專利名稱：一種用于纖維素乙醇生產(chǎn)的微生物復合菌劑及其制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種微生物復合菌劑及其制作方法。
背景技術：
全球農(nóng)作物秸稈年產(chǎn)量超過20億噸，中國年產(chǎn)量達到7億噸左右，其中玉米秸稈產(chǎn)量約2.5億噸，這些玉米秸稈除了少部分用于動物飼料和農(nóng)村燃料，大部分都被直接燒掉，既浪費了資源，又嚴重污染了環(huán)境。而另一方面，隨著化石能源逐漸枯竭，能源危機正在加劇，乙醇被認為是最好的可再生液體能源。
現(xiàn)有的纖維素乙醇發(fā)酵工藝便是利用農(nóng)作物秸稈中的纖維素進行發(fā)酵，這種發(fā)酵工藝以可再生的纖維素資源為原料進行乙醇生產(chǎn)的研究，既緩解了能源危機，又減輕了環(huán)境污染，有利于可持續(xù)發(fā)展。
在纖維素乙醇發(fā)酵生產(chǎn)中，基于天然纖維素的特殊結(jié)構(gòu)，在酶解纖維素前，進行適當?shù)念A處理以打開木質(zhì)纖維素的分子結(jié)構(gòu)是必要的技術手段，其中，蒸汽爆破預處理是目前應用最廣泛的一種纖維素預處理方法，但是經(jīng)過此方法處理的玉米秸稈，在預處理過程中產(chǎn)生的甲酸、乙酸、蘋果酸和酚類化合物等副產(chǎn)物對纖維素酶解糖化和乙醇發(fā)酵都有強烈的抑制作用，因此有必要預先清除這些毒物或減小其毒性作用。目前，纖維素乙醇發(fā)酵生產(chǎn)中應用最為廣泛的解毒方法是水洗解毒法，雖然該方法在纖維素乙醇發(fā)酵生產(chǎn)中解毒效果好，但是水洗解毒的耗水量大，后續(xù)水處理的負擔重，造成纖維素乙醇發(fā)酵生產(chǎn)成本過高，且水洗解毒法在解毒的過程中還容易損失木質(zhì)纖維素中的木糖等營養(yǎng)成分，造成纖維素乙醇發(fā)酵生產(chǎn)得到的乙醇終產(chǎn)率低。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為了解決采用水洗解毒法造成纖維素乙醇發(fā)酵生產(chǎn)成本高的問題及水洗解毒法損失木質(zhì)纖維素中的營養(yǎng)成分導致乙醇終產(chǎn)率低的問題，而提供了一種用于纖維素乙醇生產(chǎn)的微生物復合菌劑及其制作方法。
本發(fā)明微生物復合菌劑主要由濃度為1()8個/mL的康寧木霉孢子懸浮液、濃度為10S個/mL的米曲霉孢子懸浮液和濃度為1()S個/mL的角毛殼菌孢子懸浮液按照l: 1: l的體積比制成。
本發(fā)明微生物復合菌劑的制作方法按照以下步驟進行 一、將濃度為108
個/mL的康寧木霉孢子懸浮液、濃度為1()S個/mL的米曲霉孢子懸浮液和濃度為10S個/mL的角毛殼菌孢子懸浮液按照l: 1: 1的體積比混合得到混合孢子液；二、在無菌的條件下，將步驟一的混合孢子液接入培養(yǎng)基中，在30 4(TC條件下靜止培養(yǎng)48 72h，即制作得到微生物復合菌劑，其中混合孢子液和培養(yǎng)基的體積比為2 3: 25。
利用本發(fā)明的微生物復合菌劑進行纖維素乙醇生產(chǎn)工藝，不需要水洗解毒，就可以進行纖維素乙醇的發(fā)酵，極大的降低了纖維素乙醇的生產(chǎn)成本，與現(xiàn)有的采用水洗解毒方法的纖維素乙醇生產(chǎn)工藝相比，利用本發(fā)明的微生物復合菌劑進行纖維素乙醇生產(chǎn)的用水量減少40%~50%，生產(chǎn)成本降低了5%~10%。利用本發(fā)明的微生物復合菌劑進行纖維素乙醇生產(chǎn)工藝中木質(zhì)纖維素原料中纖維素的乙醇濃度可以達到33g/L左右，纖維素乙醇轉(zhuǎn)化率可以達到85%以上，且不損失半纖維素的水解產(chǎn)物木糖，這些木糖也可以被進一步發(fā)酵成乙醇，利用本發(fā)明的微生物復合菌劑進行纖維素乙醇生產(chǎn)乙醇終產(chǎn)率高。


