專利名稱：：治療豬呼吸道疾病綜合征的制作方法治療豬呼吸道疾病綜合征序列表本申請(qǐng)包含紙件形式和計(jì)算機(jī)可讀形式的序列表，其中的教導(dǎo)和內(nèi)容都？1入本文做參考。該序列表與WO06/072065的序列表一致。發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及包含豬2型圓環(huán)病毒(PCV2)抗原的免疫原性組合物用于預(yù)防及治療動(dòng)物、尤其豬的豬呼吸道疾病綜合征(PRDC)的用途。
背景技術(shù)：
：豬2型圓環(huán)病毒(PCV2)為小型(直徑為17nm-22nm)二十面體無包膜DNA病毒，其含有單鏈環(huán)狀基因組。PCV2與豬1型圓環(huán)病毒(PCV1)共有大約80%之序列一致性。然而，與通常為非致病性之PCV1不同，豬感染PCV2近來已與多種疾病綜合癥(其共同稱作豬圓環(huán)病毒疾病(PCVD)(亦稱作豬圓環(huán)病毒相關(guān)疾病(PCVAD)))相關(guān)(Allan等人，2006,IPVSCongress)。通常認(rèn)為離乳后多系統(tǒng)消4毛性綜合癥(PostweaningMultisystemicWastingSyndrome;PMWS)為PCVD之主要臨床表現(xiàn)(Harding等人，1997，SwineHealthProd;5:201-203;Kennedy等人，2000,JCompPathol;122:9-24)。PMWS侵襲介于5-18周齡之豬。PMWS之臨床特征在于消瘦、皮膚蒼白、生長(zhǎng)遲滯、呼吸窘迫、腹瀉、黃疽及黃膽。在一些受感染之豬中，將顯而易見所有癥狀之組合，而其它受感染之豬將僅具有所述癥狀中之一或兩者(Muirhead，2002,Vet.Rec.;150:456)。在尸4企期間，顯樣i鏡可見及肉眼可見之病灶亦出現(xiàn)于多個(gè)組織及器官上，其中淋巴器官為最常見之病灶部位(Allan及Ellis,2000;JVet.Diagn.Invest.,12:3-14)。已觀測(cè)到PCV2核酸或抗原之量與顯微鏡可見淋巴病灶嚴(yán)重性之間的較強(qiáng)相關(guān)性。感染PCV2之豬之死亡率可達(dá)80%。VeterinaryJ,,2005;169:326-336)。存在若干種在文獻(xiàn)中報(bào)導(dǎo)之潛在相關(guān)病狀，其包括豬呼吸道疾病綜合征(PRDC)、豬皮膚病及腎病綜合癥(PDNS)、繁殖障礙、肉芽腫性腸炎及潛在先天性震顫(CT-AII)及周產(chǎn)期心肌炎(Chae,VeterinaryJ.,2005;169:326-336)。其中，由于PRDC之一般高流行性、高發(fā)病率(在感染農(nóng)場(chǎng)為30%-70%)及死亡率(在感染農(nóng)場(chǎng)為4%-6%),認(rèn)為其在歐洲具有最大經(jīng)濟(jì)影響(Kim等人，VeterinaryJ.，2003;166:251-256)。罹患PRDC的豬的肺炎是由于病毒性病原體和細(xì)菌性病原體組合所致，所述病原體如PRRSV、豬流感病毒(Swineinfluenzavirus;SIV)、豬肺炎支原體(7k^c。//a纖(3/2_yo/wew/wo"/(3e)、胸膜月申炎放線軒菌(m'wo6ac/〃Msp/eMro/wewmo"/ae)及多殺巴斯德氏菌(尸asteMre〃a附w/to"V/a)。盡管病因?qū)W涉及多種病原體且在各農(nóng)場(chǎng)之間不同，但PRRSV及豬肺炎支原體為兩種最常見的從表現(xiàn)PRDC的PCV2陽性豬分離到的病原體(Kim等人，VeterinaryJ.，2003;166:251-256)。仍未知PCV2是否在PRDC之病因或PRDC之臨床跡象(clinicalsign)之表現(xiàn)、嚴(yán)重性或延長(zhǎng)中起任何作用。與其它病毒性病原體相比，在罹患PRDC之豬之肺病灶中一致診斷出PCV2。前瞻性研究已證明由共同感染PCV2及PRRSV產(chǎn)生之肺炎及通常系統(tǒng)性疾病比與單獨(dú)感染任一病原體相關(guān)之疾病更嚴(yán)重。因此可假定在PCV2與其它病原體之間存在明顯協(xié)同效應(yīng)，其已在該領(lǐng)域中之呼吸道疾病病例中觀測(cè)到(Ellis等人，VeterinaryMicrobiol.,2004;98:159-163)。然而，仍未知PCV2(若存在于罹患PRDC之豬中)是否對(duì)豬之PRDC之臨床跡象具有任何影響。由于在肥育(fattening)結(jié)束時(shí)具有高達(dá)100°/。血清反應(yīng)陽性之PCV2動(dòng)物普遍存在，類似地PCV2可對(duì)PRDC之疾病表現(xiàn)完全無影響，但僅為不相關(guān)共感染病原體。盡管PMWS通常侵襲幼豬(通常介于5與12周齡之間)，但PRDC主要可見于生長(zhǎng)至肥育豬(通常約為16至22周齡)中。發(fā)病率在30%-70%范圍內(nèi)，其中平均死亡率為4。/。-6。/。(Kim等人，VeterinaryJ.,2003;166:251-256)。PRDC之臨床跡象為難以用抗生素療法治愈之長(zhǎng)期且異常嚴(yán)重之咳嗽及呼吸困難(dyspnea)、生長(zhǎng)緩慢、飼料效率(feedefficiency)降低、昏睡(lethargy)、厭食(anorexia)及在肥育中期至后期死亡率顯著增加。顯微鏡可見病灶PRDC之特點(diǎn)為具有支氣管周及細(xì)支氣管周纖維化之支氣管性間質(zhì)性肺炎。巨噬細(xì)胞之浸潤(rùn)顯著增厚肺泡隔(Chae，VeterinaryJ.,2005;169:326-336)。基于DNA疫苗之治療PCV2感染之方法描述于美國(guó)專利第6,703,023號(hào)中。在WO03/049703中描述嵌合活疫苗的制備，該嵌合活疫苗包含PCV-1骨架，且該骨架中有基因被致病性PCV2病毒抹的免疫原性基因置換。WO99/18214已提供若干種PCV2病毒抹及用于制備PVC2滅活疫苗的方法。但未曾報(bào)導(dǎo)功效資料。WO06/072065已報(bào)導(dǎo)有效的基于ORF-2的亞單位疫苗。任一種上述疫苗都意欲用于3周齡以上的豬的疫苗接種/治療。任何所述疫苗均未描述用于免疫預(yù)防或治療罹患PRDC之豬、尤其罹患PRDC之PCV2陽性豬。此外，尚無人描述所述疫苗賦予抗PCV2感染的保護(hù)性免疫力，或降何臨床癥狀的嚴(yán)重性，或治愈與其相關(guān)之任何臨床癥狀。圖1:按周數(shù)分組的各個(gè)組之間體重增加程度的差異。圖2:研究過程中體重差異(IVP-CP)及平均病毒負(fù)載量(logIO)的變化。
發(fā)明內(nèi)容PRDC之特征在于多種臨床跡象，其包括難以用抗生素療法治愈之長(zhǎng)期且異常嚴(yán)重之咳嗽及呼吸困難、生長(zhǎng)緩慢、飼料效率降低、昏睡、厭食及在肥育中期至后期死亡率顯著增加。這些臨床跡象與多種不同病原體有關(guān)。迄今未知是否PCV2參與PRDC及(若參與時(shí))PCV2參與PRDC的程度。已意外發(fā)現(xiàn)在各種病原體中，PCV2亦在PRDC之臨床跡象之表現(xiàn)、嚴(yán)重性及延長(zhǎng)中起重要作用。因此在各種病原體中，PCV2是豬PRDC的其中一種病原體。一般而言，一種病原體對(duì)如PRDC之多病因疾病(等于多因素疾病)之影響不可預(yù)測(cè)。病原體可無影響，但亦轉(zhuǎn)移、抑制、替代、覆蓋或加強(qiáng)其它病原體對(duì)多因素疾病(如PRDC)之臨床跡象之表現(xiàn)、嚴(yán)重性及延長(zhǎng)的影響。舉例而言，若存在至少一種其它病原體，則多因素疾病(如PRDC)之一種病原體之減少或消除可對(duì)彼疾病之臨床征兆無影響，但亦可顯著減少彼疾病之臨床癥狀，即使在任何其它病原體存在下亦如此。所涉及之病原體之?dāng)?shù)目愈多，則僅一種病原體之減少或消除對(duì)疾病之表現(xiàn)持續(xù)時(shí)間、嚴(yán)重性或延長(zhǎng)之正面影響的期望愈低。如今已意外發(fā)現(xiàn)藉由用PCV2抗原免疫預(yù)防或治療受威脅或受感染動(dòng)物可減輕或降低豬之PRDC臨床跡象之表現(xiàn)、嚴(yán)重性及延長(zhǎng)。詳言之，在感染PCV2以及已知造成豬之PRDC或與其相關(guān)之病原體(諸如PRRSV、豬肺炎支原體、支氣管敗血性博德特氏菌、豬流感病毒、豬鼻支原體和/或多殺巴斯德氏菌)之豬中，PRDC之臨床跡象或與其相關(guān)之臨床跡象之嚴(yán)重性及延長(zhǎng)可強(qiáng)烈減輕及降低。換言之，用PCV2抗原來免疫預(yù)防及治療罹患PRDC之豬對(duì)豬之整體健康、肥育期間之體重增加及豬肥育中期至晚期之死亡率具有正面影響，尤其因?yàn)橐阎鲆蛩?整體健康、體重增加、死亡率)受PRRSV、豬肺炎支原體、支氣管敗血性博德特氏菌、豬流感病毒、豬鼻支原體和/或多殺巴斯德氏菌負(fù)面影響。因此，根據(jù)一方面，本發(fā)明提供一種免疫預(yù)防及治療動(dòng)物之豬呼吸道疾病綜合征(PRDC)和/或與PRDC相關(guān)之任何臨床跡象之方法，其包含向需要此治療之動(dòng)物施用治療有效量之PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性組合物的步驟。與PRDC相關(guān)之臨床跡象選自由咳嗽及呼吸困難、生長(zhǎng)緩慢、飼料效率降低、昏睡、厭食和/或在肥育中期至后期死亡率顯著增加組成的組。因此根據(jù)另一方面，本發(fā)明涉及一種免疫預(yù)防及治療動(dòng)物之咳嗽及呼吸困難、生長(zhǎng)緩慢、飼料效率降低、昏睡、厭食和/或與PRDC相關(guān)之死亡率顯著增加的方法，其包含向需要此治療之動(dòng)物施用治療有效量之PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性組合物的步驟。優(yōu)選地，該咳嗽及呼吸困難系難以用抗生素療法治愈。本文中術(shù)語"抗原"系指引起宿主免疫反應(yīng)之氨基酸序列。本文中，抗原包括任何PCV2蛋白之全長(zhǎng)序列、其類似物或其免疫原性片段。術(shù)語"免疫原性片段"系指包括一或多個(gè)表位且由此引起宿主免疫反應(yīng)之蛋白質(zhì)片段?？墒褂帽绢I(lǐng)域已知的任何數(shù)目之表位定位技術(shù)來鑒別所述片段。例如參見EpitopeMappingProtocolsinMethodsinMolecularBiology,第66巻(GlennE.Morris編，1996)HumanaPress,Totowa,NewJersey。