專利名稱：亞麻白粉病抗病基因分子標(biāo)記的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于亞麻抗病育種和分子生物學(xué)領(lǐng)域，特別涉及與亞麻白粉病抗性基因相連鎖的分子標(biāo)記及獲得方法，可應(yīng)用于分子標(biāo)記輔助育種。

背景技術(shù)：
目前，白粉病是我國(guó)亞麻產(chǎn)區(qū)的一種常發(fā)病，是危害亞麻生產(chǎn)的主要病害之一，在田間發(fā)生時(shí)期短，流行速度快。近幾年來，據(jù)黑龍江、云南和新疆等地區(qū)的調(diào)查，亞麻生長(zhǎng)后期全田大發(fā)生，很少有抗病品種，尤其是國(guó)外品種發(fā)病特別嚴(yán)重。亞麻白粉病病原菌為Oidium Lini Skoric(亞麻粉孢)，屬半知菌亞門真菌；有性態(tài)為Erysiphe cichoracearum DC.(二孢白粉菌)，屬子囊菌亞門真菌菊科白粉菌。白粉病病原菌侵染亞麻的莖、葉及花器，在其上覆蓋白粉狀薄層，導(dǎo)致其呼吸作用提高，蒸騰作用強(qiáng)度增加，光合效率降低，嚴(yán)重阻礙了其正常的生長(zhǎng)發(fā)育，造成早枯、落葉、原莖光澤度差、麻籽結(jié)實(shí)率低、千粒重低、纖維質(zhì)量差，嚴(yán)重影響了種子和纖維的產(chǎn)量和質(zhì)量，給亞麻生產(chǎn)帶來了巨大的損失[1，2，3]。目前，亞麻白粉病已經(jīng)成為威脅我國(guó)亞麻生產(chǎn)的常見病害之一，所以對(duì)該病的防治刻不容緩。盡管實(shí)踐中可以采取化學(xué)藥劑來防治亞麻白粉病，但是，培育抗病品種是最為安全、經(jīng)濟(jì)、有效的措施。
分子標(biāo)記在亞麻抗病方面的研究較少，僅對(duì)亞麻抗銹病基因和抗枯萎病基因進(jìn)行了標(biāo)記。早在1991年，Hausner G等就通過使用CAPS(cleavedamplified polymorphic sequence，酶切擴(kuò)增多態(tài)性序列)標(biāo)記技術(shù)成功地對(duì)亞麻抗銹病基因M3進(jìn)行了標(biāo)記[4]。利用抗病基因的保守性獲得的分子標(biāo)記很可能與篩選定位的新基因共分離這一特點(diǎn)，可以在各式基因文庫(kù)中篩選適宜的克隆。Anderson等用轉(zhuǎn)座子標(biāo)記技術(shù)克隆亞麻中抗銹病(Melampsora lini)基因M時(shí)，就使用了從L6基因衍生的DNA序列作探針[5]。若根據(jù)已克隆抗病基因的完整序列設(shè)計(jì)引物，還可能從含新抗病基因的作物中通過PCR擴(kuò)增直接克隆到該抗病基因。若在PCR引物中附加酶切點(diǎn)，擴(kuò)增的含抗病基因的DNA序列經(jīng)酶切后，可以直接克隆到質(zhì)粒或M13噬菌體載體中。隨后在1999年，Hausner G等人以RFLP標(biāo)記技術(shù)為手段對(duì)亞麻抗銹病基因L2、L6、L11進(jìn)行了標(biāo)記[6]。在國(guó)內(nèi)，薄天岳等人也對(duì)亞麻抗銹病基因進(jìn)行了分子標(biāo)記，用520個(gè)10堿基隨機(jī)引物對(duì)含有亞麻抗銹病基因M4的近等基因系材料NM4及其輪回親本Bison進(jìn)行RAPD分析，其中OPA18引物在NM4材料中穩(wěn)定地?cái)U(kuò)增出特異的DNA片段，并將OPA18432片段回收、克隆和測(cè)序，成功地將其轉(zhuǎn)化為SCAR標(biāo)記。對(duì)不同抗源材料的擴(kuò)增分析表明，該標(biāo)記是M4基因的特異標(biāo)記，目前這一標(biāo)記已成功地應(yīng)用于亞麻抗銹病基因M4的分子標(biāo)記輔助選擇育種中[7]。