圖1為對比試驗中的第一組試驗發(fā)酵過程中糠醛、苯酚和羥甲基糠醛的濃度變化圖，其中a表示糠醛的濃度、b表示苯酚的濃度、c表示羥甲基糠醛的濃度；圖2為對比試驗中的第一組試驗發(fā)酵過程中甲酸、乙酸和蘋果酸的濃度變化圖，其中d表示甲酸的濃度、e表示乙酸的濃度、f表示蘋果酸的濃度；圖3為對比試驗中的第一組試驗和第二組試驗發(fā)酵過程中纖維素酶活性變化的對比圖，其中"0"表示第一組試驗的檢測結(jié)果，"圓"表示第二組試驗的撿測結(jié)果；圖4為對比試驗中的第一組試驗和第二組試驗發(fā)酵過程中葡萄糖濃度變化對比圖，其中"a"表示第一組試驗的檢測結(jié)果，"0"表示第二組試驗的檢測結(jié)果；圖5為對比試驗中第一組試驗和第二組實驗的發(fā)酵過程中乙醇濃度變化對比圖，其中"ra"表示第一組實驗的檢測結(jié)果"s"第二組實驗的檢測結(jié)果。
具—體實施方式
本發(fā)明技術方案不局限于以下所列舉具體實施方式
，還包括各具體實施方式
間的
任意組合。
具體實施方式
一本實施方式用于纖維素乙醇生產(chǎn)的微生物復合菌劑主要 由濃度為1()S個/mL的康寧木霉孢子懸浮液、濃度為1()S個/mL的米曲霉孢子 懸浮液和濃度為1()S個/mL的角毛殼菌孢子懸浮液按照1:1:1的體積比制成。
本實施方式中的康寧木霉孢子懸浮液的制作方法為將康寧木霉接種到馬 鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基斜面上，在28 32r條件下培養(yǎng)48~72h得到康寧木霉 孢子，然后用無菌水將馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基斜面上培養(yǎng)得到的康寧木霉孢 子洗下，并將無菌水與康寧木霉孢子均勻混合即得到康寧木霉孢子懸浮液，其 中所述的康寧木霉可從市場上購買得到。
本實施方式中的米曲霉孢子懸浮液的制作方法為將米曲霉接種到馬鈴薯 葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基斜面上，在28 32t:條件下培養(yǎng)48~72h得到米曲霉孢子， 然后用無菌水將馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基斜面上培養(yǎng)得到的米曲霉孢子洗下， 并將無菌水與米曲霉孢子均勻混合即得到米曲霉孢子懸浮液，其中所述的米曲 霉可從市場上購買得到。
本實施方式中的角毛殼菌孢子懸浮液的制作方法為將角毛殼菌接種到馬 鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基斜面上，在28 32匸條件下培養(yǎng)4S 72h得到角毛殼菌 孢子，然后用無菌水將馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基斜面上培養(yǎng)得到的角毛殼菌孢 子洗下，并將無菌水與米曲霉孢子均勻混合即得到角毛殼菌孢子懸浮液，其中 所述的將角毛殼菌可從市場上購買得到。
本實施方式的微生物復合菌劑分別與甲酸、乙酸、蘋果酸、羥甲基糠醛 (HMF)和酚類物質(zhì)進行反應，反應后的結(jié)果顯示對本發(fā)明的復合菌劑甲酸、 乙酸、蘋果酸、羥甲基糠醛(腿F)和酚類物質(zhì)的降解率分別為72.37Q/。 81.69Q/0、 50.61% 60.89%、 78.18% 89.12%、 98%~100%和70.08%~86.23%，從這些數(shù)據(jù) 可以看出，本發(fā)明的復合菌劑用于纖維素乙醇生產(chǎn)工藝中，對玉米秸稈預處理 過程中產(chǎn)生的甲酸、乙酸、蘋果酸和酚類化合物的去除效果好，本發(fā)明的在纖 維素乙醇生產(chǎn)工藝中的解毒效果好。
