專利名稱：：瑞士乳桿菌微膠囊及其制備與應(yīng)用的制作方法瑞士乳桿菌微膠囊及其制備與應(yīng)用發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明提供了瑞士乳桿菌微膠囊及其制備與應(yīng)用，屬于生物
技術(shù)領(lǐng)域：
,涉及瑞士乳桿菌微膠囊及其制備方法與應(yīng)用。技術(shù)背景益生菌是一種通過(guò)改善腸道微生物平衡從而對(duì)宿主施加有益影響的微生物添加物，它們對(duì)機(jī)體有多種其它正常生理菌群無(wú)法比擬的生理作用。例如改善腸道功能，抵抗腸道病原菌，促進(jìn)乳糖消化，抗癌，抗過(guò)敏，調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)，降血脂，降血壓，抵抗泌尿系統(tǒng)感染等功效。瑞士乳桿菌屬于益生菌，可分離自人體腸道內(nèi)、酸乳、制干酪的引子或干酪，瑞士乳桿菌具有較強(qiáng)的蛋白水解活性，能水解乳蛋白產(chǎn)生多種生物活性肽，例如可以產(chǎn)生高濃度的具有抗高血壓作用的二肽，三肽，其發(fā)酵乳具有抗高血壓、抑制腫瘤、降低膽固醇等作用，還能分泌胞外多糖，改善乳制品的質(zhì)地。瑞士乳桿菌，可以作為一種天然產(chǎn)品使用，或用于制藥業(yè)的新的有效微生物，越來(lái)越被人們認(rèn)識(shí)、接受，追求。但是，瑞士乳桿菌抗高溫，抗酸，抗逆，抗噬菌體侵染等性能比較差，容易失活。瑞士乳桿菌在應(yīng)用中存在一些問題，主要表現(xiàn)在當(dāng)瑞士乳桿菌代替抗生素作為一種綠色添加劑添加到飼料中時(shí)，由于飼料中存在大量微量元素，金屬離子，維生素等，會(huì)引起一系列的氧化還原反應(yīng)，酸堿反應(yīng)等抑制菌體的活力。當(dāng)瑞士乳桿菌作為一種膳食補(bǔ)充劑時(shí)，胃液的pH為2.5，大多數(shù)菌體被滅活，只有百萬(wàn)分之一的活菌可以到達(dá)腸道，發(fā)揮正常的生理保健功能。而現(xiàn)有的益生菌保健品，一般來(lái)說(shuō)菌體都沒有經(jīng)過(guò)微膠囊包埋，只是加入保護(hù)劑，凍干成粉，直接包裝為沖劑，或用一般的膠囊壁材將沒有經(jīng)過(guò)微膠囊化的菌粉直接包裝，制作成大膠囊，這里所用的一般的膠囊壁材，或者使得乳酸菌在腸道內(nèi)不能迅速釋放，定植，不利于抑制有害菌的生長(zhǎng)，從而不能有效地調(diào)節(jié)機(jī)體腸道菌群的平恒；或者，在胃里釋放，因?yàn)榫w未經(jīng)微膠囊化，所以很快被胃液中的酸，消化酶，抗生素滅活，不能順利地到達(dá)腸道。另外，當(dāng)前應(yīng)用乳酸菌進(jìn)行生產(chǎn)發(fā)酵時(shí)，存在以下問題。傳統(tǒng)的發(fā)酵過(guò)程，都是利用乳酸菌的自由細(xì)胞進(jìn)行批次發(fā)酵，菌體抵抗噬菌體侵染能力比較差，菌體質(zhì)粒保持穩(wěn)定性也不強(qiáng)，且菌體和代謝產(chǎn)物難以分離，菌體不能重復(fù)利用，產(chǎn)品的后酸化問題也比較嚴(yán)重，而微膠囊化的乳酸菌可以克服以上問題，但是到目前為止，并沒有利用微膠囊化的乳酸菌進(jìn)行生產(chǎn)發(fā)酵。
發(fā)明內(nèi)容要解決的問題為了克服瑞士乳桿菌的抗高溫，抗酸，抗逆等性能差的問題，和在應(yīng)用瑞士乳桿菌生產(chǎn)發(fā)酵中，自由菌體細(xì)胞引起的菌體抵抗噬菌體侵染能力差，菌體質(zhì)粒保持穩(wěn)定性不強(qiáng)，菌體和代謝產(chǎn)物難以分離，菌體不能重復(fù)利用，產(chǎn)品的后酸化等問題，急需要對(duì)乳酸菌進(jìn)行微膠囊化。