專(zhuān)利名稱(chēng)：化學(xué)酶法合成谷胱甘肽的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種谷胱甘肽的合成方法，特別是涉及一種利用γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶的化學(xué)酶法合成谷胱甘肽的方法。
背景技術(shù)：
還原型谷胱甘肽是一種具有重要生理功能的活性三肽，由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸經(jīng)肽鍵縮合而成，在醫(yī)藥、食品和保健品領(lǐng)域有廣泛的用途。如在醫(yī)學(xué)上可用于解毒保肝，治療白內(nèi)障等疾病，在食品方面可強(qiáng)化營(yíng)養(yǎng)、增強(qiáng)食品的風(fēng)味和防止食品的褐變等。
目前谷胱甘肽的生產(chǎn)方法主要有萃取法、化學(xué)合成法、發(fā)酵法和酶法。萃取法制備谷胱甘肽，其生產(chǎn)原料受到限制、生長(zhǎng)路線長(zhǎng)且產(chǎn)品純度不高；化學(xué)合成法制備谷胱甘肽合成路線比較長(zhǎng)，消旋體需拆分，易造成環(huán)境污染；而發(fā)酵法制備谷胱甘肽需要篩選優(yōu)良菌種，細(xì)胞中GSH含量不高，也存在產(chǎn)品從胞內(nèi)分離的問(wèn)題；酶法合成則需要經(jīng)過(guò)兩步酶反應(yīng)，每步酶反應(yīng)都要消耗能量ATP，必須要ATP再生系統(tǒng)。
近年來(lái)，隨著對(duì)谷胱甘肽研究的深入，谷胱甘肽在醫(yī)學(xué)、食品、保健等方面越來(lái)越引起人們的重視。谷胱甘肽的生產(chǎn)市場(chǎng)需求正迅速擴(kuò)大，抓緊開(kāi)發(fā)研制并投入生產(chǎn)已是現(xiàn)在谷胱甘肽的研究熱點(diǎn)。
專(zhuān)利號(hào)為ZL02151746.0名稱(chēng)為“利用枯草芽胞桿菌NX-2制備γ-聚谷氨酸及其鹽和谷胱甘肽及其前體”的專(zhuān)利公開(kāi)了一種化學(xué)酶法合成谷胱甘肽的方法，該方法利用從土壤篩選的枯草芽孢桿菌Bacillus subtillis NX-2(保藏號(hào)為CGMCC No.0833)發(fā)酵所產(chǎn)的γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶的催化作用，將谷氨?；D(zhuǎn)移到L-半胱氨酰L-甘氨酸或其前體制備谷胱甘肽或其前體，該法將化學(xué)合成與酶促合成有機(jī)結(jié)合，其主要優(yōu)點(diǎn)表現(xiàn)在反應(yīng)條件溫和，立體專(zhuān)一性強(qiáng)，谷氨酰胺不需側(cè)鏈保護(hù)，在酶反應(yīng)中不需要加ATP。
該專(zhuān)利公開(kāi)的利用枯草芽胞桿菌NX-2制備谷胱甘肽及其前體的方法，其步驟是a.菌株NX-2進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)，發(fā)酵產(chǎn)γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶，發(fā)酵液的酶活力達(dá)1-5U/L；b.以L-半胱氨酸和L-甘氨酸為主要原料合成L-半胱氨酰L-甘氨酸或基團(tuán)保護(hù)的前體，配成濃度為20-500mmol/L溶液，加入L-谷氨酸或L-谷氨酰胺，作為酶反應(yīng)底物；c.將a的發(fā)酵液；或者對(duì)γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶進(jìn)行分離純化，得到酶制劑，配成酶液；或者對(duì)γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶酶制劑進(jìn)行固定化；和b的酶反應(yīng)底物溶液混合，反應(yīng)生成谷胱甘肽及其前體。反應(yīng)體系中加入γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶的酶量50-1000mU/ml，酶反應(yīng)溫度20-50℃，pH6.0-11.0，酶反應(yīng)時(shí)間0.5-30小時(shí)。