利用本實施方式的微生物復合菌劑進行纖維素乙醇生產(chǎn)工藝的步驟如下
一、將成熟的玉米秸稈切成4 6cm的小段，然后在220~240°C、 L6 1.8MPa 的條件下蒸汽爆破預處理，即得到汽爆秸稈；二、取100g汽爆秸稈和 250 350mL的蒸餾水混合得到混合物，然后置于12rC條件下，濕熱滅菌20min;冷卻后，無菌操作調(diào)節(jié)混合物的pH為5.0-5.5，然后向滅菌后的混合 物中加入10 13g的纖維素酶(天津佳益，CMC酶活為55.6IU/g)、 L0 1.5g 釀酒酵母(安琪酵母，產(chǎn)品編號84000024)和3.5~5g本實施方式的微生物 復合菌劑，充分攪勻，在溫度為39°C、轉(zhuǎn)速為200r/min條件下糖化發(fā)酵70~80h 得到發(fā)酵液，即完成了纖維素乙醇生產(chǎn)工藝；其中，發(fā)酵液中的乙醇濃度為 32~35g/L，在生產(chǎn)過程中纖維素乙醇的轉(zhuǎn)換率為81% 92%。
利用本實施方式的微生物復合菌劑進行纖維素乙醇生產(chǎn)工藝，不需要水洗 解毒，就可以進行纖維素乙醇的發(fā)酵，極大的降低了纖維素乙醇的生產(chǎn)成本， 與現(xiàn)有的使用水洗解毒方法的纖維素乙醇生產(chǎn)工藝相比，利用本實施方式的微 生物復合菌劑進行纖維素乙醇生產(chǎn)的總用水量減少40%~50%，生產(chǎn)成本降低 了 6%~10%。利用本實施方式的微生物復合菌劑進行纖維素乙醇生產(chǎn)工藝中木 質(zhì)纖維素原料中纖維素的乙醇濃度可以達到33g/L左右，纖維素乙醇轉(zhuǎn)化率可 以達到85%以上且不損失半纖維素的水解產(chǎn)物木糖，這些木糖也可以被發(fā)酵成 乙醇，利用本實施方式的微生物復合菌劑進行纖維素乙醇生產(chǎn)乙醇終產(chǎn)率高。
具體實施方式
二本實施方式與具體實施方式
一不同的是用于纖維素乙醇 生產(chǎn)的微生物復合菌劑還包括培養(yǎng)基，培養(yǎng)基按照重量份數(shù)由7 9份的麩皮、 11 13份的微晶纖維素和14 16份的無機鹽溶液組成。其他與具體實施方式
一 相同。
本實施方式培養(yǎng)基的制作方法為按照重量份數(shù)比將7~9份的麩皮、11~13
份的微晶纖維素和14 16份的無機鹽溶液混合，然后將混合物置于urc條件
下，滅菌20min,即得到培養(yǎng)基。
具體實施方式
三本實施方式與具體實施方式
二不同的是無機鹽溶液中 KH2P04的質(zhì)量濃度為0.7°/。、 (NH4)2S04的質(zhì)量濃度為3.3%、 K2HP04的質(zhì)量 濃度為0.7%和MgS04的質(zhì)量濃度為0.1%的水溶液，無機鹽溶液的pH值為 5 7。其他與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
四本實施方式用于纖維素乙醇生產(chǎn)的微生物復合菌劑的制 作方法按照以下步驟進行 一、將濃度為10S個/mL的康寧木霉孢子懸浮液、 濃度為10S個/mL的米曲霉孢子懸浮液和濃度為1()S個/mL的角毛殼菌孢子懸 浮液按照l: 1: 1的體積比混合得到混合孢子液；二、在無菌的條件下，將步
7驟一的混合孢子液接入培養(yǎng)基中，在30 4(TC條件下靜止培養(yǎng)48 72h，即制作 得到微生物復合菌劑，其中混合孢子液和培養(yǎng)基的體積比為2 3: 25。