技術(shù)方案本發(fā)明首次對(duì)瑞士乳桿菌實(shí)現(xiàn)了三層包埋，特有的三層包埋技術(shù)克服了以往單層包埋或雙層包埋的缺點(diǎn)，提高了包埋效率和包埋產(chǎn)率，使活性菌能順利地通過(guò)了人體胃和小腸，到達(dá)大腸釋放，從而有效的解決了胃酸，消化酶和抗生素等對(duì)活性桿菌引起的滅活問題。另外，本發(fā)明在制作菌懸液的過(guò)程中，用的是經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)正交優(yōu)化的保護(hù)劑配方(10%的脫脂奶95%，海藻糖1.5%，甘油0.5%，山梨醇2%，麥芽糊精1%)，克服了以往研究中用生理鹽水或脫脂奶制作菌懸液，冷凍干燥存活率低的問題。針對(duì)上述問題，瑞士乳桿菌微膠囊分別利用大豆分離蛋白，微孔淀粉，海藻酸鈉作為菌體微膠囊化的第一層包埋材料，第二層包埋材料，第三層包埋材料，對(duì)瑞士乳桿菌aa"ok/c/〃^/2e/w"cusCICC6024)，進(jìn)行三層包埋；其具體制備方法是首先制備菌懸液，即將活化后的瑞士乳桿菌菌種接入優(yōu)化的MRS增殖培養(yǎng)基，利用流加堿中和培養(yǎng)的方法對(duì)菌體進(jìn)行增殖培養(yǎng)，至穩(wěn)定期前期，再經(jīng)離心分離收集菌體，在菌泥中加入菌體冷凍干燥保護(hù)劑，制備菌懸液，使菌體的濃度達(dá)到10mCfu/mL;然后對(duì)菌體進(jìn)行三層包埋，即在上述制備的菌懸液中加入與菌懸液等體積的第一層包埋材料，包埋材料選用4%大豆分離蛋白溶液，常溫下，200rpm/min攪拌20min至均勻，再等體積加入第二層包埋材料，包埋材料選用4%的微孔淀粉溶液，200rpm/min攪拌20min至吸附，接著加入2倍溶液體積的第三層包埋材料，包埋材料選用2%的海藻酸鈉溶液，200rpm/min攪拌30min攪拌均勻，將得到的混合液滴入2%的CaCl2溶液中，固化30min成球；最后進(jìn)行真空冷凍干燥，即將上述制得的微球用無(wú)菌水漂洗后放在一80。C的冰箱中預(yù)凍3h，在冷阱溫度一5rC，真空度0.09毫巴，真空冷凍干燥24h，即制得瑞士乳桿菌微膠囊；上述所用的瑞士乳桿菌，購(gòu)買于中國(guó)工業(yè)微生物菌種保藏管理中心，菌種編號(hào)為/.a"o6a"7/ws/ze/ve"'cusCICC6024。上述優(yōu)化的MRS增殖培養(yǎng)基，重量百分比配方為MRS80%，番茄汁7.5%,麥芽汁11%，乳清粉1.5%。配制時(shí)各物料重量百分比為100%。所用菌體冷凍干燥保護(hù)劑，重量百分比配方為10%的脫脂奶95%，海藻糖1.5%，甘油0.5%，山梨醇2%，麥芽糊精1%。配制時(shí)各物料重量百分比為100%。瑞士乳桿菌微膠囊的制備方法是首先制備菌懸液，即將活化后的瑞士乳桿菌菌種接入優(yōu)化的MRS增殖培養(yǎng)基，利用流加堿中和培養(yǎng)的方法對(duì)菌體進(jìn)行增殖培養(yǎng)，至穩(wěn)定期前期，再經(jīng)離心分離收集菌體，在菌泥中加入菌體冷凍干燥保護(hù)劑，制備菌懸液，使菌體的濃度達(dá)到101QcfWmL;然后對(duì)菌體進(jìn)行三層包埋，即加入與菌懸液等體積的第一層包埋材料，包埋材料選用4%大豆分離蛋白溶液，常溫下，200rpm/min攪拌20min至均勻，再等體積加入第二層包埋材料，包埋材料選用4%的微孔淀粉溶液，200rpm/min攪拌20min至吸附，接著加入2倍溶液體積的第三層包埋材料，包埋材料選用2%的海藻酸鈉溶液，200rpm/min攪拌30min攪拌均勻，將得到的混合液滴入2%的CaCl2溶液中固化30min成球；最后進(jìn)行真空冷凍干燥，即將上述制得的微球用無(wú)菌水漂洗后放在-8(TC的冰箱中預(yù)凍3h，在冷阱溫度-51'C，真空度0.09毫巴，真空冷凍干燥18h24h，即制得瑞士乳桿菌微膠囊。瑞士乳桿菌微膠囊作為發(fā)酵劑重復(fù)發(fā)酵牛乳的應(yīng)用,其方法是稱取0.1g瑞士乳桿菌微膠囊，用孔徑規(guī)格為S0.2mm的不銹鋼網(wǎng)籃包住，接種于100mL，經(jīng)85。