但是該方法采用的底物為L(zhǎng)-半胱氨酰L-甘氨酸或基團(tuán)保護(hù)的前體及L-谷氨酸或L-谷氨酰胺，這些底物的水溶性不高，導(dǎo)致底物濃度太低，影響酶的利用，其采用的酶也是粗酶，在酶轉(zhuǎn)化反應(yīng)過(guò)程中，粗酶帶有的一些雜質(zhì)影響反應(yīng)，而引起副反應(yīng)的發(fā)生，使最終產(chǎn)品的純度不高，使用粗酶反應(yīng)，其轉(zhuǎn)化效率不高，會(huì)造成反應(yīng)底物的浪費(fèi)，而且一些雜質(zhì)會(huì)影響酶反應(yīng)產(chǎn)物的分離，從而影響收率；另外，用粗酶反應(yīng)，只所用的粗酶量比較大，則進(jìn)一步在反應(yīng)過(guò)程中增加了雜質(zhì)，限制了該方法的推廣使用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種轉(zhuǎn)化率高的利用γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶的化學(xué)酶法合成谷胱甘肽的方法。
本發(fā)明的目的是通過(guò)下列措施來(lái)實(shí)現(xiàn)的一種化學(xué)酶法合成谷胱甘肽的方法，包括a、利用化學(xué)法合成底物，b、培養(yǎng)Bacillussubtillis NX-2產(chǎn)生γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶，c、將γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶加入到底物溶液中，通過(guò)γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶的轉(zhuǎn)肽反應(yīng)制備谷胱甘肽，其中底物為S-芐基-半胱氨酰甘氨酸和L-谷氨酰胺。
其中底物S-芐基-半胱氨酰甘氨酸的甘氨酸的羧基不需要保護(hù)，以增加其水溶性，若甘氨酸的羧基用甲基或芐基保護(hù)后，降低了它們?cè)谒械娜芙?，使反?yīng)液中底物濃度較低，影響酶的利用率。另外，若甘氨酸的羧基用芐基保護(hù)，其芳香環(huán)會(huì)影響二肽底物與酶反應(yīng)中心的結(jié)合，產(chǎn)生酶反應(yīng)過(guò)程中的空間位阻效應(yīng)，從而導(dǎo)致酶反應(yīng)收率比較低。
該方法中采用的γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶為純酶，一個(gè)轉(zhuǎn)化反應(yīng)，50ml反應(yīng)體積只要加個(gè)1U的酶活力的酶液即可，比沒(méi)有純化的酶用量要少的多。
所述的合成谷胱甘肽的方法，其中γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶是通過(guò)下列步驟得到的a、常規(guī)方法培養(yǎng)Bacillus subtillis NX-2，發(fā)酵產(chǎn)生γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶；b、利用蛋白質(zhì)分離純系統(tǒng)KTATMexplorer 100蛋白純化儀(Amersham Pharmacia公司生產(chǎn))分離純化γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶以100％冷丙酮(-20℃)冰水浴中加入發(fā)酵液上清液，離心，沉淀物用原上清液30％體積的Tris-HCl(pH8.0，0.05mol/L)重新溶解；以60-90％飽和度的硫酸銨梯度做蛋白質(zhì)梯度沉降，分離出的蛋白用等體積Tris-HCl(pH8.0，0.05mol/L)復(fù)溶；以pH8.0，0.05mol/L Tris-HCl+1.0mol/L硫酸銨為上樣緩沖，pH8.0，0.05mol/L Tris-HCl為洗脫液，進(jìn)行疏水層析分離，收集30％洗脫液濃度處的洗脫峰；10萬(wàn)分子量的透析袋透析過(guò)夜，PEG20000濃縮；以pH8.0，0.05mol/LTris-HCl為上樣緩沖，pH8.0，0.05mol/LTris-HCl+0.5mol/LNaCl為洗脫液，進(jìn)行DEAE離子交換層析，收集20-80％洗脫液(30min)梯度洗脫處第一個(gè)洗脫峰即得到純的γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(電泳純)。該純化方法是利用儀器，對(duì)本領(lǐng)域普通技術(shù)人員而言，屬于一般的分離純化過(guò)程，依照該系統(tǒng)的使用手冊(cè)即可進(jìn)行操作。
