專利名稱：：一種豬免疫性狀相關(guān)基因tap1及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于基因工程
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種豬免疫性狀相關(guān)基因TAP1及其制備方法，以及其突變位點(diǎn)檢測方法和在建立適用于豬免疫性狀的分子標(biāo)記方面的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：近10年以來，現(xiàn)代育種技術(shù)使豬的生產(chǎn)性能(生長，胴體與肉質(zhì)性狀)得到了顯著的改良，而對豬健康及抵抗疾病能力的遺傳改良卻重視不夠。隨著分子遺傳學(xué)的飛速發(fā)展，畜禽遺傳圖譜的不斷完善，遺傳標(biāo)記的不斷補(bǔ)充，使一些與疾病抗性有關(guān)的基因或遺傳標(biāo)記相繼被發(fā)現(xiàn)。采用遺傳學(xué)方法從遺傳本質(zhì)上提高畜禽的抗性，減少疾病的發(fā)生，對于控制疾病，提高養(yǎng)豬效益和安全養(yǎng)殖具有標(biāo)本兼治的重要意義。個(gè)體免疫力是衡量動物健康的重要指標(biāo)(Knapp等，2000)，它屬于數(shù)量性狀，其中涉及相關(guān)基因較多，分子機(jī)制很復(fù)雜。免疫力與生產(chǎn)性能通常表現(xiàn)為表型負(fù)相關(guān)關(guān)系，這為育種工作者提出了一個(gè)大的難題，即如何在保持和提高生產(chǎn)性能的基礎(chǔ)上同時(shí)提高個(gè)體免疫能力是育種工作者研究的新課題。最近國外少量研究表明豬免疫能力與生產(chǎn)性能的關(guān)系是雙向的，某種情況下即正常狀態(tài)免疫能力的增強(qiáng)能提高豬的生長速度，飼料效率等主要生產(chǎn)性能，而單純針對生產(chǎn)性能的選擇卻導(dǎo)致豬免疫能力下降即相關(guān)等位基因的丟失或頻率的降低。但是，目前二者的相互關(guān)系仍然不是很明了，從基因組水平揭示出生產(chǎn)性能和免疫力的控制基因體系間的具體關(guān)系，是解決上述難題的有效途徑。在抗病育種中，抗病基因的尋找是關(guān)鍵。腸毒素型大腸桿菌(￡>zferato:dgemV:co//,￡7^0是引起仔豬瀉痢的主要病原體之一(施啟順，2001)，研究表明動物體內(nèi)如果缺乏大腸桿菌K88受體或F18受體，就會對相應(yīng)的血清型大腸桿菌引起的腹瀉產(chǎn)生抗性，目前編碼大腸桿菌K88受體(K88abR和K88acR)的基因已經(jīng)定位在豬13號染色體上靠近轉(zhuǎn)鐵蛋白基因的位置(Edfors-Lilja等，1997)，a-(1，2)-海藻糖轉(zhuǎn)移酶1(a(1，2)^/ms7^ra似/era^,Ft/77)基因是F18受體(ECF18R)的候選基因，位于豬6號染色體上(Meijerink等，1997)。此外，豬第7號染色體著絲粒附近的主要組織相容性復(fù)合體(A^y'or/H'Jtoco呼a/z》z7z'/ycompfec，MHC)基因已經(jīng)被證明與抗體對多種抗原的應(yīng)答、細(xì)菌的噬菌作用、對螺旋旋毛蟲和惡性黑素瘤的易感性等性狀有相關(guān)(Pedman等，1996)，其它與抗病力有關(guān)的基因還有MX1(AfyjcoWms(7w/7M,"ms/加"cg1，禾占液病毒(流感)抗性因子1)、NRAMP1(iVifl似raZms7'加w"-asvocz-她Jmacro/7/wzge/ra的V21，與巨噬細(xì)胞有關(guān)的天然抗性蛋白1)，IL1(/WerZeMJb>wl，白細(xì)胞介素1)、PPARG(Perajdyome/ra斷ratorflcft.va/^/gamma，過氧化物酶體增殖激活受體Y)等基因。