C加熱30min的12%的全脂牛奶中，40。C恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行牛乳發(fā)酵，待牛乳發(fā)較成熟后，將網(wǎng)籃提出，將其重新放入新鮮的牛奶中進(jìn)行下一批次的發(fā)酵。瑞士乳桿菌微膠囊在制作保健品上的應(yīng)用調(diào)節(jié)腸道菌群平衡，輔助治療腸胃疾病的瑞士乳桿菌微膠囊保健品，其具體制作方法是按下述重量百分比配方稱取各種物質(zhì)瑞士乳桿菌微膠囊5070%，木瓜蛋白酶23%，菠蘿蛋白酶23%，低聚果糖510%谷氨酸鈉13%，酪酸13%琉璃苣籽05%，亞麻籽05%,卵磷脂510%,混合均勻，配制成沖劑，無(wú)菌充氮?dú)獍b，真空包裝或放入全自動(dòng)膠囊灌裝封口機(jī)內(nèi)，制成硬膠囊。配制時(shí)，各物料重量百分比為100%。也可以在沖劑或硬膠囊的內(nèi)容物中適當(dāng)添加其它成分例如復(fù)合維生素，低聚糖，蛋白水解物，植物，中草藥提取物，多元醇等益生元物質(zhì)，增強(qiáng)產(chǎn)品的保健功能。還可以將未經(jīng)真空冷凍千燥的濕的瑞士乳桿菌微膠囊與富含多種保健功能的橄欖油，魚油，小麥胚芽油，葡萄籽油混合，利用膠囊自動(dòng)填充機(jī)進(jìn)行填充，制成瑞士乳桿菌微膠囊軟膠囊。瑞士乳桿菌微膠囊在植物飲料制備中的應(yīng)用，發(fā)酵苦菜制作苦菜保健飲料，具體制作方法是將新鮮苦菜經(jīng)漂洗后，加入l倍體積的水，榨汁，再加入3倍苦菜汁體積的鮮奶，攪拌均勻后，巴氏滅菌，冷卻到4(TC，然后每100mL原料中接入0.006g瑞士乳桿菌微膠囊，4(TC發(fā)酵6h7h，再添加木糖醇，低聚糖，維生素E，鐵粉使重量百分比含量分別為5%,5%，0.05%，0.05%，最后無(wú)菌包裝。也可以選取苦瓜，人參，蘑菇，花粉，中草藥，茶葉等幾種原材料，進(jìn)行瑞士瑞桿菌微膠囊發(fā)酵。性能測(cè)定瑞士乳桿菌微膠囊產(chǎn)品的包埋效率和包埋產(chǎn)率的性能其具體方法是包埋效率=1一(濕球微膠囊表面活菌數(shù))/(濕球微膠囊完全破壁后的活菌數(shù))X100%包埋產(chǎn)率=(濕球微膠囊完全破壁后的活菌數(shù))/(加入的活菌數(shù))xioo%產(chǎn)品干燥存活率=(干燥后的產(chǎn)品微膠囊完全破壁后的活菌數(shù))/(加入的活菌數(shù))X100%微膠囊表面活菌數(shù)的測(cè)定將瑞士乳桿菌濕球微膠囊直接加入到生理鹽水中，180r/min，攪拌30min，使表層及可泄露的菌體溶出，利用固體MRS培養(yǎng)基進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)。微膠囊完全破壁后活菌數(shù)的測(cè)定將瑞士乳桿菌濕球微膠囊或干燥后的產(chǎn)品微膠囊溶于0.2mol/L磷酸緩沖液(pH二7.0)中180r/min處理60min，完全溶解后，利用固體MRS培養(yǎng)基進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)。測(cè)定結(jié)果為包埋效率是91%，包埋產(chǎn)率95%，產(chǎn)品千燥存活率，。瑞士乳桿菌微膠囊的耐熱性能分別將微膠囊化的瑞士乳桿菌和未微膠囊化的瑞士乳桿菌粉置于50。C，55°C，6CTC，65'C下，保溫60min，然后測(cè)其菌體存活率，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。如表1所示，微膠囊化的瑞士乳桿菌具有很強(qiáng)的耐熱性，其存活率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于未包埋菌體。