專利名稱：：具有提高的淀粉蔗糖酶蛋白和提高的分支酶活性的遺傳修飾的植物細(xì)胞和植物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及具有提高的淀粉蔗糖酶蛋白活性和提高的分支酶活性的轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞和植物。這類植物細(xì)胞和植物與相應(yīng)非遺傳修飾的野生型植物(植物細(xì)胞)相比可合成改性淀粉和/或合成在O-6-位上帶有改變的支化度的α-1，6支鏈α-1，4-葡聚糖類和/或獲得較高產(chǎn)量。在農(nóng)業(yè)和林業(yè)領(lǐng)域中，生產(chǎn)具有提高的產(chǎn)量的植物，特別是為了確保持續(xù)增長的世界人口的食品需求和保證再生原料的供應(yīng)，已經(jīng)成為一個持久的努力方向。在傳統(tǒng)上，已經(jīng)進(jìn)行了通過培育獲得高產(chǎn)植物的嘗試。對于每一所關(guān)注的植物物種來說，必須進(jìn)行相應(yīng)的培育程序。然而，這要花費大量的時間和勞動。已經(jīng)部分通過對植物的遺傳操作、即通過在植物中有目的的引入和表達(dá)重組核酸分子而取得了進(jìn)展。這類手段具有如下優(yōu)點一般來說，它們并不限于一個植物物種，而可以將一個植物物種轉(zhuǎn)化成其它植物物種。因此，看起來需要提供可得到高產(chǎn)量的植物細(xì)胞和植物并提供用于生產(chǎn)這類植物細(xì)胞和植物的方法。鑒于近來正在逐步增長的與作為再生原料來源的植物物質(zhì)結(jié)合的重要性，為生產(chǎn)工業(yè)的要求而調(diào)整這些植物原料作努力是生物技術(shù)研究中的任務(wù)之一。為了有利于在盡可能多的應(yīng)用領(lǐng)域中使用再生原料，另外必不可少的是獲得大量的各種物質(zhì)。此外，必須增加這些植物物質(zhì)的產(chǎn)量以便提高生產(chǎn)再生植物原料來源的效率。除油、脂肪和蛋白質(zhì)外，多糖是最重要的再生植物原料。除纖維素外，淀粉與多糖一起起重要作用，因為它是高等植物中最重要的儲備物質(zhì)之一。除多糖淀粉在食品中的應(yīng)用外，它還可以廣泛用作生產(chǎn)工業(yè)化產(chǎn)品的再生原料。多糖淀粉由化學(xué)上一致的基本成分，葡萄糖分子組成，但它可以形成具有不同聚合度和支化度且由此主要在其物理和化學(xué)特性方面存在差異的不同分子的復(fù)雜的混合物。在主要由α-1，4-糖苷鍵連接的葡萄糖單位組成的非支化聚合物直鏈淀粉與支化是因存在其它α-1，6-糖苷鍵而產(chǎn)生的支化聚合物支鏈淀粉之間進(jìn)行區(qū)分。按照文獻(xiàn)中所述(Voet和Voet，《生物化學(xué)》(Biochemistry)，JohnWiley&Sons，1990)，平均每24-30個葡萄糖殘基出現(xiàn)一個α-1，6-糖苷鍵。這符合約3％-4％的支化度。具體的支化度是可變的且取決于各淀粉的來源(例如，植物物種、植物變種等)。通常用于淀粉的工業(yè)化生產(chǎn)的植物的總淀粉含量中的直鏈淀粉含量在10-25％之間改變。為了有利于廣泛應(yīng)用諸如例如淀粉這樣的多糖，看起來需要提供在多糖組成上改變的植物，且例如這些植物能夠合成特別適合于不同應(yīng)用的改性淀粉和/或高度支化的α-1，6-α-1，4-葡聚糖類。除培育法外，生產(chǎn)這類植物的一種可能性是有目的的通過遺傳工程法改變產(chǎn)淀粉的植物中的淀粉代謝。然而，有關(guān)的先決條件是對淀粉合成和/或改性過程中起作用的酶進(jìn)行鑒定和特征記述并分離編碼這些酶的相應(yīng)DNA分子。使淀粉形成的生物化學(xué)合成途徑基本上是公知的。植物細(xì)胞中的淀粉合成發(fā)生在質(zhì)體中。在光合活性組織中，它們發(fā)生在葉綠體中，在儲藏淀粉的無光合活性組織中，它們發(fā)生在造粉體中。參與淀粉合成的最重要的酶是淀粉合酶(例如，參見專利申請WO96/15248)、R1-酶(例如，參見WO97/11188)以及分支酶(例如，參見WO92/14827)。在淀粉的生物合成過程中諸如例如淀粉磷酸化酶(例如，參見WO98/40503)這樣的其它酶的確切作用尚未了解。為了以植物合成改性淀粉這樣一種方式進(jìn)一步提供改變?nèi)我庵参锏目赡苄?，也可能引入在野生型植物中不存在且編碼參與多糖合成的蛋白質(zhì)的外源核酸分子，諸如例如細(xì)菌或真菌的。例如，可以證實能夠通過在造粉體中對細(xì)菌果糖基轉(zhuǎn)移酶進(jìn)行造粉粒表達(dá)來合成所謂的“淀粉果聚糖”(Smeekens，《植物科學(xué)趨勢》(TrendsinPlantScience)第2卷第8期(1997)，286-288)。對馬鈴薯植物中的細(xì)菌糖原合酶進(jìn)行異源表達(dá)導(dǎo)致與野生型植物相比直鏈淀粉的含量輕度下降、支化度增加且支鏈淀粉的支化模式改變(Shewmaker等，《植物生理學(xué)》(Plant.Physiol.)104(1994)，1159-1166)。此外，細(xì)菌分支酶在不含直鏈淀粉的馬鈴薯突變株(amf)(Jacobsen等，Euphytica，44(1989)，43-48)中的馬鈴薯植物中的表達(dá)導(dǎo)致支鏈淀粉分子具有的分支點(Kortstee等，《植物雜志》(ThePlantJournal)10(1)，(1996)，83-90)比對照分子(amf)多25％。這種分支點的增加是由于改變較長側(cè)鏈的鏈長分布有利于較短側(cè)鏈所造成的。在碘染色后平均鏈長的下降和λmax的減少也是轉(zhuǎn)化植物中支鏈淀粉的支化結(jié)構(gòu)多于未轉(zhuǎn)化植物中支鏈淀粉的支化結(jié)構(gòu)的標(biāo)志(Kortstee等，參見上文)。然而，通過這種手段不能夠獲得約10％的糖原支化度。主要在動物和細(xì)菌中發(fā)現(xiàn)的一種多糖即糖原含有高度支化的α-1，6-α-1，4-葡聚糖類。糖原在側(cè)鏈的平均長度和聚合度方面也不同于淀粉。按照文獻(xiàn)中所述(Voet和Voet，《生物化學(xué)》(Biochemistry)，JohnWiley&Sons，1990)，糖原平均每8-12個葡萄糖殘基含有一個α-1，6-分支點。這符合約8％-12％的支化度。糖原分子量存在在1百萬-大于10億之間改變的各種數(shù)值(D.J.Manners《碳水化合物化學(xué)進(jìn)展》(AdvancesinCarbohydrateChemistry)，編輯M.L.Wolfrom，AcademicPress，NewYork(1957)，261-298；Geddes等，《碳水化合物研究》(Carbohydr.Res.)，261(1994)，79-89)。這些數(shù)值也非常依賴于相應(yīng)的生物體來源、其營養(yǎng)狀態(tài)以及所分離糖原的種類。通常通過昂貴和耗時的方法從貝類(例如殼菜紫貽貝)、哺乳動物肝臟或肌肉(例如家兔、大鼠)中獲得它(Bell等，《生物化學(xué)雜志》(Biochem.J.)28(1934)，882；Bueding和Orrell，《生物學(xué)與化學(xué)雜志》(J.Biol.Chem.)236(1961)，2854)。此外，在植物中，例如在玉米的su1-突變株中發(fā)現(xiàn)了所謂的藻糖原，它具有約10％的支化度且與支鏈淀粉相比表現(xiàn)出改變的側(cè)鏈分布(Yun和Matheson，《碳水化合物研究》(CarbohydrateResearch)，243(1993)，307-321)和不同的溶解度特性。然而，這類累積藻糖原的植物表現(xiàn)出最高達(dá)90％的淀粉含量下降(Zeeman等，《植物細(xì)胞》(PlantCell)10，(1998)，1699-1711)。此外，描述了使用淀粉蔗糖酶和分支酶合成α-1，6-支鏈α-1，4-葡聚糖類的體外方法，其中包括生產(chǎn)高度支化的(類似糖原的)葡聚糖類(德國專利申請DE19846635.8)。然而，其中并未描述在植物中生產(chǎn)這類糖原。因此，看起來需要提供以合理的價格生產(chǎn)改性淀粉和/或與植物中的野生型植物相比在O-6-位上具有改變的支化度的α-1，6-α-1，4-葡聚糖類的另一種方法。因此，構(gòu)成本發(fā)明基礎(chǔ)的技術(shù)問題是提供與相應(yīng)未修飾的野生型植物細(xì)胞和野生型植物相比含有在植物細(xì)胞和植物中含有的改變的多糖組成且如果可能還表現(xiàn)出較高產(chǎn)量的植物細(xì)胞和植物。這一問題已經(jīng)通過提供權(quán)利要求中所表征的實施方案而得到了解決。因此，本發(fā)明涉及遺傳修飾的轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞，其中所述的遺傳修飾是引入一種外源核酸分子或幾種外源核酸分子，與相應(yīng)的非遺傳修飾的野生型植物的植物細(xì)胞相比所述外源核酸分子的存在或表達(dá)可導(dǎo)致淀粉蔗糖酶蛋白的活性和分支酶蛋白的活性提高。所述的遺傳修飾可以是導(dǎo)致淀粉蔗糖酶活性提高和分支酶活性提高的任意遺傳修飾。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述的遺傳修飾是將編碼淀粉蔗糖酶蛋白和分支酶的一種外源核酸分子引入植物細(xì)胞的基因組中。例如，這種外源核酸分子可以是所謂的“雙構(gòu)建體”，它是一種用于植物轉(zhuǎn)化的含有既編碼淀粉蔗糖酶蛋白和也編碼分支酶的遺傳信息的單一載體。編碼均包含在所述“外源核酸分子”中的淀粉蔗糖酶和分支酶的核酸分子可以彼此獨立地在各自啟動子的控制下或它們在融合成翻譯單元后可以在相同啟動子的控制下。在另一個優(yōu)選的實施方案中，將幾種外源核酸分子引入植物細(xì)胞的基因組，其中一種外源核酸分子編碼淀粉蔗糖酶蛋白且另一種核酸分子編碼分支酶。由此可以將所述的外源核酸分子同時或連續(xù)引入植物細(xì)胞的基因組。在第一種情況中，將其稱作“共轉(zhuǎn)化”，在后一種情況中，將其稱作“超轉(zhuǎn)化”。因此術(shù)語“轉(zhuǎn)基因”指的是本發(fā)明的植物細(xì)胞含有可穩(wěn)定地整合入基因組的至少一種外源，優(yōu)選兩種外源核酸分子，優(yōu)選一種或兩種編碼淀粉蔗糖酶蛋白和分支酶的核酸分子。術(shù)語“外源核酸分子”優(yōu)選指的是編碼具有淀粉蔗糖酶活性的蛋白質(zhì)和具有分支酶活性的蛋白質(zhì)且不會天然存在于相應(yīng)植物中或不會以確切的空間次序天然存在于植物中或定位于不會天然存在的植物基因組中的一定位置上的核酸分子。優(yōu)選所述的外源核酸分子是一種由不同元件組成的重組分子，這些不同元件的組合或特定空間次序不會天然存在于植物中。本發(fā)明的植物含有至少一種外源核酸分子，這種核酸分子可編碼優(yōu)選與調(diào)節(jié)DNA元件連接的具有淀粉蔗糖酶活性的蛋白質(zhì)和具有分支酶活性的蛋白質(zhì)，所述的調(diào)節(jié)DNA元件可保證植物中的轉(zhuǎn)錄，特別是使用啟動子的轉(zhuǎn)錄。術(shù)語“幾種外源核酸分子”優(yōu)選指的是兩種核酸分子，其中一種外源核酸分子編碼淀粉蔗糖酶蛋白且第二種外源核酸分子編碼分支酶。原則上，所述的外源核酸分子可以是編碼淀粉蔗糖酶蛋白和分支酶的任意核酸分子。在本發(fā)明中，淀粉蔗糖酶蛋白(蔗糖1，4-α-D-葡聚糖4-α-葡糖基轉(zhuǎn)移酶，E.C.2.4.1.4.)指的是一種優(yōu)選在體外催化蔗糖轉(zhuǎn)化成水不溶性α-1，4-葡聚糖類和果糖的酶。提出了有關(guān)這種酶的下列反應(yīng)圖解蔗糖+(α-1，4-D-葡聚糖)n→D-果糖+(α-1，4-D-葡聚糖)n+1這是一種轉(zhuǎn)糖基反應(yīng)。這種體外反應(yīng)的產(chǎn)物是水不溶性α-1，4-葡聚糖類和果糖。核苷酸活化的糖類或輔因子對該反應(yīng)來說并非必要。