所述的合成谷胱甘肽的方法，其中利用γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶反應(yīng)制備谷胱甘肽時(shí)反應(yīng)在水溶液中進(jìn)行，且反應(yīng)pH必須控制在堿性9-11。
以下具體介紹本發(fā)明的方法產(chǎn)酶微生物枯草牙孢桿菌Bacillus subtillis NX-2(保藏號(hào)為CGMCC No.0833)的培養(yǎng)以單糖或雙糖作為碳源，如葡萄糖、蔗糖或麥芽糖；氮源以有機(jī)氮源為佳，效果最好的是玉米漿和酵母膏。該菌是好氧培養(yǎng)菌，在pH5-9、溫度25-40℃的通氣條件下，生長(zhǎng)良好。
在發(fā)酵時(shí)使用液體培養(yǎng)，一般發(fā)酵周期在20-30小時(shí)，發(fā)酵結(jié)束后，發(fā)酵液離心收集上清液，再KTATMexplorer 100蛋白純化儀分離純化得到γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶用作合成催化劑。
酶反應(yīng)的前體底物S-芐基-半胱氨酰甘氨酸是通過(guò)化學(xué)合成得到的。先將半胱氨酸的側(cè)鏈巰基用芐基保護(hù)，再將其氨基用芐氧羰基保護(hù)，得到N-芐氧羰基-S-芐基-半胱氨酸，再與甘氨酸甲酯縮合得到N-芐氧羰基-S-芐基-半胱氨酰甘氨酸甲酯，將它脫保護(hù)得到S-芐基-半胱氨酰甘氨酸?；瘜W(xué)法合成S-芐基-半胱氨酰甘氨酸的方法為本領(lǐng)域技術(shù)人員公知方法。S-芐基-半胱氨酰甘氨酸的羧基無(wú)需保護(hù)，可以增加其水溶性，如果底物濃度太低，影響酶的利用；且減少保護(hù)基團(tuán)可促進(jìn)底物與酶活性中心的結(jié)合從而增強(qiáng)反應(yīng)過(guò)程，有利于底物的轉(zhuǎn)化成產(chǎn)物。
利用γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶反應(yīng)制備谷胱甘肽時(shí)反應(yīng)在水溶液中進(jìn)行，S-芐基半胱氨酰甘氨酸的起始濃度為1.2-2.0％，谷氨酰胺起始濃度為1.5-2.0％；pH9-11；反應(yīng)溫度35-40℃；反應(yīng)時(shí)間為10-16小時(shí)。反應(yīng)底物起始濃度高，有利于酶反應(yīng)，但如果太高的話，有可能抑制酶反應(yīng)。
反應(yīng)結(jié)束后，反應(yīng)液經(jīng)過(guò)微濾除去酶，再用高效液相色譜系統(tǒng)分離純化(色譜分離條件色譜柱為麥科菲柱(反相柱)，檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm，流動(dòng)相為A0.2％三氟乙酸，B甲醇，梯度洗脫5％B～30％B；流速8mL/min)，得到中間產(chǎn)物S-芐基-谷胱甘肽。S-芐基-谷胱甘肽，在液氨的條件下脫芐基(該脫保護(hù)基的方法是常規(guī)的化學(xué)方法，教課書(shū)里都有)，即可得到產(chǎn)品谷胱甘肽。反應(yīng)方程式如下 本發(fā)明的有益效果1、本發(fā)明采用S-芐基半胱氨酰甘氨酸為反應(yīng)底物之一，S-芐基半胱氨酰甘氨酸的羧基無(wú)需保護(hù)，以增加其水溶性，同時(shí)減少保護(hù)基團(tuán)可促進(jìn)底物與酶活性中心的結(jié)合從而增強(qiáng)反應(yīng)過(guò)程，有利于底物轉(zhuǎn)化成產(chǎn)物，提高轉(zhuǎn)化率(專(zhuān)利ZL02151746.0介紹的工藝其轉(zhuǎn)化率只有30％)。