表1瑞士乳桿菌微膠囊的熱穩(wěn)定性試驗(yàn)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>瑞士乳桿菌微膠囊的恒溫儲(chǔ)存性育將3批瑞士乳桿菌微膠囊(I，II，III)和瑞士乳桿菌凍干粉(IV)經(jīng)鉑紙密封，于37°C恒溫培養(yǎng)箱中放置3個(gè)月，I，II，IV每個(gè)月取樣O.lg利用磷酸鹽緩沖液完全破壁ii其菌體存活率。in—直儲(chǔ)存到3個(gè)月才測(cè)其活菌數(shù)，測(cè)其菌體存活率，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。結(jié)果得出瑞士乳桿菌微膠囊恒溫儲(chǔ)存條件下的存活率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于未經(jīng)過(guò)微膠囊化的菌體。表2瑞士乳桿菌微膠囊的恒溫儲(chǔ)存實(shí)驗(yàn)<table>tableseeoriginaldocumentpage133</column></row><table>瑞士乳桿菌微膠囊人工胃液和人工腸液中的溶解性能模擬胃液9mLHCI加入1OOOmL水中，調(diào)節(jié)pH至1.2:模擬腸液750mL模擬胃液中加入250mL0.2mol/L磷酸鈉溶液，調(diào)節(jié)pH至6.8;分別稱取微膠囊O.lg，置于盛有l(wèi)OOmL人工胃液，人工腸液的三角瓶中，于搖床中以37。C，180rpm/min進(jìn)行崩解，于15min，30min，45min，60min時(shí)分別取樣測(cè)其600nm下的透光率，再分別在60min，120min取樣測(cè)人工胃液，人工腸液中的活菌數(shù)，并將胃液中未溶解的膠珠撈出，用磷酸鹽緩沖液完全破壁后，測(cè)其活菌數(shù)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖1和表3。結(jié)果所示，微膠囊經(jīng)過(guò)人工胃液處理60min后，透光率在95%以上，120min后在人工胃液中并未檢測(cè)到活菌數(shù)，而將胃液中未溶解的膠珠撈出，用磷酸鹽緩沖液完全破壁后，測(cè)其活菌數(shù)為8.0X108cfu/g，表明微膠囊在人工胃液中是基本不溶解，不發(fā)生滲漏，且微膠囊化的乳酸菌具有較強(qiáng)的耐酸性。理想的乳酸菌微膠囊在十二指腸(pH4.76.5)就開始崩解，本法所得的乳酸菌微膠囊在人工腸液中的崩解性能仍然以透光率衡量。由圖l和表3得出，微膠囊用人工腸液處理后，立即崩解，50min后崩解完全，120min活菌計(jì)數(shù)得9.0Xl()Scfu/g。說(shuō)明經(jīng)過(guò)微膠囊化處理的瑞士乳桿菌具有很好的耐酸性，能安全地通過(guò)胃液，順利地到達(dá)腸道，立即釋放。表3瑞士乳桿菌微膠囊在人工胃液和人工腸液中的溶解情況溶解條件<table>tableseeoriginaldocumentpage133</column></row><table>瑞士乳桿菌微膠囊的耐膽鹽性能稱取O.1g瑞士乳桿菌微膠囊，放入100mL0.5。/。牛膽鹽溶液中，180r/min，37°C，60min，測(cè)其活菌數(shù)，結(jié)果微膠囊化的瑞士乳桿菌存活率為90%,而未包埋的菌存活率為證明25%,說(shuō)明微膠囊化的菌耐膽鹽的特性顯著高于未包埋的菌。瑞士乳桿菌微膠囊重復(fù)利用發(fā)酵牛乳性能瑞士乳桿菌的微膠囊化不僅增強(qiáng)了其耐酸性，耐熱性，耐膽鹽性，儲(chǔ)存穩(wěn)定性，而且還體現(xiàn)在利用微膠囊化瑞士乳桿菌膠珠發(fā)酵牛乳的高重復(fù)利用率。實(shí)驗(yàn)方法為稱取0.lg瑞士乳桿菌微膠囊，用孔徑規(guī)格為《0.2mm的不銹鋼網(wǎng)籃包住接種于100mL,85'C加熱30min的12%的全脂牛奶中，40。