具體實施方式
五本實施方式與具體實施方式
四不同的是步驟一中康寧木
霉孢子懸浮液的制作方法為將康寧木霉接種到馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基斜面
上，在28 32t:條件下培養(yǎng)4S 72h得到康寧木霉孢子，然后用無菌水將馬鈴 薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基斜面上培養(yǎng)得到的康寧木霉孢子洗下，并將無菌水與康寧 木霉孢子均勻混合即得到康寧木霉孢子懸浮液。其他步驟及參數(shù)與具體實施方 式四相同。
具體實施方式
六本實施方式與具體實施方式
四或五不同的是步驟一中米
曲霉孢子懸浮液的制作方法為將米曲霉接種到馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基斜面
上，在28 32。C條件下培養(yǎng)48 72h得到米曲霉孢子，然后用無菌水將馬鈴薯 葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基斜面上培養(yǎng)得到的米曲霉孢子洗下，并將無菌水與米曲霉孢 子均勻混合即得到米曲霉孢子懸浮液。其他步驟及參數(shù)與具體實施方式
四或五 相同。
具體實施方式
七本實施方式與具體實施方式
六不同的是步驟一中角毛殼 菌孢子懸浮液的制作方法為將角毛殼菌接種到馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基斜面
上，在2S 32。C條件下培養(yǎng)48 72h得到角毛殼菌孢子，然后用無菌水將馬鈴 薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基斜面上培養(yǎng)得到的角毛殼菌孢子洗下，并將無菌水與米曲 霉孢子均勻混合即得到角毛殼菌孢子懸浮液。其他步驟及參數(shù)與具體實施方式
六相同。
具體實施方式
八:本實施方式與具體實施方式
四、五或七不同的是步驟二 中的培養(yǎng)基按照重量份數(shù)由7-9份的麩皮、11~13份的微晶纖維素和14~16份 的無機鹽溶液組成。其他步驟及參數(shù)與具體實施方式
四、五或七相同。
本實施方式培養(yǎng)基的制作方法為按照重量份數(shù)比將7~9份的麩皮、11~13
份的微晶纖維素和14 16份的無機鹽溶液混合，然后將混合物置于12rc條件
下，滅菌20min，即得到培養(yǎng)基。
具體實施方式
九本實施方式與具體實施方式
八不同的是無機鹽溶液中 KH2P04的質(zhì)量濃度為0.7%、 (NH4)2S04的質(zhì)量濃度為3.3%、 K2HP04的質(zhì)量 濃度為0.7%和MgS04的質(zhì)量濃度為0.1%的水溶液，無機鹽溶液的pH值為5~7。其他步驟及參數(shù)與具體實施方式
八相同。
具體實施方式
十本實施方式與具體實施方式
八不同的是步驟二中在
40'C條件下靜止培養(yǎng)62h。其他步驟及參數(shù)與具體實施方式
八相同。
具體實施方式
十一本實施方式用于纖維素乙醇生產(chǎn)的微生物復合菌劑的 制作方法按照以下步驟進行 一、將濃度為1()S個/mL的康寧木霉孢子懸浮液、 濃度為1()8個/mL的米曲霉孢子懸浮液和濃度為1()S個/mL的角毛殼菌孢子懸
浮液按照l: 1: 1的體積比混合得到混合孢子液；二、在無菌的條件下，將步
驟一的混合孢子液接入培養(yǎng)基中，在35"C條件下靜止培養(yǎng)62h，即制作得到微 生物復合菌劑，其中混合孢子液和培養(yǎng)基的體積比為2.5: 25。
