專利名稱：：抗旱相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子及其編碼基因與應用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及抗旱相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子及其編碼基因與應用。
背景技術(shù)：
：由于氣候逐漸變暖，干旱、半干旱地區(qū)逐漸擴大，面對水資源逐漸匱乏的壓力，改良樹木的抗旱能力，提高樹木水分利用效率，對于保障我國林業(yè)經(jīng)濟發(fā)展具有重要意義?？购祷虻霓D(zhuǎn)錄調(diào)控對于樹木的抗旱是非常重要的，樹木的抗旱性是受多基因控制的復雜性狀，DREB(DehydrationResponsiveElementBinding)轉(zhuǎn)錄因子可以調(diào)控多個與干旱、高鹽耐性相關(guān)功能基因的表達。DREB轉(zhuǎn)錄因子與順式作用元件DRE(DehydrationResponsiveElement)結(jié)合調(diào)控抗旱相關(guān)基因的表達，保護自身免受傷害。DREB轉(zhuǎn)錄因子屬AP2/EREBP類家族轉(zhuǎn)錄因子。AP2/EREBP類家族轉(zhuǎn)錄因子存在多種植物中，在植物中AP2/EREBP功能保守域是DREB類轉(zhuǎn)錄因子的特異性結(jié)構(gòu)，調(diào)控植物對干旱、高鹽脅迫的分子應答，參與調(diào)控植物的干旱、高鹽等信號途徑。DREB類某些基因能接受環(huán)境脅迫信號并啟動逆境應答基因，使得植物耐逆性提高。桃樹作為一種重要的經(jīng)濟作物，改善其耐逆性表現(xiàn)特征一直是桃樹育種研究的重要目的之一。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種抗旱相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子及其編碼基因與應用。本發(fā)明所提供抗旱相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子，命名為PpDREBl，來源于桃樹(Pru皿spersica)，是如下a)或b)的蛋白a)由序列表中序列2所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；b)在序列表中序列2的氨基酸序列經(jīng)過取代和/或缺失和/或添加一個或幾個氨基酸且與抗旱相關(guān)的由a)衍生的轉(zhuǎn)錄因子。為了使a)的PpDREBl蛋白質(zhì)便于純化，可在由序列表中序列2所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)的氨基末端或羧基末端連接上如表1所示的標簽。表1.標簽的序列<table>tableseeoriginaldocumentpage3</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>上述b)中的PpDREBl蛋白質(zhì)可人工合成，也可先合成其編碼基因，再進行生物表達得到。上述b)中的PpDREBl蛋白質(zhì)的編碼基因可通過將序列表中序列1所示的DNA序列中缺失一個或幾個氨基酸殘基的密碼子，和/或進行一個或幾個堿基對的錯義突變，和/或在其5'端和/或3'端連上表l所示的標簽的編碼序列得到。所述蛋白的編碼基因也屬于本發(fā)明的保護范圍。所述蛋白的編碼基因，是如下1)至3)中任一所述的基因；1)其核苷酸序列是序列表中序列1;2)在嚴格條件下與1)限定的DNA片段雜交且編碼與抗旱相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子的DNA分子；3)與1)或2)的基因具有90%以上的同源性，且編碼與抗旱相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子的DNA分子。所述步驟3)中的基因，與1)的基因最好有95%以上的同源性。上述嚴格條件可為在6XSSC，0.5%SDS的溶液中，在68°C下雜交，然后用2XSSC，0.1%SDS和1XSSC，0.1%SDS各洗膜一次。擴增PpDREBl基因全長或任一片段的引物對也屬于本發(fā)明的保護范圍。含有上述PpDREBl基因的重組載體、轉(zhuǎn)基因細胞系和重組菌也屬于本發(fā)明的保護范圍?？