C培養(yǎng)箱中進(jìn)行牛乳發(fā)酵，待牛乳發(fā)較成熟后，將網(wǎng)籃提出，將其重新放入新鮮的牛奶中進(jìn)行下一批次的發(fā)酵，結(jié)果如表4。由表4可知，在6次重復(fù)利用試驗(yàn)中，膠珠的凝乳時(shí)間、pH值、酸度等都比較接近，說(shuō)明膠珠在這6次重復(fù)發(fā)酵的試驗(yàn)中，活性并沒有降低，產(chǎn)酸能力和PH值都沒有太多變化。第1，2次相對(duì)于后面幾次，其凝乳時(shí)間稍長(zhǎng)，這與膠珠溶漲，活化有關(guān)。在第7次發(fā)酵試驗(yàn)中，膠珠已經(jīng)破裂，不可以再重復(fù)利用。因此，利用固定化乳酸菌微膠囊重復(fù)利用發(fā)酵牛乳這一特性，不僅可以防止制品在貯藏過(guò)程中的后酸化問題，而且可提高制作酸奶的方便性與時(shí)效性，延長(zhǎng)菌種的存活力，并可重復(fù)使用，且不易污染，既經(jīng)濟(jì)又方便。表4瑞士乳桿菌微膠囊重復(fù)利用發(fā)酵牛乳實(shí)驗(yàn)發(fā)酵批次凝乳時(shí)間(h)PH酸度/OT17.05.052.626.04.555.035.04.456.045.04.260,055.04.064.264.54.064.5有益效果本發(fā)明提供了一種對(duì)瑞士乳桿菌微膠囊化的方法，首次對(duì)瑞士乳桿菌實(shí)現(xiàn)了三層包埋，該方法簡(jiǎn)單易行，包埋效率和包埋產(chǎn)率高。其中以大豆分離蛋白作為第一層包埋材料，為微膠囊化的菌體在腸道內(nèi)迅速釋放以后提供營(yíng)養(yǎng)，有利于菌體的生長(zhǎng)繁殖；以微孔淀粉作為第二層包埋材料，有利于釋放后的菌體在腸道內(nèi)定植，黏附，增殖，且微孔淀粉特有的孔狀結(jié)構(gòu)，是很好地包埋材料，有利于9微膠囊化的菌體在腸道內(nèi)迅速釋放；以加工性能，包埋性能良好及安全性良好的海藻酸鈉作為第三層包埋材料，使保健藥物在腸道中停留和吸收時(shí)間大大延長(zhǎng)，從而提高乳酸菌的保健療效。本發(fā)明特有的三層包埋技術(shù)克服了以往單層包埋或雙層包埋的缺點(diǎn)，提高了包埋效率和包埋產(chǎn)率。本發(fā)明制作菌懸液的過(guò)程中，采用的是經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)正交優(yōu)化的保護(hù)劑，相比以往研究中用生理鹽水或10%的脫脂奶制作的菌懸液，冷凍干燥后活菌數(shù)從107提高到io8。本發(fā)明對(duì)瑞士乳桿菌進(jìn)行了包埋，其耐熱性，耐酸性，恒溫儲(chǔ)存穩(wěn)定性都有了很大的提高，通過(guò)微膠囊在胃液中和在腸液中的溶解性試驗(yàn)，可知其能順利地通過(guò)了人體胃和小腸，到達(dá)大腸釋放，從而有效的解決了胃酸，消化酶和抗生素等對(duì)活性桿菌引起的滅活問題，且發(fā)酵牛乳的重復(fù)利用性好。本發(fā)明提供的瑞士乳桿菌微膠囊，豐富了益生菌微膠囊的品種，且開發(fā)的瑞士乳桿菌微膠囊保健品為機(jī)體提供了一種很好的益生菌膳食補(bǔ)充劑，活菌數(shù)高，具有調(diào)節(jié)腸道菌群平衡，提高機(jī)體的免疫能力，降血壓，降血脂等良好的益生功能。本發(fā)明產(chǎn)品無(wú)論在保健功能，加工性能和生產(chǎn)性能上，相比于現(xiàn)代技術(shù)都具有特別的優(yōu)勢(shì)，蘊(yùn)藏著巨大的市場(chǎng)價(jià)值。圖l微膠囊在人工胃液和人工腸液中的溶解情況在圖l中l(wèi)表示微膠囊在人工胃液中的溶解情況曲線，2表示微膠囊在人工腸液中的溶解情況曲線。結(jié)果表明微膠囊在人工胃液中是基本不溶解，不發(fā)生滲漏，即微膠囊化的菌體具有較強(qiáng)的耐酸性。微膠囊用人工腸液處理后，立即崩解，50min后崩解完全。