本實施方式步驟一中的康寧木霉孢子懸浮液的制作方法為將康寧木霉接 種到馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基斜面上，在28 32-C條件下培養(yǎng)48 72h得到康 寧木霉孢子，然后用無菌水將馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基斜面上培養(yǎng)得到的康寧 木霉孢子洗下，并將無菌水與康寧木霉孢子均勻混合即得到康寧木霉孢子懸浮 液。
本實施方式步驟一中的米曲霉孢子懸浮液的制作方法為將米曲霉接種到
馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基斜面上，在28 32。C條件下培養(yǎng)48~72h得到米曲霉 孢子，然后用無菌水將馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基斜面上培養(yǎng)得到的米曲霉孢子 洗下，并將無菌水與米曲霉孢子均勻混合即得到米曲霉孢子懸浮液。
本實施方式步驟一中的角毛殼菌孢子懸浮液的制作方法為將角毛殼菌接 種到馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基斜面上，在28 32-C條件下培養(yǎng)48~72h得到角 毛殼菌孢子，然后用無菌水將馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基斜面上培養(yǎng)得到的角毛 殼菌孢子洗下，并將無菌水與米曲霉孢子均勻混合即得到角毛殼菌孢子懸浮 液。
本實施方式步驟二中的培養(yǎng)基按照重量份數(shù)由7 9份的麩皮、11~13份的 微晶纖維素和14 16份的無機鹽溶液組成，其中的水溶液，無機鹽溶液中 KH2P04的質(zhì)量濃度為0.7%、 (NH4)2S04的質(zhì)量濃度為3.3%、 K2HP04的質(zhì)量 濃度為0.7°/。和MgS04的質(zhì)量濃度為0.1%的水溶液，無機鹽溶液的pH值為 5~7。
對比試驗第一組實驗是利用本實施方式制作得到的微生物復合菌劑進行纖維素乙
醇生產(chǎn)，具體步驟如下 一、將成熟的玉米秸稈切成4~6cm的小段，然后在 230°C、 1.7MPa的條件下蒸汽爆破預處理，即得到汽爆秸稈；二、取100g汽 爆秸稈和300mL的蒸餾水混合得到混合物，然后置于12rC條件下，濕熱滅 菌20min;冷卻后，無菌操作調(diào)節(jié)混合物的pH為5.0，然后向滅菌后的混合物 中加入15g的纖維素酶(天津佳益，CMC酶活為55.6IU/g)、 1.5g釀酒酵母(安 琪酵母，產(chǎn)品編號84000024)和4g本實施方式的微生物復合菌劑，充分攪 勻，在溫度為39。C、轉(zhuǎn)速為200r/min條件下糖化發(fā)酵72h得到發(fā)酵液，即完 成了纖維素乙醇生產(chǎn)工藝。
第二組實驗是采用水洗解毒方法進行纖維素乙醇生產(chǎn)的方法，具體步驟如 下 一、將成熟的玉米秸稈切成4 6cm的小段，然后在220 240°C， 1.7MPa 的條件下蒸汽爆破預處理，即得到汽爆秸稈，其中，汽爆秸稈的含水量約為 20%,干物纖維素含量為40%左右；二、取100g汽爆秸稈和300mL的蒸餾水 混合得到混合物，然后置于12rC條件下，濕熱滅菌20min;冷卻后，無菌操 作調(diào)節(jié)混合物的pH為5.0，然后向滅菌后的混合物中加入20g的纖維素酶(天 津佳益，CMC酶活為55.6IU/g)和2.0g釀酒酵母(安琪酵母，產(chǎn)品編號 84000024)，充分攪勻，在溫度為4(TC、轉(zhuǎn)速為200r/min條件下糖化發(fā)酵72h 得到發(fā)酵液，即完成了纖維素乙醇生產(chǎn)工藝。