舉例而言，可藉由(例^口)同時(shí)在固體支撐物上合成大量肽(所述肽對(duì)應(yīng)于蛋白質(zhì)分子的各個(gè)部分)且使所述肽與抗體反應(yīng)(同時(shí)所述肽仍與支撐物連接)來測(cè)定線性表位。所述技術(shù)為本領(lǐng)域已知且描述于(例如)美國(guó)專利第4,708,871號(hào)；Geysen等人(1984)Proc.Natl.Acad.Sci.USA81:3998-4002;Geysen等人(1986)Molec.Immunol.23:709-715中。同樣地，構(gòu)象性表位易于通過用X射線晶體學(xué)及2維核》茲共振等方法測(cè)定氨基酸的空間構(gòu)形而加以鑒別。例如參見EpitopeMappingProtocols,同上。合成抗原亦包括于該定義中，例如多表位、側(cè)接表位及其它重組或合成得到之抗原。例如參見Bergmann等人(1993)Eur.J.Immunol.23:2777-2781;Bergmann等人(1996)，J.Immunol.157:3242-3249;Suhrbier，A.(1997),Immunol,andCellBiol.75:402-408;Gardner等人，(1998)12thWorldAIDSConference,Geneva,Switzerland,1998年6月28日-7月3日。"免疫反應(yīng)"意謂(但不限于)在宿主中發(fā)生抗目標(biāo)抗原、免疫原性組合物或疫苗的細(xì)胞和/或抗體介導(dǎo)的免疫反應(yīng)。通常，"免疫反應(yīng)"包括(但不限于)一或多種以下效應(yīng)特異性針對(duì)目標(biāo)組合物或疫苗中所包括之一或多種抗原之抗體、B細(xì)胞、輔助T細(xì)胞、抑制T細(xì)胞和/或細(xì)胞毒性T細(xì)胞的產(chǎn)生或活化。優(yōu)選地，宿主將顯示治療性或保護(hù)性免疫學(xué)(記憶)反應(yīng)以使得對(duì)新感染之抗性將增強(qiáng)和/或疾病之臨床嚴(yán)重性降低。此保護(hù)將由PCV2感染之?dāng)?shù)目或嚴(yán)重性的降低或一或多種與PCV2感染相關(guān)之癥狀之缺乏、病毒血癥發(fā)作之延遲、病毒持續(xù)性降低、總病毒負(fù)載量降低和/或病毒性排泄物減少來證實(shí)。本文中術(shù)語"免疫原性組合物"或"疫苗"(兩種術(shù)語系同義使用)系指含有PCV2抗原之任何藥物組合物，該組合物可用于預(yù)防或治療受檢者之PCV2感染相關(guān)疾病或病狀。優(yōu)選免疫原性組合物可誘發(fā)、刺激或增強(qiáng)針對(duì)PCV2之免疫反應(yīng)。因此該術(shù)語涵蓋如下所述之亞單位免疫原性組合物，以及含有全滅活或減毒和/或失活PCV2之組合物。因此根據(jù)另一方面，本發(fā)明涉及一種免疫預(yù)防及治療動(dòng)物之豬呼吸道疾病綜合征(PRDC)和/或與PRDC相關(guān)之任何臨床跡象的方法，其包含向需要此治療的動(dòng)物施用有效量之PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性組合物的步驟，其中該免疫原性組合物為亞單位免疫原性組合物、含有全滅活或減毒和/或失活PCV2之組合物。本文中術(shù)語"亞單位免疫原性組合物"系指含有至少一種來源于PCV2之此組合物大體上不含完整PCV2。因此，"亞單位免疫原性組合物"系由來自PCV2或其重組類似物之至少部分純化或分級(jí)分離(優(yōu)選大體上純化)之免疫抗原或多肽或呈分級(jí)分離形式的目標(biāo)亞單位抗原。優(yōu)選免疫原性亞單位組合物包含如下所述之PCV2ORF-2蛋白質(zhì)。最優(yōu)選者為免疫原性亞單位組合物，其包含WO06/072065中提供之PCV2抗原中之任一者，該文獻(xiàn)系以引用的方式全部并入本文中。根據(jù)其它方面，本文所述免疫原性組合物最優(yōu)選包含由PCV2ORF-2表ORF-2DNA及蛋白質(zhì)為PCV2分離抹內(nèi)高度保守之域，且進(jìn)而任何PCV2ORF-2可有效作為如本文中使用之PCVORF-2DNA和/或多肽的來源。優(yōu)選PCV2ORF-2蛋白質(zhì)為WO06/072065之SEQIDNO:11之PCV2ORF-2蛋白質(zhì)。另一優(yōu)選PCVORF-2多肽系以WO06/072065之SEQIDNO:5形式提供。然而，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)了解此序列可在序列同源性方面改變多達(dá)6%-10%特征可(例如)由如由WO06/072065之實(shí)例4提供之激發(fā)實(shí)驗(yàn)評(píng)估。此外，與如WO06/072065中提供之SEQIDNO:3或SEQIDNO:4之多核香酸序列編碼的PCV2ORF-2蛋白質(zhì)相比，當(dāng)經(jīng)修飾抗原賦予至少70%、優(yōu)選80%、更優(yōu)選90%之保護(hù)免疫性時(shí)，經(jīng)修飾抗原之抗原特征仍得以保持。因此根據(jù)另一方面，本發(fā)明提供一種免疫預(yù)防及治療動(dòng)物之豬呼吸道疾病綜合征(PRDC)和/或與PRDC相關(guān)之任何臨床跡象之方法，其包含向需要此治療的動(dòng)物施用有效量之PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性組合物的步驟，其中該P(yáng)CV2抗原為抗原PCV2ORF-2蛋白質(zhì)，與如由WO06/072065中提供之SEQIDNO:3或SEQIDNO:4之多核苷酸序列編碼的PCV20RF-2蛋白質(zhì)相比，其具有至少70%、優(yōu)選80%、甚至更優(yōu)選90%之保護(hù)免疫性。該P(yáng)CV2ORF-2優(yōu)選具有WO06/072065之SEQIDNO:ll或SEQIDNO:5之序列。在一些形式中，PCV2ORF-2蛋白質(zhì)之免疫原性部分系用作包含PCV2抗原之免疫原性組合物中的抗原組份。本文中術(shù)語"免疫原性部分"系指PCV2ORF-2蛋白質(zhì)和/或多核苷酸各自之截短形式和/或經(jīng)取代形式或片段。優(yōu)選地，所述截短形式和/或經(jīng)取代形式或片段應(yīng)包含全長(zhǎng)ORF-2多肽之至少6個(gè)連續(xù)氨基酸。更優(yōu)選地，截短形式或經(jīng)取代形式或片段應(yīng)具有全長(zhǎng)PCVORF-2多肽之至少10個(gè)，更優(yōu)選至少15個(gè)且更優(yōu)選至少19個(gè)連續(xù)氨基酸。此方面中之兩個(gè)優(yōu)選序列系以WO06/072065之SEQIDNO:9及SEQIDNO:10形式提供。應(yīng)進(jìn)一步了解所述序列可為較大片段或截短形式之部分。如上所述，另一優(yōu)選PCV2ORF-2多肽為由SEQIDNO:3或SEQIDNO:4之核苷酸序列編碼之任一多肽。然而，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)了解此序列可在序列同源性方面改變多達(dá)6%-20。/。且仍保持使其適用于免疫原性組合物中之抗原特征。在一些形式中，此PVC20RF-2多肽之截短或經(jīng)取代形式或片段系用作組合物中之抗原組份。優(yōu)選地，所述截短或經(jīng)取代形式或片段應(yīng)包含(例如)SEQIDNO:3或SEQIDNO:4之全長(zhǎng)PCV2ORF-2核普酸序列之至少18個(gè)連續(xù)核苷酸。更優(yōu)選地，所述截短或經(jīng)取代形式或片段應(yīng)具有(例如)SEQIDNO:3或SEQIDNO:4之全長(zhǎng)PCV2ORF-2核苦酸序列之至少30個(gè)、更優(yōu)選至少45個(gè)且更優(yōu)選至少57個(gè)連續(xù)核苷酸。本領(lǐng)域已知的"序列一致性"系指兩個(gè)或兩個(gè)以上多肽序列或兩個(gè)或兩個(gè)以上多核芬酸序列(亦即參考序列與待與參考序列比較之給定序列)之間之關(guān)系。如由所述序列之間的匹配所測(cè)定，序列一致性系在序列經(jīng)最優(yōu)選比對(duì)以產(chǎn)生最高序列相似度后，藉由比較給定序列與參考序列而測(cè)定。在此比對(duì)后，在位置-位置基礎(chǔ)上確定序列一致性，例如，若在一特定位置處核苦酸或氨基酸殘基一致，則所述序列在彼位置處"一致"。隨后將所述位置一致性之總數(shù)除以參考序列中核苷酸或殘基之總數(shù)以得到序列一致性百分比?？梢子谟梢阎椒▉碛?jì)算序列一致性，所述方法包括(并不限于)以下文獻(xiàn)中描述之方法ComputationalMolecularBiology,Lesk,A.N.編，OxfordUniversityPress,NewYork(1988);Biocomputing:InformaticsandGenomeProjects,Smith,D.W,編，AcademicPress,NewYork(1993);ComputerAnalysisofSequenceData,告卩分I,Griffin,A.M.及Griffm,H.G.編，HumanaPress,NewJersey(1994);SequenceAnalysisinMolecularBiology,vonHeinge，G.,AcademicPress(1987);SequenceAnalysisPrimer,Gribskov,M.及Devereux，J.編，M.StocktonPress,NewYork(1991);及Carillo,H.及Lipman，D.,SIAMJ.AppliedMath.，48:1073(1988)，其教示內(nèi)容系以引用的方式并入本文中。測(cè)定序列一致性之優(yōu)選方法經(jīng)設(shè)計(jì)以得到所測(cè)試序列之間的最大匹配。測(cè)定序列一致性之方法已在測(cè)定給定序列之間的序列一致性之公開可用計(jì)算機(jī)程序中編碼。所述程序之實(shí)例包括(但不限于)GCG程序套件(Devereux,J.等人，NucleicAcidsResearch,12(1):387(1984))、BLASTP、BLASTN及FASTA(Altschul，S.F.等人，J.Molec.Biol"215:403-410(1990》。BLASTX程序可公開獲自NCBI及其它來源(BLASTManual,Altschul,S.等人，NCVINLMNIHBethesda，MD20894,Altschul,S.F.等人，J.Molec.Biol"215:403-410(1990)，其教示內(nèi)容系以引用的方式并入本文中)。