說(shuō)明經(jīng)過(guò)微膠囊化處理的菌體具有很好的耐酸性，能安全地通過(guò)胃液，順利地到達(dá)腸道，立即釋放。具體實(shí)施例方式實(shí)施例1:瑞士乳桿菌微膠囊的制備方法。首先制備菌泥，即將由脫脂乳活化后的瑞士乳桿菌菌種，(瑞士乳桿菌菌種購(gòu)買于中國(guó)工業(yè)微生物菌種保藏管理中心，菌種編號(hào)為CICC6024)，按4。/。的接種量，接入優(yōu)化的2000mLMRS增殖培養(yǎng)基，(MRS1600mL，番茄汁150mL,麥芽汁220mL，乳清粉30mL)利用20%的碳酸鈉溶液每隔3h調(diào)節(jié)發(fā)酵液的PH值為6.2，對(duì)菌體進(jìn)行增殖培養(yǎng)15h，至穩(wěn)定期前期，再8000rpm/min，20min離心分離收集菌體.在上述制得的菌泥中加入菌體冷凍干燥保護(hù)劑200mL(10。/。脫脂奶190mL，海藻糖3g，甘油lg，山梨醇4g，麥芽糊精2g)制備菌懸液，使菌體的濃度達(dá)到10^cfu/mL;然后對(duì)菌體進(jìn)行三層包埋，即加入200mL4。/。大豆分離蛋白溶液，25'C下，200rpm/min攪拌20min至均勻，再加入400mL4%的微孔淀粉溶液，200rpm/min攪拌20min至吸附，接著加入1600mL2%的海藻酸鈉溶液，200rpm/min攪拌30min攪拌均勻，用5mL的注射器，6號(hào)針頭吸取得到的混合液，滴入200mL的2%的CaCl2溶液中，固化30min成球(直到CaCl2溶液不能固化混合液成球時(shí)，更換新的CaCl2溶液)，將膠珠撈出，無(wú)菌水洗滌，先在一80'C的冰箱中預(yù)凍3h，最后在冷阱溫度一51°C，真空度0.09毫巴，真空冷凍干燥24h，即制得瑞士乳桿菌微膠囊；表5制備瑞士乳桿菌微膠囊的菌懸液的保護(hù)劑篩選<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>應(yīng)用實(shí)施例1瑞士乳桿菌微膠囊重復(fù)多批次發(fā)酵的酸奶稱取0.lg瑞士乳桿菌微膠囊，用孔徑規(guī)格為《0.2mm的不銹鋼網(wǎng)籃包住，接種于85'C加熱30min的12%的全脂牛奶100mL中，40'C培養(yǎng)箱中進(jìn)行牛乳發(fā)酵，待牛乳發(fā)酵成熟后，將網(wǎng)籃提出，將其重新放入新鮮的牛奶中進(jìn)行下一批次的發(fā)酵。由表4可知，在6次重復(fù)利用試驗(yàn)中，膠珠的凝乳時(shí)間、pH值、酸度等都比較接近，說(shuō)明膠珠在這6次重復(fù)發(fā)酵的試驗(yàn)中，活性并沒有降低，產(chǎn)酸能力和pH值都沒有太多變化。第1，2次相對(duì)于后面幾次，其凝乳時(shí)間稍長(zhǎng)，這與膠珠溶漲，活化有關(guān)。在第7次發(fā)酵試驗(yàn)中，膠珠已經(jīng)破裂，不可以再重復(fù)利用。因此，利用固定化乳酸菌微膠囊重復(fù)利用發(fā)酵牛乳這一特性，不僅可以防止制品在貯藏過(guò)程中的后酸化問題，而且可提高制作酸奶的方便性與時(shí)效性，延長(zhǎng)菌種的存活力，并可重復(fù)使用，且不易污染，既經(jīng)濟(jì)又方便。結(jié)果證明，經(jīng)過(guò)6次重復(fù)回收微膠囊膠珠重復(fù)發(fā)酵牛奶，經(jīng)檢驗(yàn)發(fā)酵終點(diǎn)的各項(xiàng)指標(biāo)都沒有太多變化。第l，2次相對(duì)于后面幾次，其凝乳時(shí)間稍長(zhǎng)，這與膠珠溶漲，活化有關(guān)，而第7次回收的微膠囊化膠珠，組織松散，膠珠老化，與發(fā)酵乳分離的過(guò)程中破裂，滲漏，不可以再重復(fù)利用。因此，微膠囊化的瑞士乳桿菌重復(fù)發(fā)酵牛乳這一特性，不僅可以防止發(fā)酵乳制品在貯藏過(guò)程中的后酸化問題，而且可提高制作酸奶的方便性，時(shí)效性，延長(zhǎng)菌種的存活力，且不易污染，既經(jīng)濟(jì)又方便。