然而，在體外由存在的諸如例如麥芽寡糖類、糊精或糖原這樣的葡糖基受體(或引物)刺激所述酶，在所述的葡糖基受體上按照上述反應(yīng)圖解轉(zhuǎn)化蔗糖的糖殘基，同時伴隨有α-1，4-葡聚糖的鏈延伸(Remaud-Simeon等，S.B.Petersen，B.Svenson和S.Pedersen(編輯)《碳水化合物生物工程》(Carbohydratebioengineering)313-320(1995)；ElsevierScienceB.V.，Amsterdam，Netherlands)。一般來說，在本發(fā)明中，所有催化由蔗糖合成直鏈α-1，4-葡聚糖的淀粉蔗糖酶均是合適的。迄今為止僅已知淀粉蔗糖酶來源于細(xì)菌種類，特別是主要來自奈瑟氏球菌屬的種類(MacKenzie等《加拿大微生物學(xué)雜志》(Can.J.Microbiol.)24(1978)，357-362)。因此，優(yōu)選使用來源于原核生物的淀粉蔗糖酶。例如，已知淀粉蔗糖酶來源于深黃奈瑟氏球菌(Okada和Hehre，《生物學(xué)與化學(xué)雜志》(J.Biol.Chem.)249(1974)，126-135；MacKenzie等《加拿大微生物學(xué)雜志》(Can.J.Microbiol.)23(1977)，1303-1307)或狗奈瑟氏球菌、灰色奈瑟氏球菌、反硝化奈瑟氏球菌、干燥奈瑟氏球菌和微黃奈瑟氏球菌(MacKenzie等《加拿大微生物學(xué)雜志》(Can.J.Microbiol.)24(1978)，357-362)。此外，WO95/31553和PCT/EP98/05573中描述了來源于多糖奈瑟氏球菌的淀粉蔗糖酶。在本發(fā)明另一個優(yōu)選的實施方案中，所述的外源核酸分子編碼來自奈瑟氏球菌屬的細(xì)菌的淀粉蔗糖酶。在本發(fā)明的一個特別優(yōu)選的實施方案中，所述的外源核酸分子編碼來源于多糖奈瑟氏球菌的淀粉蔗糖酶，更優(yōu)選編碼具有如國際專利申請PCT/EP98/05573中所公開的核酸或氨基酸序列的淀粉蔗糖酶。在多糖奈瑟氏球菌中表達(dá)的酶是極其穩(wěn)定的，它與聚合產(chǎn)物牢固連接并以競爭性方式被反應(yīng)產(chǎn)物果糖所抑制(MacKenzie等《加拿大微生物學(xué)雜志》(Can.J.Microbiol.)23(1977)，1303-1307)。使用奈瑟氏球菌屬的種類多糖奈瑟氏球菌分泌淀粉蔗糖酶(Riou等《加拿大微生物學(xué)雜志》(Can.J.Microbiol.)32(1986)，909-911)，而在使用其它奈瑟氏球菌屬的種類時，淀粉蔗糖酶保留在細(xì)胞中。分支酶(α-1，4-葡聚糖α-1，4-葡聚糖6-葡糖基轉(zhuǎn)移酶，E.C.2.4.1.18)是一種催化轉(zhuǎn)糖基反應(yīng)的蛋白質(zhì)，其中α-1，4-葡聚糖供體的α-1，4-鍵被水解且在此過程中處于游離狀態(tài)的α-1，4-葡聚糖鏈被轉(zhuǎn)到α-1，4-葡聚糖受體鏈上且由此被轉(zhuǎn)化成α-1，6-鍵。一般來說，與本發(fā)明有關(guān)的任意來源(細(xì)菌、真菌、植物、動物)的所有分支酶均是合適的，例如來自玉米的分支酶(例如，參見Baba等《生物化學(xué)和生物物理學(xué)通訊》(Biochem.Biophys.Res.Commun.)181(1991)，87-94；基因庫登記號AF072724、AF072725)；來自馬鈴薯的分支酶(Kossmann等《分子基因遺傳學(xué)》(Mol.Gen.Henet.)203(1991)，237-244；Jobling等，基因庫登記號AJ011885)；來自稻米的分支酶(Mizuno等《生物化學(xué)雜志》(J.Biochem.)112(1992)，643-651；Kawasaki等《分子基因遺傳學(xué)》(Mol.Gen.Genet.)237(1993)，10-16；Mizuno等《生物學(xué)與生物化學(xué)雜志》(J.Biol.Chem.)268(1993)，19084-19091；Nakamura和Yamanouchi《植物生理學(xué)》(PlantPhysiol.)99(1992)，1265-1266)；來自小麥的分支酶(Baga等《植物分子生物學(xué)》(PlantMol.Biol.)40(1999)，1019-1030；Rahman等《應(yīng)用遺傳學(xué)理論》(Theor.Appl.Genet.)98(1999)，156-163和基因庫登記號Y12320)；來自大麥的分支酶(基因庫登記號AF064561)；來自集胞藍(lán)細(xì)菌屬的分支酶(基因庫登記號D63999)；來自大腸桿菌的分支酶(Baecker等《生物學(xué)與生物化學(xué)雜志》(J.Biol.Chem.)261(1986)，8738-8743；基因庫登記號M13751)；來自嗜熱脂肪芽孢桿菌的分支酶(基因庫登記號M35089)；來自金霉素鏈霉菌的分支酶(基因庫登記號L11647)；來自熱溶芽孢桿菌的分支酶(基因庫登記號Z14057)；來自聚球藍(lán)細(xì)菌屬PCC6301的分支酶(基因庫登記號M31544)；來自聚球藍(lán)細(xì)菌屬PCC7942的分支酶(Kiel等《基因》(Gene)78(1989)，9-17)和來自根癌土壤桿菌的分支酶(基因庫登記號AF033856)。對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說，能夠通過分子生物學(xué)標(biāo)準(zhǔn)方法，尤其如Sambrook等所述(Sambrook等《分子克隆實驗指南》(MolecularcloningAlaboratorymanual)第2版，美國冷泉港實驗室出版(ColdSpringHarborLaboratoryPress)，NY，USA(1989))分離相應(yīng)的基因。在本發(fā)明的一個優(yōu)選的實施方案中，所述的外源核酸分子編碼來自原核生物，優(yōu)選來自奈瑟氏球菌屬的細(xì)菌，特別優(yōu)選來自反硝化奈瑟氏球菌的分支酶且甚至更優(yōu)選編碼具有用SEQIDNo.1表示的核苷酸序列或具有用SEQIDNo.2描述的氨基酸序列的分支酶。在另一個優(yōu)選的實施方案中，所述的外源核酸分子編碼植物分支酶。存在各種將DNA引入植物宿主細(xì)胞的技術(shù)。這些技術(shù)包括使用根癌土壤桿菌或發(fā)根土壤桿菌作為轉(zhuǎn)化劑以T-DNA轉(zhuǎn)化植物細(xì)胞；原生質(zhì)體融合；注射；DNA的電穿孔；使用生物(biolistic)手段引入DNA；以及其它可能的方法。集中檢驗農(nóng)桿菌屬介導(dǎo)的對植物細(xì)胞的轉(zhuǎn)化的應(yīng)用且充分描述在下列文獻(xiàn)中EP0120516；Hoekema《二元植物載體系統(tǒng)》(TheBinaryPlantVectorSystem)，OffsetdrukkerijKantersB.V.，Alblasserdam(1985)第V章；Fraley等《植物科學(xué)評論綜述》(Crit.Rev.PlantSci.)4，1-46；和An等《歐洲分子生物學(xué)協(xié)會雜志》(EMBOJ.)4，(1985)，277-287。有關(guān)馬鈴薯的轉(zhuǎn)化，例如參見Rocha-Sosa等《歐洲分子生物學(xué)協(xié)會雜志》(EMBOJ.)8，(1989)，29-33。描述了通過基于農(nóng)桿菌屬的載體轉(zhuǎn)化單子葉植物(Chan等《植物分子生物學(xué)》(PlantMol.Biol.)22，(1993)，491-506；Hiei等《植物雜志》(PlantJ.)6(1994)271-282；Deng等《科學(xué)在中國》(ScienceinChina)33，(1990)，28-34；Wilmink等《植物細(xì)胞報導(dǎo)》(PantCellReports)11，(1992)，76-80)；May等《生物/技術(shù)》(Bio/Technology)13，(1995)，486-492；Connor和Domisse《國際植物科學(xué)雜志》(Int.J.Plant.Sci.)153(1992)，550-555；Ritchie等《轉(zhuǎn)基因研究》(TrangenicRes.)2，(1993)，252-265)。用于轉(zhuǎn)化單子葉植物的可選擇的系統(tǒng)有使用生物(biolistic)手段進(jìn)行轉(zhuǎn)化(Wan和Lemaux《植物生理學(xué)》(PlantPhysiol.)104，(1994)，37-48；Vasil等《生物/技術(shù)》(Bio/Technology)11，(1993)，1553-1558；Ritala等《植物分子生物學(xué)》(PlantMol.Biol.)24，(1994)，317-325；Spencer等《應(yīng)用遺傳學(xué)理論》(Theor.Appl.Genet.)79，(1990)，625-631)；原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化；部分通透細(xì)胞的電穿孔；通過玻璃纖維引入DNA。特別地，文獻(xiàn)中已經(jīng)反復(fù)描述了玉米的轉(zhuǎn)化(例如，參見WO95/06128、EP0513849、EP0465875、EP0292435；Fromm等《生物技術(shù)》(Biotechnology)8，(1990)，833-844；Gordon-Kamm等《植物細(xì)胞》(PlantCell)2，(1990)，603-618；Koziel等《生物技術(shù)》(Biotechnology)11，(1993)，194-200；Moroc等《應(yīng)用遺傳學(xué)理論》(Theor.Appl.Genet.)80，(1990)，721-726))。已經(jīng)描述了對其它種類谷物的成功轉(zhuǎn)化，例如對大麥的成功轉(zhuǎn)化(Wan和Lemaux，參見上文；Ritala等，參見上文；Krens等《自然》(Nature)296，(1982)，72-74)和對小麥的成功轉(zhuǎn)化(Nehra等《植物雜志》(PlantJ.)5，(1994)，285-297)。一般來說，可以將在植物細(xì)胞中具有活性的任意啟動子用于表達(dá)外源核酸分子(多種外源核酸分子)?？梢赃@樣一種方式選擇啟動子，即在本發(fā)明植物中的表達(dá)組成上或僅在某種組織中發(fā)生、在植物發(fā)育的某一時間點上發(fā)生或在由外部影響因素決定的某一時間發(fā)生。就所述植物而言，啟動子可以是同源的或異源的。合適的啟動子有例如花椰菜花葉病毒的35SRNA啟動子和用于組成型表達(dá)的玉米的遍在蛋白質(zhì)啟動子；用于在馬鈴薯中的塊莖特異性表達(dá)的patatin基因啟動子B33(Rocha-Sosa等《歐洲分子生物學(xué)協(xié)會雜志》(EMBOJ.)8，(1989)，23-29)或確保僅在光合活性組織中表達(dá)的啟動子，例如ST-LS1啟動子(Stockhaus等《美國國家科學(xué)院院報》(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)84(1987)7943-7947；Stockhaus等《歐洲分子生物學(xué)協(xié)會雜志》(EMBOJ.)8，(1989)，2445-2451)；Ca/b啟動子(例如，參見US5656496、US5639952、Bansal等《美國國家科學(xué)院院報》(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)89(1992)3654-3658)和RubiscoSSU啟動子(例如，參見US5034322、US4962028)或用于胚乳特異性表達(dá)的谷蛋白啟動子(Leisy等《植物分子生物學(xué)》(PlantMol.Biol.)14，(1990)，41-50；Zheng等《植物雜志》(PlantJ.)4，(1993)，357-366；Yoshihara等《FEBS通訊》(FEBSLett.)383，(1996)，213-218)；shrunken-1啟動子(Werr等《歐洲分子生物學(xué)協(xié)會雜志》(EMBOJ.)4，(1985)，1373-1380)；小麥的HMG啟動子；USP啟動子；菜豆異類黃酮靈啟動子或玉米的玉米醇溶蛋白基因啟動子(Pedersen等《細(xì)胞》(Cell)29，(1982)，1015-1026；Quatroccio等《植物分子生物學(xué)》(PlantMol.Biol.)15，(1990)，81-93)。