Rothschild實(shí)驗(yàn)室長期從事MHC基因單倍型與豬初生重、斷奶重、生長速度、背膘厚等性狀有關(guān)等性狀的研究，他們認(rèn)為MHC基因單倍型與上述生產(chǎn)性能存在相關(guān)關(guān)系(RothschildMF，1998)。內(nèi)源性抗原通過MHC類分子提呈給細(xì)胞毒性T細(xì)胞(CTL)是機(jī)體細(xì)胞免疫識別的重要階段?？乖幚硐嚓P(guān)轉(zhuǎn)運(yùn)體(/r^wpo"w似w"'flfejvWfA，TAP)負(fù)責(zé)抗原肽從胞漿到內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的轉(zhuǎn)運(yùn)，在MHC類分子的抗原處理及提呈過程中發(fā)揮重要作用，TAP結(jié)構(gòu)和功能障礙將導(dǎo)致細(xì)胞表面MHC類分子表達(dá)缺陷，這成為腫瘤細(xì)胞、病毒感染細(xì)胞逃逸免疫監(jiān)視的重要機(jī)制。人的TAP基因是于1985年首次發(fā)現(xiàn)的，TAP是由TAP1與TAP2亞單位以異二聚體的形式發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)，在MHC-I類分子介導(dǎo)的抗原遞呈途徑中起著重要作用(Colonnaetal.,1992)。因此，TAP的異常將嚴(yán)重影響抗原遞呈，成為病毒感染及腫瘤細(xì)胞逃避免疫監(jiān)視的重要機(jī)制，如卵巢癌、肝癌及宮頸癌(Vermeuleneta1.，2007)。另外，TAP蛋白在T淋巴細(xì)胞的活化和增殖過程中作用極大，在自身免疫性疾病的免疫損傷機(jī)制中占有重要地位。TAP1對內(nèi)源性抗原片段的選擇轉(zhuǎn)運(yùn)起主要作用，因而TAP1基因多態(tài)性與1型糖尿病的關(guān)聯(lián)性是目前研究的熱點(diǎn)(SiaandWeinem，2005)。Carcia-Borges等(2006)發(fā)現(xiàn)豬的TAP1基因存在一個(gè)可變剪接機(jī)，很有可能關(guān)系到機(jī)體能否抵御一些表達(dá)ICP47的病毒。Zhao等(2006)發(fā)現(xiàn)豬感染沙門氏桿菌48小時(shí)后，TAP1基因顯著上升。對于其它病原的感染，也有類似的發(fā)現(xiàn)(JennerandYoung，2005)。但是到目前為止，仍沒見到全面研究TAP1基因功能的報(bào)導(dǎo)。研究突變位點(diǎn)在群體中的多態(tài)性，并進(jìn)行性狀關(guān)聯(lián)分析是研究基因功能的一個(gè)非常有力的手段。所以申請人對這個(gè)基因的外顯子ni進(jìn)行了多態(tài)研究和關(guān)聯(lián)分析，為基因的應(yīng)用提供技術(shù)基礎(chǔ)。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種豬免疫性狀相關(guān)基因TAP1。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供所述豬免疫性狀相關(guān)基因TAP1的制備方法。本發(fā)明還有一個(gè)目的是通過對父母代及子代群體中進(jìn)行TAP1基因的SNP檢測，并在有免疫及生長記錄的子代群體中做關(guān)聯(lián)分析，找到與對綜合抗病力影響很大的分子遺傳標(biāo)記，提出TAP1基因在抗性育種方面的應(yīng)用。本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)提供一種豬免疫性狀相關(guān)基因TAP1，所述基因的序列表如SEQIDNO:l所示，基因序列全長為790bp，包括部分外顯子m。所述TAP1基因DNA序列中有1個(gè)G〉A(chǔ)堿基突變位點(diǎn)，所述堿基突變位點(diǎn)位于第652位置的堿基處，導(dǎo)致了BSP143I—RFLP多態(tài)性。