第一組試驗的發(fā)酵過程中糠醛、苯酚、羥甲基糠醛、甲酸、乙酸和蘋果酸 的濃度變化如圖1和圖2所示；從圖1和圖2可以看出糠醛、苯酚、羥甲基糠 醛、甲酸、乙酸和蘋果酸的降解率分別達到了 76.23%、 74.08%、 100%、 75.37°/。、 53.61%、 80.18%。本實施方式制作得到的微生物復合菌劑對汽爆秸稈中產(chǎn)生 的抑制纖維素乙醇發(fā)酵的副產(chǎn)物有好的降解效果，本實施方式制作得到的微生 物復合菌劑有很好的解毒效果。 ，
第一組試驗和第二組試驗發(fā)酵過程中纖維素酶活性的變化對比圖如圖3 所示，從圖3可以看出，第一組試驗中纖維素酶的活性可以達到7.5~10.1 IU/mL，其中有2.0~3.0IU/mL左右的纖維素酶活是由本實施方式制作得到的微 生物復合菌劑提供的，而第二組試驗的纖維素酶活僅為2.1 2.3IU/mL;本實施 方式制作得到微生物復合菌劑不僅具有解毒的作用，還具有纖維素酶的活性。
10第一組試驗和第二紹^^襟過程中的葡萄糖濃度的變化對比圖如圖4 所示，從圖4可以看出第一組試驗的葡萄糖發(fā)酵率達到了92.9%，而第二組試 驗的葡萄糖發(fā)酵率僅能達到38.6%;利用本實施方式制作得到的微生物復合菌 劑的纖維素乙醇發(fā)酵中葡萄糖的轉(zhuǎn)化率高，有利于提高乙醇的產(chǎn)率。
第一組試驗和第二組實驗發(fā)酵過程中的乙醇濃度的變化對比圖如圖5所 示，從圖5可以看出，在發(fā)酵時間相同的情況下，第一組試驗的乙醇的最高濃 度可達到33g/L,而第二組實驗的乙醇最高濃度僅能達到了 16g/L，由此可知 利用本實施方式制作得到的微生物復合菌劑的纖維素乙醇工藝所得到的乙醇 終產(chǎn)率高，且利用本實施方式制作得到的微生物復合菌劑不需要使用水洗解 毒，也可以進行纖維素乙醇發(fā)酵，極大的降低了纖維素乙醇的生產(chǎn)成本。
權利要求
1、一種用于纖維素乙醇生產(chǎn)的微生物復合菌劑，其特征在于微生物復合菌劑主要由濃度為108個/mL的康寧木霉孢子懸浮液、濃度為108個/mL的米曲霉孢子懸浮液和濃度為108個/mL的角毛殼菌孢子懸浮液按照1∶1∶1的體積比制成。
2、 根據(jù)權利要求1所述的一種用于纖維素乙醇生產(chǎn)的微生物復合菌劑， 其特征在于微生物復合菌劑還包括培養(yǎng)基，培養(yǎng)基按照重量份數(shù)由7~9份的麩 皮、11 13份的微晶纖維素和14 16份的無機鹽溶液組成。
3、 根據(jù)權利要求2所述的一種用于纖維素乙醇生產(chǎn)的微生物復合菌劑， 其特征在于無機鹽溶液為KH2P04的質(zhì)量濃度為0.7%、 (NH4)2S04的質(zhì)量濃度 為3.3%、 K2HP04的質(zhì)量濃度為0.7%禾卩MgS04的質(zhì)量濃度為0.1%的水溶液， 無機鹽溶液的pH值為5 7。
4、 一種用于纖維素乙醇生產(chǎn)的微生物復合菌劑的制作方法，其特征在于 微生物復合菌劑的制作方法按照以下步驟進行 一、將濃度為1()S個/mL的康 寧木霉孢子懸浮液、濃度為1()8個/mL的米曲霉孢子懸浮液和濃度為1()S個/mL 的角毛殼菌孢子懸浮液按照l: 1: 1的體積比混合得到混合孢子液；二、在無 菌的條件下，將步驟一的混合孢子液接入培養(yǎng)基中，在30 40'C條件下靜止培 養(yǎng)4S 72h，即制作得到微生物復合菌劑，其中混合孢子液和培養(yǎng)基的體積比 為2 3: 25。
