工序列 〈220〉 〈223>RT-PCR分析檢測PCR引物上游引物。 〈400>6 ACTTGTGCCC AACGTGTTCG AA 22 〈210>7 〈211>22 〈212>DNA 〈213>人工序列 〈220〉 〈223>RT-PCR分析檢測PCR引物下游引物。 〈400>7 ACTTGTGCCC AACGTGTTCG AA 2權利要求
黃瓜谷胱甘肽硫轉移酶基因CsGSTZ，其特征在于黃瓜谷胱甘肽硫轉移酶基因CsGSTZ的cDNA序列全長為710bp，編碼區(qū)cDNA序列長度為657bp，編碼218個氨基酸，5’非翻譯區(qū)為22bp，3’非翻譯區(qū)為31bp，其基因全長序列為AGACGTAGACATCGTAGTCACCATGGCAGTGGACGAAGAATCTCCATTGAAGCTCTACTCATTCTGGGCCAGCACTTGTGCCCAACGTGTTCGAATTGCCCTCAACCTAAAAGGACTAAACTTTCAGTATAAAGCTGTTGATATTTTGAAGGGAGAGCATTTGGCTCCTGAATATCTAAAGCTCAATCCTGTTGGTTTTGTACCTACTCTTGTGGATGGAGATGTTGTTATTGCTGACTCTTTTGCTATAATAATGTATTTGGAGGAAAAGTATCCTGAGCGTCCTTTGCTGCCTACTGATCTTGTTAAAAGGGCTATTAATCACCAGGTTGCAAATACTGTTTCTTCAAGCATACAGCCTCTTCAAAATTTAATTGTTGAGAAATACATTGAGGAAAAATGTGGTACTGAGGAGAAACTTTCTTGGGTTCACATGATCATTGGAAAAGGTTTTTTAGCACTAGAAAAGTTGCTAACAGTTGAAGCTGGAAATTTTGCTACTGGAGACCAAATTTATATGGCAGACTTGTTTTTGGCACCTCAACTTCATCGGGCCATTGAAACATTCAATCTTGACATGAATCAATTCCCTACTCTGTTGAGGGTATATAAGGCTTACCAAGAGCTGCCCGCTTTCCAGGATGCTATGCCAGAAAAGCAACCTGATGCCACCAGCTAAATCTAAGATTACTGATAGAACCTACAGATCA。
2.黃瓜谷胱甘肽硫轉移酶基因CsGSTZ編碼的氨基酸序列，其特征在于黃瓜谷胱甘肽 硫轉移酶基因CsGSTZ編碼的氨基酸序列包括218個氨基酸，黃瓜谷胱甘肽硫轉移酶基因 CsGSTZ編碼的氨基酸序列為MAVDEESPLKLYSFWASTCAQRVRIALNLKGLNFQYKAVDILKGEHLAPEYLKLNPVGFVPTLVDGDVVIADSFAnMYLEEKYPERPLLPTDLVKRAINHQVANTVSSSIQPLQNLIVEKYIEEKCGTEEKLSWVHMIIGKGFLALEKLLTVEAGNFATGDQIYMADLFLAPQLHRAIETFNLDMNQFPTLLRVYKAYQELPAFQDAMPEKQPDATS。
全文摘要
黃瓜谷胱甘肽硫轉移酶基因CsGSTZ及其編碼的氨基酸序列，它涉及了黃瓜谷胱甘肽硫轉移酶基因及其編碼的氨基酸序列。本發(fā)明解決了現(xiàn)有農(nóng)作物因基因的缺陷而抗鹽堿的能力差的問題。本發(fā)明黃瓜谷胱甘肽硫轉移酶基因CsGSTZ的cDNA序列全長為710bp，編碼區(qū)cDNA序列長度為657bp，編碼218個氨基酸，5′非翻譯區(qū)為22bp，3′非翻譯區(qū)為31bp，基因序列如SEQ ID No.1所示。本發(fā)明黃瓜谷胱甘肽硫轉移酶基因CsGSTZ的氨基酸序列如SEQ IDNo.2所示。本發(fā)明黃瓜谷胱甘肽硫轉移酶基因CsGSTZ所轉化的酵母菌具有抗鹽堿的能力。
文檔編號C12N15/54GK101724639SQ20091007309
公開日2010年6月9日 申請日期2009年10月26日 優(yōu)先權日2009年10月26日
發(fā)明者劉關君, 劉明坤, 孟令波, 曲春浦, 李淑敏, 秦智偉 申請人:哈爾濱學院