所述的堿基突變位點(diǎn)是通過設(shè)計(jì)引物，應(yīng)用PCR-RFLP方法檢測得到。應(yīng)用PCR-RFLP的方法檢測豬TAP1基因外顯子HI突變的多態(tài)性，并初步進(jìn)行其基因型與豬的部分免疫性狀之間的關(guān)聯(lián)分析。本發(fā)明為豬的分子育種提供了一個(gè)新的分子標(biāo)記。檢測652G—652A堿基處堿基突變的正、反向引物序列如下所正向5，-TCGGAAATGTGGATAAGAGCA-3，反向5，-AAACAGACGGATAATGAAAGAGG-3，。本發(fā)明同時(shí)提供了所述豬免疫性狀相關(guān)基因TAP1的制備方法，包括以下步驟(1)根據(jù)報(bào)道的mRNA序列(GenBankAccession:DQ227990)BLASTN分析找到對應(yīng)的一豬基因組克隆序列(Accession:BX323833)。同源比較兩種序列推測豬TAP1基因含有11個(gè)外顯子，根據(jù)以上比對的結(jié)果，確認(rèn)外顯子大概的范圍，并設(shè)計(jì)相關(guān)引物。正反向引物設(shè)計(jì)參照的模板為豬的BAC克隆序列BX323833，其克隆號為XX-554F3，引物序列分別是正向5，-TCGGAAATGTGGATAAGAGCA-3，，反向5，-AAACAGACGGATAATGAAAGAGG~3，o(2)進(jìn)行PCR擴(kuò)增。15uL的反應(yīng)體系中加入DNA模板0.75uL，PCRReactionMix7.5uL，去離子水7.5uL，10mM引物前后各0.3uL，Taq酶0.15uL(2.5U/ul)。PCR反應(yīng)條件為:94。C預(yù)變性5min后，94。C變性30s、56。C退火30s、72"C延伸50s，30個(gè)循環(huán)，最后72。C延伸5min。PCR產(chǎn)物經(jīng)1.0%瓊脂糖凝膠電泳檢測。所述豬免疫性狀相關(guān)基因TAP1應(yīng)用于進(jìn)行基因型與豬的部分免疫性狀之間的關(guān)聯(lián)分析。依照本發(fā)明，所述的豬免疫性狀相關(guān)基因TAP1可以應(yīng)用在豬標(biāo)記輔助選擇中，為豬的分子育種提供了一個(gè)新的分子標(biāo)記。本發(fā)明的有益效果是本發(fā)明提供了一種豬免疫性狀相關(guān)基因TAP1，同時(shí)檢測到其堿基突變位點(diǎn)，本發(fā)明可應(yīng)用于為豬的標(biāo)記輔助育種提供新的分子標(biāo)記，應(yīng)用本發(fā)明有望從遺傳本質(zhì)上提高畜禽的抗性，減少疾病的發(fā)生，對于控制疾病，提高養(yǎng)豬效益和安全養(yǎng)殖具有標(biāo)本兼治的重要意義。圖1本發(fā)明關(guān)聯(lián)分析的流程示意圖圖2本發(fā)明中豬TAP1基因外顯子III部分序列的擴(kuò)增序列的電泳圖譜圖3本發(fā)明中豬TAP1基因測序G〉A(chǔ)突變圖圖4本發(fā)明中豬TAP1基因外顯子III的PCR—RFLP的兩種基因型(AB和BB)電泳圖譜具體實(shí)施例方式下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施例進(jìn)一步詳細(xì)說明本發(fā)明。實(shí)施例1豬免疫性狀相關(guān)基因TAP1的制備具體的實(shí)驗(yàn)過程描述如下1.引物設(shè)計(jì)根據(jù)公開報(bào)道的mRNA序列(GenBankAccession:DQ227990)BLASTN分析找到對應(yīng)的一豬基因組克隆序列，Accession:BX323833。同源比較兩種序列推測豬TAP1基因含有11個(gè)外顯子，根據(jù)以上比對的結(jié)果，確認(rèn)外顯子大概的范圍，并設(shè)計(jì)相關(guān)引物。