捎矛F(xiàn)有的植物表達載體構(gòu)建含有PpDREBl基因的重組表達載體。所述植物表達載體包括雙元農(nóng)桿菌載體和可用于植物微彈轟擊的載體等，如pCAMBIA3301、pCAMBIA1300、pBI121、pBinl9、pCAMBIA2301、pCAMBIA1301-UbiN或其它衍生植物表達載體。攜帶有本發(fā)明的PpDREBl基因的植物表達載體可通過Ti質(zhì)粒、Ri質(zhì)粒、植物病毒載體、直接DNA轉(zhuǎn)化、顯微注射、電導、農(nóng)桿菌介導等常規(guī)生物學方法轉(zhuǎn)化到植物細胞或組織中。使用PpDREBl基因構(gòu)建重組植物表達載體時，在其轉(zhuǎn)錄起始核苷酸前可加上任何一種增強型、組成型、組織特異型或誘導型啟動子，如花椰菜花葉病毒(CAMV)35S啟動子、泛生素基因Ubiquitin啟動子(pUbi)等，它們可單獨使用或與其它的植物啟動子結(jié)合使用；此外，使用本發(fā)明的基因構(gòu)建植物表達載體時，還可使用增強子，包括翻譯增強子或轉(zhuǎn)錄增強子，這些增強子區(qū)域可以是ATG起始密碼子或鄰接區(qū)域起始密碼子等，但必需與編碼序列的閱讀框相同，以保證整個序列的正確翻譯。所述翻譯控制信號和起始密碼子的來源是廣泛的，可以是天然的，也可以是合成的。翻譯起始區(qū)域可以來自轉(zhuǎn)錄起始區(qū)域或結(jié)構(gòu)基因。為了便于對轉(zhuǎn)基因植物細胞或植物進行鑒定及篩選，可對所用植物表達載體進行加工，如加入可在植物中表達可產(chǎn)生顏色變化的酶或發(fā)光化合物的基因(GUS基因、螢光素酶基因等)、具有抗性的抗生素標記物(慶大霉素標記物、卡那霉素標記物等)或是抗化學試劑標記基因(如抗除莠劑基因)等。本發(fā)明的另一個目的是提供一種培育抗旱植物的方法。4本發(fā)明所提供的培育抗旱植物的方法，是將所述的PpDREBl基因?qū)胫参锛毎校玫娇购的芰μ岣叩霓D(zhuǎn)基因植物。本發(fā)明的PpDREBl轉(zhuǎn)錄因子基因編碼的蛋白含有一個高度保守的AP2/EREBP結(jié)構(gòu)域、一個核定位信號和一個激活域，屬于AP2/EREBP類家族轉(zhuǎn)錄因子的新成員。PpDREBl在桃樹根、莖和葉中都表達，同時PpDREBl表達被ABA和干旱誘導，PpDREBlmRNA累積速度較快，高鹽和低溫也能誘導PpDREBl高效表達。PpDREBl蛋白具有明顯的轉(zhuǎn)錄激活能力，用PpDREBl基因培育的擬南芥抗旱性明顯增強。圖1為SDS-PAGE分析結(jié)果。圖2為PpDREBl基因組織特異性表達。圖3為PpDREBl基因受脅迫條件誘導表達。圖4為pGEX-4Tl-PpDREBl表達載體的構(gòu)建示意圖。圖5為Y印GAP-PpDREBl表達載體的構(gòu)建示意圖。圖6為pCAMBIA1304-PpDREBl表達載體的構(gòu)建示意圖。圖7為轉(zhuǎn)pCAMBIA1304-PpDREBl擬南芥和轉(zhuǎn)pCAMBIA1304擬南芥根系比較。具體實施例方式實施例1、桃樹PpDREB1基因的克隆用Promega尺嫩§61^5總RNA提取試劑盒提取生長15天的桃樹幼苗的總RNA，用Stratagene試劑盒構(gòu)建cDNA文庫。采用酵母單雜交系統(tǒng)篩選cDNA文庫。取cDNA轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域(AD)融合表達文庫的質(zhì)粒20iig進行轉(zhuǎn)化后，涂布到含15mmol/L3-AT的SD/附8-/^￡1-/1611-選擇性培養(yǎng)基上，3(TC培養(yǎng)3d。選取生長較旺盛的酵母菌落，在含30mmo1/L341的50/附8-川1^-/161!-選擇性培養(yǎng)基上培養(yǎng)，對陽性克隆進行P-半乳糖甘酶活性檢領(lǐng)"得到8個陽性克隆。提取陽性克隆質(zhì)粒DNA，用限制內(nèi)切酶Sal1、NotI進行雙酶切，連到T載體構(gòu)建重組載體T，進行測序。測序結(jié)果中有1個cDNA克隆編碼的蛋白含有AP2/EREBP結(jié)構(gòu)域，且具有完整的編碼框，命名為PpDREBl。PpDREBl基因的核苷酸序列如序列表中序列1所示，長為814bp，含有522bp的開放閱讀框架，編碼的230個氨基酸組成的多肽，其氨基酸序列如序列表中的序列2。