所述程序使用預(yù)設(shè)空隙權(quán)重(defaultgapweight)最優(yōu)選比對(duì)序列以產(chǎn)生給定序列與參考序列之間的最高程度之序列一致性。舉例而言，具有與參考核苷酸序列具有至少(例如)85%、優(yōu)選90%、甚至更優(yōu)選95%"序列一致性"之核普酸序列之多核苷酸意謂除給定多核苷酸序列可在參考核苷酸序列之每各100個(gè)核苦酸中包括至多15個(gè)、優(yōu)選至多10個(gè)、甚至更優(yōu)選至多5個(gè)點(diǎn)突變之外，給定多核苷酸之核苷酸序列與參考序列一致。換言之，在具有相對(duì)于參考核苷酸序列具有至少85%、優(yōu)選90%、甚至更優(yōu)選95%—致性之核苷酸序列之多核苷酸中，參考序列中之至多15%、優(yōu)選10%、甚至更優(yōu)選5%之核苷酸可缺失或經(jīng)另一核苷酸取代，或可將參考序列中全部核苷酸之至多15%、優(yōu)選10%、甚至更優(yōu)選5%之多個(gè)核苷酸插入?yún)⒖夹蛄兄?。參考序列之所述突變可發(fā)生在參考核苷酸序列之5'或3'末端位置處或所述末端位置之間的任何地方，個(gè)別地散布于參考序列中之核苷酸之間或參考序列內(nèi)之一或多個(gè)連續(xù)群中。同樣地，具有與參考氨基酸序列具有至少(例如)85%、優(yōu)選90%、甚至更優(yōu)選95。/。序列一致性之給定氨基酸序列之多肽意謂除給定多肽序列可在參考核苷酸序列之每各100個(gè)氨基酸中包括至多15、優(yōu)選至多IO、甚至更優(yōu)選至多5個(gè)氨基酸變異之外，多肽之給定氨基酸序列與參考序列一致。換言之，為獲得與參考氨基S吏序列具有至少85。/。、優(yōu)選90%、甚至更優(yōu)選95%序列一致性之給定多肽序列，參考序列中之至多15%、優(yōu)選至多10%、甚至更優(yōu)選至多5%之氨基酸殘基可缺失或經(jīng)另一氨基酸取代，或可將參考序列中氨基酸殘基總數(shù)之至多15%、優(yōu)選至多10%、甚至更優(yōu)選至多5%之多個(gè)氨基酸插入?yún)⒖夹蛄兄小⒖夹蛄兄鲎儺惪砂l(fā)生于參考氨基酸序列之胺基末端或羧基末端位置處或所述末端位置之間的任何地方，個(gè)別地散布于參考序列中之殘基之間或參考序列內(nèi)之一或多個(gè)連續(xù)群中。優(yōu)選地，不一致之殘基位置系因保守性氨基酸取代而不同。然而，當(dāng)測(cè)定序列一致性時(shí)，不包括保守性if又代作為匹配。本文所述"序列同源性"系指一種測(cè)定兩個(gè)序列之相關(guān)性的方法。為測(cè)定序列同源性，最優(yōu)選比對(duì)兩個(gè)或兩個(gè)以上序列且必要時(shí)引入空隙。然而，與"序列一致性"不同，當(dāng)測(cè)定序列同源性時(shí)，將保守性氨基酸取代計(jì)為匹酉己。列中之85%、優(yōu)選90%、甚至更優(yōu)選95%之氨基酸殘基或核苷酸須與另一氨基酸或核芬酸匹配或包含經(jīng)另一氨基酸或核苷酸之保守性取代，或可將參考序列中全部氨基酸殘基或核苷酸(不包括保守性取代)之至多15%、優(yōu)選至多10%、甚至更優(yōu)選至多5%之多個(gè)氨基酸或核苷酸插入?yún)⒖夹蛄兄?。同源序列?yōu)選包含至少一段50個(gè)，甚至更優(yōu)選至少100個(gè)，甚至更優(yōu)選至少250個(gè)且甚至更優(yōu)選至少500個(gè)核苷酸。"保守性取代"系指一個(gè)氨基酸殘基或核苷酸經(jīng)另一個(gè)具有類似特征或性質(zhì)(包括大小、疏水性等)之氨基酸殘基或核苷酸取代，以使得整體功能不顯著改變。"分離"意謂"藉由人工"自其天然狀態(tài)改變，亦即若其存在于自然界中，則其已自原始環(huán)境改變或移出，或兩者。舉例而言，天然存在于活有機(jī)體中之多核苷酸或多肽系未經(jīng)"分離"，當(dāng)該術(shù)語用于本文中時(shí)，與天然狀態(tài)之共存物質(zhì)分離之相同多核苷酸或多肽系經(jīng)"分離"。因此，根據(jù)另一方面，本發(fā)明提供一種預(yù)防及治療動(dòng)物之豬呼吸道疾病綜合征(PRDC)和/或與PRDC相關(guān)之任何臨床跡象之方法，其包含向需要此治療之動(dòng)物施用有效量之PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性組合物的步驟，其中該P(yáng)CV2ORF-2蛋白質(zhì)為上述蛋白質(zhì)中之任一者。該P(yáng)CV2ORF-2蛋白質(zhì)優(yōu)選為i)包含WO06/07065之SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:9、SEQIDNO:IO或SEQIDNO:1l之序列的多肽；ii)與i)之多肽至少80%同源的任何多肽，iii)i)和/或ii)之多肽之任何免疫原性部分，iv)iii)之免疫原性部分，其包含包括于WO06/072065之SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:9、SEQIDNO:IO或SEQIDNO:1l之序列中的至少10個(gè)連續(xù)氨基酸，v)由包含WO06/072065之SEQIDNO:3或SEQIDNO:4之序列的DNA編碼之多肽，vi)由與v)之多核苦酸至少80%同源之多核苷酸編碼的任何多肽，vii)由v)和/或vi)之多核苷酸編碼之多肽的任何免疫原性部分，viii)vii)之免疫原性部分，其中編碼該免疫原性部分之多核苷酸包含包括于WO06/072065之SEQIDNO:3或SEQIDNO:4之序列中的至少30個(gè)連續(xù)核苷酸。所述免疫原性部分中之任一者優(yōu)選具有由WO06/07065之SEQIDNO:3或SEQIDNO:4之序列編碼的PCV2ORF-2蛋白質(zhì)之免疫原性特征。根據(jù)另一方面，PCV2ORF-2蛋白質(zhì)系以可有效誘發(fā)所需免疫反應(yīng)(亦即降低PRDC和/或與PRDC相關(guān)之任何臨床癥狀之發(fā)病率、減輕PRDC和/或與PRDC相關(guān)之任何臨床癥狀之嚴(yán)重性或預(yù)防或減少PRDC和/或與PRDC相關(guān)之任何臨床癥狀)之抗原包涵量提供于免疫原性組合物中。PCV2ORF-2蛋白質(zhì)包涵量?jī)?yōu)選為每毫升最終免疫原性組合物至少0.2lag抗原Oig/ml)、更優(yōu)選約0.2fig/ml至約400|ig/ml、更優(yōu)選約0.3)tig/ml至約200|tig/ml、甚至更優(yōu)選約0.35jug/ml至約100Mg/ml、更優(yōu)選約0.4pg/ml至約50pg/ml、更優(yōu)選約0.45lig/ml至約30pg/ml、更優(yōu)選約0.6pg/ml至約15jag/ml、甚至更優(yōu)選約0.75pg/ml至約8pg/ml、甚至更優(yōu)選約l.Opg/ml至約6pg/ml、更優(yōu)選約1.3^xg/ml至約3.0|ig/ml、甚至更優(yōu)選約1.4pg/ml至約2.5pg/ml、甚至更優(yōu)選約1.5lig/ml至約2.0itig/ml且最優(yōu)選約1.6(ag/ml。才艮據(jù)另一方面，PCVORF-2抗原包涵量為每劑最終抗原組合物至少0.2微克如上所述之PCV2ORF-2蛋白質(zhì)(微克/劑)、更優(yōu)選約0.2微克/劑至約400微克/劑、更優(yōu)選約0.3微克/劑至約200微克/劑、甚至更優(yōu)選約0.35微克/劑至約100微克/劑、更優(yōu)選約0.4微克/劑至約50微克/劑、更優(yōu)選約0.45微克/劑至約30微克/劑、更優(yōu)選約0.6微克/劑至約15微克/劑、甚至更優(yōu)選約0.75微克/劑至約8微克/劑、甚至更優(yōu)選約1.0微克/劑至約6微克/劑、更優(yōu)選約1.3微克/劑至約3.0微克/劑、甚至更優(yōu)選約1.4微克/劑至約2.5微克/劑、甚至更優(yōu)選約1.5微克/劑至約2.0微克/劑且最優(yōu)選約1.6微克/劑?？梢园≒CV2ORF2之分離及純化、標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)合成及重組方法之任何方式獲得用于本發(fā)明之免疫原性組合物中之PCV2ORF-2多肽。用于獲得PCV2ORF-2多肽之優(yōu)選方法提供于WO06/072065中，其教示及內(nèi)容系以引用的方式全部并入本文中。簡(jiǎn)言之，用含有PCV2ORF-2DNA編碼序列之重組病毒載體感染易感細(xì)胞，由重組病毒表達(dá)PCV2ORF-2多肽且藉由過濾自上清液回收所表達(dá)之PCV2ORF-2多肽且由任何常規(guī)方法、優(yōu)選使用二元氮丙啶使其失活，隨后將其中和以終止失活過程。本文所述免疫原性組合物亦系指包含以下各物之組合物i)優(yōu)選具有上述濃度之上述PCV2ORF-2蛋白質(zhì)中之任一者，及ii)表達(dá)該P(yáng)CV2ORF-2蛋白質(zhì)之病毒載體、優(yōu)選重組桿狀病毒之至少一部分。此外，免疫原性組合物可包含i)優(yōu)選具有上述濃度之上述PCV20RF-2蛋白質(zhì)中之任一者，ii)表達(dá)該P(yáng)CV20RF-2蛋白質(zhì)之病毒載體、優(yōu)選重組桿狀病毒之至少一部分，及iii)一部分細(xì)胞培養(yǎng)物上清液。因此，根據(jù)另一方面，本發(fā)明提供一種免疫預(yù)防及治療動(dòng)物之豬呼吸道疾病綜合征(PRDC)和/或與PRDC相關(guān)之任何臨床跡象之方法，其包含向需要此治療的動(dòng)物施用有效量之PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性組合物的步驟，其中該P(yáng)CV2抗原為重組PCV20RF-2、優(yōu)選為桿狀病毒表達(dá)之PCV2ORF-2。所述重組或桿狀病毒表達(dá)PCV2ORF-2優(yōu)選具有如上所述之序列。本文所述免疫原性組合物亦系指包含以下各物之組合物i)優(yōu)選具有上述濃度之上述PCV2ORF-2蛋白質(zhì)中之任一者，ii)表達(dá)該P(yáng)CV2ORF-2蛋白質(zhì)之病毒載體、優(yōu)選重組桿狀病毒之至少一部分，及iii)一部分細(xì)胞培養(yǎng)物；其中約90%之組份具有小于1iim之大小。本文所述免疫原性組合物亦系指包含以下各物之組合物i)優(yōu)選具有上述濃度之上述PCV2ORF-2蛋白質(zhì)中之任一者，ii)表達(dá)該P(yáng)CV2ORF-2蛋白質(zhì)之病毒載體之至少一部分，iii)一部分細(xì)胞培養(yǎng)物，iv)及使重組病毒載體失活之失活劑，優(yōu)選為BEI,其中約90。