目前，亞麻分子遺傳圖譜還不完善，只建立了包含13個(gè)RFLP和80個(gè)RAPD標(biāo)記的連鎖群[8]。Spielmeyer等人利用AFLP標(biāo)記技術(shù)，以雙單倍體系(DH)為材料構(gòu)建亞麻遺傳連鎖圖譜，并用于識(shí)別獨(dú)立連鎖組上對(duì)抗枯萎病有較大影響的兩個(gè)數(shù)量性狀基因位點(diǎn)(QTLs)[9]。2003年薄天岳等人用高抗枯萎病亞麻品種“晉亞7號(hào)”與高感枯萎病品種“晉亞1號(hào)”配制雜交組合，接種鑒定其正反交F1代以及F2代分離群體的枯萎病發(fā)生情況，結(jié)果表明，晉亞7號(hào)對(duì)枯萎病的抗性屬于細(xì)胞核遺傳，受2個(gè)顯性基因控制。用48個(gè)EcoRI/MseI引物組合對(duì)“晉亞7號(hào)”“晉亞1號(hào)”兩個(gè)親本及其F2代抗病和感病基因池進(jìn)行AFLP分析，共擴(kuò)增出約3300條可分辨的帶，其中3條為穩(wěn)定的差異。用“晉亞7號(hào)”和“晉亞1號(hào)”雜交產(chǎn)生的F2代分離群體對(duì)3個(gè)特異條帶與目的基因的遺傳連鎖性進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)特異條帶AG/CAG與暫定名為FuJ7(t)的抗枯萎病基因緊密連鎖，二者之間的遺傳距離為5.2cM。將AG/CAG片段回收，克隆和測(cè)序，成功地將其轉(zhuǎn)化為SCAR標(biāo)記，可以更加方便地用于對(duì)FuJ7(t)基因的分子檢測(cè)和標(biāo)記輔助選擇[10]。
近幾年來，隨著我國(guó)種植業(yè)結(jié)構(gòu)的調(diào)整，亞麻種植面積的不斷擴(kuò)大，重迎茬種植面積的不斷增加，亞麻白粉病在種植區(qū)已經(jīng)呈現(xiàn)出日益嚴(yán)重的趨勢(shì)，這已經(jīng)嚴(yán)重影響了亞麻種子和纖維的產(chǎn)量和質(zhì)量。而解決這個(gè)問題最好的方法就是培育抗病品種。和傳統(tǒng)的育種手段比起來，分子標(biāo)記輔助選擇育種具有準(zhǔn)確、快捷、不受或少受外界因素的干擾等優(yōu)點(diǎn)。分子標(biāo)記輔助選擇是通過分析與目標(biāo)基因緊密連鎖的分子標(biāo)記來判斷目標(biāo)基因是否存在，可以大大加速目標(biāo)基因的轉(zhuǎn)移和利用，較早淘汰不利相關(guān)性狀，設(shè)計(jì)和培育理想品種，縮短育種周期，提高育種效率。利用分子標(biāo)記輔助選擇進(jìn)行亞麻抗病育種，可加速抗源篩選和抗性基因的鑒定，促進(jìn)抗性基因的合理快速利用，還可把不同抗病基因聚合到同一優(yōu)良品種中。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明是針對(duì)上述情況，利用RAPD標(biāo)記技術(shù)對(duì)亞麻抗白粉病材料(9801-1)進(jìn)行抗性篩選，研究亞麻白粉病抗性的遺傳規(guī)律，篩選與白粉病抗性基因連鎖的分子標(biāo)記。在抗病親本和抗病池間顯示出約792bp大小的特異擴(kuò)增帶，命名為0PP02792。進(jìn)一步擴(kuò)大群體分析表明，該標(biāo)記與抗白粉病基因共分離。這可為抗白粉病育種提供輔助選擇，提高育種效率，加速抗白粉病育種進(jìn)程。
為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是與亞麻抗白粉病基因相連鎖的分子標(biāo)記，RAPD分子標(biāo)記是用下述方法得到的 (1)抗病基因供體親本來自于黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院經(jīng)濟(jì)作物所抗白粉病材料9801-1，其與感病品種ILONA、VENUS、DIANE進(jìn)行正反交得到的F1和F2代群體，亞麻雜交后代白粉病抗性鑒定在田間進(jìn)行，在溫室內(nèi)亞麻苗上繁殖白粉病病原菌，在亞麻快速生長(zhǎng)期將病苗移到田間鑒定行間，使其分生孢子自然接種到鑒定植株上，待充分發(fā)病時(shí)觀察葉片的發(fā)病情況，調(diào)查級(jí)別分為高抗、抗、中抗、感、高感五級(jí)，調(diào)查F2代群體抗感分離比，研究亞麻白粉病抗病基因遺傳規(guī)律， (2)以SDS方法提取亞麻親本及自交后代幼苗DNA 