2、本發(fā)明采用的γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶是通過(guò)分離純化得到的精制酶，反應(yīng)在堿性的水溶液中進(jìn)行，可提高酶的效率，促進(jìn)反應(yīng)轉(zhuǎn)化，提高轉(zhuǎn)化率。本申請(qǐng)方法簡(jiǎn)單，成本低，谷胱甘肽轉(zhuǎn)化率高(詳見(jiàn)實(shí)施例轉(zhuǎn)化效果)，可用于工業(yè)生產(chǎn)。
具體實(shí)施例方式
以下通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的闡述。
實(shí)施例1取蔗糖20g，玉米漿30g，蛋白胨10g，K2HPO415g，MgSO40.5g，pH7.5加自來(lái)水配制成1000mL液體培養(yǎng)基，按此配方配制3.5L裝入5L發(fā)酵罐中0.1MPa高壓蒸汽滅菌25分鐘備用。同時(shí)分裝50mL培養(yǎng)基到500mL，加8層紗布，用牛皮紙包好后，與發(fā)酵罐一起滅菌備用。
將冰箱內(nèi)保存的菌種——枯草芽孢桿菌Bacillus subtillis NX-2(保藏號(hào)為CGMCCNo.0833)取出后，接在新鮮斜面培養(yǎng)基(斜面培養(yǎng)基(g/L)蛋白胨10，牛肉膏3，NaCl5，瓊脂20)上，活化培養(yǎng)24小時(shí)，接入種子培養(yǎng)基(種子培養(yǎng)基(g/L)葡萄糖20，玉米漿10，蛋白胨5，K2HPO42，MgSO4 0.25)在32.5℃、220rpm振蕩培養(yǎng)20小時(shí)。培養(yǎng)結(jié)束接入發(fā)酵罐，于32.5℃、200rpm，補(bǔ)料添加四新有機(jī)硅發(fā)酵消泡劑(X-100F)，發(fā)酵培養(yǎng)40小時(shí)。
發(fā)酵結(jié)束后，8000轉(zhuǎn)/分離心機(jī)離心25分鐘，收集上清液。以100％(體積比)冷丙酮(-20℃)冰水浴中加入發(fā)酵液上清液，離心，沉淀物用原上清液30％體積的Tris-HCl(pH8.0，0.05mol/L)重新溶解；然后以60-90％飽和度的硫酸銨梯度做蛋白質(zhì)梯度沉降，分離出的蛋白用等體積Tris-HCl(pH8.0，0.05mol/L)復(fù)溶，用疏水層析分離，收集30％洗脫液(pH8.0，0.05mol/L Tris-HCl)濃度處的洗脫峰后，再用DEAE離子交換層析，收率20-80％洗脫液(pH8.0，0.05mol/L Tris-HCl，0.5mol/L NaCl)(約30min)梯度洗脫處第一個(gè)洗脫峰得到純的(電泳純)γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶。(疏水層析及DEAE離子交換層析的方法為本領(lǐng)域普通技術(shù)人員公知的技術(shù))。
取15.7g(0.1mol)L-半胱氨酸鹽酸鹽溶解，冷卻至0～5℃后，通過(guò)恒流泵流加165ml氯化芐的乙醇溶液(氯化芐∶乙醇＝1∶9(v/v))，控制反應(yīng)溫度在5℃左右。流加結(jié)束后，室溫繼續(xù)反應(yīng)約2h，然后調(diào)節(jié)反應(yīng)液至pH值5.50，過(guò)濾、洗滌、干燥，得到結(jié)晶——S-芐基-半胱氨酸，產(chǎn)品19.2g，純度約98.2％，熔點(diǎn)為210～211℃。
取S-芐基-半胱氨酸10.5g(約0.05mol)，用200mL 2mol/L NaOH進(jìn)行溶解，將溶液置于500mL三口燒瓶中，利用滴液漏斗向其中緩慢滴加9.8mL氯甲酸芐酯，電動(dòng)攪拌器充分?jǐn)嚢韬筮M(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)溫度控制在0℃，反應(yīng)時(shí)間5h。反應(yīng)結(jié)束后用乙醚洗滌后，乙酸乙酯萃取得酯層，并用水洗至中性，無(wú)水硫酸鈉干燥后濃縮，石油醚結(jié)晶——S-芐基-N-芐氧羰基半胱氨酸，產(chǎn)品15.5g，收率為88％，純度達(dá)95％。同法制備S-芐基N-芐氧羰基半胱氨酸備用。
