專利名稱：從魚中提取小分子膠原蛋白寡肽的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種膠原蛋白寡肽的提取方法，具體是指一種采用酶解方式從魚中提 取小分子膠原蛋白寡肽的方法。
背景技術(shù)：
膠原(Collagen)蛋白是一種重要的功能性蛋白質(zhì)，它與細(xì)胞增生、分化、運(yùn)動、免 疫、關(guān)節(jié)潤滑、傷口愈合等密切相關(guān)。由于膠原蛋白的特殊功能，其提取物已被廣泛應(yīng)用于 醫(yī)藥、食品、日用化工、生物合成等工業(yè)領(lǐng)域，如醫(yī)用膠囊、外科手術(shù)材料、食用明膠、照相明 膠、化妝品等。目前生產(chǎn)的膠原蛋白制品的原料主要來源是從豬、牛等陸生哺乳動物的皮、 骨和肌腱，因近年來隨著全球生態(tài)環(huán)境惡化導(dǎo)致許多瘋牛病、口蹄疫等流行病的發(fā)生，使得 從陸生動物皮、骨中提取膠原蛋白的危險性增大。歐美、日本等國家相繼出臺了不少法規(guī)， 限制從牛等哺乳動物皮骨中提取物用于食品醫(yī)藥等對人體直接影響的產(chǎn)品中。由此，人們 便開始尋求從水產(chǎn)動物中提取膠原蛋白，因而，從水生動物魚體廢棄物中提取安全、衛(wèi)生、 無害的膠原蛋白已成為當(dāng)前國內(nèi)外業(yè)內(nèi)人士研發(fā)的一個熱門課題。經(jīng)業(yè)內(nèi)人士研究分析，膠原蛋白含量占魚體總蛋白的25-30 %，主要分布于魚鱗和 魚皮中，且魚鱗、魚皮中的粗膠原蛋白就約占80%，而一般水產(chǎn)加工中都將魚鱗、魚皮作為 廢棄物扔掉的，尤其是魚鱗。因此，充分而合理地利用廢棄物魚鱗提取膠原蛋白不僅可推動 水產(chǎn)加工業(yè)的發(fā)展，而且能化廢為寶、減少環(huán)境污染，更好地造福于人類。我國是世界上最 大的淡水魚養(yǎng)殖國，據(jù)不完全統(tǒng)計，每年廢棄魚鱗約達(dá)5萬噸，魚鱗資源相當(dāng)豐富，目前國 內(nèi)已有多家魚鱗收購公司，將魚鱗曬干作為一種資源出口。國外如日本也十分看好中國魚 鱗資源，并將在中國籌建生產(chǎn)基地共同開發(fā)魚鱗膠原蛋白產(chǎn)品。目前，采用酶解方式從魚鱗中提取小分子膠原蛋白寡肽的加工方法，有些加工企 業(yè)沒有在酶解前，進(jìn)行脫脂處理，故其酶解的時間很長，從而影響了生產(chǎn)效率；為了彌補(bǔ)上 述不足，還有些企業(yè)采用了酶解前脫脂的方案，但由于采用鹽水或醇溶液進(jìn)行脫脂處理，該 方案脫脂很不徹底，沒有達(dá)到其預(yù)期的效果。上述企業(yè)還普遍存在所生產(chǎn)出來的膠原蛋白 分子量較大，不利于人體的吸收。

發(fā)明內(nèi)容
為了克服上述之不足，本發(fā)明的目的在于提供一種脫脂效果好、生產(chǎn)效率高的從 魚中提取小分子膠原蛋白寡肽的方法。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是從魚中提取小分子膠原蛋白 寡肽的方法，它包括以下步驟1、脂肪酶脫脂將洗凈晾干的魚鱗或魚皮投入到提取罐，按其重量的3-15倍加水?dāng)嚢杈鶆颍呆~ 鱗或魚皮重量的0.01% -1%加入脂肪酶，進(jìn)行酶解；2、清洗