外源核酸分子(多種外源核酸分子)的表達(dá)在那些具有增加的蔗糖含量或儲備蔗糖的植物器官中特別有利。這類器官有例如甜菜中的蕪菁或甘蔗或糖小米(sugarmillet)的莖。因此，優(yōu)選使用的啟動子是那些介導(dǎo)這些器官中的表達(dá)的啟動子。然而，也可以使用其它啟動子，即那些在由外部因素決定的時間點上具有活性的啟動子(例如，參見WO9307279)。此處，熱激蛋白的啟動子可能具有特殊意義，因為它們允許簡單的誘導(dǎo)。此外，可以使用種子特異性啟動子，諸如，例如來自蠶豆的USP啟動子，它可確保蠶豆和其它植物中的種子特異性表達(dá)(Fiedler等《植物分子生物學(xué)》(PlantMol.Biol.)22，(1993)，669-679；Bumlein等《分子基因遺傳學(xué)》(Mol.Gen.Genet.)225，(1991)，459-467)。此外，可以例如按WO91/01373、WO99/16879中所述和vanHaaren和Houck所述(《植物分子生物學(xué)》(PlantMol.Biol.)21，(1993)，625-640)使用果實特異性啟動子。此外，可以存在終止序列，它用于正確終止轉(zhuǎn)錄和用于因轉(zhuǎn)錄物穩(wěn)定化中的作用所引起的將聚腺苷酸尾添加到所述轉(zhuǎn)錄物上。文獻(xiàn)中已經(jīng)描述了這類元件(例如，參見Gielen等《歐洲分子生物學(xué)協(xié)會雜志》(EMBOJ.)8，(1989)，23-29)且它們是可任意互換的。本發(fā)明的植物細(xì)胞可以區(qū)別于天然存在的植物細(xì)胞，尤其是由于下列事實它們含有一種或多種在這些細(xì)胞中并非天然存在的外源核酸分子或發(fā)現(xiàn)這類分子被整合入所述植物的基因組中的一定位置，在該位置所述的外源核酸分子通常不存在，即被整合入另一個基因組的環(huán)境中。此外，本發(fā)明的這類轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞可以區(qū)別于天然存在的植物細(xì)胞，因為可能除了天然存在于植物細(xì)胞中的這類分子的拷貝之外，它們還含有穩(wěn)定整合入其基因組的外源核酸分子(多種外源核酸分子)的至少一個拷貝。如果引入所述細(xì)胞的核酸分子是天然存在于植物中的分子的附加拷貝，那么本發(fā)明的植物細(xì)胞可以區(qū)別于天然存在的植物細(xì)胞，特別是由于這種(這些)附加的拷貝定位于它(它們)并不天然存在的基因組中的一定位置上這一事實。例如，可以通過DNA印跡分析來檢測這種情況。此外，本發(fā)明的植物細(xì)胞可以區(qū)別于天然存在的植物細(xì)胞，優(yōu)選通過下列特征之一如果所引入的核酸分子相對于植物來說是異源的，那么轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞顯示出所引入核酸分子的轉(zhuǎn)錄物。例如，可以用RNA印跡分析檢測它們。優(yōu)選本發(fā)明的植物細(xì)胞含有由所引入的外源核酸分子編碼的蛋白質(zhì)。例如可以通過免疫方法，特別是通過蛋白質(zhì)印跡分析進(jìn)行檢測。如果所引入的分子相對于所述植物而言是同源的，那么本發(fā)明的轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞可以例如因所引入的外源核酸分子的附加表達(dá)而區(qū)別于天然存在的植物細(xì)胞。這種轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞優(yōu)選含有所述外源核酸分子的多種轉(zhuǎn)錄物。例如，可以通過RNA印跡分析進(jìn)行檢測。術(shù)語“遺傳修飾的”指的是植物細(xì)胞在其遺傳信息方面通過引入一種外源核酸分子或幾種外源核酸分子而得到改變且所述外源核酸分子的存在或表達(dá)導(dǎo)致表型改變。由此表型改變優(yōu)選指的是植物(植物細(xì)胞)的一種或多種功能的可測定改變。例如，本發(fā)明的植物細(xì)胞因所引入的核酸分子的存在或表達(dá)而表現(xiàn)出具有淀粉蔗糖酶活性的蛋白質(zhì)的活性提高和具有分支酶活性的蛋白質(zhì)的活性提高。在本發(fā)明的框架內(nèi)，術(shù)語“活性提高”指的是在植物中編碼具有淀粉蔗糖酶活性的蛋白質(zhì)和編碼具有分支酶活性的蛋白質(zhì)的核酸分子(幾種核酸分子)的表達(dá)增加、具有淀粉蔗糖酶活性和具有分支酶活性的蛋白質(zhì)的量增加或具有淀粉蔗糖酶活性的蛋白質(zhì)的活性和具有分支酶活性的蛋白質(zhì)的活性提高。例如，可以通過測定編碼這類蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)錄物的量，例如通過RNA印跡分析來確定所述表達(dá)的增加。在這里，增加優(yōu)選指的是與相應(yīng)非遺傳修飾的植物細(xì)胞相比轉(zhuǎn)錄物的量至少增加10％，優(yōu)選至少增加20％，特別優(yōu)選至少增加50％且尤其優(yōu)選至少增加75％。例如，可以通過DNA印跡分析來測定具有淀粉蔗糖酶活性或具有分支酶活性的蛋白質(zhì)的量的增加。在這里，增加優(yōu)選指的是與相應(yīng)非遺傳修飾的細(xì)胞相比具有淀粉蔗糖酶活性或具有分支酶活性的蛋白質(zhì)的量至少增加10％，優(yōu)選至少增加20％，特別優(yōu)選至少增加50％且尤其優(yōu)選至少增加75％。例如，可以如實施例中所述測試淀粉蔗糖酶蛋白和分支酶的活性。此外，可以如Lloyd等所述測定分支酶的活性(《生物化學(xué)雜志》(Biochem.J.)338(1999)，515-521)。還可以如下面的部分“材料和方法…”，部分3中所述測定淀粉蔗糖酶的活性。令人意外地發(fā)現(xiàn)含有具有提高活性的淀粉蔗糖酶和提高活性的分支酶的這類植物細(xì)胞的植物可合成無法由相應(yīng)的非遺傳修飾的野生型植物細(xì)胞合成的在O-6-位上帶有改變的支化度的α-1，6支鏈α-1，4-葡聚糖類。在本發(fā)明的一個實施方案中，本發(fā)明的植物細(xì)胞含有在O-6-位上帶有至少2％的支化度，優(yōu)選至少4％支化度的α-1，6-支鏈α-1，4-葡聚糖類。在另一個實施方案中，所述的支化度至少為6％，優(yōu)選至少為8％，特別優(yōu)選至少為10％且尤其優(yōu)選至少為12％。在本發(fā)明的框架內(nèi)，“支化度”指的是與按不同方式連接的葡萄糖單位相比O-6-位上分支的平均數(shù)量?？梢酝ㄟ^甲基化分析，例如如下進(jìn)一步所述來測定支化度。例如，有關(guān)這種方法的一般信息還可以在《通過GLC和MS分析碳水化合物》(AnalysisofCarbohydratesbyGLCandMS)(Biermann，C.J.和McGinnis，G.D.(編輯)CRCPress(1989)，第9章，Carpita，N.C.和Shea，E.M.，157-216)或BjrndalH.等(Angew.Chem.，82，(1970)，643-652；Int.Ed.Engl.9，(1970)，610-619)中找到。在本發(fā)明的另一個實施方案中，本發(fā)明的植物細(xì)胞合成了不同于相應(yīng)野生型植物細(xì)胞的淀粉的改性淀粉，所述的不同在于物理化學(xué)特性，特別是直鏈淀粉/支鏈淀粉的比例、支化度、平均鏈長、磷酸酯含量、糊化特性、淀粉顆粒的大小和/或形狀方面。特別地，與野生型淀粉相比，這類淀粉在有關(guān)粘度和/或淀粉糊的膠凝能力方面可以得到改變。在本發(fā)明的另一個實施方案中，含有本發(fā)明植物細(xì)胞的植物比相應(yīng)非遺傳修飾的野生型植物具有更高的產(chǎn)量。在本發(fā)明范圍內(nèi)，術(shù)語“野生型植物”指的是用作產(chǎn)生本發(fā)明植物的原料的植物，即在不考慮引入的遺傳修飾的情況下，其遺傳信息符合本發(fā)明的植物的遺傳信息。本文的術(shù)語“產(chǎn)量提高”指的是產(chǎn)量至少提高5％，優(yōu)選至少提高10％，特別優(yōu)選至少提高20％且尤其優(yōu)選至少提高30％。術(shù)語“產(chǎn)量提高”優(yōu)選指的是特別當(dāng)以每株植物的鮮重為基準(zhǔn)測定時物質(zhì)和/或生物質(zhì)產(chǎn)量的提高。這類產(chǎn)量的提高優(yōu)選涉及可以采收的植物部位，諸如種子、果實、貯藏根、根、塊莖、花、芽、枝條、莖或木材。根據(jù)本發(fā)明，如果在相同條件下栽培，那么與相應(yīng)的相同基因組型的未轉(zhuǎn)化植物相比涉及生物質(zhì)和/或內(nèi)含物的產(chǎn)量至少比野生型植物提高3％，優(yōu)選至少提高10％，特別優(yōu)選至少提高20％且尤其優(yōu)選至少提高30％乃至40％。在本發(fā)明的另一個實施方案中，本發(fā)明植物細(xì)胞具有比相應(yīng)非遺傳修飾的野生型植物細(xì)胞增加的熱值。將術(shù)語“熱值”定義為身體通過消化食物獲取和用于滿足能量需求的能量的量(以卡或焦耳給出)。術(shù)語“增加的熱值”指的是熱值至少增加5％，優(yōu)選至少增加10％，特別優(yōu)選至少增加20％且尤其優(yōu)選至少增加30％。具有高熱值的植物對食品工業(yè)，特別是諸如例如病人或老年人這樣具有高能量需求的人的飲食、嬰兒或參加競賽的運(yùn)動員的飲食具有意義。在一個優(yōu)選的實施方案中，編碼淀粉蔗糖酶和分支酶的核苷酸序列包括確保在諸如液泡或質(zhì)體這樣的特定細(xì)胞區(qū)室內(nèi)定位的蛋白質(zhì)引導(dǎo)信號序列。在一個特別優(yōu)選的實施方案中，編碼所述兩種酶的核苷酸序列包括確保兩種酶定位于相同細(xì)胞區(qū)室內(nèi)的蛋白質(zhì)引導(dǎo)信號序列。在這方面，所述的外源核酸分子可以包括確保淀粉蔗糖酶和分支酶定位于相同細(xì)胞區(qū)室內(nèi)的一種或多種蛋白質(zhì)引導(dǎo)信號序列。特別有可能的是編碼淀粉蔗糖酶或分支酶的每一編碼區(qū)包括一種以上的信號序列或不同信號序列的組合。在本發(fā)明的另一個實施方案中，所述的外源核酸分子帶有一種或多種介導(dǎo)淀粉蔗糖酶蛋白和分支酶的液泡定位的蛋白質(zhì)引導(dǎo)信號序列。編碼“外源核酸分子”中含有的淀粉蔗糖酶和分支酶的核酸分子可以在一種或幾種彼此獨立的蛋白質(zhì)引導(dǎo)信號序列的控制下或它們可以在作為翻譯單位融合后的一種或幾種蛋白質(zhì)引導(dǎo)信號序列的共同控制下。在本發(fā)明的另一個實施方案中，所述的外源核酸分子帶有一種或幾種各自介導(dǎo)淀粉蔗糖酶蛋白和分支酶的液泡定位的蛋白質(zhì)引導(dǎo)信號序列。在這個實施方案中，將幾種外源核酸分子引入植物細(xì)胞的基因組，其中一種外源核酸分子編碼淀粉蔗糖酶蛋白且另一種核酸分子編碼分支酶。如上所述，可以將所述的外源核酸分子同時或連續(xù)引入植物細(xì)胞的基因組。各外源核酸分子含有一種或多種介導(dǎo)各淀粉蔗糖酶蛋白和分支酶的液泡定位的蛋白質(zhì)引導(dǎo)信號序列，其中所述的蛋白質(zhì)引導(dǎo)信號序列可以彼此相同或可以彼此不同。