取葉片0.3g，放入1.5mL離心管中，于液氮中研磨成粉末狀并加入750μL 65℃預(yù)熱的SDS提取緩沖液，于65℃水浴中保溫20-30分鐘，取出離心管，加入5mol/L醋酸鉀250μL，冰浴20-30分鐘，而后在4℃下12000rpm離心15分鐘，取上清液到另一1.5mL離心管中，加入等體積氯仿/異戊醇24∶1，在4℃下10000rpm離心10分鐘，取上清液到另一1.5mL離心管中，加入0.8倍體積異丙醇，于-20℃下放置30分鐘，使DNA以沉淀析出，挑出DNA沉淀轉(zhuǎn)移至1.5mL離心管中，用70％乙醇洗滌數(shù)次，用無水乙醇脫水，加入適量滅菌的超純水，37℃溶解，0.8％的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)DNA的完整性， (3)采用RAPD分子標(biāo)記方法，進(jìn)行與亞麻白粉病抗性基因相關(guān)的分子標(biāo)記的篩選 反應(yīng)體系為PCR擴(kuò)增的反應(yīng)體積為25μL，組成包括3.5U TaqDNA聚合酶、10×buffer 2.5μL、1mM Mg2+、250μM dNTPs、0.4μM randompr imer、100ng模板DNA，PCR反應(yīng)程序，94℃預(yù)變性5min，94℃變性40s、37℃復(fù)性60s、72℃延伸90s，共40個(gè)循環(huán)，最后72℃延伸10min，電泳檢測(cè)，按1∶6-6×loading buffer，PCR產(chǎn)物，比例把上樣液與PCR產(chǎn)物混合后點(diǎn)樣，在1.3％瓊脂糖凝膠加溴化乙錠0.5μg/mL上電泳，電泳電壓為3-4伏/厘米，保持10℃恒溫，以DL2000marker作為分子量時(shí)照，配制膠的緩沖液為1×TAE，電泳緩沖液為0.5×TAE， (4)經(jīng)RAPD分子標(biāo)記0PP02792的連鎖性鑒定，發(fā)現(xiàn)RAPD標(biāo)記與抗白粉病基因共分離， 分別提取抗病、感病單株的總體DNA，用與前面同樣的反應(yīng)體系、引物及程序進(jìn)行單株的PCR擴(kuò)增，統(tǒng)計(jì)抗、感單株標(biāo)記帶的出現(xiàn)頻率和交換類型并計(jì)算交換值，用Mapmaker3.0軟件對(duì)分離群體單株的抗病性和分子標(biāo)記的分離數(shù)據(jù)進(jìn)行連鎖分析，計(jì)算標(biāo)記與抗白粉病基因之間的遺傳距離。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是 白粉病是影響亞麻生產(chǎn)的一種嚴(yán)重病害。本發(fā)明是利用分子標(biāo)記方法得到一個(gè)新的與白粉病抗性基因緊密連鎖的分子標(biāo)記。利用這種方法，不僅克服了常規(guī)育種方法所需時(shí)間周期長(zhǎng)等缺點(diǎn)、有目標(biāo)地將抗病基因在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)選擇得到、并有利用這個(gè)新白粉病抗性基因的分子標(biāo)記克隆抗白粉病基因、并對(duì)其進(jìn)行結(jié)構(gòu)和功能分析，這對(duì)于進(jìn)一步了解亞麻抗白粉病的分子遺傳學(xué)機(jī)理有積極意義。因此，本研究結(jié)果在亞麻育種實(shí)踐及抗病理論研究上都很有價(jià)值。其優(yōu)點(diǎn)具體歸納如下 (1)本發(fā)明的與白粉病抗性基因緊密連鎖的分子標(biāo)記，是在對(duì)東北地區(qū)白粉病菌免疫的亞麻抗病材料9801-1及其雜交F2代單株中獲得新的標(biāo)記，抗性基因能穩(wěn)定遺傳，可以用于亞麻白粉病品種鑒定和抗病后代的輔助選擇育種。
(2)本研究所用亞麻抗病材料9801-1，對(duì)東北地區(qū)白粉病菌具有比較廣譜的抗性。因此，根據(jù)所得分子標(biāo)記有望克隆到新的白粉病抗性基因。
(3)為克隆亞麻抗白粉病基因、基因序列分析以及轉(zhuǎn)抗白粉病基因亞麻研究奠定了良好基礎(chǔ)。