放掉提取罐中的酶解液后，向提取罐內(nèi)加水沖洗魚鱗或魚皮3-5遍；3、調(diào)整 PH 值:向提取罐內(nèi)加入水，加水量為魚鱗或魚皮重量的3-15倍，升溫至42V -68°C，用濃 度為3% -17%的NaOH及HCL將提取罐內(nèi)液體的pH值調(diào)節(jié)為6. 8-9. 9 ；4、加入蛋白酶進(jìn)行酶解再降溫至38°C _68°C，按魚鱗或魚皮重量的-4%加入蛋白酶進(jìn)行酶解，酶解時 間為1-6小時；5、滅酶酶解完畢后將酶解液升溫至70°C -95°C，保持30分鐘左右，滅酶后，降溫至65°C調(diào) 節(jié) pH 為 6. 5-8. 5 ；6、過濾、濃縮、干燥得到小分子膠原蛋白寡肽。上述方法中所用的脂肪酶即三?；视王；饷?，它催化天然底物油脂水解， 生成脂肪酸、甘油和甘油單酯或二酯，脂肪酶基本組成單位僅為氨基酸，通常只有一條多肽 鏈；蛋白酶采用胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、酸性蛋白酶、堿性蛋白酶、菠 蘿蛋白酶、復(fù)合蛋白酶中的一種或者幾種。本發(fā)明的有益效果在于由于采用脂肪酶對魚鱗或魚皮進(jìn)行脫脂處理，故提高了 脫脂效果，從而不僅大大縮短了蛋白酶的酶解時間，提高了生產(chǎn)效率，而且加工出來的膠原 蛋白分子量更小，有利于人體的吸收。
具體實(shí)施例實(shí)施例1從魚中提取小分子膠原蛋白寡肽的方法，它包括以下步驟1、脂肪酶脫脂將洗凈晾干的魚鱗或魚皮投入到提取罐，按其重量的3倍加水?dāng)嚢杈鶆?，加?0.01%的脂肪酶進(jìn)行酶解；2、清洗放掉提取罐中的酶解液后，向提取罐內(nèi)加水沖洗魚鱗或魚皮3遍；3、調(diào)整 PH 值向提取罐內(nèi)加入水，加水量為魚鱗或魚皮重量的3倍，升溫至42°C，用濃度為3% 的NaOH及HCL將提取罐內(nèi)液體的pH值調(diào)節(jié)為6. 8 ；4、加入蛋白酶進(jìn)行酶解再降溫至38°C，按魚鱗或魚皮重量的加入蛋白酶進(jìn)行酶解，酶解時間為6小 時；5、滅酶酶解完畢后將酶解液升溫至70°C，保持30分鐘左右，滅酶后，降溫至65°C調(diào)節(jié)pH 為 6.5 ；6、過濾、濃縮、干燥得到小分子膠原蛋白寡肽。脂肪酶即三?；视王；饷?，它催化天然底物油脂水解，生成脂肪酸、甘油和 甘油單酯或二酯，脂肪酶基本組成單位僅為氨基酸，通常只有一條多肽鏈；蛋白酶采用胃蛋
4白酶。實(shí)施例2從魚中提取小分子膠原蛋白寡肽的方法，它包括以下步驟1、脂肪酶脫脂將洗凈晾干的魚鱗或魚皮投入到提取罐，按其重量的9倍加水?dāng)嚢杈鶆?，按魚鱗 或魚皮重量的0. 05%加入脂肪酶，進(jìn)行酶解；2、清洗放掉提取罐中的酶解液后，向提取罐內(nèi)加水沖洗魚鱗或魚皮4遍；3、調(diào)整 PH 值向提取罐內(nèi)加入水，加水量為魚鱗或魚皮重量的3-15倍，升溫至42V -68°C，用濃 度為10%的NaOH及HCL將提取罐內(nèi)液體的pH值調(diào)節(jié)為8 ；4、加入蛋白酶進(jìn)行酶解再降溫至53°C，按魚鱗或魚皮重量的2. 5%加入蛋白酶進(jìn)行酶解，酶解時間為4小 時；5、滅酶酶解完畢后將酶解液升溫至82V，保持30分鐘左右，滅酶后，降溫至65°C調(diào)節(jié)pH 為 7.5 ；6、過濾、濃縮、干燥得到小分子膠原蛋白寡肽。