正反向引物設(shè)計(jì)參照的模板為豬的BAC克隆序列BX323833，克隆號為XX-554F3，引物序列分別是正向5，-TCGGAAATGTGGATAAGAGCA-3，，反向5，-AAACAGACGGATAATGAAAGAGG-3，。2.PCR-RFLP方法建立(1)引物序列正向5，-TCGGAAATGTGGATAAGAGCA-3，，反向5，-AAACAGACGGATAATGAAAGAGG"3，。該引物擴(kuò)增片段長度790bp。(2)PCR擴(kuò)增條件15uL的反應(yīng)體系中加入DNA模板0.75uL，PCRReactionMix7.5uL，去離子水7.5uL，10mM引物前后各0.3uL，Taq酶0.15uL(2.5U/ul)。PCR反應(yīng)條件為9(C預(yù)變性5min后，94。C變性30s、56i:退火30s、72。C延伸50s，30個(gè)循環(huán)，最后72。C延伸5min。PCR產(chǎn)物經(jīng)1.0%瓊脂糖凝膠電泳檢測，瓊脂糖膠濃度為1%，見附圖2所示本發(fā)明中豬tapi基因外顯子m部分序列的擴(kuò)增序列的電泳圖譜，片段大小為790bp，圖中M泳道DNA分子量標(biāo)記(2000bpladder)。(3)RFLP檢測以上述PCR產(chǎn)物6.5111、10xbuffei0.75^d、限制性內(nèi)切酶BSP14310.25^1(10U/ul)混勻后離心，于37。C培養(yǎng)箱放置4h，用2%瓊脂糖凝膠電泳檢測酶切結(jié)果，記錄基因型，在紫外燈下拍照，結(jié)果見附圖3，本發(fā)明中豬TAP1基因測序發(fā)現(xiàn)G〉A(chǔ)突變。實(shí)施例2標(biāo)記性狀關(guān)聯(lián)分析實(shí)驗(yàn)程序如附圖l所示，首先進(jìn)行家系設(shè)計(jì)，本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)豬群來自廣東華農(nóng)溫氏畜牧股份有限公司水臺原種豬場的長白豬，父母代為17頭公豬和36頭母豬，子一代共306頭仔豬，父母代及子代全部進(jìn)行了基因型檢測；子代免疫前后采集血樣，進(jìn)行免疫指標(biāo)測定，父母代、子代基因組DNA抽提，進(jìn)行標(biāo)記基因的基因型檢測；然后進(jìn)行指標(biāo)與基因型間的關(guān)聯(lián)分析。子代在l、17、32日齡采集抗凝血和非抗凝血，用于血常規(guī)和抗體水平檢測。所分析的性狀主要是免疫性狀。根據(jù)采集樣品的群體結(jié)構(gòu)，申請人運(yùn)用混合模型來統(tǒng)計(jì)分析TAP1基因SNPs位點(diǎn)的基因型效應(yīng)及其與免疫指標(biāo)的關(guān)系其中Y為免疫性狀測定值向量；X為固定效應(yīng)關(guān)聯(lián)矩陣；(3為固定效應(yīng)參數(shù)向量，包括性別效應(yīng)、胎次效應(yīng)、生產(chǎn)線別效應(yīng)、候選基因的基因型效應(yīng)；Z為混合模型中的隨機(jī)效應(yīng)的關(guān)聯(lián)矩陣；Y為所有隨機(jī)效應(yīng)參數(shù)向量，包括公畜效應(yīng)、公畜內(nèi)母畜效應(yīng)；e為隨機(jī)殘差效應(yīng)；采用SAS(Version8.1)軟件中MIXEDMODELS程序進(jìn)行數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析。實(shí)驗(yàn)效果1、豬TAP1基因不同帶型基因型的驗(yàn)證以酶切帶型不同個(gè)體的DNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增。將PCR產(chǎn)物純化、克隆、后測序，測序結(jié)果顯示其堿基序列與根據(jù)酶切帶型所判斷的結(jié)果一致，見附圖4。