專利名稱：一種蕎麥蛋白生物活性肽的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種蕎麥蛋白生物活性肽的制備方法。
背景技術(shù)：
蛋白經(jīng)酶水解后得到的多肽比原蛋白和氨基酸更易被人體吸收，這些多 肽具有多種生物活性，如促進(jìn)免疫、激素調(diào)節(jié)、抗菌、抗氧化、抗病毒、降 血壓、降血脂等功能。以各種蛋白為原料，選擇適合其水解的酶類，以獲得 具有多種營(yíng)養(yǎng)性和功能性的多肽，已成為蛋白質(zhì)開發(fā)與利用的重要方向之一。
蕎麥蛋白質(zhì)含量豐富，且必需氨基酸配比適宜，但其消化吸收利用率較 低，這與蕎麥種子中存在抗?fàn)I養(yǎng)因子(如胰蛋白酶抑制劑、單寧等)以及蕎 麥蛋白質(zhì)對(duì)蛋白酶的低敏感性有關(guān)。此外，膳食纖維、多糖、植酸、高濃度 蘆丁等對(duì)胰蛋白酶活性也具有抑制作用，進(jìn)而影響消化吸收。而蕎麥蛋白水 解及其水解產(chǎn)物活性多肽的研究較晚，而且也沒有全面深入的探討。

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題與缺陷，本發(fā)明的目的是提供一種適宜工業(yè) 化大批量生產(chǎn)的蕎麥蛋白生物活性肽的制備方法，酶解的工藝過程及工藝參 數(shù)，以期提高蕎麥蛋白的水解效率，為蕎麥蛋白的生產(chǎn)與利用提供理論與技 術(shù)依據(jù)。
實(shí)施上述發(fā)明目的的技術(shù)方案是一種蕎麥蛋白生物活性肽的制備方法， 其特征在于，包括下列步驟
1. 一種蕎麥蛋白生物活性肽的制備方法，其特征在于，包括下列步驟
1 )將蕎麥蛋白溶解于pH6.0 12.0的NaOH溶液中，使蛋白濃度達(dá)到15 21g/L;
2) 在30 50 。C下，加入4000 6500 U/g堿性蛋白酶，水解1 3h，水 解度為30 55%;
3) 將水解后的蛋白肽溶液于95 10(TC水浴中保溫10min鈍化酶后，10 000 rpm離心40min，清液經(jīng)真空冷凍干燥即得蕎麥蛋白生物活性肽的干粉。
本發(fā)明蕎麥蛋白生物活性肽的制備方法的最佳工藝條件為
1) 將蕎麥蛋白溶解于pH9.8的NaOH溶液中，使蛋白濃度達(dá)到18g/L;
2) 在4(TC下，加入5 500U/g堿性蛋白酶，水解2h，水解度為46%;
3) 將水解后的蛋白肽溶液于95 100'C水浴中保溫10min鈍化酶后，10 000 rpm離心40min，清液經(jīng)真空冷凍干燥即得蕎麥蛋白生物活性肽的干粉。
我國(guó)蕎麥的種植面積約200萬公頃，年產(chǎn)量60 95萬噸，位居世界第二， 僅次于俄羅斯。大批量水解蕎麥蛋白，對(duì)于開發(fā)新的具有特殊生物活性的小 分子活性肽產(chǎn)品，有效利用蕎麥蛋白資源，擴(kuò)大蕎麥蛋白的應(yīng)用領(lǐng)域均具有 重要作用。
本發(fā)明的蕎麥蛋白生物活性肽的制備方法簡(jiǎn)單，適宜工業(yè)化大批量生產(chǎn)。


圖1是蕎麥蛋白生物活性肽的電泳圖。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1
1) 將蕎麥蛋白溶解于pH6.0的NaOH溶液中，使蛋白濃度達(dá)到15g/L;
2) 在4(TC下，加入4000U/g堿性蛋白酶，水解2h，水解度為40%; 3)將水解后的蛋白肽溶液于95"C水浴中保溫10min鈍化酶后，10 000 rpm 離心40min，清液經(jīng)真空冷凍干燥即得蕎麥蛋白生物活性肽的干粉。 實(shí)施例2
1) 將蕎麥蛋白溶解于pH8.0的NaOH溶液中，使蛋白濃度達(dá)到18g/L;
2) 在3(TC下，加入5000U/g堿性蛋白酶，水解1.5h，水解度為30%;
3) 將水解后的蛋白肽溶液于97'C水浴中保溫10min鈍化酶后，10 000 rpm 離心40min，清液經(jīng)真空冷凍干燥即得蕎麥蛋白生物活性肽的干粉。
實(shí)施例3
1) 將蕎麥蛋白溶解于pH12.0的NaOH溶液中，使蛋白濃度達(dá)到21g/L;
2) 在50。C下，加入6500U/g堿性蛋白酶，水解3h，水解度為55%;