/。之組份i)至組份iii)具有小于lnm之大小。BEI優(yōu)選以可有效使桿狀病毒失活之濃度存在，優(yōu)選為2mM至約8mMBEI、優(yōu)選約5mMBEI之量。本文所述免疫原性組合物亦系指包含以下各物之組合物i)優(yōu)選具有上述濃度之上述PCV2ORF-2蛋白質(zhì)中之任一者，ii)表達(dá)該P(yáng)CV2ORF-2蛋白質(zhì)之病毒載體之至少一部分，iii)一部分細(xì)胞培養(yǎng)物，iv)使重組病毒載體失活之失活劑，優(yōu)選為BEI,及v)終止由失活劑所介導(dǎo)之失活之中和劑，其中約90%之組份0至組份出)具有小于1ium之大小。優(yōu)選地，若失活劑為BEI，則該組合物包含與BEI等量之硫代硫酸鈉。將多肽并入可施用對(duì)PCV2感染敏感之動(dòng)物之組合物中。在優(yōu)選形式中，組合物亦可包括本領(lǐng)域技術(shù)人員已知之其它組份(亦參見Remington'sPharmaceuticalSciences.(1990)。第18版，MackPubl.,Eastern)。另外，該組合物可包括一或多種獸醫(yī)學(xué)上可接受之載劑。本文中，"獸醫(yī)學(xué)上可接受之載劑"包括任何及所有溶劑、分散介質(zhì)、涂料、佐劑、穩(wěn)定劑、稀釋劑、防腐劑、抗細(xì)菌劑及抗真菌劑、等滲劑、吸收延遲劑及其類似載劑。在一優(yōu)選實(shí)施例中，免疫原性組合物包含優(yōu)選具有上述濃度之如由此提供之PCV2ORF-2蛋白質(zhì)，其系與佐劑(優(yōu)選Carbopol)及生理鹽水混合。學(xué)上可接受之無菌溶液。為制備用于非經(jīng)腸注射或輸液之即用溶液，現(xiàn)成可用諸如鹽水或相應(yīng)血漿蛋白質(zhì)溶液之等滲水溶液。另外，本發(fā)明之免疫原性組合物及疫苗組合物可包括稀釋劑、等滲劑、穩(wěn)定劑或佐劑。稀釋劑可包括水、鹽水、右旋糖、乙醇、甘油及其類似物。等滲劑尤其可包括氯化鈉、右旋糖、甘露糖醇、山梨糖醇及乳糖。穩(wěn)定劑尤其包括白蛋白及乙二胺四乙酸之i威金屬鹽。本文所述"佐劑"可包括氫氧化鋁及磷酸鋁；皂素，例如QuilA、QS-21(CambridgeBiotechInc.,CambridgeMA)、GPI-0100(GalenicaPharmaceuticals,Inc.,Birmingham,AL);油包水乳液；水包油乳液；？K/油/水乳液。乳液尤其可基于輕液體石蠟油(EuropeanPharmacopea類型)；由烯烴、尤其異丁烯或癸烯之低聚合產(chǎn)生之類異戊二烯油，諸如角鯊?fù)橛突蚪酋徬┯?；含有直鏈烷基之酸或醇之酯，更特定言之植物油、油酸乙酯、丙二醇二?辛酸酯/癸酸酯)、甘油三-(辛酸酯/癸酸酯)或丙二醇二油酸酯；支鏈脂肪酸或醇之酯，尤其異硬脂酸酯。該油系與乳化劑組合使用以形成乳液。乳化劑優(yōu)選為非離子型界面活性劑，尤其視情況經(jīng)乙氧基化之脫水山梨糖醇酯、二縮甘露醇酯(例如無水甘露糖醇油酸酯)、乙二醇酯、聚甘油酯、丙二醇酯，及油酸酯、異硬脂酸酯、蓖麻油酸酯或羥基硬脂酸酯，及聚氧化丙烯-聚氧化乙烯共聚物嵌段體，尤其泊洛尼克(Pluronic)產(chǎn)品，尤其為L(zhǎng)121。參見Hunter等人，TheTheoryandPracticalApplicationofAdjuvants(Stewart-Tull，D.E.S,編).JohnWileyandSons,NY,第51誦94頁(1995)及Todd等人，Vaccine15:564-570(1997)。舉例而言，有可育fe<吏用"VaccineDesign,TheSubunitandAdjuvantApproach",M.Powell及M.Newman編，PlenumPress,1995之第147頁所述之SPT乳液，及此同一本著作之第183頁所述之乳液MF59。佐劑之另一實(shí)例為選自丙烯酸或曱基丙烯酸之聚合物及順丁烯二酸酐及烯基衍生物之共聚物的化合物。有利佐劑化合物為尤其與糖或多元醇之聚烯基醚交聯(lián)之丙烯酸或甲基丙烯酸之聚合物。所述化合物稱為術(shù)語卡波姆(carbomer)(Phameuropa,第8巻，第2期，1996年6月)。本領(lǐng)域技術(shù)人員亦可參看美國(guó)專利第2,909,462號(hào)，其描述與具有至少3個(gè)羥基、優(yōu)選不超過8個(gè)羥基之多羥基化合物交聯(lián)的所述丙烯酸聚合物，其中至少三個(gè)羥基之氳原子經(jīng)具有至少2個(gè)碳原子之不飽和脂族基團(tuán)置換。優(yōu)選基團(tuán)為含有2至4個(gè)碳原子之基團(tuán)，例如乙烯基、烯丙基及其它烯系不飽和基團(tuán)。所述不飽和基團(tuán)可自身含有諸如曱基之其它取代基。以名稱Carbopol(BFGoodrich,Ohio,USA)銷售之產(chǎn)品尤其適合。其與烯丙基蔗糖或烯丙基異戊四醇交聯(lián)。其中，可提及Carb叩ol974P、Carbopol934P及Carbopo1971P。最優(yōu)選使用優(yōu)選每劑約500pg至約5mg之量、甚至更優(yōu)選每劑約750pg至約2.5mg之量且最優(yōu)選每劑約1mg之量的Carbopol，尤其使用Carbopol971P。其它適合佐劑尤其包括(但不限于)RIBI佐劑系統(tǒng)(RibiInc.)、嵌段共聚物(CytRx,AtlantaGA)、SAF-M(Chiron,EmeryvilleCA)、單磷?；|(zhì)A、安夫利定(Avridine)脂質(zhì)胺佐劑、來自大腸桿菌(E.coli)之熱不穩(wěn)定腸毒素(重組或其它)、霍亂毒素、IMS1314或胞壁酰二肽。優(yōu)選添加每劑約100pg至約10mg佐劑。甚至更優(yōu)選添加每劑約100|ig至約10mg佐劑。甚至更優(yōu)選添加每劑約500^tg至約5mg佐劑。甚至更優(yōu)選添加每劑約750嗎至約2.5mg佐劑。最優(yōu)選添加每劑約1mg佐劑。另外，組合物可包括一或多種醫(yī)藥上可接受之載劑。本文中，"醫(yī)藥上可接受之載劑"包括任何及所有溶劑、分散介質(zhì)、涂料、穩(wěn)定劑、稀釋劑、防腐劑、抗細(xì)菌劑及抗真菌劑、等滲劑、吸收延遲劑及其類似物。由此提供之組合物最優(yōu)選含有自活體外培養(yǎng)細(xì)胞之上清液回收的PCV2ORF-2蛋白質(zhì)，其中所述細(xì)胞系經(jīng)含有PCV2ORF-2DNA且表達(dá)PCV2ORF-2蛋白質(zhì)之重組病毒載體感染，且其中該細(xì)胞培養(yǎng)物系經(jīng)約2mM至約8mMBEI、優(yōu)選約5mMBEI處理以使病毒載體失活，且用相等濃度之中和劑(優(yōu)選硫代硫酸鈉;容液)處理至最終濃度為約2mM至約8mM、優(yōu)選約5mM。本發(fā)明亦涉及免疫原性組合物用于免疫預(yù)防或治療PRDC或減少與PRDC相關(guān)之任何臨床跡象的用途，該免疫原性組合物包含i)優(yōu)選具有上述濃度之上述PCV2ORF-2蛋白質(zhì)中之任一者，ii)表達(dá)該P(yáng)CV2ORF-2蛋白質(zhì)之病毒載體之至少一部分，iii)一部分細(xì)胞培養(yǎng)物，iv)使重組病毒載體失活之失活劑，優(yōu)選為BEI,及v)終止由失活劑所介導(dǎo)之失活之中和劑，優(yōu)選為與BEI等量之石克代疏酸鈉；及vi)適當(dāng)佐劑，優(yōu)選為上述量之Carbopol971;其中約90。/。之組份i)至組份iii)具有小于ljLim之大小。根據(jù)另一方面，此免疫原性組合物進(jìn)一步包含呈生理學(xué)上可接受之濃度的醫(yī)藥學(xué)上可接受之鹽、優(yōu)選磷酸鹽。優(yōu)選將該免疫原性組合物之pH值調(diào)節(jié)至生理pH值，意謂介于約6.5與7.5之間。本文所述免疫原性組合物亦系指一種組合物，其每一毫升包含i)至少1.6)ug上述PCV2ORF-2蛋白質(zhì)；ii)表達(dá)該P(yáng)CV2ORF-2蛋白質(zhì)之桿狀病毒之至少一部分；iii)一部分細(xì)胞培養(yǎng)物；iv)約2mM至8mMBEI;v)與BEI等量之硫代硫酸鈉；及vi)約lmgCarbopol971;及vii)生理學(xué)上可接受之濃度之磷酸鹽；其中約90。/。之組份i)至組份iii)具有小于lpm之大小且將該免疫原性組合物之pH值調(diào)節(jié)至約6.5至7.5。免疫原性組合物可進(jìn)一步包括一或多種其它免疫調(diào)節(jié)劑，諸如白細(xì)胞介素、干擾素或其它細(xì)胞因子。免疫原性組合物亦可包括慶大霉素(Gentamicin)及硫柳汞(Merthiolate)。盡管本領(lǐng)域技術(shù)人員可易于確定適用于本發(fā)明情況下之佐劑及添加劑之量及濃度，但本發(fā)明涵蓋包含約50iag至約2000lag佐劑之組合物且優(yōu)選每毫升劑量疫苗組合物包含約250pg佐劑。因此，本文所述免疫原性組合物亦系指包含約lpg/ml至約60jiig/ml抗生素且更優(yōu)選小于約30ng/ml抗生素之組合物。本文所述免疫原性組合物亦系指包含以下各物之組合物i)優(yōu)選具有上述濃度之上述PCV2ORF-2蛋白質(zhì)中之任一者，ii)表達(dá)該P(yáng)CV2ORF-2蛋白質(zhì)之病毒載體之至少一部分，iii)一部分細(xì)胞培養(yǎng)物，iv)使重組病毒載體失活之失活劑，優(yōu)選為BEI，及v)終止由失活劑所介導(dǎo)之失活之中和劑，優(yōu)選為與BEI等量之硫代硫酸鈉；vi)適當(dāng)佐劑，優(yōu)選為上述量之Carbopol971;vii)醫(yī)藥學(xué)上可接受之濃度之鹽水緩沖液，優(yōu)選為磷酸鹽，及viii)抗微生物活性劑；其中約90。/。之組份i)至組份iii)具有小于1pm之大小。本文所述免疫原性組合物亦系指lngelvac⑧CircoFLEX(BoehringerIngelheimVetmedicaInc,StJoseph,MO,USA)、CircoVac(MerialSAS,Lyon,France)、PorcilisPCV(IntervetInc.,Millsboro,DE,USA)或S畫xynPCV-2OneDose(FortDodgeAnimalHealth,KansasCity,KA，USA)。因此，本發(fā)明亦相關(guān)之任何臨床跡象的方法，其包含向需要此治療之動(dòng)物施用治療有效量抗原之免疫原性組合物為IngelvacCircoFLEX、CircoVac、PordlisPCV和/或SuvaxynPCV-2OneDose,其優(yōu)選為IngelvacCircoFLEXTM。如上所述，PCV2已經(jīng)鑒別為PRDC之一種相關(guān)病原體。