應(yīng)用實(shí)施例2:瑞士乳桿菌微膠囊在制作保健品上的應(yīng)用調(diào)節(jié)腸道菌群平衡，輔助治療腸胃疾病的瑞士乳桿菌微膠囊保健品，其具體制作方法是100g瑞士乳桿菌微膠囊保健品內(nèi)容物，具體做法是分別稱取瑞士乳桿菌微膠囊65g，木瓜蛋白酶2g，菠蘿蛋白酶2g，低聚果糖10g，谷氨酸鈉3g,酪酸3g，琉璃苣籽3g，亞麻籽2g，卵磷脂10g，混合均勻，配制干粉沖劑，無(wú)菌充氮?dú)獍b或真空包裝。應(yīng)用實(shí)施例3:瑞士乳桿菌微膠囊在制作保健品上的應(yīng)用琉璃苣籽0g，亞麻籽0g其它同應(yīng)用實(shí)施例2應(yīng)用實(shí)施例4:瑞士乳桿菌微膠囊在制作保健品上的應(yīng)用分別稱取瑞士乳桿菌微膠囊70g，木瓜蛋白酶3g，菠蘿蛋白酶3g,低聚果糖10g谷氨酸鈉lg，酪酸lg，亞麻籽2g，卵磷脂10g，混合均勻，配制成干粉沖劑，無(wú)菌充氮?dú)獍b或真空包裝。應(yīng)用實(shí)施例5:瑞士乳桿菌微膠囊在植物飲料制備中的應(yīng)用，發(fā)酵苦菜制作苦菜保健飲料，具體做法是500g新鮮苦菜經(jīng)漂洗后，加1000mL的水，榨汁，加入3000mL的鮮奶，攪拌均勻后，巴氏滅菌，冷卻到4(TC，再添加200g木糖醇，200g低聚糖，2g維生素E，2g鐵粉，接入0.18g瑞士乳桿菌微膠囊，然后4CTC發(fā)酵6.5h，可以添加天然香精調(diào)合成不同口味，或保持原味，無(wú)菌包裝。產(chǎn)品經(jīng)檢驗(yàn)活菌數(shù)達(dá)到107以上，復(fù)合國(guó)家有關(guān)酸奶的標(biāo)準(zhǔn)，擁有獨(dú)特的香氣，營(yíng)養(yǎng)豐富，保健功能強(qiáng)，具有良好的開發(fā)前景和市場(chǎng)價(jià)值。權(quán)利要求1.瑞士乳桿菌微膠囊，其特征是利用大豆分離蛋白作為第一層包埋材料，微孔淀粉作為第二層包埋材料，海藻酸鈉作為第三層包埋材料，對(duì)瑞士乳桿菌(Lactobacillushelveticus)，進(jìn)行三層包埋；瑞士乳桿菌微膠囊是這樣制備的首先制備菌懸液，即將活化后的瑞士乳桿菌菌種接入優(yōu)化的MRS增殖培養(yǎng)基，利用流加堿中和培養(yǎng)的方法對(duì)菌體進(jìn)行增殖培養(yǎng)，至穩(wěn)定期前期，再經(jīng)離心分離收集菌體，在菌泥中加入菌體冷凍干燥保護(hù)劑，制備菌懸液，使菌體的濃度達(dá)到1010cfu/mL；然后對(duì)菌體進(jìn)行三層包埋，即在上述制備的菌懸液中加入與菌懸液等體積的第一層包埋材料，包埋材料選用4％大豆分離蛋白溶液，常溫下，200rpm/min攪拌20min至均勻，再等體積加入第二層包埋材料，包埋材料選用4％的微孔淀粉溶液，200rpm/min攪拌20min至吸附，接著加入2倍溶液體積的第三層包埋材料，包埋材料選用2％的海藻酸鈉溶液，200rpm/min攪拌30min攪拌均勻，將得到的混合液滴入2％的CaCl2溶液中，固化30min成球；最后進(jìn)行真空冷凍干燥，即將上述制得的微球用無(wú)菌水漂洗后放在-80℃的冰箱中預(yù)凍3h，在冷阱溫度-51℃，真空度0.09毫巴，真空冷凍干燥18h～24h，即制得瑞士乳桿菌微膠囊；上述優(yōu)化的MRS增殖培養(yǎng)基，重量百分比配方為MRS80％，番茄汁7.5％，麥芽汁11％，乳清粉1.5％；所用菌體冷凍干燥保護(hù)劑，重量百分比配方為10％的脫脂奶95％，海藻糖1.5％，甘油0.5％，山梨醇2％，麥芽糊精1％。2.