圖1是本發(fā)明部分引物在抗病池和感病池間的擴(kuò)增； 圖2是本發(fā)明隨機(jī)引物OPP02的RAPD擴(kuò)增結(jié)果；
具體實(shí)施例方式 下面結(jié)合附圖對(duì)本實(shí)用新型的實(shí)施例作進(jìn)一步詳細(xì)描述。
圖1、圖2中的符號(hào)分別為R抗病池；S感病池；MDL-2000分子量標(biāo)準(zhǔn)；19801-1；2DIANE；3BR；4BS；5-14抗病株；15-24感病株。
實(shí)施例、 RAPD分子標(biāo)記進(jìn)行篩選與亞麻抗白粉病基因相連鎖的分子標(biāo)記 一、抗病基因供體親本來自于黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院經(jīng)濟(jì)作物所抗白粉病材料9801-1，其與感病品種ILONA、VENUS、DIANE進(jìn)行正反交得到的F1和F2代群體，抗白粉病材料9801-1是1998年從黑亞11號(hào)中發(fā)現(xiàn)的1株自然突變的抗病單株，經(jīng)過1999-2004年不斷的選育而得到的抗白粉病材料，其主要特點(diǎn)是高抗白粉病，從小區(qū)試驗(yàn)到大面積示范都不感白粉病， 亞麻雜交后代白粉病抗性鑒定在田間進(jìn)行，在溫室內(nèi)亞麻苗上繁殖白粉病病原菌，在亞麻快速生長(zhǎng)期將病苗移到田間鑒定行間，使其分生孢子自然接種到鑒定植株上，待充分發(fā)病時(shí)觀察葉片的發(fā)病情況，調(diào)查級(jí)別分為高抗、抗、中抗、感、高感五級(jí)，調(diào)查F2代群體抗感分離比，研究白粉病抗病基因遺傳規(guī)律，統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示，抗病材料9801-1與感病品種ILONA、VENUS、DIANE雜交F2代抗、感單株的分離比接近3∶1，其x2值均小于x21，0.05＝3.841，結(jié)合F1代的抗性表現(xiàn)，表明9801-1對(duì)白粉病的抗性屬于細(xì)胞核遺傳，受顯性單基因控制， 二、提取DNA 取亞麻幼苗上部新長(zhǎng)出的無病葉片0.3g，放入1.5mL離心管中，于液氮中研磨成粉末狀，向離心管中加入750μL 65℃預(yù)熱的SDS提取緩沖液，混勻后于65℃水浴中保溫20-30分鐘，不時(shí)搖動(dòng)以免成團(tuán)，取出離心管，加入5mol/L醋酸鉀250μL，混勻后冰浴20-30分鐘，而后在4℃下12000rpm離心15分鐘，取上清液到另一1.5mL離心管中，加入等體積氯仿/異戊醇24∶1，充分混勻，在4℃下10000rpm離心10分鐘，取上清液到另一1.5mL離心管中，加入0.8倍體積異丙醇，緩慢混勻，于-20℃下放置30分鐘，使DNA以沉淀析出，挑出DNA沉淀轉(zhuǎn)移至1.5mL離心管中，用70％乙醇洗滌數(shù)次，最后用無水乙醇脫水，吹干，加入適量滅菌的超純水，37℃溶解，紫外分光光度法檢測(cè)DNA樣品的濃度，0.8％的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)DNA的完整性， 三、RAPD分析及產(chǎn)物檢測(cè) RAPD反應(yīng)在美國(guó)ABI公司生產(chǎn)的2720Thermal cycler PCR擴(kuò)增儀上進(jìn)行，RAPD反應(yīng)程序在Williams(1990)的基礎(chǔ)上，根據(jù)擴(kuò)增結(jié)果做一定的調(diào)整和改進(jìn)， 1、PCR擴(kuò)增 (1)反應(yīng)體系為 PCR擴(kuò)增的反應(yīng)體積為25μL，組成包括3.5U TaqDNA聚合酶、10×buffer 2.5μL、1mM Mg2+、250μM dNTPs、0.4μM random primer、100ng模板DNA， (2)PCR反應(yīng)程序 94℃預(yù)變性5min，94℃變性40s、37℃復(fù)性60s、72℃延伸90s，共40個(gè)循環(huán)，最后72℃延伸10min， 2、電泳檢測(cè) 按1∶6-6×loading bufferPCR產(chǎn)物，比例把上樣液與PCR產(chǎn)物混合后點(diǎn)樣，在1.3％瓊脂糖凝膠加溴化乙錠0.5μg/mL上電泳，電泳電壓為3-4伏/厘米，保持10℃恒溫，以DL2000 marker作為分子量時(shí)照，配制膠的緩沖液為1×TAE，電泳緩沖液為0.5×TAE。