大多^:罹患PRDC之豬對(duì)PCV2呈陽性(例如Kim等人，VeterinaryJournal(2003)166:251-256)。用PCV2抗原來治療豬使得PRDC之呼吸道癥狀減少(參見實(shí)施例3)。因此根據(jù)另一方面，本發(fā)明提供一種免疫預(yù)防及治療動(dòng)物之豬呼吸道疾病綜合征(PRDC)和/或與PRDC相關(guān)之任何臨床跡象的方法，其包含向需要此治療之動(dòng)物施用治療有效量之PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性組合物的步驟，其中該P(yáng)RDC或與PRDC相關(guān)之所述臨床跡象系與PCV2相關(guān)或由PCV2造成。此外，本發(fā)明亦提供一種免疫預(yù)防及治療動(dòng)物之豬呼吸道疾病綜合征(PRDC)和/或與PRDC相關(guān)之任何臨床跡象的方法，其包含向需要此治療之動(dòng)物施用治療有效量之PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性組合物的步驟，其中該P(yáng)RDC或與PRDC相關(guān)之所述臨床跡象系與PCV2及PRRSV、胸膜肺炎放線桿菌、豬肺炎支原體、支氣管敗血性博德特氏菌、豬流感病毒、豬鼻支原體、豬鏈球菌(Streptococcussuis)和/或多殺巴斯德氏菌相關(guān)或由其造成。因?yàn)镻CV2為PRDC之一種病原體，所以對(duì)PCV2呈陽性之畜群比不含PCV2之畜群具有更高的患上PRDC或患上更嚴(yán)重持續(xù)時(shí)間之具有嚴(yán)重臨床癥狀之PRDC的風(fēng)險(xiǎn)。本文中術(shù)語"對(duì)PCV2呈陽性之畜群"意謂畜群動(dòng)物之至少1%、優(yōu)選10%、更優(yōu)選30%、甚至更優(yōu)選50%、最優(yōu)選70。/。感染有PCV2或在任何時(shí)間變?yōu)楦腥居蠵CV2。此未必意謂該畜群之任何動(dòng)物均出現(xiàn)已知由PCV2造成之臨床癥狀(諸如PMWS或PRDC)。因此根據(jù)另一方面，本發(fā)明亦提供一種免疫預(yù)防及治療動(dòng)物之豬呼吸道疾病綜合征(PRDC)和/或與PRDC相關(guān)之任何臨床跡象的方法，其包含向需要此治療之動(dòng)物施用治療有于對(duì)PCV2呈陽性之畜群。PRDC和/或與PRDC相關(guān)之任何臨床跡象優(yōu)選系由PCV2造成。因?yàn)樵诠哺腥綪RDC之其它致病性病原體之動(dòng)物中，PRDC及PRDC之臨床癥狀亦可減輕或減少，所以本發(fā)明亦提供一種免疫預(yù)防及治療動(dòng)物之豬呼吸道疾病綜合征(PRDC)和/或與PRDC相關(guān)之任何臨床跡象的方法，其包含向需要此治療之動(dòng)物施用治療有效量之PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性組合物的步驟，其中該動(dòng)物屬于對(duì)PCV2及一或多種選自由PRRSV、豬肺炎支原體、胸膜肺炎放線桿菌、支氣管敗血性博德特氏菌、豬流感病毒、豬鼻支原體、豬鏈球菌和/或多殺巴斯德氏菌組成的組之其它病原體呈陽性的畜群。PRDC和/或與PRDC相關(guān)之任何臨床跡象優(yōu)選系由PCV2及至少一種其它PRDC致病性病原體造成。本文中術(shù)語"對(duì)PCV2及一或多種選自由PRRSV、豬肺炎支原體、胸膜肺炎放線桿菌、支氣管敗血性博德特氏菌、豬流感病毒、豬鼻支原體、豬鏈球菌和/或多殺巴斯德氏菌組成的組之其它病原體呈陽性的畜群"意謂畜群動(dòng)物之至少10%、優(yōu)選30%、更優(yōu)選50%、甚至更優(yōu)選70%感染有PCV2及至少一種下文列出之其它病原體或在任何時(shí)間變?yōu)楦腥居蠵CV2及至少一種下文列出之其它病原體感染。此未必意謂該畜群之任何動(dòng)物均出現(xiàn)已知由PCV2及至少一種上文列出之病原體造成之臨床癥狀(例如PRDC)。PRDC和/或與PRDC相關(guān)之任何臨床跡象優(yōu)選至少由PCV2造成。PRDC并非僅侵襲確定數(shù)目之動(dòng)物，其通常侵襲畜群之所有動(dòng)物(整個(gè)畜群)。換言之，若農(nóng)場(chǎng)中至少一只動(dòng)物發(fā)生PRDC，則PRDC之病原體持續(xù)存在于彼農(nóng)場(chǎng)之牲畜中。因此根據(jù)另一方面，本發(fā)明亦提供一種免疫預(yù)防及治療動(dòng)物之豬呼吸道疾病綜合征(PRDC)和/或與PRDC相關(guān)之任何臨床跡象的方法，其包含向需要此治療之動(dòng)物施用治療有效量之PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性組合物的步驟，其中該動(dòng)物屬于對(duì)PCV2呈陽性之畜群。PRDC和/或與PRDC相關(guān)之任何臨床跡象優(yōu)選系由PCV2造成。本文中術(shù)語"對(duì)PCV2呈陽性之畜群"意謂畜群動(dòng)物之至少1。/。、優(yōu)選10%、更優(yōu)選30%、甚至更優(yōu)選50%、最優(yōu)選70。/。感染有PCV2或在任何時(shí)間變?yōu)楦腥居蠵CV2。此未必意謂該農(nóng)場(chǎng)之任何動(dòng)物均出現(xiàn)已知由PCV2造成之臨床癥狀(諸如PMWS或PRDC)。PRDC和/或與PRDC相關(guān)之任何臨床跡象優(yōu)選系由PCV2造成。因?yàn)樵诠哺腥綪RDC之其它致病性病原體之動(dòng)物中，PRDC及PRDC之臨床癥狀亦可減輕或減少，所以本發(fā)明亦提供一種免疫預(yù)防及治療動(dòng)物之豬呼吸道疾病綜合征(PRDC)和/或與PRDC相關(guān)之任何臨床跡象的方法，其包含向需要此治療之動(dòng)物施用治療有效量之PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性組合物的步驟，其中該動(dòng)物屬于對(duì)PCV2及一或多種選自由PRRSV、豬肺炎支原體、胸膜肺炎放線桿菌、支氣管敗血性博德特氏菌、猿流感病毒、豬鼻支原體、豬鏈球菌和/或多殺巴斯德氏菌組成的組之其它病原體呈陽性的農(nóng)場(chǎng)。PRDC和/或與PRDC相關(guān)之任何臨床跡象優(yōu)選系由PCV2及至少一種其它PRDC致病性病原體造成。本文中術(shù)語"對(duì)PCV2及一或多種選自由PRRSV、豬肺炎支原體、胸膜肺炎放線桿菌、支氣管敗血性博德特氏菌、豬流感病毒、豬鼻支原體、豬鏈球菌和/或多殺巴斯德氏菌組成的組之其它病原體呈陽性的畜群"意謂畜群動(dòng)物之至少10%、優(yōu)選30%、更優(yōu)選50%、甚至更優(yōu)選70%感染有PCV2及至少一種下文列出之其它病原體或在任何時(shí)間變?yōu)楦腥居蠵CV2及至少一種下文列出之其它病原體。此未必意謂該畜群之任何動(dòng)物均出現(xiàn)已知由PCV2及至少一種上文列出之病原體造成之臨床癥狀(例如PRDC)。母源免疫性已顯示可賦予一定程度的對(duì)抗PCV2感染及與PCV2感染相關(guān)之臨床疾病之保護(hù)。此保護(hù)已顯示為效價(jià)依賴性較高效價(jià)通常具保護(hù)性，而較低效價(jià)不具保護(hù)性(McKeown等人，2005;Clin.Diagn.Lab.Immunol.;12:1347-1351)。斷乳動(dòng)物之平均抗體半衰期已估算為19.0天，在群體內(nèi)PCV2被動(dòng)抗體衰減窗相對(duì)較寬(Opriessnig等人，2004,J.SwineHealthProd.12:186-191)。母源抗體之存在不僅可賦予一定程度的對(duì)抗病毒感染之保護(hù)(然而其不可預(yù)測(cè))，而且已知亦可能削弱免疫作用之功效。已驚奇地發(fā)現(xiàn)抗PCV2抗體(尤其多至1:20480之抗PCV2抗體效價(jià))之存在不影響PCV2治療之功效。因此，根據(jù)另一方面，本發(fā)明亦提供一種預(yù)防及治療動(dòng)物之豬呼吸道疾病綜合征(PRDC)和/或與PRDC相關(guān)之任何臨床跡象的方法，其包含向具有抗PCV2抗體之需要此治療之動(dòng)物施用治療有效量的PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性組合物的步驟，優(yōu)選其中該動(dòng)物具有達(dá)1:100、優(yōu)選大于1:100、甚至更優(yōu)選大于1:250、甚至更優(yōu)選大于1:500、甚至更優(yōu)選1:640、甚至更優(yōu)選大于1:750、最優(yōu)選大于l:1000之可^r測(cè)抗PCV2抗體效價(jià)。優(yōu)選地，該抗PCV2抗體效價(jià)在特異性抗PCV2免疫檢定中、優(yōu)選在如實(shí)施例2中所述之檢定中可斗企測(cè)且可定量。檢測(cè)及定量抗PCV2抗體之方法為本領(lǐng)域已知。舉例而言，PCV2抗體之檢測(cè)及定量可由Magar等人，2000,Can.J.VetRes.;64:184-186或Magar等人，2000，J.Comp.Pathol.;123:258-269中所述之間接免疫熒光法進(jìn)行。定量抗PCV2抗體之其它檢定描述于Opriessnig等人，2006，美國(guó)豬獸醫(yī)協(xié)會(huì)第37屆年會(huì)(37"AnnualMeetingoftheAmericanAssociationofSwineVeterinarians)中。此外，實(shí)施例2亦描述一種本領(lǐng)域技術(shù)人員可使用之間接免疫熒光檢定。在結(jié)果有爭(zhēng)議及有任何疑問之情況下，本文所提及之抗PCV2效價(jià)系指由/可由實(shí)施例2中所述之檢定估算出之抗PCV2效價(jià)。才艮據(jù)另一更通用方面，本發(fā)明提供一種免疫預(yù)防年幼動(dòng)物中優(yōu)選與PCV2相關(guān)或由PCV2造成之PRDC,或減少由PRDC造成或與PRDC相關(guān)之臨床癥狀的方法，其包含向需要此治療之彼年幼動(dòng)物施用有效量之PCV2抗原的步驟。本文中術(shù)語"年幼動(dòng)物"系指1至22天齡之動(dòng)物。術(shù)語年幼動(dòng)物優(yōu)選意謂l至20天齡之動(dòng)物。術(shù)語年幼動(dòng)物更優(yōu)選系指1至15天齡、甚至更優(yōu)選l天齡至14天齡、甚至更優(yōu)選1至12天齡、甚至更優(yōu)選1至10天齡、甚至更優(yōu)選l至8天齡、甚至更優(yōu)選1至7天齡、甚至更優(yōu)選1至6天齡、甚至更優(yōu)選1至5天齡、甚至更優(yōu)選1至4天齡、甚至更優(yōu)選1至3天齡、甚至更優(yōu)選1或2天齡之動(dòng)物，最優(yōu)選系指l天齡之動(dòng)物。