2、PCR-RFLP診斷方法建立用引物擴(kuò)增豬基因組DNA得到了790bp特異性擴(kuò)增片段，序列分析結(jié)果表明在652nt處存在G>A突變，該基因座由兩個(gè)等位基因控制，A是沒有形成酶切位點(diǎn)的等位基因，B是形成酶切位點(diǎn)的等位基因。這兩個(gè)等位基因可組成三種基因型其中AA型為未發(fā)生酶切的純合型，只有790bp-DNA帶；BB型為發(fā)生酶切的純合型，651bp和139bp兩條DNA帶；AB為雜合型，790bp、651bp和139bp三條DNA帶；但是在現(xiàn)有的群體中只檢測到了AB型和BB型，見附圖4。3、標(biāo)記性狀關(guān)聯(lián)分析3.1豬tapi基因外顯子ni多態(tài)性與免疫性狀之間的關(guān)聯(lián)分析對豬TAP1基因外顯子ni多態(tài)性位點(diǎn)基因型檢測結(jié)果表明在306個(gè)個(gè)體中AB基因型有31個(gè)，BB基因型有275個(gè)。所分析的免疫性狀有:藍(lán)耳病毒抗體水平、豬瘟病毒抗體水平、偽狂犬抗體水平及血常規(guī)18項(xiàng)，分別對306頭仔豬在1、17、32三個(gè)日齡進(jìn)行檢測。不同基因型之間性狀顯著差異的結(jié)果總結(jié)如下。表i:tapi基因外顯子ni多態(tài)性位點(diǎn)基因型與1日齡部分免疫性狀的關(guān)聯(lián)分析<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>氺表示P〈0.05;襯表示PO.Ol由表1可知TAP1基因外顯子III的SNP位點(diǎn)對1日齡的RBC分布寬度有顯著影響(p<0.05)，此位點(diǎn)對其它免疫性狀沒有顯著影響。對RBC分布寬度顯著影響的TAP1基因外顯子III中SNP位點(diǎn)基因型的最小二乘均數(shù)見表2:表2:SNP位點(diǎn)(TAP1)基因型RBC分布寬度的最小二乘均數(shù)<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>由表2可知，AB基因型的RBC分布寬度顯著高于BB基因型(p<0.05)表3:TAP1基因外顯子III多態(tài)性位點(diǎn)基因型與17日齡部分免疫性狀的關(guān)聯(lián)分析<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>由表3可知TAP1基因外顯子III的SNP位點(diǎn)對17日齡的藍(lán)耳抗體和淋巴細(xì)胞絕對值有顯著影響(p<0.05)，此位點(diǎn)與其他免疫性狀沒有達(dá)到顯著水平。對藍(lán)耳抗體和淋巴細(xì)胞絕對值顯著影響的TAP1基因外顯子III中SNP位點(diǎn)基因型的最小二乘均數(shù)見表4:表4:SNP位點(diǎn)(TAP1)基因型藍(lán)耳抗體和淋巴細(xì)胞絕對值的最小二乘均數(shù)<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>由表4可知，AB基因型的藍(lán)耳抗體水平顯著低于BB基因型(p<0.05)，而淋巴細(xì)胞絕對值顯著高于BB基因型(p<0.05)。200810028459<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>由表6可知，從檢測的標(biāo)準(zhǔn)差來看，各類指標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)誤較小，各次測定的準(zhǔn)確性較好。三次測定的抗體水平及血常規(guī)指標(biāo)比較，經(jīng)T檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)除偽狂犬抗體、紅細(xì)胞壓積、平均HGB量、平均HGB濃度、淋巴細(xì)胞等指標(biāo)沒有顯著變化外，其他免疫指標(biāo)相差都達(dá)到顯著或極顯著水平。