利用帶有EcoRI和SalI酶切位點的引物PPF(5'-AACAGAATTCTGGACATGTTCTCCGCTC-3')和PPR(5'-ACCAGTCGACGATAGAGAAACTCCATAA-3')，以重組載體T為模板，進行PCR擴增，獲得片段A，片段A通過瓊脂糖凝膠電泳回收，用EcoRI和SalI雙酶切回收的片段A，然后將EcoRI和SalI雙酶切過的片段A連入酶切的pGEX_4T_l載體，構(gòu)建融合GST基因的原核表達載體pGEX-4T1-PpDREB1。pGEX-4Tl-PpDREBl表達載體的構(gòu)建過程如圖4所示。將pGEX-4Tl-PpDREBl和pGEX_4T_l分別轉(zhuǎn)入大腸桿菌XL1-Blue，獲得重組菌PpDREBl和重組菌4T-1，提取IPTG誘導下重組菌PpDREBl和重組菌4T-1的總蛋白，進行SDS-PAGE分析。SDS-PAGE檢測結(jié)果如圖l，表明PpDREBl基因在大腸桿菌中表達。圖l中，"l"代表為誘導的重組菌4T-1，"2"為未誘導的重組菌PpDREBl，"3-6"為誘導的重組菌PpDREBl，"M"為Markero實施例2、PpDREBl基因編碼轉(zhuǎn)錄因子提取將在25t:恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)15天的桃樹幼苗不同組織的總RNA，進行Northorn雜交。將在25。C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)15天的桃樹幼苗，分別置于干旱條件、高鹽溶液、ABA溶液中進行干旱、低溫、高鹽、ABA處理。脅迫處理后將材料放入液氮速凍。通過Promga公司RNA提取試劑盒提取不同脅迫處理下的桃樹幼苗的總RNA，進行Northorn雜交。Northorn雜交結(jié)果如圖2和3所示，PpDREBl基因在桃樹植株中的表達呈現(xiàn)了組織特異性的特點；PpDREBl在根中的表達量最高，在莖中的表達量沒有根中的高，而在葉中的表達量最低。PpDREBl的表達受脅迫條件的誘導，干旱和高鹽能誘導PpDREBl的高效表達；在ABA處理時，PpDREBl基因表達量的增加；低溫處理時，PpDREBl的誘導表達特別緩慢，與干旱條件下PpDREBl的表達相比，表達量增加的比較少。圖2中，"L"為葉，"R"為根，"S"為莖。上述結(jié)果說明PpDREBl可能參與了干旱和高鹽脅迫信號轉(zhuǎn)導途徑。EcoRI和SalI雙酶切片段A，回收后連接到同樣雙酶切的Y印GAP載體(MATCHMAKERTranscription-activationSystem,Clontech公司)(沒有GAL4domain)酵母表達載體上，構(gòu)建重組載體Y印GAP-PpDREBl，構(gòu)建過程如圖5。重組載體Y印GAP-PpDREBl轉(zhuǎn)入大腸桿菌XL1-Blue構(gòu)建得到重組菌X-PpDREBl。將含有4個DRE元件的片段5，-GAATTC-DRE-DRE-DRE-DRE-GTCGAC_3，(DRE的核心序列TACCGACAT)分別構(gòu)建到pHis-1載體(MATCHMAKEROne-HybridSystem，Clontech公司)的PminHIS3啟動子和pLacZi載體(MATCHMAKEROne-HybridSystem，Clontech公司)PCTCI啟動子上游，分別得到重組載體pHis-l-DRE和pLacZi-DRE，用XhoI和NcoI內(nèi)切酶分別將pHis-l-DRE和pLacZi-DRE載體切成線狀。先將線狀pHis-l-DRE載體轉(zhuǎn)化到酵母細胞(YM4271株系，MATCHMAKEROne-HybridSystem,Clontech公司)內(nèi)，獲得能在SD/His—培養(yǎng)基上正常生長的酵母轉(zhuǎn)化子(Yeasttransformant)，接著以這種酵母轉(zhuǎn)化子為寄主細胞，繼續(xù)轉(zhuǎn)化含有4個重復DRE元件的pLacZi-DRE載體，這樣在同時缺乏組氨酸和尿嘧啶的SD/His7Ura—培養(yǎng)基上，選擇獲得含有pHis-l-DRE和pLacZi-DRE的雙報告基因His3和LacZ的酵母菌，獲得帶有DRE-box且含有雙報告基因His3和LacZ的酵母菌預4271。將4個DRE元件的核心序列CCGAC突變成TTTTT(MDRE)，即5'-GAATTC-MDRE-MDRE-MDRE-MDRE-GTCGAC-3'，按正常的雙重酵母報道子構(gòu)建方法，再構(gòu)建帶突變的DRE-box的雙報告基因His3和LacZ的酵母菌YM4271。