因此根據(jù)另一方面，本發(fā)明提供一種免疫預(yù)防年幼動(dòng)物中優(yōu)選與PCV2相關(guān)或由PCV2造成之PRDC,或減少由PRDC造成或與PRDC相關(guān)之臨床癥狀的方法，其包含向需要此治療之1至22天齡、優(yōu)選l至20天齡、更優(yōu)選1至15天齡、甚至更優(yōu)選1至14天齡、甚至更優(yōu)選1至12天齡、甚至更優(yōu)選1至10天齡、甚至更優(yōu)選1至8天齡、甚至更優(yōu)選1至7天齡、甚至更優(yōu)選1至6天齡、甚至更優(yōu)選1至5天齡、甚至更優(yōu)選1至4天齡、甚至更優(yōu)選1至3天齡、甚至更優(yōu)選1或2天齡、最優(yōu)選l天齡之動(dòng)物施用有效量之PCV2抗原的步驟。舉例而言，有證據(jù)證明在19至22天齡時(shí)進(jìn)行疫苗接種/治療展示高疫苗接種功效。此外，在12至18天齡時(shí)進(jìn)行疫苗接種/治療亦已展示可極有效減少與PRDC相關(guān)或由PRDC造成之臨床癥狀、降低總病毒負(fù)載量、縮減病毒血癥之持續(xù)時(shí)間、延遲病毒血癥之發(fā)作、體重增加。由于PCV2在野外普遍存在，所以大多數(shù)年幼仔豬關(guān)于PCV2呈血清陽性。因此根據(jù)另一方面，本發(fā)明提供一種優(yōu)選在疫苗接種當(dāng)天免疫預(yù)防具少由PRDC造成或與PRDC相關(guān)之臨床癥狀的方法，其包含向需要此治療之1至22天齡、優(yōu)選1至20天齡、更優(yōu)選1至15天齡、甚至更優(yōu)選1至14天齡、甚至更優(yōu)選1至12天齡、甚至更優(yōu)選1至10天齡、甚至更優(yōu)選1至8天齡、甚至更優(yōu)選1至7天齡、甚至更優(yōu)選1至6天齡、甚至更優(yōu)選1至5天齡、甚至更優(yōu)選1至4天齡、甚至更優(yōu)選1至3天齡、甚至更優(yōu)選1或2天齡、最優(yōu)選l天齡之動(dòng)物施用有效量之PCV2抗原的步驟。在疫苗接種/治療當(dāng)天，所述年幼動(dòng)物優(yōu)選具有在疫苗接種/治療當(dāng)天高達(dá)l:100、優(yōu)選大于I:IOO、甚至更優(yōu)選大于1:250、甚至更優(yōu)選大于1:500、甚至更優(yōu)選1:640、甚至更優(yōu)選大于1:750、最優(yōu)選大于1:1000之可4全測(cè)抗PCV2抗體效^介。如上所述，用PCV2抗原對(duì)罹患PRDC之動(dòng)物進(jìn)行疫苗接種/治療使得與未經(jīng)疫苗接種之對(duì)照動(dòng)物相比病毒血癥階段縮短。與相同物種之未經(jīng)疫苗接種之對(duì)照動(dòng)物相比，平均縮短時(shí)間為15.4天。因此，才艮據(jù)另一方面，本發(fā)PRDC，或減少由PRDC造成或與PRDC相關(guān)之臨床癥狀的方法，其包含向需要此治療的動(dòng)物施用有效量之PCV2抗原的步驟，其中與相同物種之未經(jīng)治療對(duì)照組之動(dòng)物相比，治療或免疫預(yù)防使得病毒血癥階段縮短5天或5天以上、優(yōu)選6天或6天以上、甚至更優(yōu)選7天或7天以上、甚至更優(yōu)選8天或8天以上、甚至更優(yōu)選9天、甚至更優(yōu)選10天、甚至更優(yōu)選12天、甚至更優(yōu)選14天、最優(yōu)選多于15天。一般而言，對(duì)罹患PRDC之豬進(jìn)行疫苗接種使得體重增加損失減小、臨床呼吸道征象(諸如咳嗽及呼吸困難)減少、病毒血癥持續(xù)時(shí)間較短、病毒血癥較早結(jié)束及病毒負(fù)載量較低。因此，根據(jù)另一方面，本發(fā)明提供一種治PRDC相關(guān)或由PRDC造成之臨床癥狀的方法，其包含向需要此治療之動(dòng)物施用有效量之PCV2抗原的步驟，其中該治療或免疫預(yù)防使得與相同物種之未經(jīng)治療對(duì)照組之動(dòng)物相比疫苗功效參數(shù)得以改良，所述疫苗功效參數(shù)系選自由體重增加損失減小、臨床呼吸道征象(諸如咳嗽及呼吸困難)減少、病毒血癥持續(xù)時(shí)間較短、病毒血癥較早結(jié)束、較低病毒負(fù)載量或其組合組成的組。本文中術(shù)語"有效量"意謂(但不限于)在該有效劑量之PCV2抗原所施用之動(dòng)物中引起或能夠引起免疫反應(yīng)的抗原量。有效量視疫苗成份及投藥時(shí)程而定。通常，當(dāng)在組合疫苗中使用失活病毒或經(jīng)修飾活病毒制劑時(shí)，疫苗含有每劑約10"至約10^TCID5。、優(yōu)選每劑約10"至約10S力TCID5Q、更優(yōu)選每劑約104()至約10801005()之量。詳言之，當(dāng)在疫苗中使用經(jīng)修飾活PCV2時(shí)，待施用易感動(dòng)物之推薦劑量?jī)?yōu)選為每劑約103'°TCIDs()(組織培養(yǎng)物感染劑量50。/。終點(diǎn))至每劑約106。TCIDso且更優(yōu)選為每劑約10"TCID5o至每劑約10"TCIDsq。一般而言，當(dāng)使用經(jīng)純化抗原時(shí)，抗原之量將介于0.2微克與5000微克之間，且介于10"與10^TCID50之間、優(yōu)選介于10"與l(fOTCID5o之間、更優(yōu)選介于10"與10"TCID5。之間。亞單位疫苗通常系以每劑至少0.2pg抗原、優(yōu)選每劑約0.2ng至約400嗎、更優(yōu)選每劑約0.3ng至約200pg、甚至更優(yōu)選每劑約0.35pg至約100Hg、更優(yōu)選每劑約0.4pg至約50|ig、更優(yōu)選每劑約0.45lag至約30pg、更優(yōu)選每劑約0.6lig至約16嗎、甚至更優(yōu)選每劑約0.75pg至約8(ig、甚至更優(yōu)選每劑約l.Ong至約6pg、更優(yōu)選每劑約1.3pg至約3.0pg之抗原含量施用。出人意料地發(fā)現(xiàn)前述免疫原性組合物之免疫預(yù)防用途可有效減少動(dòng)物中優(yōu)選至少由PCV2造成之PRDC造成或與其相關(guān)的臨床癥狀。此外，本文中所述之抗原組合物降低總圓環(huán)病毒負(fù)載量，其包括較遲發(fā)作、較短持續(xù)時(shí)間、病毒血癥較早結(jié)束及病毒負(fù)載量降低及其在雍患PRDC之動(dòng)物中之免疫抑制性影響，且進(jìn)而產(chǎn)生較高程度之一般疾病抵抗性及降低之PRDC發(fā)病率。根據(jù)本發(fā)明之組合物可經(jīng)皮內(nèi)、氣管內(nèi)或陰道內(nèi)施用。該組合物優(yōu)選可經(jīng)肌肉內(nèi)或鼻內(nèi)施用，最優(yōu)選經(jīng)月幾肉內(nèi)施用。在動(dòng)物體內(nèi)，可證實(shí)經(jīng)由靜脈內(nèi)或藉由直接注射入耙組織中來施用上述藥物組合物為有利的。就全身性施用而言，靜脈內(nèi)、血管內(nèi)、肌肉內(nèi)、鼻內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、經(jīng)口或鞘內(nèi)途徑優(yōu)選?？山?jīng)皮下、皮內(nèi)、皮膚內(nèi)、心臟內(nèi)、小葉內(nèi)、骨髓內(nèi)、肺內(nèi)或直接在待處理組織(結(jié)締組織、骨組織、月幾肉組織、神經(jīng)組織、上皮組織)中或其附近實(shí)現(xiàn)更局部施用。視治療之所需持續(xù)時(shí)間及有效性而定，可例如在每日基礎(chǔ)上一次或若干次(亦間歇地)歷時(shí)若干天、數(shù)周或數(shù)月且以不同劑量來施用根據(jù)本發(fā)明之組合物。優(yōu)選地，至少一個(gè)劑量之如上所述之免疫原性組合物系經(jīng)肌肉內(nèi)施用有需要之受檢者。根據(jù)另一方面，如本文中所述之PCV2抗原或包含任何此PCV2抗原之免疫原性組合物系裝入瓶中且以每劑一(l)mL之量施用。因此，根據(jù)另一方面，本發(fā)明亦提供一種包含如本文中所述之PCV-2抗原的1ml免道疾病綜合征(PRDC)和/或與其相關(guān)的任何臨床跡象，其包含向需要此治療的動(dòng)物施用有效量之PCV2抗原的步驟。根據(jù)另一方面，向有需要之受檢者給予至少一個(gè)劑量之如上所述之免疫原性組合物的至少一次進(jìn)一步投藥，其中該第二或任何進(jìn)一步投藥系在初始或任何先前投藥后給予至少14天。免疫原性組合物優(yōu)選與免疫刺激物一起施用。該免疫刺激物優(yōu)選給予至少兩次。優(yōu)選地，在免疫刺激物之第一次投藥與第二次或任何進(jìn)一步投藥之間為至少3天、更優(yōu)選至少5天、甚至更優(yōu)選至少7天。優(yōu)選地，在初始施用本文中提供之免疫原性組合物后給予免疫刺激物至少10天、優(yōu)選15天、甚至更優(yōu)選20天、甚至更優(yōu)選至少22天。優(yōu)選免疫刺激物為(例如)優(yōu)選用不完全佛氏佐劑(Freund'sadjuvant)(KLH/ICFA)乳化之匙孔螺血氰蛋白(keyholelimpethemocyanin;KLH)。然而，由此應(yīng)了解亦可使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知之任何其它免疫刺激物。本文中術(shù)語"免疫刺激物"意謂優(yōu)選在未起始或增強(qiáng)特異性免疫反應(yīng)(例如對(duì)抗特定病原體之免疫反應(yīng))之情況下，可觸發(fā)免疫反應(yīng)之任何藥劑或組合物。進(jìn)一步指示施用適合劑量之免疫刺激物。藥物的用途，其中該藥物系用于免疫預(yù)防及治療動(dòng)物之豬呼吸道疾病綜合征(PRDC)和/或與PRDC相關(guān)之任何臨床跡象。PRDC或與PRDC相關(guān)之臨床跡象優(yōu)選系至少由PCV2、更優(yōu)選以及一或多種其它病原體造成，所述病原體系選自由PRRSV、豬肺炎支原體、胸膜肺炎放線桿菌、支氣管敗血性博德特氏菌、猿(Simian)流感病毒、豬鼻支原體、豬鏈球菌和/或多殺巴斯德氏菌組成的組。更優(yōu)選地，PCV2抗原為重組抗原、優(yōu)選PCV20RF-2、甚至更優(yōu)選Ingelvac⑧CircoFLEXTM。本文所述"動(dòng)物"意謂豬類(swine)、豬(pig)或仔豬(piglet)。