測定值減少的有藍(lán)耳抗體、豬瘟抗體、平均RBC體積、淋巴細(xì)胞等指標(biāo)，測定值增加的有紅細(xì)胞、血紅蛋白、紅細(xì)胞壓積、血小板、RBC分布寬度等指標(biāo)，其它性狀均表先為先減少后增加的趨勢。對豬TAP1基因外顯子m多態(tài)性位點(diǎn)基因型檢測結(jié)果表明在306個(gè)個(gè)體中AB基因型有31個(gè)，BB基因型有275個(gè)。所分析的免疫性狀有藍(lán)耳病毒抗體水平、豬瘟病毒抗體水平、偽狂犬抗體水平及血常規(guī)18項(xiàng)，分別對306頭仔豬在1、17、32三個(gè)日齡進(jìn)行。不同基因型之間性狀顯著差異的結(jié)果總結(jié)于表7:表7:TAP1基因外顯子III多態(tài)性位點(diǎn)基因型與1日齡部分免疫<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>承表示PO.05;w表示PO.Ol由表7可知TAP1基因外顯子III的SNP位點(diǎn)對1日齡的RBC分布寬度有顯著影響(p<0.05)，此位點(diǎn)與其他免疫性狀沒有達(dá)到顯著水平。對RBC分布寬度顯著影響的TAP1基因外顯子III中SNP位點(diǎn)基因型的最小二乘均數(shù)見表8:(p<0.05)表8SNPs位點(diǎn)(TAP1)基因型RBC分布寬度的最小二乘均數(shù)<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>由表8可知，AB基因型的RBC分布寬度顯著高于BB基因型。表9:TAP1基因外顯子m多態(tài)性位點(diǎn)基因型與17日齡部分免疫性狀的關(guān)聯(lián)分析<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>由表9可知TAP1基因外顯子m的SNP位點(diǎn)對17日齡的藍(lán)耳抗體和淋巴細(xì)胞絕對值有顯著影響(p<0.05)，此位點(diǎn)與其他免疫性狀沒有達(dá)到顯著水平。對藍(lán)耳抗體和淋巴細(xì)胞絕對值顯著影響的TAP1基因外顯子III中SNP位點(diǎn)基因型的最小二乘均數(shù)見表10:表10SNPs位點(diǎn)(TAP1)基因型藍(lán)耳抗體和淋巴細(xì)胞絕對值的最小二乘均數(shù)<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>由表10可知，AB基因型的藍(lán)耳抗體水平顯著低于BB基因型(p<0.05)，而淋巴細(xì)胞絕對值顯著高于BB基因型(pO.05)'SEQUENCELISTING<110〉華南農(nóng)業(yè)大學(xué)<120〉一種豬免疫性狀相關(guān)基因TAPl及其制備方法和應(yīng)用<130><160〉1<170>Paterrtinversion3.2<210〉1<211>790<212>D跳<213>人工序列<400〉1tcgga犯tgtggMaagagcaagcccaccccgctcaggtccacttggtggagaggaaaga60gccctggactgggtgggagtcaggagtcctggactccsgtgctgctcaggtgttgcttca120ctggccacct.tgggcg站ctctttcctcctaccatcctgiggcttcttaattaaccctcta180aaggtctggtgaggecacaggattacgagttccccgggggcccattccagtgccgagagt240gtgcgctgtttetgeaggataatgggcaagggtgaagggaggatgggcgggaggtgeage300ctggttagagctgagctgettaggctgettagacttgetctttctgacccgcccatctct360cctctccctccccaggggagatggccattccgttctt.cacaggccggctcactgactgga420ttctacgagatggggc郷tgctgccttcacgcagaacctaactctcatgtccatcctca480teatagecaggtctgactgctgagcttggaaggctggggacgggggaccctgaa肌gggc540gC3gttgg肌gttggggccgccctccaaagtgcacttctacggggtccctgaccgaccgg600ccc"tccttctttgtctccctetagcteggtgctgg敏tcgtgtgcgacgggatct3taa660cagcaccatgggccgcgtgcacagccacctgcagggagaggtgtttcggtctgtcctgcg720cc犯ga犯cagagttttttc3gaaig犯1:ca犯caggtgl:cttatgaacctctttcattat780ccgtctgttt790權(quán)利要求1.一種豬免疫性狀相關(guān)基因TAP1，其特征在于所述基因的序列表如SEQIDNO1所示。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述豬免疫性狀相關(guān)基因TAP1，其特征在于所述TAP1基因DNA序列中有1個(gè)G>A堿基突變位點(diǎn)，所述堿基突變位點(diǎn)位于第652位置的堿基處。3、根據(jù)權(quán)利要求2所述豬免疫性狀相關(guān)基因TAP1，其特征在于所述的堿基突變位點(diǎn)是通過設(shè)計(jì)引物，應(yīng)用PCR-RFLP方法檢測得到。4、一種權(quán)利要求1或2所述豬免疫性狀相關(guān)基因TAP1的制備方法，其特征在于包括以下步驟(1)根據(jù)GenBankAccession:DQ227990mRNA序列BLASTN分析找到對應(yīng)的一豬基因組克隆序列Accession:BX323833，同源比較兩種序列，以豬的BAC克隆序列BX323833為參照模板，設(shè)計(jì)正反向引物；(2)進(jìn)行PCR擴(kuò)增。5、根據(jù)權(quán)利要求4所述的豬免疫性狀相關(guān)基因TAP1的制備方法，其特征在于步驟(1)所述正反向引物的序列為正向5，-TCGGAAATGTGGATAAGAGCA-3，，反向5，-AAACAGACGGATAATGAAAGAGG"3，。6、根據(jù)權(quán)利要求4所述的豬免疫性狀相關(guān)基因TAP1的制備方法，其特征在于歩驟(2)所述PCR擴(kuò)增條件為94i:預(yù)變性5min;94C變性30s、56。C退火30s、72。C延伸50s、30個(gè)循環(huán)；72。C延伸5min。7、一種權(quán)利要求1所述豬免疫性狀相關(guān)基因TAP1的應(yīng)用，其特征在于應(yīng)用于進(jìn)行基因型與豬的部分免疫性狀之間的關(guān)聯(lián)分析或豬標(biāo)記遺傳輔助選擇。全文摘要本發(fā)明公開了一種豬免疫性狀相關(guān)基因TAP1，基因的序列表如SEQIDNO1所示，并檢測到一個(gè)影響豬免疫性狀的堿基突變位點(diǎn)。本發(fā)明還公開了獲得上述基因的方法；本發(fā)明提供的基因以及檢測到的堿基突變位點(diǎn)的成果可應(yīng)用于為豬的標(biāo)記輔助育種提供新的分子標(biāo)記，應(yīng)用本發(fā)明有望從遺傳本質(zhì)上提高畜禽的抗性，減少疾病的發(fā)生，對于控制疾病，提高養(yǎng)豬效益和安全養(yǎng)殖具有標(biāo)本兼治的重要意義。文檔編號C12N15/10GK101285065SQ200810028459公開日2008年10月15日申請日期2008年6月2日優(yōu)先權(quán)日2008年6月2日發(fā)明者吳珍芳,孫奴奴,陳慧勇申請人:華南農(nóng)業(yè)大學(xué)