例如，可以將patatin蛋白質(zhì)的N-末端序列(146個氨基酸)用作液泡引導(dǎo)序列(Sonnewald等，《植物雜志》(PlantJ.)1，(1998)，95-106)。在一個優(yōu)選的實施方案中，使用用SEQIDNo.7描述的信號序列。此外，可以將下列信號序列用作液泡引導(dǎo)序列番茄酸性轉(zhuǎn)化酶的N-末端信號序列(基因庫登記號LM81081)或馬鈴薯酸性轉(zhuǎn)化酶的N-末端信號序列(基因庫登記號L29099)；甜馬鈴薯sporamin的N-末端信號序列(Koide等《植物生理學(xué)》(PlantPhysiol.)114(1997)，863-870)；大麥aleurain的N-末端信號序列(Vitale和Raikhel《植物科學(xué)趨勢》(TrendsinPlantScience)4(1999)，149-155)；馬鈴薯蛋白酶抑制劑的N-末端信號序列(基因庫登記號X04118)；和大麥凝集素的C-末端液泡引導(dǎo)信號肽(Vitale和Raikhel，上述文獻(xiàn)中所述)。其它液泡信號序列描述在下列文獻(xiàn)中例如Matsuoka和Neuhaus《實驗植物學(xué)雜志》(JournalofExperimentalBotany)50，(1999)，165-174；Chrispeels和Raikhel《細(xì)胞》(Cell)68，(1992)，613-616；Matsuoka和Nakamura《美國國家科學(xué)院院報》(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)88，(1991)834-838；Bednarek和Raikhel《植物細(xì)胞》(PlantCell)3，(1991)，1195-1206；Nakamura和Matsuoka《植物生理學(xué))》(PlantPhys.)101(1993)，1-5。一般來說，可以使用包括確保將相應(yīng)蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的N-末端信號序列與C-末端液泡引導(dǎo)序列的組合。有關(guān)液泡引導(dǎo)序列的概述可以在Chrispeels和Raikhel的《細(xì)胞》(Cell)68(1992)，613-616中找到。由于液泡通?？梢詢浯罅康挠米鞯矸壅崽敲傅孜锏恼崽?，所以該區(qū)室適合于產(chǎn)生因淀粉蔗糖酶蛋白活性提高和分支酶活性提高而在液泡中合成α-1，6支鏈α-1，4-葡聚糖類的植物細(xì)胞。在本發(fā)明的一個實施方案中，這些葡聚糖在O-6-位上帶有的支化度至少為1％，優(yōu)選至少為4％，特別優(yōu)選至少為7％且尤其優(yōu)選至少為10％。在本發(fā)明的另一個實施方案中，可以通過選擇顯示出不同比例分支酶活性與淀粉蔗糖酶活性的轉(zhuǎn)基因植物來控制O-6-位上的支化度。在一個特別優(yōu)選的實施方案中，淀粉蔗糖酶和分支酶均定位在液泡中的本發(fā)明植物細(xì)胞表現(xiàn)出熱值增加。對于該術(shù)語的定義參見上文。在本發(fā)明的另一個實施方案中，外源核酸分子具有一種或多種介導(dǎo)淀粉蔗糖酶蛋白和分支酶蛋白的質(zhì)體定位的蛋白質(zhì)引導(dǎo)信號序列。編碼“外源核酸分子”中含有的淀粉蔗糖酶和分支酶的核酸分子可以各自彼此獨立地在一種或多種蛋白質(zhì)引導(dǎo)信號序列的控制下或它們可以在作為翻譯單位融合后的一種或多種蛋白質(zhì)引導(dǎo)信號序列的控制下。在本發(fā)明的另一個實施方案中，外源核酸分子具有一種或多種各自介導(dǎo)淀粉蔗糖酶蛋白和分支酶蛋白的質(zhì)體定位的蛋白質(zhì)引導(dǎo)信號序列。在該實施方案中，將幾種外源核酸分子引入植物細(xì)胞的基因組，其中一種外源核酸分子編碼淀粉蔗糖酶蛋白且另一種外源核酸分子編碼分支酶。如上所述，可以將所述的外源核酸分子同時或連續(xù)引入植物細(xì)胞的基因組。所引入的外源核酸分子各自含有一種或多種介導(dǎo)淀粉蔗糖酶蛋白和分支酶蛋白各自的質(zhì)體定位的蛋白質(zhì)引導(dǎo)信號序列，其中所述的蛋白質(zhì)引導(dǎo)信號序列彼此相同或彼此不同。例如，可以將來自菠菜的ferrodoxinNADP+氧化還原酶(FNR)的信號序列用作信號序列。該序列含有來自菠菜的質(zhì)體蛋白質(zhì)ferrodoxinNADP+氧化還原酶cDNA的5’非翻譯區(qū)和側(cè)翼轉(zhuǎn)運(yùn)肽序列(核苷酸-171-+165；Jansen等《最新遺傳學(xué)》(CurrentGenetics)13，(1988)，517-522)。此外，例如可以將來自玉米的蠟質(zhì)蛋白的轉(zhuǎn)運(yùn)肽和成熟蠟質(zhì)蛋白的前34個氨基酸(Klsgen等《分子基因遺傳學(xué)》(Mol.Gen.Get.)217，(1989)，155-161)用作信號序列。可以使用的其它質(zhì)體引導(dǎo)序列有核酮糖二磷酸羧化酶-加氧酶小亞單位的信號序列(Wolter等《美國國家科學(xué)院院報》(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)85，(1988)846-850；Nawrath等《美國國家科學(xué)院院報》(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)91，(1994)12760-12764)；NADP-蘋果酸脫氫酶的信號序列(Gallardo等《植物》(Planta)197(1995)，324-332)；和谷胱甘肽還原酶的信號序列(Creissen等《植物雜志》(PlantJ.)8(1995)，167-175)。在本發(fā)明的一個優(yōu)選的實施方案中，使用不含成熟蠟質(zhì)蛋白前34個氨基酸的玉米蠟質(zhì)蛋白的轉(zhuǎn)運(yùn)肽(參見上文)(參見實施例1)。在一個特別優(yōu)選的實施方案中，使用來自馬鈴薯的R1蛋白質(zhì)的質(zhì)體信號序列(Lorberth等《天然生物技術(shù)》(NatureBiotechnology)16(1998)，473-477)。通過細(xì)菌果糖基轉(zhuǎn)移酶的造粉粒表達(dá)可以證實質(zhì)體還含有可以在造粉體中通過果糖基轉(zhuǎn)移酶轉(zhuǎn)化成“淀粉果聚糖”的蔗糖(Smeekens《植物科學(xué)趨勢》(TrendsinPlantScience)第2卷第8期(1997)，286-288)。因此，該區(qū)室還適合于共同表達(dá)淀粉蔗糖酶基因和分支酶基因且允許合成與在野生型植物中合成的淀粉相比被改變的改性淀粉，所述的改變例如是在其物理化學(xué)特性、特別是直鏈淀粉/支鏈淀粉比例、支化度、平均鏈長、磷酸酯含量、糊化特性、淀粉顆粒的大小和/或形狀方面。因此，在本發(fā)明的另一個實施方案中，本發(fā)明的轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞合成了改性淀粉。在本發(fā)明的一個優(yōu)選的實施方案中，這些淀粉的凝膠穩(wěn)定性與提取自野生型植物的淀粉相比得到了改變。在一個特別優(yōu)選的實施方案中，最大凝膠穩(wěn)定性比提取自野生型植物的淀粉至少增加了20％，更優(yōu)選至少增加了50％，甚至更優(yōu)選至少增加了100％且尤其優(yōu)選至少增加了200％?？梢匀鐚嵤├?中所述測定凝膠穩(wěn)定性。還可以按照本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的方法對分離自本發(fā)明植物細(xì)胞的淀粉進(jìn)行改性且該淀粉以未改性或改性的形式適合于食品和非食品領(lǐng)域的各種應(yīng)用。原則上，可以將淀粉的應(yīng)用領(lǐng)域再分成兩個大的領(lǐng)域。一個領(lǐng)域包括淀粉的水解產(chǎn)物，主要是通過酶促或化學(xué)方法獲得的葡萄糖和葡聚糖成分。它們用作進(jìn)一步化學(xué)改性和加工、諸如發(fā)酵的原料。就降低成本而言，水解方法的簡便性和成本有效傳輸可能具有重要性。目前，當(dāng)使用淀粉葡糖苷酶時，主要是酶促反應(yīng)?？梢栽O(shè)想通過減少酶的用量來節(jié)約成本。例如谷物表面延伸、通過低支化度的易消化性或限制所用酶的可及性的空間結(jié)構(gòu)這樣的對淀粉結(jié)構(gòu)的修飾可以實現(xiàn)上述目的?？梢詫⒁蚱渚酆衔锝Y(jié)構(gòu)而作為所謂的天然淀粉使用淀粉的另一領(lǐng)域分成兩個進(jìn)一步的應(yīng)用領(lǐng)域1.食品工業(yè)淀粉是傳統(tǒng)的各種食品的添加劑，其中它主要用于結(jié)合水添加劑的目的或使粘度增加或膠凝增加。重要特征是流動性和吸著性、溶脹溫度和糊化溫度、粘度和增稠性、淀粉的溶解性、透明度和糊化結(jié)構(gòu)、耐熱性、抗剪強(qiáng)度和耐酸性、退減趨勢、成膜能力、抗凍/融性、可消化性以及與例如無機(jī)或有機(jī)離子形成復(fù)合物的能力。2.非食品工業(yè)在這種廣大的領(lǐng)域內(nèi)，可以將淀粉用作各種生產(chǎn)過程中的輔助劑或用作工業(yè)產(chǎn)品的添加劑。淀粉用作輔助劑的主要領(lǐng)域是造紙業(yè)和紙板工業(yè)。在該領(lǐng)域中，淀粉主要用于留著(滯留固體)、用于壓平填料和細(xì)顆粒、作為固化物質(zhì)和用于脫水。此外，可充分利用有關(guān)勁度、硬度、固定性、手感、光澤、平滑性、撕裂強(qiáng)度以及表面積的淀粉的有利特性。2.1造紙工業(yè)和紙板工業(yè)在紙的生產(chǎn)過程中，可以在4個應(yīng)用領(lǐng)域即表面、涂布、團(tuán)塊和噴霧之間進(jìn)行區(qū)分。對有關(guān)淀粉表面處理的要求主要是高度的亮度、相應(yīng)的粘度、高粘度穩(wěn)定性、良好的成膜性以及幾乎不形成灰塵。當(dāng)用于涂布固體內(nèi)含物時，相應(yīng)的粘度、高結(jié)合能力和高色素親合性起重要作用。作為團(tuán)塊的添加劑快速，均勻、無損耗分散、高機(jī)械穩(wěn)定性和在紙漿中完全的保留性具有重要性。當(dāng)使用淀粉噴霧時，相應(yīng)的固體含量、高粘度和高結(jié)合能力也是顯著的。2.2粘合劑工業(yè)主要的應(yīng)用領(lǐng)域例如是在粘合劑工業(yè)中，其中將淀粉用于4個領(lǐng)域用作純淀粉膠、用于用特殊化學(xué)物質(zhì)制備的淀粉膠、將淀粉用作合成樹脂和聚合物分散體的添加劑以及將淀粉用作合成粘合劑的補(bǔ)充劑。將全部基于淀粉的粘合劑的90％用于生產(chǎn)波面紙板、紙囊和紙袋、紙和鋁的復(fù)合材料、信封用盒和膠水、郵票等。2.3紡織工業(yè)和紡織品護(hù)理工業(yè)淀粉作為輔助劑和添加劑的另一個可能的應(yīng)用是用于織物和織物護(hù)理產(chǎn)品的生產(chǎn)過程中。在紡織工業(yè)中，可以在下列4個應(yīng)用領(lǐng)域中進(jìn)行區(qū)分將淀粉用作漿料，即作為熨平和加強(qiáng)用于防止編織過程中主動張力和用于增加編織過程中耐磨性的去毛刺特性的輔助劑；作為主要在變質(zhì)預(yù)處理后織物的改善劑，諸如漂白劑、染色劑等；作為用于防止染料擴(kuò)散的染料漿生產(chǎn)過程中的增稠劑；和作為用于縫線用纏繞劑的添加劑。2.4建筑業(yè)淀粉的第4個應(yīng)用領(lǐng)域是將其用作建筑材料的添加劑。一個實例是生產(chǎn)石膏板，其中薄石膏粉中混合的淀粉與水成膏狀、在石膏板表面擴(kuò)散且由此使紙板與所述石膏板粘合。其它應(yīng)用領(lǐng)域是將淀粉與石膏粉和礦物纖維混合。在預(yù)拌混凝土中，可以將淀粉用于使上漿過程減速。2.5土壤穩(wěn)定化此外，淀粉有利地用于生產(chǎn)暫時防止土壤顆粒受到人為地層移動中水的影響的土壤穩(wěn)定化工具。