取17.4g S-芐基N-芐氧羰基半胱氨酸溶解于100mL二氯甲烷；6.27g甘氨酸甲酯溶于100mL二氯甲烷中，再加入20mL四氫呋喃和7mL三乙胺，將兩溶液混勻后置于500mL三口燒瓶中預(yù)冷至0℃，再將10.5g DCC(環(huán)二己基碳二亞酰胺)的50mL冰冷四氫呋喃溶液滴加到反應(yīng)液中，0℃攪拌反應(yīng)，再室溫反應(yīng)5h。濾去沉淀物，濾液濃縮至干，再用乙酸乙酯溶解，依次用NaHCO3、2N檸檬酸、NaHCO3和水洗滌，加無(wú)水硫酸鈉干燥后減壓濃縮有固體析出時(shí)加入石油醚研磨得白色結(jié)晶——S-芐基-N-芐氧羰基-半胱氨酰甘氨酸甲酯，產(chǎn)品18.5g，收率為89％，純度為97％。
取10g S-芐基-N-芐氧羰基-半胱氨酰甘氨酸甲酯置于500mL圓底燒瓶中(瓶口接有氯化鈣干燥管)，加入40mL 39.5％的溴化氫的醋酸溶液于室溫下振搖，2h后減壓抽去部分溴化氫和冰醋酸，得到油狀物。加入大量乙醚研磨，傾去乙醚后，抽干成粉狀物，放置于真空干燥器中進(jìn)行干燥。。將所得到的固體溶于200mL水中，過(guò)濾除去少量不溶物，濾液用乙醚洗兩次以除去殘余的溴化芐，分出水層，用乙酸乙酯抽提，再5％NaCl水洗至中性，無(wú)水硫酸鈉干燥減壓濃縮得結(jié)晶S-芐基-半胱氨酰甘氨酸二肽6.8g，收率為91％，純度為98％。
取0.134g S-芐基-半胱氨酰甘氨酸二肽溶解于50mL三角瓶中，L-谷氨酰胺0.074g，去離子水10mL，用5mol/L NaOH調(diào)節(jié)pH至10.0，再加1.0U的γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶，混合均勻后，攪拌反應(yīng)10h，反應(yīng)溫度為39℃。反應(yīng)結(jié)束后，反應(yīng)液經(jīng)過(guò)微濾除去酶，硅膠薄層制備色譜，流動(dòng)相為正丁醇-冰醋酸-水(4∶1∶1，v/v/v)，得S-芐基-谷胱甘肽0.1g，收率為50％，純度為95％。同法制備S-芐基-谷胱甘肽備用。
再將所得的S-芐基-谷胱甘肽脫掉芐基就可得到還原型谷胱甘肽。取1.9gS-芐基-谷胱甘肽置于新配成的Na/液氨溶液(濃度約15％(m/v))中，輕微振蕩至溶液不再變色，然后室溫讓氨自然揮發(fā)干，再冷凍減壓抽干，則可得到粉狀的谷胱甘肽1.4g，收率90％，純度97％。對(duì)S-芐基-半胱氨酰甘氨酸的轉(zhuǎn)化度為45％。
實(shí)施例2γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶制備及純化方法、底物S-芐基-半胱氨酰甘氨酸二肽的制備方法均同實(shí)施例1。
取0.134g S-芐基-半胱氨酰甘氨酸二肽溶解于50mL三角瓶中，L-谷氨酰胺0.09g，去離子水10mL，用5mol/L NaOH調(diào)節(jié)pH至11.0，再加1.0U的γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶，混合均勻后，攪拌反應(yīng)10h，反應(yīng)溫度為39℃。反應(yīng)結(jié)束后，反應(yīng)液經(jīng)過(guò)微濾除去酶，硅膠薄層制備色譜，流動(dòng)相為正丁醇-冰醋酸-水(4∶1∶1，v/v/v)，得S-芐基-谷胱甘肽0.095g，收率為48％，純度為95％。同法制備S-芐基-谷胱甘肽備用。
將2.0gS-芐基-谷胱甘肽置于新配成的Na/液氨溶液中，輕微振蕩至溶液不再變色，然后室溫讓氨自然揮發(fā)干，再冷凍減壓抽干，則可得到粉狀的谷胱甘肽1.35g，收率88％，純度96％。對(duì)S-芐基-半胱氨酰甘氨酸的轉(zhuǎn)化度為43％。
實(shí)施例3γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶制備及純化方法、底物S-芐基-半胱氨酰甘氨酸二肽的制備方法均同實(shí)施例1。
取0.2g S-芐基-半胱氨酰甘氨酸二肽溶解于50mL三角瓶中，L-谷氨酰胺0.08g，去離子水10mL，用5mol/L NaOH調(diào)節(jié)pH至10.5，再加1.0U的γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶，混合均勻后，攪拌反應(yīng)10h，反應(yīng)溫度為38℃。反應(yīng)結(jié)束后，反應(yīng)液經(jīng)過(guò)微濾除去酶，硅膠薄層制備色譜，流動(dòng)相為正丁醇-冰醋酸-水(4∶1∶1，v/v/v)，得S-芐基-谷胱甘肽0.16g，收率為55％，純度為96％。同法制備S-芐基-谷胱甘肽備用。