5、 根據(jù)權利要求4所述的一種用于纖維素乙醇生產(chǎn)的微生物復合菌劑的 制作方法，其特征在于步驟一中康寧木霉孢子懸浮液的制作方法為將康寧木 霉接種到馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基斜面上，在28 32。C條件下培養(yǎng)48~72h得 到康寧木霉孢子，然后用無菌水將馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基斜面上培養(yǎng)得到的 康寧木霉孢子洗下，并將無菌水與康寧木霉孢子均勻混合即得到康寧木霉孢子 懸浮液。
6、 根據(jù)權利要求4或5所述的一種用于纖維素乙醇生產(chǎn)的微生物復合菌 劑的制作方法，其特征在于步驟一中米曲霉孢子懸浮液的制作方法為將米曲 霉接種到馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基斜面上，在28 32。C條件下培養(yǎng)48~72h得 到米曲霉孢子，然后用無菌水將馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基斜面上培養(yǎng)得到的米曲霉孢子洗下，并將無菌水與米曲霉孢子均勻混合即得到米曲霉孢子懸浮液。
7、 根據(jù)權利要求6所述的一種用于纖維素乙醇生產(chǎn)的微生物復合菌劑的 制作方法，其特征在于步驟一中角毛殼菌孢子懸浮液的制作方法為將角毛殼 菌接種到馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基斜面上，在28 32。C條件下培養(yǎng)48~72h得 到角毛殼菌孢子，然后用無菌水將馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基斜面上培養(yǎng)得到的 角毛殼菌孢子洗下，并將無菌水與米曲霉孢子均勻混合即得到角毛殼菌孢子懸 浮液。
8、 根據(jù)權利要求4、 5或7所述的一種用于纖維素乙醇生產(chǎn)的微生物復合 菌劑的制作方法，其特征在于步驟二中的培養(yǎng)基按照重量份數(shù)由7~9份的麩 皮、11 13份的微晶纖維素和14 16份的無機鹽溶液組成。
9、 根據(jù)權利要求8所述的一種用于纖維素乙醇生產(chǎn)的微生物復合菌劑的 制作方法，其特征在于無機鹽溶液中KH2P04的質(zhì)量濃度為0.7%、 (NH4)2S04 的質(zhì)量濃度為3.3%、 K2HP04的質(zhì)量濃度為0.7%和MgS04的質(zhì)量濃度為0.1% 的水溶液，無機鹽溶液的pH值為5-7。
10、 根據(jù)權利要求8所述的一種用于纖維素乙醇生產(chǎn)的微生物復合菌劑的 制作方法，其特征在于步驟二中在4(TC條件下靜止培養(yǎng)62h。
全文摘要
一種用于纖維素乙醇生產(chǎn)的微生物復合菌劑及其制作方法，它涉及一種復合菌劑及其制作方法。本發(fā)明解決了采用水洗解毒法造成纖維素乙醇發(fā)酵生產(chǎn)成本高的問題及水洗解毒法損失木質(zhì)纖維素中的營養(yǎng)成分導致乙醇終產(chǎn)率低的問題。本發(fā)明微生物復合菌劑主要由康寧木霉孢子懸浮液、米曲霉孢子懸浮液和角毛殼菌孢子懸浮液制成。方法一、將康寧木霉孢子懸浮液、米曲霉孢子懸浮液和角毛殼菌孢子懸浮液混合；二、混合孢子液混合接入培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，即得到微生物復合菌劑。本發(fā)明的微生物復合菌劑用量少，降低了纖維素乙醇發(fā)酵生產(chǎn)成本，使用本發(fā)明的微生物復合菌劑所得到乙醇終產(chǎn)率高。
文檔編號C12N1/14GK101665770SQ20091007296
公開日2010年3月10日 申請日期2009年9月24日 優(yōu)先權日2009年9月24日
發(fā)明者于艷玲, 馮玉杰, 嘉 劉, 琛 徐, 李冬梅 申請人:哈爾濱工業(yè)大學