因此，根據(jù)另一方面，本發(fā)明提供一種免疫預(yù)防及治療豬之豬呼吸道疾病綜合征(PRDC)和/或與PRDC相關(guān)之任何臨床跡象的方法，其包含向需要此治療之豬施用治PRDC系至少由PCV2、優(yōu)選以及至少一種已知造成PRDC之其它病原體(例如PRRSV、豬肺炎支原體、胸膜肺炎放線桿菌、支氣管敗血性博德特氏菌、豬流感病毒、豬鼻支原體、豬鏈球菌和/或多殺巴斯德氏菌)造成。PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性組合物優(yōu)選為前述任一者，PCV2抗原最優(yōu)選為IngelvacCircoFLEX。優(yōu)選實(shí)施方式詳述以下實(shí)施例描述了本發(fā)明優(yōu)選的材料和方法。盡管在實(shí)施或測(cè)試本發(fā)明時(shí)可使用與本文所述類似或等效的任何方法和材料，但現(xiàn)在描述優(yōu)選的方法、裝置、以及材料。但應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅僅是舉例說明，不應(yīng)被視為對(duì)本發(fā)明總體范圍的任何限制。實(shí)施例l制備PCV2ORF-2抗原將初始SF+細(xì)胞培養(yǎng)物從液氮儲(chǔ)存器中取出，在無菌旋轉(zhuǎn)燒瓶中的Excell420培養(yǎng)基(JRHBiosciences,Inc.，Lenexa，KS)中懸浮培養(yǎng)，持續(xù)攪拌。使所述培養(yǎng)物在100-250mL旋轉(zhuǎn)燒瓶中含有25-150毫升Exce11420的無血清培養(yǎng)基中生長(zhǎng)。當(dāng)細(xì)胞增殖至細(xì)胞密度為1.0-8.0xl(^細(xì)胞/ml時(shí)，將其以0.5-1.5xl04田胞/ml的種植密度分至新容器中。隨后使經(jīng)過擴(kuò)大培養(yǎng)的培養(yǎng)物在至多36升旋轉(zhuǎn)燒瓶中或在至多300升不銹鋼生物反應(yīng)器中于25-29'C生長(zhǎng)2-7天時(shí)間。接種后，將燒瓶在27。C培育4小時(shí)。隨后，用含有PCV20RF-2基因(SEQIDNO:4)的重組桿狀病毒對(duì)每個(gè)燒瓶進(jìn)行接種。含有PCV2ORF-2基因的重組桿狀病毒按WO06/072065所述制備。在接種桿狀病毒后，將所述燒瓶在27士2。C培育7天，期間以100rpm攪拌。所述燒瓶使用通風(fēng)蓋以容許空氣流動(dòng)。培育后，收獲所得上清液，將其過濾以移除細(xì)胞碎片并滅活。上清液通過將溫度升至37士2。C而滅活，添加二元氮丙咬(binaryethlylenimine，BEI)至終濃度為5mM。隨后將樣品持續(xù)攪拌72-96小時(shí)。添加l.OM硫代硫酸鈉溶液，使最終最小濃度為5mM，以中和任何殘余BEI。在滅活后，添加約0.5-2.5毫克/劑的、經(jīng)磷酸鹽緩沖液及Carpopol緩沖的PCV2ORF-2。最終每一劑包含約16微克PCV2ORF-2抗原。實(shí)施例2抗PCV-2免疫分析將WO02/07721所述PK15(例如ATCCCCL-33)或VIDORl細(xì)胞接種至96孔板(約20.000-60.000個(gè)細(xì)胞/孔)。當(dāng)單層約65%至85%鋪滿時(shí)，將細(xì)胞用PCV2分離物感染。將經(jīng)感染的細(xì)胞培育48小時(shí)。移除培養(yǎng)基，用PBS將孔洗滌兩次。棄去洗滌緩沖劑，將細(xì)胞在約-20。C用冷50/50曱醇/丙酮固定劑(約100微升/孔)處理約15分鐘。棄去固定劑，所述板在空氣中干燥。在PBS中制備豬血清樣品的系列稀釋液，添加至所述板中，36.5士rC培育約l小時(shí)，若血清樣品中有抗體則能夠發(fā)生結(jié)合?？筆CV2的陽性及陰性對(duì)照樣品(陽性對(duì)照及陰性對(duì)照樣品)的系列稀釋液并行進(jìn)行。隨后將所述板用PBS洗滌三次。棄去PBS。隨后將所述板用在PBS中以1:100稀釋的市售山羊抗豬FITC偶聯(lián)物染色，36.5士rC培育約l小時(shí)，這樣能夠檢測(cè)出與感染細(xì)胞結(jié)合的抗體。在培育完成后，自培育箱中移出微滴板，棄去偶聯(lián)物，用PBS將所述板洗兩次。通過UV顯微鏡檢讀板，將各孔讀為陽性或陰性。用陽性對(duì)照及陰性對(duì)照樣品監(jiān)測(cè)該測(cè)試系統(tǒng)。若對(duì)照在預(yù)期范圍內(nèi)，則測(cè)試方法所用參數(shù)導(dǎo)致的結(jié)果是可接受的。用顯示特異性IFA反應(yīng)性的最高稀釋度計(jì)算血清抗體效價(jià)，用適合的Reed-Muench公式計(jì)算每一稀釋度的陽性孔數(shù)或50%終點(diǎn)。實(shí)施例3PCV2ORF-2(IngelvacCircoFLEXTM)在PRDC治療中的功效目的此研究旨在證實(shí)Ingelvac⑧CircoFLEX控制PCV2相關(guān)PRDC的功效。研究的實(shí)施此研究中包括1542只普通豬(conventionalpig),它們屬于三個(gè)連續(xù)周組(weekgroup),每組有約500只豬。將這些豬按照體重、以及是否一窩所生區(qū)分開，隨機(jī)分配至一個(gè)疫苗接種組01=769)及一個(gè)對(duì)照組(11=773)。-逸2:在研究當(dāng)天(第0天)，對(duì)約20日齡的豬進(jìn)行單次肌肉接種，所接種的是，作為活性物質(zhì)的含有PCV2ORFJ蛋白(RP為l(每劑1ml》的IngelvacCircoFLEX,及作為佐劑的Carbopol。對(duì)照組接受lml對(duì)照物品，其包含無PCV2ORF-2蛋白的細(xì)胞培養(yǎng)物上清液及作為佐劑的Carbopol。一W:未經(jīng)治療的豬。在肥育結(jié)束時(shí)(研究第22周)終止研究。摩記錄的參教參數(shù)記錄如下-個(gè)體體重(所有動(dòng)物)-"僵豬(mnt)"率(所有動(dòng)物)-臨床跡象(所有動(dòng)物)-死亡率(所有動(dòng)物)-血清中之PCV2病毒血癥病毒血癥之發(fā)作、結(jié)束、持續(xù)時(shí)間，病毒負(fù)載量(17%的研究動(dòng)物)-尸檢(若可能，每一只死亡或安樂死動(dòng)物)^場(chǎng)之發(fā)病/#況根據(jù)詞養(yǎng)及肥育農(nóng)場(chǎng)的發(fā)病史，動(dòng)物自肥育中期開始經(jīng)歷與豬呼吸道疾病綜合征(PRDC)相關(guān)之呼吸道癥狀。這些癥狀伴有肥育期間的體重增加程度降低(ADWG750-780g)及死亡率增加(5.5-6.6。/。)。此時(shí)被認(rèn)為涉及PRDC的病原體為PCV2、PRRSV、多殺巴斯德氏菌、支氣管敗血性博德特氏菌，有時(shí)還涉及SIV。此研究中還發(fā)現(xiàn)，豬肺炎支原體及豬鼻支原體與此疾病綜合征有關(guān)。有趣的是，此研究的結(jié)果表明，PRRSV和豬肺炎支原體的感染(infection)在PCV2病毒血癥發(fā)作的約4-6周前出現(xiàn)。然而，根據(jù)整個(gè)研究期間動(dòng)物死亡數(shù)、以及PCV2病毒血癥發(fā)作前后呼吸道癥狀的頻率來看，這些動(dòng)物一直未受這兩種感染性病原體影響(ratherunaffected)。結(jié)果體重、#重增>、乎坊每"體:T增^^D『G)在研究啟始時(shí)兩個(gè)處理組之體重相當(dāng)。在研究第17周及第22周，疫苗接種組之體重顯著高于安慰劑處理組之體重(分別為p二0.0007及pO.0001)。自研究啟始至研究第22周，疫苗接種組動(dòng)物比安慰劑處理組動(dòng)物多增重2.8kg。此對(duì)應(yīng)于，從研究啟始至研究第17周時(shí)疫苗接種組動(dòng)物的ADWG高13g/d,至研究第22周時(shí)疫苗接種組動(dòng)物的ADWG高18g/d。對(duì)于整個(gè)肥育期(研究第7-22周)而言，ADWG因此可乂人安慰劑處理組動(dòng)物的777g/d(相當(dāng)于過去的750-780g/dADWG)增加至疫苗接種組動(dòng)物的803g/d(表l及圖1)。^/,#,、雄f乂f》pX4D『G之^^(^f^"三個(gè)^i^之,r桌炎凝z)27<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>l)組間比較之t檢驗(yàn)之p值，ns:不顯著，***顯著，p《0.001A濕,之病善J^癥結(jié)果表明，疫苗接種組動(dòng)物的病毒血癥的發(fā)作略遲(晚1.5天)、結(jié)束得顯著較早(pO.OOOl)、持續(xù)時(shí)間顯著較短(pO.OOOl)、每只動(dòng)物之陽性取樣天數(shù)顯著較少(pO.OOOl)、且病毒負(fù)載量總體上顯著減少(pO.OOOl)。在研究第17周時(shí)觀測(cè)到有病毒血癥的動(dòng)物的比例最高，其中在安慰劑組中75%有病毒血癥，在疫苗接種組中28°/。有病毒血癥。<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>gE:每毫升之基因組等效物p值(組間比較的WilcoxonMann-whitaey^r驗(yàn))，ns:不顯著，***顯著，p<0.001A濕哞4毒J&癥與伴重之^^^'/:^圖2示出兩個(gè)處理組在整個(gè)研究期間取樣動(dòng)物的病毒負(fù)載量，以及兩個(gè)處理組在不同稱重時(shí)間點(diǎn)所有動(dòng)物活體重量的差異(對(duì)照產(chǎn)品(C。n加lProduct,CP)-研究用獸醫(yī)產(chǎn)品(InvestigationalVeterinaryProduct,IVP))。將體重差異曲線與表示病毒負(fù)載量的柱進(jìn)行比較可明顯發(fā)現(xiàn)，所觀測(cè)到的兩個(gè)處理組之間的體重差異(研究第17周及第22周)出現(xiàn)在病毒血癥發(fā)作(研究第14-16周)后。當(dāng)病毒負(fù)載量在研究第17周出現(xiàn)峰值后降低時(shí)，組間體重差異進(jìn)一步增加，直至肥育結(jié)束。這些信息一起表明，疫苗接種組在研究第17周及第22周所觀測(cè)到的較大體重增加與病毒血癥的發(fā)作、持續(xù)時(shí)間及水平有關(guān)聯(lián)。通過計(jì)算Spearman秩系數(shù)(rankcoefficient)證實(shí)，在研究第17周及第22周的安慰劑處理組動(dòng)物中，病毒血癥與增重之差異之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著相關(guān)性。