上述方法中，蛋白酶采用胰蛋白酶。實(shí)施例3從魚中提取小分子膠原蛋白寡肽的方法，它包括以下步驟2、脂肪酶脫脂將洗凈晾干的魚鱗或魚皮投入到提取罐，按其重量的15倍加水?dāng)嚢杈鶆?，按魚鱗 或魚皮重量的加入脂肪酶，進(jìn)行酶解；2、清洗放掉提取罐中的酶解液后，向提取罐內(nèi)加水沖洗魚鱗或魚皮5遍；3、調(diào)整 PH 值向提取罐內(nèi)加入水，加水量為魚鱗或魚皮重量的15倍，升溫至68°C，用濃度為 17%的NaOH及HCL將提取罐內(nèi)液體的pH值調(diào)節(jié)為9. 9 ；4、加入蛋白酶進(jìn)行酶解再降溫至68°C，按魚鱗或魚皮重量的4%加入蛋白酶進(jìn)行酶解，酶解時間為1小 時；5、滅酶酶解完畢后將酶解液升溫至95°C，保持30分鐘左右，滅酶后，降溫至65°C調(diào)節(jié)pH 為 8.5 ；6、過濾、濃縮、干燥得到小分子膠原蛋白寡肽。上述方法中，蛋白酶采用胃蛋白酶。
權(quán)利要求
一種從魚中提取小分子膠原蛋白寡肽的方法，其特征在于從魚中提取小分子膠原蛋白寡肽的方法，它包括以下步驟①脂肪酶脫脂將洗凈晾干的魚鱗或魚皮投入到提取罐，按其重量的3 15倍加水?dāng)嚢杈鶆?，按魚鱗或魚皮重量的0.01％ 1％加入脂肪酶，進(jìn)行酶解；②清洗放掉提取罐中的酶解液后，向提取罐內(nèi)加水沖洗魚鱗或魚皮3 5遍；③調(diào)整PH值向提取罐內(nèi)加入水，加水量為魚鱗或魚皮重量的3 15倍，升溫至42℃ 68℃，用濃度為3％ 17％的NaOH及HCL將提取罐內(nèi)液體的pH值調(diào)節(jié)為6.8 9.9；④加入蛋白酶進(jìn)行酶解再降溫至38℃ 68℃，按魚鱗或魚皮重量的1％ 4％加入蛋白酶進(jìn)行酶解，酶解時間為1 6小時；⑤滅酶酶解完畢后將酶解液升溫至70℃ 95℃，保持30分鐘左右，滅酶后，降溫至65℃調(diào)節(jié)pH為6.5 8.5；⑥過濾、濃縮、干燥得到小分子膠原蛋白寡肽。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種從魚中提取小分子膠原蛋白寡肽的方法。它包括以下步驟脂肪酶脫脂將洗凈晾干的魚鱗或魚皮投入到提取罐，按其重量的3到15倍加水?dāng)嚢杈鶆颍呆~鱗或魚皮重量的0.01％-1％加入脂肪酶進(jìn)行酶解，然后經(jīng)清洗、調(diào)整PH值、加入蛋白酶進(jìn)行酶解、滅酶、過濾、濃縮、干燥得到小分子膠原蛋白寡肽。蛋白酶進(jìn)行酶解的過程為溫度在38℃-68℃，按魚鱗或魚皮重量的1％-4％加入蛋白酶進(jìn)行酶解，酶解時間為1-6小時。由于采用脂肪酶對魚鱗或魚皮進(jìn)行脫脂處理，故提高了脫脂效果，從而不僅大大縮短了蛋白酶的酶解時間，提高了生產(chǎn)效率，而且加工出來的膠原蛋白分子量更小，有利于人體的吸收。
文檔編號C12P21/06GK101892278SQ20091003955
公開日2010年11月24日 申請日期2009年5月18日 優(yōu)先權(quán)日2009年5月18日
發(fā)明者張嘉強(qiáng), 林國, 馬曉英 申請人:湛江中南島生化有限公司