根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)的知識，可以將由淀粉和聚合物乳液組成的組合產(chǎn)品看作與迄今為止所用產(chǎn)品具有相同的減侵蝕和減結(jié)殼作用；然而，它們相當(dāng)?shù)土?.6淀粉在植物保護(hù)劑和肥料中的應(yīng)用另一個應(yīng)用領(lǐng)域是淀粉在用于改變這些制品的特殊特性的植物保護(hù)劑中的應(yīng)用。例如，將淀粉用于改善植物保護(hù)劑和肥料的濕潤性；用于活性成分的定量釋放；用于將液體、揮發(fā)性和/或有氣味的活性成分轉(zhuǎn)化成微晶、穩(wěn)定、可變形的物質(zhì)；用于混合不相容的組成；和因分解較緩慢而用于延長作用期限。2.7藥物、醫(yī)療和化妝品工業(yè)還可以將淀粉用于藥物、醫(yī)療和化妝品工業(yè)領(lǐng)域。在制藥工業(yè)中，可以將淀粉用作片劑的粘合劑或用于稀釋膠囊中的粘合劑。此外，淀粉適合用作片劑的崩解劑，這是因為在吞咽時它吸收液體并在短時后它溶脹到使活性成分釋放。由于性質(zhì)上的原因，傷口用的醫(yī)用潤滑粉和醫(yī)用粉以淀粉為基礎(chǔ)。在化妝品領(lǐng)域中，例如，將淀粉用作諸如香料和水楊酸這樣的粉末添加劑的載體。淀粉相對廣泛的應(yīng)用領(lǐng)域是牙膏。2.8淀粉作為煤和煤磚的添加劑還可以將淀粉用作煤和煤磚的添加劑。通過添加淀粉，煤可以定量地成塊和/或團(tuán)成高質(zhì)量的煤磚，由此防止了煤磚的過早崩解。燒煤含有4-6％的添加淀粉、0.1-0.5％的熱量煤。此外，淀粉作為粘合劑變得越來越重要，因為向煤和煤磚中添加它可以明顯減少毒性物質(zhì)的散發(fā)。2.9礦石和煤泥的加工此外，可以將淀粉用作加工礦石和煤泥中的絮凝劑。2.10淀粉作為澆鑄中的添加劑另一個應(yīng)用領(lǐng)域是將淀粉用作澆鑄中加工物料的添加劑。就各種澆鑄工藝而言，需要由混有粘合劑的砂子生產(chǎn)的芯。目前，最常用的粘合劑是混有改性淀粉，大部分是溶脹淀粉的膨潤土。添加淀粉的目的在于增加流阻和改善粘合強(qiáng)度。此外，溶脹淀粉可以滿足生產(chǎn)工藝的其它先決條件，諸如在冷水中的分散性、再水化程度、在砂子中良好的混溶性和高度結(jié)合水的能力。2.11淀粉在橡膠工業(yè)中的應(yīng)用在橡膠工業(yè)中，可以將淀粉用于改善工藝和光學(xué)質(zhì)量。由于這一原因就要求改善表面光澤、手感和外觀。為了這一目的，在冷硫化前將淀粉分散在橡膠物質(zhì)的粘性涂膠表面上。還可以將淀粉用于改善橡膠的可印性。2.12皮革替代物的生產(chǎn)改性淀粉的另一個應(yīng)用領(lǐng)域是生產(chǎn)皮革替代物。2.13.合成聚合物中的淀粉在塑料市場上，正在涌現(xiàn)出下列應(yīng)用領(lǐng)域?qū)碓从诘矸鄣漠a(chǎn)物整合入加工過程(淀粉僅是填料，在合成聚合物與淀粉之間不存在直接粘合)或另一方面將來源于淀粉的產(chǎn)物整合入聚合物的產(chǎn)生過程中(淀粉和聚合物形成穩(wěn)定的粘合)。淀粉用作純填料不能與諸如滑石這樣的其它物質(zhì)競爭。當(dāng)特殊的淀粉特性變得有效且終產(chǎn)品的特性分布由此明顯改變時，上述情況可以改變。一個實例是將淀粉產(chǎn)品用于加工諸如聚乙烯這樣的熱塑性材料。因此，通過共表達(dá)將淀粉和合成聚合物按1∶1的比例混合而形成“母煉膠”，由此可以通過使用成粒的聚乙烯的常規(guī)技術(shù)生產(chǎn)不同產(chǎn)品。聚乙烯薄膜中淀粉的整合可以使物質(zhì)在空心體中的透性增加、水蒸汽滲透性改善、抗靜電性能改善、防結(jié)塊性能改善和使用含水染料的可印性改善。另一種可能性是淀粉在聚氨酯泡沫塑料中的應(yīng)用。由于淀粉衍生物的采用且由于加工技術(shù)的最優(yōu)化，所以能夠?qū)铣删酆衔锱c淀粉羥基之間的反應(yīng)進(jìn)行特定控制。結(jié)果是因應(yīng)用了淀粉而使聚氨酯薄膜獲得了下列特性分布熱膨脹系數(shù)降低；收縮性能降低；壓力/張力性能改善；水蒸汽滲透性增加而吸水性沒有改變；可燃性和裂化密度降低；沒有易燃部分溢出；不含鹵素且老化減少。目前仍然存在的缺陷在于壓力和沖擊強(qiáng)度降低。薄膜產(chǎn)品的研發(fā)不再是唯一的選擇。還可以生產(chǎn)諸如罐、盤子和碗這樣具有50％以上淀粉含量的固體塑料產(chǎn)品。此外，淀粉/聚合物混合物提供了它們可生物降解至較大程度的優(yōu)點。此外，由于淀粉接枝聚合物具有極強(qiáng)的結(jié)合水的能力，所以它們已經(jīng)獲得了極大的重要性。它們是具有淀粉的主鏈和按照自由基鏈機(jī)理接枝上的合成單體的側(cè)鏈晶格的產(chǎn)品。目前可獲得的淀粉接枝聚合物的特征在于改善的粘合和保留能力高達(dá)1000g水/g淀粉的高粘度。在過去的幾年中，已經(jīng)更為廣泛地應(yīng)用了這些超級吸收劑-主要是在衛(wèi)生保健領(lǐng)域，例如應(yīng)用在諸如尿布和床單這樣的產(chǎn)品中以及應(yīng)用在例如種子顆粒這樣的農(nóng)業(yè)領(lǐng)域中。應(yīng)用通過重組DNA技術(shù)改性的新型淀粉的決定性因素一方面是結(jié)構(gòu)、含水量、蛋白質(zhì)含量、脂類含量、纖維含量、灰分/磷酸酯含量、直鏈淀粉/支鏈淀粉比例、相對摩爾質(zhì)量的分布、支化度、顆粒大小和形狀以及晶形，而另一方面是產(chǎn)生下列特征的特性流動性和吸著性、糊化溫度、粘度、在鹽水溶液中的粘度穩(wěn)定性、增稠性、溶解性、糊狀結(jié)構(gòu)和透明性、耐熱性、抗剪強(qiáng)度和耐酸性、退減趨勢、膠凝能力、抗冷凍/融化性、復(fù)合物形成能力、碘結(jié)合能力、成膜性、粘合強(qiáng)度、酶穩(wěn)定性、可消化性和反應(yīng)性。通過使用轉(zhuǎn)基因植物進(jìn)行遺傳操作生產(chǎn)的改性淀粉可以以使通過化學(xué)或物理方法進(jìn)一步修飾變得多余的方式來改變獲自植物的淀粉的特性。另一方面，可以對通過重組DNA技術(shù)改性的淀粉進(jìn)行進(jìn)一步的化學(xué)修飾，這會導(dǎo)致某些上述應(yīng)用領(lǐng)域中的質(zhì)量的進(jìn)一步改善。這些化學(xué)修飾對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說大部分是公知的。它們特別是通過下列手段進(jìn)行的修飾-熱處理；-酸處理；-氧化和-酯化，從而形成磷酸酯、硝酸酯、硫酸酯、黃原酸酯、乙酸酯和檸檬酸酯淀粉。還可以將其它有機(jī)酸用于酯化-形成淀粉醚淀粉烷基醚、O-烯丙基醚、羥烷基醚、O-羧甲基醚、含N的淀粉醚、含P的淀粉醚和含S的淀粉醚；-形成支鏈淀粉-形成淀粉接枝聚合物。在本發(fā)明的另一個實施方案中，外源核酸分子具有一種或多種介導(dǎo)淀粉蔗糖酶蛋白和分支酶的細(xì)胞壁特異性定位的蛋白質(zhì)引導(dǎo)信號序列。編碼“外源核酸分子”中含有的淀粉蔗糖酶和分支酶的核酸分子可以在一種或幾種彼此獨立的蛋白質(zhì)引導(dǎo)信號序列的控制下或它們可以在作為翻譯單位融合后的一種或幾種蛋白質(zhì)引導(dǎo)信號序列的共同控制下。在本發(fā)明的另一個實施方案中，外源核酸分子具有一種或多種各自介導(dǎo)淀粉蔗糖酶蛋白和分支酶蛋白的細(xì)胞壁特異性定位的蛋白質(zhì)引導(dǎo)信號序列。在該實施方案中，將幾種外源核酸分子引入植物細(xì)胞的基因組，其中一種外源核酸分子編碼淀粉蔗糖酶蛋白且另一種外源核酸分子編碼分支酶。如上所述，可以將所述的外源核酸分子同時或連續(xù)引入植物細(xì)胞的基因組。在第一種情況中，將其稱作“共轉(zhuǎn)化”，在后一種情況中，將其稱作“超轉(zhuǎn)化”。所引入的外源核酸分子各自含有一種或多種介導(dǎo)淀粉蔗糖酶蛋白和分支酶蛋白各自的細(xì)胞壁特異性定位的蛋白質(zhì)引導(dǎo)信號序列，其中所述的蛋白質(zhì)引導(dǎo)信號序列彼此相同或彼此不同。作為信號序列，可以使用來自馬鈴薯的蛋白酶抑制劑II的信號序列(vonSchaewen等《歐洲分子生物學(xué)協(xié)會雜志》(EMBOJ.)9，(1990)，3033-3044；Keil等《核酸研究》(NucleicAcidResearch)14，(1986)，5641-5650)。在本發(fā)明的另一個實施方案中，所述的外源核酸分子介導(dǎo)淀粉蔗糖酶蛋白和分支酶的胞質(zhì)定位。此外，本發(fā)明涉及含有具有活性提高的淀粉蔗糖酶和分支酶的這類植物細(xì)胞的轉(zhuǎn)基因植物。本發(fā)明的植物可以屬于任意植物種類，即它們可以是單子葉植物或雙子葉植物。優(yōu)選它們是來自農(nóng)業(yè)上有用植物的植物，即它們是來自由人栽培用作食品或用于加工工藝，特別是工業(yè)化應(yīng)用的植物的植物。本發(fā)明優(yōu)選涉及成纖植物(例如亞麻、大麻、棉花)、儲油植物(例如油菜、向日葵、大豆)、儲藏淀粉的植物(例如小麥、大麥、燕麥、黑麥、馬鈴薯、玉米、稻米、豌豆、木薯)、儲糖植物(例如甜菜、甘蔗、糖小米(sugarmillet))和儲藏蛋白質(zhì)的植物(例如豆科植物)。在另一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明涉及食品植物(例如飼料作物和放牧植物(苜蓿、三葉草等))、蔬菜植物(例如番茄、生菜、菊苣)。特別優(yōu)選的是甜菜、甘蔗、玉米、小麥和稻米。本發(fā)明還涉及一種用于生產(chǎn)與野生型植物相比獲得高產(chǎn)量的轉(zhuǎn)基因植物的方法，其中(a)通過引入一種(幾種)外源核酸分子對植物細(xì)胞進(jìn)行遺傳修飾，所述的外源核酸分子的存在或表達(dá)使得具有淀粉蔗糖酶活性的蛋白質(zhì)的活性和具有分支酶活性的蛋白質(zhì)的活性均得到提高；(b)從按照(a)生產(chǎn)的細(xì)胞中再生植物；和(c)選擇性地由按照步驟(b)生產(chǎn)的植物生產(chǎn)其它植物。此外，本發(fā)明涉及一種用于生產(chǎn)與相應(yīng)非遺傳修飾的野生型植物相比可合成在O-6-位上帶有改變的支化度的α-1，6支鏈α-1，4-葡聚糖類的轉(zhuǎn)基因植物的方法，其中(a)通過引入一種或多種外源核酸分子對植物細(xì)胞進(jìn)行遺傳修飾，所述的外源核酸分子的存在或表達(dá)使得具有淀粉蔗糖酶活性的蛋白質(zhì)的活性和具有分支酶活性的蛋白質(zhì)的活性均得到提高；(b)從按照(a)生產(chǎn)的細(xì)胞中再生植物；和(c)選擇性地由按照步驟(b)生產(chǎn)的植物生產(chǎn)其它植物。本發(fā)明的另一個主題是一種用于生產(chǎn)與相應(yīng)非遺傳修飾的野生型植物相比可合成改性淀粉的轉(zhuǎn)基因植物方法，其中(a)通過引入一種或多種外源核酸分子對植物細(xì)胞進(jìn)行遺傳修飾，所述的外源核酸分子的存在或表達(dá)使得具有淀粉蔗糖酶活性的蛋白質(zhì)的活性和具有分支酶活性的蛋白質(zhì)的活性均得到提高；(b)從按照(a)生產(chǎn)的細(xì)胞中再生植物；和(c)選擇性地由按照步驟(b)生產(chǎn)的植物生產(chǎn)其它植物。在涉及本發(fā)明植物的另一個方面如上所述的方法同樣適用于按照步驟a)引入的遺傳修飾?？梢园凑毡绢I(lǐng)域技術(shù)人員所公知的方法進(jìn)行步驟b)的植物再生。例如，通過無性繁殖(例如通過插條、塊莖或通過愈傷組織培養(yǎng)和再生完整植物)或通過有性繁殖按照本發(fā)明方法的步驟c)再生其它植物。有性繁殖優(yōu)選在控制下進(jìn)行，即使所選擇的具有某些特性的植物彼此雜交并繁殖。本發(fā)明還涉及能通過本發(fā)明方法獲得的植物。本領(lǐng)域技術(shù)人員已知他不僅可以通過本發(fā)明的上述方法，而且可以例如通過將具有因引入了外源核酸分子而具有淀粉蔗糖酶活性的蛋白質(zhì)的提高活性的遺傳修飾植物與具有因引入了外源核酸分子而具有分支酶活性的蛋白質(zhì)的提高活性的轉(zhuǎn)基因植物雜交獲得本發(fā)明的植物。