3) 將水解后的蛋白肽溶液于96"C水浴中保溫浴中保溫10min鈍化酶后， 10 000 rpm離心40min，清液經(jīng)真空冷凍干燥即得蕎麥蛋白生物活性肽的干 粉。
實(shí)施例4
1) 將蕎麥蛋白溶解于pH9.8的NaOH溶液中，使蛋白濃度達(dá)到18g/L;
2) 在4(TC下，加入5 500U/g堿性蛋白酶，水解2h，水解度為46%;
3) 將水解后的蛋白肽溶液于IO(TC水浴中保溫10min鈍化酶后，10 000 rpm離心40min，清液經(jīng)真空冷凍干燥即得蕎麥蛋白生物活性肽的干粉。
實(shí)施例5:蕎麥蛋白生物活性多肽的分子量分布
蕎麥蛋白水解度(Y)與底物濃度(XI)、溫度(X2)、 pH值(X3)、酶 用量(X4)、酶解時(shí)間(X5)在編碼空間的多元回歸模型如下
7=16.252+1.3 62X廣1.322^3+3.054Z4+2.551￥5-1.68Z￥22-0.816%32+1.672%52-1 .430U2-1.936^2Zrl .611X2Z5+2.360Z4Z5
本發(fā)明實(shí)施例4制備的蕎麥蛋白生物活性肽的分電泳圖所示(見圖1)。 圖中結(jié)果表明，蕎麥蛋白的分子量主要分布在20 000 43 000 Da，在31 000 43 000 Da之間有密集條帶區(qū)，在稍高于20 000 Da也有一段條帶。蕎麥多肽 平均鏈長(zhǎng)為2.19，平均分子量為259Da。這說明蕎麥蛋白經(jīng)堿性蛋白酶水解 后得到了分子量較小的多肽混合物，多肽的分子量分布較為均勻。
實(shí)施例6 :蕎麥蛋白生物活性多肽的抗氧化性能
蕎麥多肽的羥自由基清除率可以達(dá)到45.40%, ABTS (2,2-連氮基-3-乙基 苯并噻吡咯啉-6-磺酸)自由基清除率可以達(dá)到99.05%，超氧陰離子清除率為 80.33%， DPPH(2， 2-diphenyl-2-picryl-hydrazyl)清除率達(dá)46.6%，亞油酸氧化 抑制率達(dá)84.80%， ACE抑制率為52.37%。除Fe"還原/抗氧化能力外，蕎麥 多肽的其它抗氧化活性都優(yōu)于蕎麥蛋白。
可見，蕎麥多肽具有較高的抗氧化性，能夠清除體內(nèi)的自由基，因此可 以作為抗氧化劑，有著廣泛的應(yīng)用前景。
權(quán)利要求
1. 一種蕎麥蛋白生物活性肽的制備方法，其特征在于，包括下列步驟1)將蕎麥蛋白溶解于pH6.0～12.0的NaOH溶液中，使蛋白濃度達(dá)到15～21g/L；2)在30～50℃下，加入4000～6500U/g堿性蛋白酶，水解1～3h，水解度為30～55％；3)將水解后的蛋白肽溶液于95～100℃水浴中保溫10min鈍化酶后，10000rpm離心40min，清液經(jīng)真空冷凍干燥即得蕎麥蛋白生物活性肽的干粉。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的蕎麥蛋白生物活性肽的制備方法，其特征在于 工藝條件為1) 將蕎麥蛋白溶解于pH9.8的NaOH溶液中，使蛋白濃度達(dá)到18g/L;2) 在40"C下，加入5 500U/g堿性蛋白酶，水解2h，水解度為46%;3) 將水解后的蛋白肽溶液于97。C水浴中保溫10min鈍化酶后，10 000 rpm 離心40min，清液經(jīng)真空冷凍干燥即得蕎麥蛋白生物活性肽的干粉。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種蕎麥蛋白生物活性肽的制備方法，該方法是將蕎麥蛋白溶解于pH6.0～12.0的NaOH溶液中，使蛋白濃度達(dá)到15～21g/L；在30～50℃下，加入4000～6500U/g堿性蛋白酶，水解1～3h，水解度為30～55％；將水解后的蛋白肽溶液于95～100℃水浴中保溫10min鈍化酶后，10000rpm離心40min，清液經(jīng)真空冷凍干燥即得蕎麥蛋白生物活性肽的干粉。該制備方法簡(jiǎn)單，適宜工業(yè)化大批量生產(chǎn)。
文檔編號(hào)C12P21/06GK101381759SQ200810231878
公開日2009年3月11日 申請(qǐng)日期2008年10月24日 優(yōu)先權(quán)日2008年10月24日
發(fā)明者凡 豐, 張國(guó)權(quán), 羅勤貴, 梅 高 申請(qǐng)人:西北農(nóng)林科技大學(xué)