將2.5gS-芐基-谷胱甘肽置于新配成的Na/液氨溶液中，輕微振蕩至溶液不再變色，然后室溫讓氨自然揮發(fā)干，再冷凍減壓抽干，則可得到粉狀的谷胱甘肽1.77g，收率92％，純度98％。對(duì)S-芐基-半胱氨酰甘氨酸的轉(zhuǎn)化度為50％。
權(quán)利要求
1.一種化學(xué)酶法合成谷胱甘肽的方法，包括a、利用化學(xué)法合成底物，b、制備γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶，c、將γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶加入到底物溶液中，通過(guò)γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶的轉(zhuǎn)肽反應(yīng)制備谷胱甘肽，其特征在于底物為S-芐基-半胱氨酰甘氨酸和L-谷氨酰胺。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于制備的γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶為純的γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的合成谷胱甘肽的方法，其特征在于γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶是通過(guò)下列步驟得到的a、常規(guī)方法培養(yǎng)Bacillus subtillis NX-2，發(fā)酵產(chǎn)γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶；b、利用蛋白質(zhì)分離純系統(tǒng)KTATM explorer 100制備純的γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的合成谷胱甘肽的方法，其特征在于利用γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶反應(yīng)制備谷胱甘肽時(shí)反應(yīng)在水溶液中進(jìn)行，且反應(yīng)pH必須控制在堿性9-11。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的合成谷胱甘肽的方法，其特征在于利用γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶反應(yīng)制備谷胱甘肽時(shí)S-芐基半胱氨酰甘氨酸的起始濃度為1.2-2.0％，谷氨酰胺起始濃度為1.5-2.0％；反應(yīng)溫度35-40℃；反應(yīng)時(shí)間為10-16小時(shí)。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種化學(xué)酶法合成谷胱甘肽的方法。該方法包括a.利用化學(xué)法合成底物；b.制備γ－谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶；c.將γ－谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶加入到底物溶液中，通過(guò)γ－谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶的轉(zhuǎn)肽反應(yīng)制備谷胱甘肽步驟，其中底物為S－芐基－半胱氨酰甘氨酸和L－谷氨酰胺。本方法簡(jiǎn)單，成本低，谷胱甘肽轉(zhuǎn)化率高，可用于工業(yè)生產(chǎn)。
文檔編號(hào)C12N9/10GK1772916SQ20051009493
公開(kāi)日2006年5月17日 申請(qǐng)日期2005年10月21日 優(yōu)先權(quán)日2005年10月21日
發(fā)明者范偉平, 歐陽(yáng)平凱, 荀志金, 徐虹 申請(qǐng)人:南京工業(yè)大學(xué)