此外，本領(lǐng)域技術(shù)人員已知上述超轉(zhuǎn)化并不一定使用初級轉(zhuǎn)化體進(jìn)行，但優(yōu)選使用此前已經(jīng)選擇且已經(jīng)有利地在有關(guān)例如能育性、外源基因的穩(wěn)定表達(dá)、半合子性和純合性等的相應(yīng)實驗中得到測試的穩(wěn)定轉(zhuǎn)基因植物來進(jìn)行。因此，可通過上述方法獲得的且表現(xiàn)出上述實施方案中所述表型的轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞和植物也是本發(fā)明的主題。本發(fā)明還涉及本發(fā)明植物的繁殖材料和按照本發(fā)明方法生產(chǎn)的轉(zhuǎn)基因植物的繁殖材料。術(shù)語“繁殖材料”包括那些適合于以無性或有性方式產(chǎn)生后代的那些植物組分。就無性繁殖而言，例如，合適的是插條、愈傷組織培養(yǎng)物、根莖或塊莖。其它繁殖材料包括例如果實、種子、幼苗、原生質(zhì)體、細(xì)胞培養(yǎng)物等。優(yōu)選所述的繁殖材料是塊莖和種子。此外，本發(fā)明涉及一種或多種編碼具有淀粉蔗糖酶的酶活性的蛋白質(zhì)和具有分支酶的酶活性的蛋白質(zhì)的核酸分子在生產(chǎn)植物中的應(yīng)用，其中所生產(chǎn)的植物與野生型植物相比可以獲得提高的產(chǎn)量和/或合成與來自野生型植物的淀粉相比得到改性的淀粉和/或與相應(yīng)非遺傳修飾的野生型植物相比合成在O-6-位上帶有改變的支化度的α-1，6支鏈α-1，4-葡聚糖類。附圖2質(zhì)粒圖pAmsu-wxy-Hyg。附圖3質(zhì)粒圖pAmsu-pat-Hyg。附圖4質(zhì)粒圖pBE-fnt-Km。附圖5質(zhì)粒圖pBE-pat-Km。附圖6質(zhì)粒圖pAmsu-cyt-Km。附圖7淀粉蔗糖酶活性凝膠。附圖8分支酶活性凝膠。附圖11來自實施例7中所述的轉(zhuǎn)基因煙草植物(變種SamsungNN)的蛋白質(zhì)提取物的活性凝膠。在本實驗中使用FNR信號肽(實施例6)。25-32、33-37、39和40來自不同的獨立的轉(zhuǎn)基因煙草品系的蛋白質(zhì)提取物(75μg總蛋白質(zhì))。K＝對照品；如專利申請WO99/67412中所述在大腸桿菌中生產(chǎn)的純化的重組淀粉蔗糖酶；50ng蛋白質(zhì)。Wt來自煙草野生型植物(SamsungNN)的蛋白質(zhì)提取物(75μg總蛋白質(zhì))。附圖12來自實施例7中所述的轉(zhuǎn)基因煙草植物(變種SamsungNN)的蛋白質(zhì)提取物的活性凝膠。在本實驗中使用R1信號肽(實施例6)。9-16和41-48來自不同的獨立的轉(zhuǎn)基因煙草品系的蛋白質(zhì)提取物(75μg總蛋白質(zhì))。K＝對照品；如專利申請WO99/67412中所述在大腸桿菌中生產(chǎn)的純化的重組淀粉蔗糖酶；50ng蛋白質(zhì)。Wt來自煙草野生型植物(SamsungNN)的蛋白質(zhì)提取物(75μg總蛋白質(zhì))。附圖13來自實施例8中所述的轉(zhuǎn)基因煙草植物(變種Desirée)的蛋白質(zhì)提取物的活性凝膠。8-12、14、16、32和35-40來自不同的獨立的轉(zhuǎn)基因煙草品系的蛋白質(zhì)提取物(75μg總蛋白質(zhì))。K＝對照品；如專利申請WO99/67412中所述在大腸桿菌中生產(chǎn)的純化的重組淀粉蔗糖酶；50ng蛋白質(zhì)。Wt來自馬鈴薯的野生型植物(Desirée)的蛋白質(zhì)提取物(75μg總蛋白質(zhì))。BE在質(zhì)體中表達(dá)來自反硝化奈瑟氏球菌的分支酶的轉(zhuǎn)基因馬鈴薯植物的蛋白質(zhì)提取物(實施例5)。附圖14轉(zhuǎn)基因植物(參見實施例9)、對照品(如實施例5中所述表達(dá)來自反硝化奈瑟氏球菌的分支酶的轉(zhuǎn)基因植物)和野生型植物的結(jié)構(gòu)分析儀顯示的分布圖。對附圖11-13的注解來自已經(jīng)通過實施例4中所述淀粉蔗糖酶活性試驗分析的植物的所有蛋白質(zhì)凝膠恰在對淀粉蔗糖酶具有特異性的帶上方顯示出淡褐色帶。當(dāng)使用用于生產(chǎn)蛋白質(zhì)提取物的綠色植物材料時，這種淡褐色帶特別明顯(例如，參見附圖12的第9、42和43行)。這種淡褐色帶在野生型植物中也存在。在電泳后作為綠色帶已經(jīng)非常明顯。在含有蔗糖的緩沖液中進(jìn)行的凝膠培養(yǎng)過程中(實施例4)，在用魯戈氏液染色前綠色變成淡褐色。從這些觀察結(jié)果中可以推斷這條帶不是由于淀粉蔗糖酶的活性所產(chǎn)生的。在來自具有高淀粉蔗糖酶表達(dá)的植物的凝膠中，非特異性淡褐色帶迭加在因淀粉蔗糖酶活性產(chǎn)生的帶上。有關(guān)描述中重要的且用于實施例中的材料和方法1.通過甲基化分析測定支化度可以通過甲基化分析測定所得到的葡聚糖的支化度。一般方法-使葡聚糖樣品的所有游離OH-基團(tuán)甲基化，每份樣品重復(fù)測定兩次；-使預(yù)甲基化的聚合物水解，隨后在C-1上還原并使單體混合物乙?；?對反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行氣相色譜分析并定量。通過甲基化分析檢驗葡聚糖樣品的支化度。通過轉(zhuǎn)化成甲基醚標(biāo)明聚合物的游離OH-基團(tuán)。通過酸水解降解成單體并產(chǎn)生以吡喃糖苷/呋喃糖苷形式存在的部分甲基化的葡萄糖分子以及α-和β-葡糖苷。通過用NaBH4或NaBD4還原而使這些變體集中于相應(yīng)的部分甲基化的山梨糖醇衍生物中。最終的游離OH-基團(tuán)的乙?；沟猛ㄟ^氣相色譜法分析反應(yīng)產(chǎn)物成為可能。實驗部分a)DMSO-溶液的制備制備1％的DMSO溶液(w/v)。b)甲基化將2ml的DMSO-溶液(即20mg聚合物)轉(zhuǎn)入50ml氮瓶中，在N2氣環(huán)境中加入5個當(dāng)量/OH(eq/OH)新制二甲亞砜(dimsyl)溶液并攪拌30分鐘。將該燒瓶的內(nèi)含物在冰浴上冷凍，加入10eq/OH甲基碘并在融化后將該體系至少攪拌2小時。在第二次脫質(zhì)子化和甲基化步驟前在真空中除去過量的甲基碘。此后，通過加入50ml水并通過每次用10ml二氯甲烷提取(5次)而除去過量的甲基碘。為了從有機(jī)相中除去微量DMSO，用水提取3次。首先使用樣品測試就預(yù)甲基化羥基而言多少次甲基化步驟是必不可少的。在第一次甲基化步驟后，一半制備物得到了進(jìn)一步加工處理，對另一半再次進(jìn)行甲基化。在將兩份樣品降解后，比較GC分析結(jié)果。隨后始終進(jìn)行第二次甲基化以便檢驗可以通過C-3位上的亞甲基化模擬的C-3上可能的分支。c)水解將2mg甲基化樣品稱重入1ml壓力玻璃瓶中，加入0.9ml2M的三氟乙酸并在20℃下攪拌2.5小時。在將玻璃瓶冷卻后，在N2氣中濃縮。為了除去微量的酸，加入3次甲苯并放出。d)還原首先向來自反應(yīng)步驟的殘余物中加入0.5ml的0.5M氨堿性NaBD4-溶液并在60℃下攪拌1小時。用幾滴冰醋酸謹(jǐn)慎研磨試劑，通過添加5次含有15％甲醇的乙酸且隨后放出而將產(chǎn)生的硼酸鹽作為硼酸三甲基醚除去。e)乙?；紫认蚍磻?yīng)步驟的殘余物中加入50μl吡啶和250μl乙酐并在95℃下攪拌2小時。在冷卻后將反應(yīng)混合物滴入10ml飽和NaHCO3-溶液并用二氯甲烷提取5次。通過氣相色譜法分析有機(jī)相中的反應(yīng)產(chǎn)物。f)氣相色譜通過應(yīng)用帶有柱上入口和FID-檢測器的穩(wěn)定CarloErbaGC6000VegaSeies2進(jìn)行氣相色譜分析。使用熔凝硅石毛細(xì)管柱SupelcoSPB5(內(nèi)徑0.2mm，長30m)、應(yīng)用氫作為載氣并使用80kPa的壓力進(jìn)行分離。使用下列溫度程序60℃(1分鐘)-25℃/分鐘→130℃-4℃/分鐘→280℃。結(jié)果通過鑒定峰、對峰面積進(jìn)行積分并通過來自Sweet等(Sweet等《碳水化合物研究》(Carbohydr.Res.)40(1975)，217)ECR-理論校準(zhǔn)數(shù)據(jù)評價氣相色譜圖。2.來自多糖奈瑟氏球菌的淀粉蔗糖酶的純化為了生產(chǎn)淀粉蔗糖酶，使用用來自多糖奈瑟氏球菌的淀粉蔗糖酶轉(zhuǎn)化的大腸桿菌細(xì)胞。DNA來源于多糖奈瑟氏球菌的基因組文庫且具有國際專利申請PCT/EP98/05573中給出的核苷酸序列。將表達(dá)編碼來自多糖奈瑟氏球菌的淀粉蔗糖酶的基因的這些大腸桿菌細(xì)胞過夜培養(yǎng)物離心并重新懸浮于約1/20個體積的50mM檸檬酸鈉緩沖液(pH6.5)、10mMDTT(二硫蘇糖醇)、1mMPMSF(苯甲基磺酰氟)中。然后用弗氏壓碎器以16,000p.s.i..將所述細(xì)胞破碎2次。此后，向細(xì)胞提取物中加入1mMMgCl2和終濃度為12.5個單位ml-1的benzonase(來自Merck；100,000個單位；250個單位μl-1)。接著在37℃下將制備物至少培養(yǎng)30分鐘，同時輕度攪拌。使提取物在冰上穩(wěn)定至少1.5小時。接下來將其在4℃下以約40,000g離心30分鐘，直到上清液相對澄清為止。用具有0.45μm孔徑的PVDF膜(微孔“Durapore”或類似物)進(jìn)行預(yù)過濾。使該提取物在4℃下穩(wěn)定過夜。在進(jìn)行HI-(疏水作用)層析前，向所述提取物中加入固體NaCl并調(diào)整至濃度為2MNaCl。然后在4℃和約40,000g下再次將其離心30分鐘。此后，通過使用具有0.22μm孔徑的PVDF膜(微孔“Durapore”或類似物)過濾使提取物從最終的大腸桿菌殘余物中釋放出來。通過上丁基瓊脂糖-4B-柱(Pharmacia)(柱體積93ml；長17.5cm)分離過濾的提取物。將約50ml具有1-5個單位μl-1淀粉蔗糖酶活性的提取物上柱。然后用150ml緩沖液B(緩沖液B50mM檸檬酸鈉，pH6.5、2MNaCl)將未結(jié)合的蛋白質(zhì)從柱上洗滌下來。最終通過降低借助于自動泵系統(tǒng)(FPLC，Pharmacia)產(chǎn)生的線性NaCl-梯度(NaCl在50mM、433ml體積的檸檬酸鈉中以1.5ml分鐘-1的速率從2M降至OM)洗脫淀粉蔗糖酶。淀粉蔗糖酶的洗脫發(fā)生在0.7M-0.1MNaCl之間。收集級分、使其在PD10Sephadex柱(Pharmacia)上脫鹽、用8.7％甘油使之穩(wěn)定、測試淀粉蔗糖酶活性并最終將其冷凍在儲存緩沖液(8.7％甘油、50mM檸檬酸鹽)中。3.淀粉蔗糖酶活性的測定將不同稀釋度的純化蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)粗提取物制成1ml含有5％蔗糖、0.1％糖原和100mM檸檬酸鹽(pH6.5)的制備物并在37℃下培養(yǎng)。5分鐘、10分鐘、15分鐘、20分鐘、25分鐘和30分鐘后，每次從該制備物中取出10μl并通過即刻加熱至95℃來終止淀粉蔗糖酶的酶活性。然后在偶聯(lián)光度試驗中測定由淀粉蔗糖酶釋放的果糖的比例。因此，將1μl-10μl失活的樣品放入1ml50mM咪唑緩沖液(pH6.9)、2mMMgCl2、1mMATP、0.4mMNAD和0.5U/ml己糖激酶中。在依次添加葡糖-6-磷酸脫氫酶(來自腸系膜狀明串珠菌)和磷酸葡糖異構(gòu)酶后，在340nm處測定吸收的改變。接著按照朗伯定律計算釋放的果糖的量。當(dāng)獲得的計算值與取樣時間相關(guān)時，可以分別測定單位數(shù)(1U＝μmol果糖/ml)(每μl蛋白質(zhì)提取物或μg純化蛋白質(zhì))。