安慰劑處理組動(dòng)物的低體重與病毒血癥早發(fā)作、持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)及病毒負(fù)載量高有關(guān)。而疫苗接種組動(dòng)物未發(fā)現(xiàn)此種相關(guān)性，表明疫苗接種組動(dòng)物體重較高是病毒血癥發(fā)作推遲、持續(xù)時(shí)間較短以及血液中病毒負(fù)載量較低的結(jié)果。虔裙卓在任一稱重時(shí)間點(diǎn)，未在疫苗接種組與安慰劑處理組之間觀測(cè)到僵豬率的顯著差異。在PCV2病毒血癥發(fā)作(研究第14-16周)后，兩個(gè)處理組的僵豬率都較低(2.2%-3.9%)。襲3;tf褚舉之化^(^f衣三個(gè)^邀之;r桌炎趁)<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>P:組間比較的t檢驗(yàn)的p值；pX).05無顯著性在病毒血癥發(fā)作前，主要臨床跡象為跛行(lameness)、咳嗽及腹瀉(diarrhea)(在8°/。-12°/。的動(dòng)物中)。這些跡象在兩個(gè)處理組中出現(xiàn)頻率相等。對(duì)死亡動(dòng)物進(jìn)行尸檢且隨后進(jìn)行微生物學(xué)檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，豬鏈球菌可能是引起跛行的感染性病原體，副豬嗜血菌(//<3￡附0//7^/arasM/s)及支氣管敗血性博德特氏菌可能是引起咳嗽的感染性病原體，溶血性大腸桿菌可能是腹瀉的原因。在病毒血癥發(fā)作后，在兩個(gè)處理組動(dòng)物中觀測(cè)到的主要臨床癥狀為咳嗽及跛行。其它感染性病原體的定期血清學(xué)分析物、及尸檢后的微生物學(xué)發(fā)現(xiàn)表明，PCV2病毒血癥伴有(在先的)PRRSV和豬肺炎支原體感染。這兩種病原體與PCV2—起形成PRDC的一部分，該部分被認(rèn)為引起病毒血癥發(fā)作后咳嗜t動(dòng)物^:增加。與安慰劑處理組動(dòng)物相比，在疫苗4妄種組動(dòng)物中咳嗽及呼吸困難的頻率分別降低12.2%及17.5%。但這些發(fā)現(xiàn)不具有任何統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。病毒血癥發(fā)作后的跛行頻率比病毒血癥發(fā)作前增加，最可能是由慢性豬鏈球菌關(guān)節(jié)炎所致，或由關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)虛弱造成，且以相同方式影響兩個(gè)處理組(p二0.8321)。同樣地，病毒血癥發(fā)作后其它臨床表現(xiàn)(腹瀉、皮膚異常、行為)的出現(xiàn)頻率在兩個(gè)處理組之間幾乎相等。在病毒血癥發(fā)作前，兩個(gè)處理組中死亡率相當(dāng)(疫苗接種組動(dòng)物5.20%，安慰劑處理組動(dòng)物5.17%)。在病毒血癥發(fā)作后，安慰劑處理組動(dòng)物具有比疫苗接種組動(dòng)物顯著較高的死亡率(疫苗接種組動(dòng)物1.51%,安慰劑處理組動(dòng)物3.68%,p=0.0127)。疫苗4妄種組動(dòng)物的死亡率比安慰劑處理組動(dòng)物的下降59%。結(jié)論所述研究已在肥育后期有典型PRDC癥狀的農(nóng)場(chǎng)進(jìn)行。豬在17-19周齡時(shí)發(fā)展出呼吸道癥狀、死亡率增加、且體重增加幅度減小。通過血清學(xué)及微生物學(xué)篩查發(fā)現(xiàn)，PCV2、PRRSV、豬肺炎支原體、豬鼻支原體及多殺巴斯德氏菌都可能參與此種疾病綜合征。與經(jīng)安慰劑處理之對(duì)照組相比，疫苗接種組的以下統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著表現(xiàn)值得注意-增重?fù)p失減小-死亡率降j氐-病毒血癥持續(xù)時(shí)間縮短、且病毒血癥較早結(jié)束-病毒負(fù)載量降低-咳嗽及呼吸困難減少如所預(yù)期，僵豬率未觀測(cè)到統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異，因?yàn)榻┴i的出現(xiàn)并非PRDC的典型表現(xiàn)。將這些表現(xiàn)匯總能得出以下結(jié)論1.本研究在肥育中期至后期受PRDC影響的畜群中進(jìn)行。PCV2顯然參與此種疾病綜合征，因?yàn)閮H在病毒血癥發(fā)作后觀測(cè)到呼吸道癥狀、增重?fù)p失及死亡率增加。2.用lngelvac⑧CircoFLEXTM對(duì)動(dòng)物進(jìn)行疫苗接種可降低或甚至防止與PCV2關(guān)聯(lián)性PRDC有關(guān)的臨床相關(guān)性決定因素。權(quán)利要求1.PCV2抗原或含PCV2抗原的免疫原性組合物的制藥用途，所述藥物是用于預(yù)防及治療動(dòng)物的豬呼吸道疾病綜合征(PRDC)和/或任何與PRDC相關(guān)的臨床跡象的藥物。2.權(quán)利要求l的用途，所述藥物以治療有效量施用需要此治療之動(dòng)物。3.權(quán)利要求1或2的用途，其中與PRDC相關(guān)的臨床跡象選自由咳嗽及呼吸困難、生長(zhǎng)緩慢、飼料效率降低、昏睡、厭食和/或在肥育中期至后期死亡率顯著增加組成的組。4.權(quán)利要求3的用途，其中該咳嗽及呼吸困難是難以用抗生素療法治愈的咳嗽及呼吸困難。5.權(quán)利要求l-4之一的用途，其中該P(yáng)RDC與PCV2感染相關(guān)。6.權(quán)利要求5的用途，其中該P(yáng)RDC由PCV2造成。7.權(quán)利要求6的用途，其中該P(yáng)RDC進(jìn)一步與下列病原體的感染相關(guān)和/或由下列病原體的感染造成PRRSV、豬肺炎支原體(i^/cop/ww"/z_yo/"￡wwom'ae)、支氣管敗血性十專德、特氏菌(5。niete〃aZro"c/^e/Z7.co)、豬^L感病毒(Swineinfluenzavirus)、胸月篦月申炎》文線桿菌(」c"wc^a"7/tw//ewro戸e謂om.ae)、豬鼻支原體(7l^cop/aswa/^or/z/m'力、豬鏈球菌(5^e/tococcMSsw/力和/或多殺巴斯德氏菌(PosfeM廠e〃amw/to"Via)。8.權(quán)利要求l-7之一的用途，其中該動(dòng)物屬于PCV2陽性的畜群。9.權(quán)利要求l-8之一的用途，其中該動(dòng)物屬于PCV2及一或多種選自下組的其它病原體陽性的畜群PRRSV、豬肺炎支原體、支氣管敗血性博德特氏菌、豬流感病毒、豬鼻支原體、豬鏈球菌和/或多殺巴斯德氏菌。10.權(quán)利要求l-9之一的用途，其中該動(dòng)物屬于PCV2陽性農(nóng)場(chǎng)的動(dòng)物。11.權(quán)利要求1-10之一的用途，其中該動(dòng)物屬于PCV2及一或多種選自下組的其它病原體陽性的農(nóng)場(chǎng)PRRSV、豬肺炎支原體、支氣管敗血性博德特氏菌、豬流感病毒、豬鼻支原體、豬鏈球菌和/或多殺巴斯德氏菌。12.權(quán)利要求l-ll之一的用途，其中該P(yáng)CV2抗原是與PCV2的ORF-2具有至少80%同源性的多肽。13.權(quán)利要求1-12之一的用途，其中該P(yáng)CV-2抗原是由重組桿狀病毒表達(dá)的PCV2ORF-2。14.權(quán)利要求1-13之一的用途，其中該P(yáng)CV2抗原為IngelvacCircoFLEXTM。15.權(quán)利要求1-14之一的用途，其中該動(dòng)物為豬。16.預(yù)防及治療動(dòng)物之豬呼吸道疾病綜合征(PRDC)和/或與PRDC相關(guān)之任何臨床跡象的方法，包括對(duì)需要此種治療的動(dòng)物施用治療有效量的PCV2抗原或含PCV2抗原的免疫原性組合物。17.權(quán)利要求16的方法，其中與PRDC相關(guān)之臨床跡象系選自由咳嗽及呼吸困難、生長(zhǎng)緩慢、飼料效率降低、昏睡、厭食和/或在肥育中期至后期死亡率顯著增加組成的組。18.權(quán)利要求17的方法，其中該咳嗽及呼吸困難是難以用抗生素療法治愈的咳p軟及呼，吸困。19.權(quán)利要求16至18之一的方法，其中該P(yáng)RDC與PCV2感染相關(guān)。20.權(quán)利要求19的方法，其中該P(yáng)RDC由PCV2造成。21.權(quán)利要求20的方法，其中該P(yáng)RDC進(jìn)一步與下列病原體的感染相關(guān)和/或由下列病原體的感染造成PRRSV、豬肺炎支原體、支氣管敗血性博德特氏菌、豬流感病毒、胸膜肺炎放線桿菌、豬鼻支原體、豬鏈球菌和/或多殺巴斯德氏菌。22.權(quán)利要求16至21之一的方法，其中該動(dòng)物屬于PCV2陽性的畜群。23.權(quán)利要求16至22之一的方法，其中該動(dòng)物屬于PCV2及一或多種選自下組的其它病原體陽性的畜群PRRSV、豬肺炎支原體、支氣管敗血性博德特氏菌、豬流感病毒、豬鼻支原體、豬鏈球菌和/或多殺巴斯德氏菌。24.權(quán)利要求16至23之一的方法，其中該動(dòng)物屬于PCV2陽性的農(nóng)場(chǎng)。25.權(quán)利要求16至24之一的方法，其中該動(dòng)物屬于PCV2及一或多種選自下組的其它病原體陽性的農(nóng)場(chǎng)PRRSV、豬肺炎支原體、支氣管敗血性博德特氏菌、豬流感病毒、豬鼻支原體、豬鏈球菌和/或多殺巴斯德氏菌。26.權(quán)利要求16至25之一的方法，其中該P(yáng)CV2抗原是與PCV2ORF-2具有至少80%同源性的多肽。27.權(quán)利要求16至26之一的方法，其中該P(yáng)CV-2抗原是由重組桿狀病毒表達(dá)的PCV2ORF-2。28.權(quán)利要求16至27之一的方法，其中該P(yáng)CV2抗原為IngelvacCircoFLEXTM。29.權(quán)利要求16至28之一的方法，其中該動(dòng)物為豬。全文摘要本發(fā)明涉及包含豬2型圓環(huán)病毒(PCV2)抗原的免疫原性組合物用于預(yù)防及治療動(dòng)物、尤其豬的豬呼吸道疾病綜合征(PRDC)的用途。文檔編號(hào)C12N15/866GK101578110SQ200880001731公開日2009年11月11日申請(qǐng)日期2008年1月2日優(yōu)先權(quán)日2007年1月3日發(fā)明者伊莎貝爾·弗賴因馮里奇索芬,克努特·埃爾伯斯,弗朗索瓦-澤維爾·奧維倫,瑪麗昂·基克斯莫勒,維基·法欽格,阿克塞爾·利謝夫斯基申請(qǐng)人:貝林格爾.英格海姆維特梅迪卡有限公司