電泳結(jié)束后，在凝膠圖像掃描儀上觀察和分析， 利用240個(gè)隨機(jī)引物，以9801-1和DIANE雜交得到F2代分離群體構(gòu)建的DNA混合池為模板進(jìn)行RAPD分析，203個(gè)引物能擴(kuò)增出條帶，37個(gè)引物無擴(kuò)增條帶，占總數(shù)的15.4％，203個(gè)引物在混合池中共擴(kuò)增出1201條帶，平均每個(gè)引物擴(kuò)增出5.9條帶，203個(gè)引物中，經(jīng)過三輪的篩選，結(jié)果只有OPP02引物能在親本和抗感混合池間擴(kuò)增出穩(wěn)定的多態(tài)性，即在抗病親本和抗病池間顯示出792bp大小的特異擴(kuò)增帶，命名為0PP 02792。進(jìn)一步擴(kuò)大群體分析，表明該標(biāo)記與抗白粉病基因共分離， 四、RAPD分子標(biāo)記OPP02792的連鎖性鑒定 研究亞麻白粉病抗性的RAPD標(biāo)記所用的材料是亞麻抗白粉病材料9801-1和感病品種DIANE，以及在以其為親本雜交得到的F2代分離群體中隨機(jī)抽取的92株植株，其中抗病植株70株，感病植株22株， 首先篩選能在9801-1和DIANE兩親本間產(chǎn)生多態(tài)性的RAPD引物，共篩選了240條RAPD引物，然后在F2代分離群體選取的70個(gè)抗白粉病植株和22個(gè)感白粉病植株中，隨機(jī)各選10株，分別混合形成抗病池(BR)和感病池(BS)，利用雙親本間有差異的引物對(duì)兩個(gè)池的DNA進(jìn)行擴(kuò)增，篩選與抗白粉病基因連鎖的引物，每個(gè)引物重復(fù)兩次， 將重復(fù)性好的引物用F2抗感株各10株進(jìn)行分析，如果存在連鎖關(guān)系，進(jìn)一步擴(kuò)大群體分析，用Mapmaker3.0軟件對(duì)分離群體單株的抗病性和分子標(biāo)記的分離數(shù)據(jù)進(jìn)行連鎖分析，利用Kosambi函數(shù)將重組率轉(zhuǎn)化成遺傳圖距cM(centimorgan)， 引物OPP02對(duì)9801-1、DI ANE、BR、BS和組成抗、感基因池的20個(gè)F2單株進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)，所有抗性植株均能給出800bp的特異擴(kuò)增帶，而感病植株沒有相應(yīng)的擴(kuò)增帶，進(jìn)一步對(duì)9801-1×DIANE雜交組合F2代群體的92個(gè)單株進(jìn)行RAPD分析，結(jié)果70個(gè)抗病單株均擴(kuò)增出800bp的片段，22個(gè)感病單株均沒有擴(kuò)增出相應(yīng)片段，對(duì)分離群體單株的抗病性和分子標(biāo)記的分離數(shù)據(jù)進(jìn)行連鎖分析，其重組率為0.0％，說明該RAPD標(biāo)記與抗白粉病基因共分離。
權(quán)利要求
1.一種亞麻白粉病抗病基因分子標(biāo)記，其特征在于與亞麻抗白粉病基因相連鎖的分子標(biāo)記，RAPD分子標(biāo)記是用下述方法得到的
(1)抗病基因供體親本來自于黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院經(jīng)濟(jì)作物所抗白粉病材料9801-1，其與感病品種ILONA、VENUS、DIANE進(jìn)行正反交得到的F1和F2代群體，亞麻雜交后代白粉病抗性鑒定在田間進(jìn)行，在溫室內(nèi)亞麻苗上繁殖白粉病病原菌，在亞麻快速生長(zhǎng)期將病苗移到田間鑒定行間，使其分生孢子自然接種到鑒定植株上，待充分發(fā)病時(shí)觀察葉片的發(fā)病情況，調(diào)查級(jí)別分為高抗、抗、中抗、感、高感五級(jí)，調(diào)查F2代群體抗感分離比，研究亞麻白粉病抗病基因遺傳規(guī)律，