用于實施例中的載體1.pBinAR-N在質(zhì)粒pBinAR(Hfgen和Willmitzer，《植物科學(xué)》(PlantScience)66，(1990)，221-230)中，使用核酸寡核苷酸、通過分子生物學(xué)標(biāo)準(zhǔn)方法(例如，參見Sambrook等《分子克隆實驗指南》(MolecularcloningAlaboratorymanual)第2版，美國冷泉港實驗室出版(ColdSpringHarborLaboratoryPress)，NYUSA(1989))交換35S啟動子與OCS終止子之間的多接頭。這就是如何獲得質(zhì)粒pBinAR-N。2.pBinAR-Hyg-N通過使用分子生物學(xué)標(biāo)準(zhǔn)方法(例如，參見Sambrook等《分子克隆實驗指南》(MolecularcloningAlaboratorymanual)第2版，美國冷泉港實驗室出版(ColdSpringHarborLaboratoryPress)，NYUSA(1989))將來自含有35S啟動子、下列多接頭和OCS終止子的pBinAR-N的EcoRI/HinDIII片段克隆入質(zhì)粒pBIB-Hyg的相同限制位點(Becker《核酸研究》(NucleicAcidsResearch)18，(1990)，203)。將所得的質(zhì)粒稱作pBinAR-Hyg-N。3.pBinAR-wxy-Hyg為了克隆編碼來自玉米的蠟質(zhì)蛋白信號肽的序列(例如，參見Klsgen等《分子基因遺傳學(xué)》(Mol.Gen.Genet.)217，(1989)，155-161)，通過使用寡核苷酸(參見SEQIDNos.3和4)的PCR、從來自玉米(Stratagene)的基因組DNA作為模板開始擴(kuò)增相應(yīng)的序列。將由此獲得的DNA片段用限制性內(nèi)切核酸酶Xbal和Sall培養(yǎng)并克隆入用Spel和Sall切割的載體pBinAR-Hyg-N中。將所得的質(zhì)粒稱作pBinAR-wxy-Hyg。PCR條件緩沖液和聚合酶來自GibcoBRL(PlantinumTaqDNA聚合酶高保真度號11304-011)DNA0.2μg10x緩沖液5μlMgSO4(50mM)2.0μldNTPs(各10mM)1μl引物Sp-wxy-5’100nM引物Sp-wxy-3’100nMTaqPlatinumHifi聚合酶1.5個單位去穩(wěn)定水加至50μl反應(yīng)條件步驟195℃230分鐘步驟295℃030分鐘步驟360℃030分鐘步驟468℃025分鐘(每個循環(huán)+1秒)步驟568℃300分鐘在循環(huán)中將步驟2-4重復(fù)35次。4.pBinAR-pat-Hyg和pBinAR-pat使用寡核苷酸Sp-pat-5’和Sp-pat-3’(參見SEQIDNos.5和6)從質(zhì)粒pgT5擴(kuò)增編碼來自馬鈴薯的patatin基因信號肽的序列(Rosahl等《分子基因遺傳學(xué)》(Mol.Gen.Genet.)203，(1986)，214-220；Sonnewald等《植物雜志》(PlantJ.)1，(1998)，95-106)。將獲得的片段用限制性內(nèi)切核酸酶Xbal和Sall消化并分別克隆入用Spel和Sall切割的質(zhì)粒pBinAR-N和pBinAR-Hyg中。分別將所得的質(zhì)粒稱作pBinAR-pat-Hyg和pBinAR-pat。將這些質(zhì)粒中包含的編碼所用patatin蛋白質(zhì)信號肽的核酸序列用SEQIDNo.7表示，因為它不同于公開的信號肽(第3位氨基酸的氨基酸互換)。PCR條件緩沖液和聚合酶來自BoehringerMannheim(Pwo聚合酶號1644947)DNA0.2μg10x緩沖液+MgSO45μldNTPs(各10mM)1μl引物Sp-pat-5’20nM引物Sp-pat-3’120nMPwo聚合酶1.0個單位去穩(wěn)定水加至50μl反應(yīng)條件步驟195℃230分鐘步驟295℃030分鐘步驟364℃030分鐘步驟472℃030分鐘(每個循環(huán)+1秒)步驟572℃500分鐘在循環(huán)中將步驟2-4重復(fù)35次。5.來自菠菜的FNR信號肽的克隆使用引物Sp-fnr-5’和Sp-fnr-3’(參見SEQIDNo.8和SEQIDNo.9)和質(zhì)粒p6SocFNR-15作為模板(Jansen等《最新遺傳學(xué)》(CurrentGenetics)13，(1988)，517-522)擴(kuò)增編碼FNR信號肽的來自菠菜的序列。在用限制性內(nèi)切核酸酶Xbal和Sall消化獲得的片段后，將它們克隆入用Spel和Sall切割的質(zhì)粒pBinAR-N中。將所得的質(zhì)粒稱作pBinAR-fnr-N。PCR條件緩沖液和聚合酶來自GibcoBRL(PlantinumTaqDNA聚合酶高保真度號11304-011)DNA0.2μg10x緩沖液5μlMgSO42.0μldNTPs(各10mM)1μl引物Sp-fnr-5’150nM引物Sp-fnr-3’150nMTaqPlatinumHifi聚合酶1.5個單位去穩(wěn)定水加至50μl反應(yīng)條件步驟195℃200分鐘步驟295℃030分鐘步驟358℃030分鐘步驟468℃020分鐘(每個循環(huán)+1秒)步驟568℃300分鐘在循環(huán)中將步驟2-4重復(fù)35次。6.pBinAR-R1-Hyg為了克隆來自馬鈴薯的R1蛋白質(zhì)信號肽的編碼序列(Lorberth等《天然生物技術(shù)》(NatureBiotechnology)16(1998)，473-477)，通過使用cDNA克隆RL2作為模板(Lorberth，PhDthesis，“CharakterisierungvonRL1einneuesEnzymdesStrkemetabolismus”，F(xiàn)reieUniversittBerlin(1996))和寡核苷酸SEQIDNO14和15作為引物的PCR擴(kuò)增相應(yīng)序列。將所得的DNA片段用限制性內(nèi)切核酸酶Xbal和Sall消化且然后克隆入用Spel和Sall切割的載體pBinAR-Hyg-N中。將所得的質(zhì)粒稱作pBinAR-R1-Hyg。PCR反應(yīng)條件緩沖液和聚合酶來自BoehringerMannheim(Pwo聚合酶，BoehringerMannheim號1644955)DNA0.05μg10x緩沖液5μldNTPs(各10mM)1μl引物Sp-R1-5’100nM引物Sp-R1-3’100nMPwo聚合酶1.0個單位去穩(wěn)定水加至50μl反應(yīng)條件步驟195℃230分鐘步驟295℃030分鐘步驟360℃030分鐘步驟472℃025分鐘(每個循環(huán)+1秒)步驟572℃300分鐘在循環(huán)中將步驟2-4重復(fù)30次。7.pBinAR-fnr-Hyg通過使用質(zhì)粒p6SocFNR-15作為模板(Jansen等《最新遺傳學(xué)》(CurrentGenetics)13，(1988)，517-522)和引物Sp-fnr-5’和Sp-fnr-3’(參見SEQIDNo.8和SEQIDNo.9)擴(kuò)增編碼來自菠菜的FNR信號肽的序列。將所得的DNA片段用限制性內(nèi)切核酸酶Xbal和Sall消化并克隆入用Spel和Sall切割的載體pBinAR-Hyg-N中。將所得的質(zhì)粒稱作pBinAR-fnr-Hyg。PCR反應(yīng)條件緩沖液和聚合酶來自GibcoBRL(TaqPlatinumHifiDNA聚合酶號11304-011)DNA0.05μg10x緩沖液5μldNTPs(各10mM)1μl引物Sp-fnr-5’100nM引物Sp-fnr-3’100nMTaqPlatinumHifi聚合酶1.0個單位去穩(wěn)定水加至50μl反應(yīng)條件步驟195℃230分鐘步驟295℃030分鐘步驟358℃030分鐘步驟472℃030分鐘(每個循環(huán)+1秒)步驟572℃500分鐘在循環(huán)中將步驟2-4重復(fù)35次。實施例1用于轉(zhuǎn)化植物的表達(dá)彈夾的生產(chǎn)來自多糖奈瑟氏球菌的淀粉蔗糖酶的液泡和質(zhì)體的分別表達(dá)使用寡核苷酸AS-5’和AS-3’(參見SEQIDNo.10和SEQIDNo.11)、通過應(yīng)用質(zhì)粒pNB2(參見國際專利申請WO95/31553，寄存在德國Braunschweig的“DeutscheSammlungfürMikroorganismenundZellkulturen”(DSMZ)，寄存號為DSM9196)作為模板擴(kuò)增編碼淀粉蔗糖酶的序列。將獲得的其擴(kuò)增物用限制性內(nèi)切核酸酶Xhol和Pstl消化并分別克隆入用Sall和Sdal切割的質(zhì)粒pBinAR-wxy-Hyg和pBinAR-pat-Hyg中。分別將所得的質(zhì)粒稱作pAmsu-wxy-Hyg(附圖2)和pAmsu-pat-Hyg(附圖3)。PCR條件緩沖液和聚合酶來自BoehringerMannheim(Pwo聚合酶號1644947)DNA0.2μg10x緩沖液+MgSO45μldNTPs(各10mM)1μl引物Sp-AS-5’100nM引物Sp-AS-3’100nMPwo聚合酶1.0個單位去穩(wěn)定水加至50μl反應(yīng)條件步驟195℃200分鐘步驟295℃030分鐘步驟356℃030分鐘步驟468℃200分鐘(每個循環(huán)+1秒)步驟568℃500分鐘在循環(huán)中將步驟2-4重復(fù)40次。可以按照標(biāo)準(zhǔn)方法分別將質(zhì)粒pAmsu-wxy-Hyg和pAmsu-pat-Hyg用于轉(zhuǎn)化植物(參見上文)。實施例2用于轉(zhuǎn)化植物的表達(dá)彈夾的生產(chǎn)來自反硝化奈瑟氏球菌的分支酶的液泡和質(zhì)體的分別表達(dá)使用寡核苷酸BE-5’和BE-3’(參見SEQIDNo.12和SEQIDNo.13)、通過應(yīng)用質(zhì)粒pBB48(寄存在德國Braunschweig的“DeutscheSammlungfürMikroorganismenundZellkulturen”(DSMZ)，寄存號為DSM12425)作為模板擴(kuò)增編碼來自反硝化奈瑟氏球菌的分支酶的序列。將由此獲得的擴(kuò)增物用限制性內(nèi)切核酸酶Sall和Sdal消化并分別克隆入用Sall和Sdal切割的質(zhì)粒pBinAR-fnr-Hyg和pBinAR-pat中。分別將所得的質(zhì)粒稱作pBE-fnr-Km(附圖4)和pBE-pat-Km(附圖5)。PCR條件緩沖液和聚合酶來自BoehringerMannheim(Pwo聚合酶號1644947)DNA0.2μg10x緩沖液+MgSO45μldNTPs(各10mM)1μl引物BE-5’120nM引物BE-3’120nMPwo聚合酶1.0個單位去穩(wěn)定水加至50μl反應(yīng)條件步驟195℃200分鐘步驟295℃030分鐘步驟366℃030分鐘步驟472℃200分鐘(每個循環(huán)+1秒)步驟572℃800分鐘在循環(huán)中將步驟2-4重復(fù)40次?？梢园凑諛?biāo)準(zhǔn)方法分別將質(zhì)粒pBE-fnr-Km和pBE-pat-Km用于轉(zhuǎn)化植物(參見上文)。實施例3用于轉(zhuǎn)化植物的表達(dá)彈夾的生產(chǎn)來自多糖奈瑟氏球菌的淀粉蔗糖酶的胞質(zhì)表達(dá)用來自質(zhì)粒pNB2(參見上文)的限制性內(nèi)切核酸酶XmnI和EagI分離編碼來自多糖奈瑟氏球菌的淀粉蔗糖酶的片段并將該片段的末端填充克列諾DNA聚合酶。然后將該片段克隆入質(zhì)粒pBinAR中、隨后用Smal切割所得質(zhì)粒(Hfgen和Willmitzer，《植物科學(xué)》(PlantScience)66，(1990)，221-230)。將所得的質(zhì)粒稱作pAmsu-cyt-Km(附圖6)并將其用于轉(zhuǎn)化植物。實施例4具有淀粉蔗糖酶活性的轉(zhuǎn)基因馬鈴薯植物的鑒定和檢測通過RNA印跡分析可以鑒定具有來自多糖奈瑟氏球菌的淀粉蔗糖酶mRNA的轉(zhuǎn)基因馬鈴薯植物。然后可以證實所述淀粉蔗糖酶在這類植物中具有活性。