權(quán)利要求1所述的瑞士乳桿菌微膠囊的制備方法是首先制備菌懸液，即將活化后的瑞士乳桿菌菌種接入優(yōu)化的MRS增殖培養(yǎng)基，利用流加堿中和培養(yǎng)的方法對(duì)菌體進(jìn)行增殖培養(yǎng)，至穩(wěn)定期前期，再經(jīng)離心分離收集菌體，在菌泥中加入菌體冷凍干燥保護(hù)劑，制備菌懸液，使菌體的濃度達(dá)到101Qcfu/mL;然后對(duì)菌體進(jìn)行三層包埋，即加入與菌懸液等體積的第一層包埋材料，包埋材料選用4%大豆分離蛋白溶液，常溫下，200rpm/min攪拌20min至均勻，再等體積加入第二層包埋材料，包埋材料選用4%的微孔淀粉溶液，200rpm/min攪拌20min至吸附，接著加入2倍溶液體積的第三層包埋材料，包埋材料選用2%的海藻酸鈉溶液，200rpm/min攪拌30min攪拌均勻，將得到的混合液滴入2%的CaCL2溶液中固化30min成球；最后進(jìn)行真空冷凍干燥，即將上述制得的微球用無(wú)菌水漂洗后放在一8(TC的冰箱中預(yù)凍3h，在冷阱溫度一5rC，真空度0.09毫巴，真空冷凍干燥24h，即制得瑞士乳桿菌微膠囊。3.按照權(quán)利要求2所述的瑞士乳桿菌微膠囊的制備方法，其特征在于在制備菌懸液中，增殖培養(yǎng)15h。4.權(quán)利要求1所述的瑞士乳桿菌微膠囊作為發(fā)酵劑重復(fù)發(fā)酵牛乳的應(yīng)用稱取0.1g瑞士乳桿菌微膠囊，用孔徑規(guī)格為S0.2min的不銹鋼網(wǎng)籃包住，接種于100mL，經(jīng)85。C加熱30min的12%的全脂牛奶中，40。C恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行牛乳發(fā)酵，待牛乳發(fā)酵成熟后，將網(wǎng)籃提出，重新放入新鮮的牛奶中進(jìn)行下一批次的發(fā)酵。5.權(quán)利要求1所述的瑞士乳桿菌微膠囊在制作保健品上的應(yīng)用調(diào)節(jié)腸道菌群平衡，輔助治療腸胃疾病的瑞士乳桿菌微膠囊保健品，其具體制作方法是按下述重量百分比配方稱取各種物質(zhì)，瑞士乳桿菌微膠囊50%70%，木瓜蛋白酶2%3%，菠蘿蛋白酶2%3%，低聚果糖5%10%谷氨酸鹽1%3%，酪酸1%3%琉璃苣籽0%5%，亞麻籽0%5%，卵磷脂5%10%，混合均勻，配制成沖劑，無(wú)菌充氮?dú)獍b，真空包裝或放入全自動(dòng)膠囊灌裝封口機(jī)內(nèi)，制成硬膠囊。6.權(quán)利要求1所述的瑞士乳桿菌微膠囊在植物飲料制備中的應(yīng)用，發(fā)酵苦菜制作苦菜保健飲料，具體做法是將新鮮苦菜經(jīng)漂洗后，加入l倍體積的水，榨汁，再加入3倍苦菜汁體積的鮮奶，攪拌均勻后，巴氏滅菌，冷卻到40'C，然后每100mL原料中接入0.006g瑞士乳桿菌微膠囊，4(TC發(fā)酵6h7h，再添加木糖醇，低聚糖，維生素E，鐵粉，使重量百分比含量分別為5%，5%，0.05%，0.05%，最后無(wú)菌包裝。全文摘要本發(fā)明提供了瑞士乳桿菌微膠囊及其制備與應(yīng)用，涉及了一種瑞士乳桿菌的包埋技術(shù)。其目的是將瑞士乳桿菌實(shí)現(xiàn)微膠囊化，解決以往單層或雙層包埋中包埋效率和包埋產(chǎn)率低的問題。其技術(shù)方案是分別利用大豆分離蛋白，微孔淀粉，海藻酸鈉作為微膠囊化的一，二，三層壁材，首次對(duì)瑞士乳桿菌進(jìn)行三層包埋；其中，在制作菌懸液的過(guò)程中，采用經(jīng)過(guò)正交優(yōu)化的保護(hù)劑，提高了冷凍干燥后存活率。本發(fā)明的微膠囊，耐熱性，耐酸性強(qiáng)，解決了胃酸，消化酶和抗生素等對(duì)活性桿菌引起的滅活問題，到達(dá)大腸釋放，調(diào)節(jié)腸道菌群平恒。且發(fā)酵牛奶的重復(fù)利用性好。本發(fā)明所用的瑞士乳桿菌，豐富了益生菌微膠囊的品種是一種很好的膳食補(bǔ)充劑。文檔編號(hào)A23C9/12GK101323850SQ20081005396公開日2008年12月17日申請(qǐng)日期2008年7月28日優(yōu)先權(quán)日2008年7月28日發(fā)明者王艷萍,女許申請(qǐng)人:天津科技大學(xué)