(2)以SDS方法提取亞麻親本及自交后代幼苗DNA
取葉片0.3g，放入1.5mL離心管中，于液氮中研磨成粉末狀并加入750μL·65℃預(yù)熱的SDS提取緩沖液，于65℃水浴中保溫20-30分鐘，取出離心管，加入5mol/L醋酸鉀250μL，冰浴20-30分鐘，而后在4℃下12000rpm離心15分鐘，取上清液到另一1.5mL離心管中，加入等體積氯仿/異戊醇24∶1，在4℃下10000rpm離心10分鐘，取上清液到另一1.5mL離心管中，加入0.8倍體積異丙醇，于-20℃下放置30分鐘，使DNA以沉淀析出，挑出DNA沉淀轉(zhuǎn)移至1.5mL離心管中，用70％乙醇洗滌數(shù)次，用無水乙醇脫水，加入適量滅菌的超純水，37℃溶解，0.8％的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)DNA的完整性，
(3)采用RAPD分子標(biāo)記方法，進(jìn)行與亞麻白粉病抗性基因相關(guān)的分子標(biāo)記的篩選
反應(yīng)體系為PCR擴(kuò)增的反應(yīng)體積為25μL，組成包括3.5U TaqDNA聚合酶、10×buffer 2.5μL、1mM Mg2+、250μM dNTPs、0.4μM randomprimer、100ng模板DNA，PCR反應(yīng)程序，94℃預(yù)變性5min，94℃變性40s、37℃復(fù)性60s、72℃延伸90s，共40個(gè)循環(huán)，最后72℃延伸10min，電泳檢測(cè)，按1∶6-6×1oading buffer，PCR產(chǎn)物，比例把上樣液與PCR產(chǎn)物混合后點(diǎn)樣，在1.3％瓊脂糖凝膠加溴化乙錠0.5μg/mL上電泳，電泳電壓為3-4伏/厘米，保持10℃恒溫，以DL2000marker作為分子量時(shí)照，配制膠的緩沖液為1×TAE，電泳緩沖液為0.5×TAE，
(4)經(jīng)RAPD分子標(biāo)記0PP02792的連鎖性鑒定，發(fā)現(xiàn)RAPD標(biāo)記與抗白粉病基因共分離，
分別提取抗病、感病單株的總體DNA，用與前面同樣的反應(yīng)體系、引物及程序進(jìn)行單株的PCR擴(kuò)增，統(tǒng)計(jì)抗、感單株標(biāo)記帶的出現(xiàn)頻率和交換類型并計(jì)算交換值，用Mapmaker3.0軟件對(duì)分離群體單株的抗病性和分子標(biāo)記的分離數(shù)據(jù)進(jìn)行連鎖分析，計(jì)算標(biāo)記與抗白粉病基因之間的遺傳距離。
全文摘要
本發(fā)明屬于亞麻白粉病抗病基因分子標(biāo)記，亞麻白粉病抗病基因分子標(biāo)記屬于農(nóng)業(yè)生物技術(shù)工程，特別涉及與亞麻白粉病抗性基因相連鎖的分子標(biāo)記及獲得方法。本發(fā)明克服常規(guī)標(biāo)記方法工作量大、易受環(huán)境影響、育種周期長(zhǎng)等缺點(diǎn)。利用RAPD標(biāo)記技術(shù)對(duì)亞麻抗白粉病材料(9801-1)、感病材料進(jìn)行抗性篩選，研究亞麻白粉病抗性的遺傳規(guī)律，篩選后得到與亞麻抗白粉病基因相連鎖的分子標(biāo)記。0PP02792。標(biāo)記用于抗白粉病亞麻的輔助選擇育種，同時(shí)為克隆新的抗白粉病基因奠定了基礎(chǔ)，為克隆亞麻抗白粉病基因、基因序列分析以及轉(zhuǎn)抗白粉病基因亞麻研究奠定了良好基礎(chǔ)。
文檔編號(hào)C12N15/10GK101302521SQ200810064839
公開日2008年11月12日 申請(qǐng)日期2008年7月2日 優(yōu)先權(quán)日2008年7月2日
發(fā)明者學(xué) 楊, 李柱剛, 關(guān)鳳芝, 珣 王, 云 趙, 吳廣文, 劉麗艷, 趙念力, 宋憲友, 劉昭軍, 穎 路, 琦 劉, 康慶華, 張莉莉 申請(qǐng)人:學(xué) 楊, 李柱剛, 關(guān)鳳芝