重組質(zhì)粒Y印GAP-PpDREBl和載體Y印GAP，用熱激法分別轉(zhuǎn)入帶有DRE-box且含有雙報告基因His3和LacZ的酵母菌預4271和帶突變的DRE-box的雙報告基因His3和LacZ的酵母菌預4271中，在SD/His—Ura—Leu—培養(yǎng)基上篩選出轉(zhuǎn)化子，挑取陽性克隆，從酵母中提取質(zhì)粒DNA進行PCR檢測。PCR產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果表明，含有一條特異性的片段，且與DRE-box的大小一致，說明已經(jīng)將Y印GAP-PpDREBl轉(zhuǎn)入帶有DRE-box且含有雙報告基因His3和LacZ的酵母菌預4271和帶突變的DRE-box的雙報告基因His3和LacZ的酵母菌預4271中，然后對轉(zhuǎn)化子進行3-AT抗性檢測。所有攜帶Y印GAP-PpDREBl載體的酵母菌株在0mmol/L3-AT的SD/His—Ura—Leu—選擇培養(yǎng)基上都能很好地生長，而且攜帶Y印GAP-PpDREBl能生長于30mmol/L3-AT的SD/His—Ura—Leu—培養(yǎng)基上，且生長狀態(tài)較好。但是，攜帶Y印GAP-PpDER1/突變的DRE-box的酵母及攜帶載體Y印GAP的酵母沒有表現(xiàn)出3-AT抗性。實驗結(jié)果表明，PpDREBl基因編碼蛋白能夠特異地識別結(jié)合DRE-box，并激活報告基因HIS3的表達，但不能識別突變的mDREbox。表1為酵母中P-半乳糖苷酶活性的檢測結(jié)果。<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>上述實驗結(jié)果說明PpDREBl基因編碼一個轉(zhuǎn)錄因子。實施例3、利用PpDREBl基因培育抗旱植物用？1~011168￡11^^§61^5總RNA提取試劑盒提取生長15天的桃樹幼苗的總RNA，反轉(zhuǎn)錄成cDNA，用引物1(5，-AACAAGATCTATGGACATGTTCTCCGCT-3'禾P2(5'-ACAAACTAGTCATCAGCTTCAGTTTCCA-3'，通過PCR擴增PpDREBl的cDNA。PCR產(chǎn)物通過瓊脂糖凝膠電泳回收后用BglII和SPeI雙酶切，與同樣雙酶切的pCAMBIA1304載體連接，PpDREBl的cDNA定向插入pCAMBIA1304表達載體的CaMV35S啟動子下游，得到重組雙元表達載體pCAMBIA1304-PpDREBl，圖6為構(gòu)建示意圖。將pCAMBIA1304-PpDREBl重組質(zhì)粒分別導入農(nóng)桿菌GV3101中，獲得重組菌，重組菌在YEB固體培養(yǎng)基(含50iig/mLRif，50yg/mLKna)上篩選，28。C培養(yǎng)2天，挑取克隆，從農(nóng)桿菌中提取質(zhì)粒DNA進行PCR檢測，農(nóng)桿菌中的質(zhì)粒DNA擴增與pGEM-PpDREBl質(zhì)粒DNA的擴增結(jié)果一致的重組菌為重組菌GV3101-PpDREBl。將載體pCAMBIA1304導入農(nóng)桿菌GV3101獲得重組菌GV3101-1304。重組菌GV3101-PpDREBl和重組菌GV3101-1304用來轉(zhuǎn)化擬南芥。將擬南芥種子放于4°C黑暗條件下春化3d，然后播種于MS固體培養(yǎng)基上，在22/1『C、16/8h光周期下培養(yǎng)10d后移栽，同樣的條件下繼續(xù)培養(yǎng)。擬南芥植株剛開花，且只有少量種夾時用于農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化。采用Floraldip法轉(zhuǎn)化野生型擬南芥植株，將浸染過的擬南芥植株蓋上塑料膜以保持濕度，在暗處放置過夜，然后移入溫室繼續(xù)培養(yǎng)，轉(zhuǎn)化后植株正常地開花生長，23周后種夾開始變黃，然后收集種子進行篩選。將TO代種子平鋪于MS選擇培養(yǎng)基(含25iig/mL潮霉素)上，4°C黑暗條件下春化3天，然后在22/18°C、16/8小時光周期條件下培養(yǎng)10天。轉(zhuǎn)pCAMBIA1304-PpDREBl擬南芥苗大、根長、根毛、側(cè)根比轉(zhuǎn)pCAMBIA1304擬南芥明顯增加(圖7)。圖7中，"l和2"為轉(zhuǎn)pCAMBIA1304-PpDREBl擬南芥，"3-6"為轉(zhuǎn)pCAMBIA1304擬南芥。轉(zhuǎn)pCAMBIA1304-PpDREBl擬南芥和轉(zhuǎn)pCAMBIA1304擬南芥Tl代種子在抗性培養(yǎng)基上篩選出轉(zhuǎn)基因苗，4t:冰箱放置3天后置于正常培養(yǎng)間光照培養(yǎng)，10天后將抗性苗移至蛭石和草炭土的營養(yǎng)基質(zhì)中，常規(guī)培養(yǎng)，兩個半月后收種為T2代種子。將用上述方法篩選得到的T2代轉(zhuǎn)基因植株的種子培育成小苗，進行耐旱試驗。共得到了30個株系的轉(zhuǎn)pCAMBIA1304-PpDREBl擬南芥，25株轉(zhuǎn)pCAMBIA1304擬南芥。將30個株系的轉(zhuǎn)pCAMBIA1304-PpDREBl擬南芥和25株轉(zhuǎn)pCAMBIA1304擬南芥，每個株系各7株，同時對稱地移栽到同一小缽的兩側(cè)。每個轉(zhuǎn)基因株系設(shè)3個重復。常規(guī)管理，澆水3次后停止?jié)菜?，三周后復水，一周后觀察并拍照。實驗結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)pCAMBIA1304擬南芥全部枯死，而轉(zhuǎn)pCAMBIA1304-PpDREBl擬南芥的30個株系中，有10個株系的轉(zhuǎn)基因植株存活，且大部分葉片保持綠色，植株生長良好。序列表〈110〉國家林業(yè)局科技發(fā)展中心中國農(nóng)業(yè)大學中國林業(yè)科學研究院森林生態(tài)環(huán)境與保護研究所〈120〉抗旱相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子及其編碼基因與應用〈130〉CGGNARW81874〈160>2〈210>1〈211>814〈212>DNA〈213>Primuspersica〈400>1tctccgctcagctttctgactcccccgaccagcctgagtcgagttctttc60120180240300360420■5406006603tgg3C3tgttccgacgccagcgtcaccaccctgccggcatcttcctccgacgaaaacgtcatattggcgtcgagccggccgaagaagcgcgctgggaggagggttttcaaggagacgaggcacccggtttacaggggcgtgaggag肌gg肌c肌c肌c肌gtgggtatgtgagttgag3g肌CCC肌Caacaagaagtcaaggatttggcttggaacgtatccgacggctgagatggctgctcgtgcccatgacgtggcggcattggcgttcagagggaagcttgcctgcataaactttgctgactccgcatggcggctgcccttgccggcttccatggacaccatggatattcgaagggcagccgctgaggccgccgaagggttcaggcctgcggagttcggtggattatccagcggcagcagtgatg3g肌gg3g3tg肌ttt肌gCgtgg3tatgg肌3肌肌C3gcagcttgtgcttgttttatttggatgaggaggaaatgtttgatatgccaaggttgattgataacatggctcaagggcttcttctttctccacctcaatgctcagctggctacttgaattgggatgacgtggaaactgaagctgatgccaaattatggagtttctctatctgattgatgttttttttagtcaatctgtat8tcatttgtgtgtttttcattggatttatttgttcatgtgtgagttgctgataaagattgt780aggtgtgttttttccttgttcgatcttta^〗14〈210>2〈211>230〈212>PRT〈213〉Prunuspersica〈400>2MetAspMetPheSerAlaGinLeuSerAspSerProAspGinProGlu151015SerSerSerPheSerAspAlaSerValThrThrLeuProAlaSerSer202530SerAspGluAsnVallieLeuAlaSerSerArgProLysLysArgAla354045GlyArgArgValPheLysGluThrArgHisProValTyrArgGlyVal505560ArgArgArgAsnAsnAsnLysTrpValCysGluLeuArgGluProAsn65707580AsnLysLysSerArglieTrpLeuGlyThrTyrProThrAlaGluMet859095AlaAlaArgAlaHisAspValAlaAlaLeuAlaPheArgGlyLysLeu100105110AlaCyslieAsnPheAlaAspSerAlaTrpArgLeuProLeuProAla115120125SerMetAspThrMetAsplieArgArgAlaAlaAlaGluAlaAlaGlu130135140GlyPheArgProAlaGluPheGlyGlyLeuSerSerGlySerSerAsp145150155160GluLysGluMetAsnLeuSerValAspMetGluLysAsnSerSerLeu165170175CysLeuPheTyrLeuAspGluGluGluMetPheAspMetProArgLeu180185190lieAspAsnMetAlaGinGlyLeuLeuLeuSerProProGinCysSer195200205AlaGlyTyrLeuAsnTrpAspAspValGluThrGluAlaAspAlaLys210215220LeuTrpSerPheSerlie9225230權(quán)利要求一種蛋白質(zhì)，是如下a)或b)的蛋白a)由序列表中序列2所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；b)在序列表中序列2的氨基酸序列經(jīng)過取代和/或缺失和/或添加一個或幾個氨基酸且與抗旱相關(guān)的由a)衍生的轉(zhuǎn)錄因子。2.權(quán)利要求l所述蛋白的編碼基因。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的基因，其特征在于所述基因是如下1)或2)或3)的基因1)其核苷酸序列是序列表中序列1;2)在嚴格條件下與1)限定的DNA片段雜交且編碼與抗旱相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子的DNA分子；3)與l)或2)的基因具有90X以上的同源性，且編碼與抗旱相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子的DNA分子。4.含有權(quán)利要求2或3所述基因的重組表達載體。5.含有權(quán)利要求2或3所述基因的轉(zhuǎn)基因細胞系或重組菌。6.—種培育抗旱植物的方法，是將權(quán)利要求2或3所述基因?qū)胫参锛毎?，得到抗旱的轉(zhuǎn)基因植物。7.擴增權(quán)利要求2或3所述基因的全長及其任意片段的引物對。8.權(quán)利要求1所述蛋白、權(quán)利要求2或3所述基因、權(quán)利要求4所述重組表達載體、權(quán)利要求5所述轉(zhuǎn)基因細胞系或重組菌在培育抗旱植物中的應用。全文摘要本發(fā)明公開了一種抗旱相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子及其編碼基因與應用。該轉(zhuǎn)錄因子是如下a)或b)的蛋白a)由序列表中序列2所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；b)在序列表中序列2的氨基酸序列經(jīng)過取代和/或缺失和/或添加一個或幾個氨基酸且與抗旱相關(guān)的由a)衍生的轉(zhuǎn)錄因子。所述蛋白的編碼基因是如下1)或2)或3)的基因1)其核苷酸序列是序列表中序列1；2)在嚴格條件下與1)限定的DNA片段雜交且編碼與抗旱相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子的DNA分子；3)與1)或2)的基因具有90％以上的同源性，且編碼與抗旱相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子的DNA分子。用所述基因培育的擬南芥抗旱性明顯增強。文檔編號C12N1/21GK101735312SQ20081022606公開日2010年6月16日申請日期2008年11月5日優(yōu)先權(quán)日2008年11月5日發(fā)明者侯玉霞,張永安,王琦,王青華,龔玉梅申請人:國家林業(yè)局科技發(fā)展中心;中國農(nóng)業(yè)大學;中國林業(yè)科學研究院森林生態(tài)環(huán)境與保護研究所