為了檢測淀粉蔗糖酶在穩(wěn)定轉(zhuǎn)化植物中的活性，將檢測用植物的葉物質(zhì)冷凍在液氮中且然后用研缽研磨已經(jīng)用液氮預(yù)冷卻的葉物質(zhì)。在解凍研磨的物質(zhì)前，加入提取緩沖液(50mM檸檬酸鈉(pH6.5)、4mMDTT、2mM氯化鈣)。將約500μl提取緩沖液加入到約100mg植物物質(zhì)(鮮重)中。通過離心(10,000×g)分離破碎植物物質(zhì)和提取緩沖液的混懸液中的固體成分。將獲得澄清上清液的等分部分與四分之一提取體積的試驗緩沖液(40％甘油、250mMTrispH8.8、0.02％溴酚藍(lán))混合并以20mA/凝膠的恒定電流強(qiáng)度用聚丙烯酰胺凝膠分離(參見下文)。(在將蛋白質(zhì)提取物施用于凝膠前，在上述條件下使凝膠電泳進(jìn)行20分鐘)。在著色劑溴酚藍(lán)從凝膠中耗盡后，終止電泳。接著用各含5倍凝膠體積的洗滌緩沖液(100mM檸檬酸鈉，pH6.5)將凝膠平衡5次，各20分鐘，同時在室溫下旋轉(zhuǎn)。接下來在37℃下將該凝膠在含有5倍量凝膠體積的培養(yǎng)緩沖液(100mM檸檬酸鈉，pH6.5；5％蔗糖)中培養(yǎng)16小時。在潷析培養(yǎng)緩沖液后，由淀粉蔗糖酶產(chǎn)生的葡聚糖在加入魯戈氏液(按1∶5稀釋)時被檢測為褐色-淺藍(lán)色帶(附圖7)。聚丙烯酰胺凝膠的組成a)分離凝膠375mMTris，pH8.87.5％聚丙烯酰胺(BioradNo.EC-890)為進(jìn)行聚合1/2000體積的TEMED1/100體積的過硫酸銨b)收集凝膠125mMTris，pH6.84％聚丙烯酰胺(BioradNo.EC-890)為進(jìn)行聚合1/2000體積的TEMED1/100體積的過硫酸銨c)電泳緩沖液375mMTris，pH8.8200mM甘氨酸實施例5具有分支酶活性的轉(zhuǎn)基因馬鈴薯植物的鑒定和檢測通過RNA印跡分析可以鑒定具有來自反硝化奈瑟氏球菌的分支酶mRNA的轉(zhuǎn)基因馬鈴薯植物。為了檢測淀粉蔗糖酶在穩(wěn)定轉(zhuǎn)化植物中的活性，將檢測用植物的葉物質(zhì)冷凍在液氮中且然后用研缽研磨已經(jīng)用液氮預(yù)冷卻的葉物質(zhì)。在解凍研磨的物質(zhì)前，加入提取緩沖液(50mM檸檬酸鈉(pH6.5)、4mMDTT、2mM氯化鈣)。將約200μl提取緩沖液加入到約100mg植物物質(zhì)(鮮重)中。通過離心(10,000×g)分離破碎植物物質(zhì)和提取緩沖液的混懸液中的固體成分。將獲得澄清上清液的等分部分與四分之一提取體積的試驗緩沖液(40％甘油、250mMTrispH8.8、0.02％溴酚藍(lán))混合并以20mA/凝膠的恒定電流強(qiáng)度用聚丙烯酰胺凝膠分離(參見上文)。(在將蛋白質(zhì)提取物施用于凝膠前，在上述條件下使凝膠電泳進(jìn)行20分鐘)。在存在于試驗緩沖液中的著色劑溴酚藍(lán)從凝膠中耗盡后，終止電泳。接著用各含5倍凝膠體積的洗滌緩沖液(100mM檸檬酸鈉，pH6.5)將凝膠平衡5次，各20分鐘，同時在室溫下旋轉(zhuǎn)。接下來在30℃下將該凝膠在含有5倍量凝膠體積的培養(yǎng)緩沖液(100mM檸檬酸鈉，pH6.5；5％蔗糖；0.625個單位的來自多糖奈瑟氏球菌的純化淀粉蔗糖酶(參見上文純化該酶并測定活性))中培養(yǎng)16小時。在潷析培養(yǎng)緩沖液后，由淀粉蔗糖酶和分支酶生產(chǎn)的葡聚糖在加入魯戈氏液(按1∶5稀釋)時被檢測為褐色-淺藍(lán)色帶(附圖8)。所有剩余的聚丙烯酰胺凝膠因培養(yǎng)緩沖液中存在淀粉蔗糖酶活性而變成藍(lán)色。聚丙烯酰胺凝膠的組成a)分離凝膠375mMTris，pH8.87.5％聚丙烯酰胺(BioradNo.EC-890)為進(jìn)行聚合1/2000體積的TEMED1/100體積的過硫酸銨b)收集凝膠125mMTris，pH6.84％聚丙烯酰胺(BioradNo.EC-890)為進(jìn)行聚合1/2000體積的TEMED1/100體積的過硫酸銨c)電泳緩沖液375mMTris，pH8.8200mM甘氨酸實施例6用于植物的表達(dá)彈夾的構(gòu)建來自多糖奈瑟氏球菌的淀粉蔗糖酶的質(zhì)體表達(dá)通過應(yīng)用質(zhì)粒pNB2(德國Braunschweig的“DeutscheSammlungfürMikroorganismenundZellkulturen”(DSMZ)，寄存號為DSM9196)作為模板和寡核苷酸AS-5’和AS-3’(SEQIDNo.10和SEQIDNo.11)作為PCR引物擴(kuò)增來自多糖奈瑟氏球菌的淀粉蔗糖酶的編碼區(qū)。然后用限制性內(nèi)切核酸酶Xhol和Pstl消化PCR產(chǎn)物。將所得的含有該編碼區(qū)的片段克隆入用Sall-和Sdal-消化的質(zhì)粒pBinAR-R1-Hyg和pBinAR-fnr-Hyg中。分別將所得的質(zhì)粒稱作pAmsu-R1-Hyg(附圖9)和pAmsu-fnr-Hyg(附圖10)。PCR條件緩沖液和聚合酶來自BoehringerMannheim(Pwo聚合酶號1644947)DNA0.2μg10x緩沖液+MgSO45μldNTPs(各10mM)1μl引物Sp-AS-5’100nM引物Sp-AS-3’100nMPwo聚合酶1.0個單位去穩(wěn)定水加至50μl反應(yīng)條件步驟195℃200分鐘步驟295℃030分鐘步驟356℃030分鐘步驟472℃200分鐘(每個循環(huán)+1秒)步驟572℃500分鐘在一個循環(huán)的方式中將步驟2-4重復(fù)40次?？梢园凑諛?biāo)準(zhǔn)方法將質(zhì)粒pAmsu-R1-Hyg和pAmsu-fnr-Hyg用于轉(zhuǎn)化植物。實施例7顯示出淀粉蔗糖酶活性的轉(zhuǎn)基因煙草植物的鑒定按照Rosahl等(《歐洲分子生物學(xué)協(xié)會雜志》(EMBOJ.)6(1987)，1155-1159)所述將實施例6中所述的構(gòu)建體pAmsu-R1-Hyg(附圖9)和pAmsu-fnr-Hyg(附圖10)用于轉(zhuǎn)化煙草植物。通過進(jìn)行RNA印跡分析鑒定含有淀粉蔗糖酶mRNA的轉(zhuǎn)基因煙草植物。此外，在質(zhì)體中表達(dá)淀粉蔗糖酶基因的那些植物也顯示出淀粉蔗糖酶的酶活性(附圖11和12)。如實施例4中所述檢測所述的酶活性。實施例8表達(dá)編碼來自反硝化奈瑟氏球菌的分支酶的基因和編碼來自多糖奈瑟氏球菌的淀粉蔗糖酶的基因的轉(zhuǎn)基因馬鈴薯植物的生產(chǎn)和鑒定選擇已經(jīng)預(yù)先用質(zhì)粒pBE-fnr-Km(實施例2)轉(zhuǎn)化并顯示出定位于質(zhì)體中的分支酶活性(如實施例5所述進(jìn)行酶活性檢測，附圖8)的2個品系的轉(zhuǎn)基因馬鈴薯植物。此后，通過帶有質(zhì)粒pAmsu-R1-Hyg的農(nóng)桿菌屬再次轉(zhuǎn)化來自這些植物葉的外植體(實施例6)。通過使用實施例4和5中所述的活性試驗鑒定同時顯示出淀粉蔗糖酶蛋白活性和分支酶活性的植物(附圖13)，其中所述的兩種酶均定位于質(zhì)體中。實施例9通過應(yīng)用結(jié)構(gòu)分析儀測定淀粉的凝膠穩(wěn)定性將提取自如實施例8中所述轉(zhuǎn)基因植物的2g淀粉(dw)加入到適當(dāng)體積的蒸餾水中而制成含有8％終濃度淀粉(w/v)的混懸液。然后在快速粘性分析儀(NewportScientficPtyLtd.，InvestmentSupportGroup，WarriewoodNSW2102，Australia)中通過使用下列溫度分布加熱該混懸液首先，通過以每分鐘增加12℃的溫度的速率將混懸液從50℃加熱至95℃。然后在95℃下將溫度保持2.5分鐘。最終以每分鐘12℃的速率將混懸液冷卻至50℃。在25℃下將所得探針在氣密下儲存24小時。然后將該探針固定在由StableMicroSystems(Haslemere，England)生產(chǎn)的TA-XT2型結(jié)構(gòu)分析儀中。使用圓形搗擊機(jī)。通過設(shè)定下列參數(shù)來測定凝膠穩(wěn)定性-測試速度0.5mm/s-距離7mm-接觸面積113mm2-觸發(fā)力2g轉(zhuǎn)基因品系006和035與野生型植物和對照品植物(如實施例5中所述表達(dá)來自反硝化奈瑟氏球菌的分支酶的轉(zhuǎn)基因植物)相比得到的分布圖如附圖14中所示。來自轉(zhuǎn)基因植物的淀粉的結(jié)構(gòu)分析儀顯示的分布圖(參見附圖14)顯示出與來自野生型植物和對照品植物的淀粉的分布圖的差異。如果將所述的“距離”設(shè)定在7.0mm，那么可以將轉(zhuǎn)基因植物的分布圖描述為“樹冠樣”。序列表<110>PlantTecBiotechnologie，F(xiàn)orschung&Entwicklung<120>具有提高的淀粉蔗糖酶蛋白和分支酶活性的遺傳修飾的植物細(xì)胞和植物<130>D1703US<140><141><160>15<170>PatentInVer.2.1<210>1<211>2475<212>DNA<213>反硝化奈瑟氏球菌<220><221>CDS<222>(170)..(2458)<400>1actgtatgccgtgcagctggaaaacctgctgggcgtacgcgacaacctcaatattcccgg60cgtggccgaaggctatccgaactgggcgcgcaaaatgccgcagcctctggaagcctttgc120ccgccacccgcaaatgggcaagcagcttgccatgatgggagacatccgcatgaaccga178MetAsnArg1aaccgccatatccgacgcggctaccacccggaagccggagaacgccaa226AsnArgHisIleArgArgGlyTyrHisProGluAlaGlyGluArgGln51015atcatcgacagcctgtttgccgccacccacagcgatccgtttgcctat274IleIleAspSerLeuPheAlaAlaThrHisSerAspProPheAlaTyr20253035cttgggcggcatcgtgtcaacgacgaacgcgaagccgtgcgcgtgctg322LeuGlyArgHisArgValAsnAspGluArgGluAlaValArgValLeu404550cgtcccgacgcgcaccacatcgacatcatcgaccgccacacaggcgca370ArgProAspAlaHisHisIleAspIleIleAspArgHisThrGlyAla556065gtcatcatgccgtctgaaaaaatcgacgagcgcggcctgtttgccgcc418ValIleMetProSerGluLysIleAspGluArgGlyLeuPheAlaAla707580gtattgcccgaacacgcgcccgactacgccctgctggtgacataccac466ValLeuProGluHisAlaProAspTyrAlaLeuLeuValThrTyrHis859095gagggcgaagccgccgtacgcgaagaagatgactaccgcttcggcagc514GluGlyGluAlaAlaValArgGluGluAspAspTyrArgPheGlySer100105110115gcgctgcaacataccgatgcctggctgctgggcgaaggcacgcacctg562AlaLeuGlnHisThrAspAlaTrpLeuLeuGlyGluGlyThrHisLeu120125130cgcccttatgaaacgctgggcgcacatttcgccgaaatggacggcgta610ArgProTyrGluThrLeuGlyAlaHisPheAlaGluMetAspGlyVal135140145tccggcgtgcgctttgccgtttgggcgcccaacgcgcggcgggtatcg658SerGlyValArgPheAlaValTrpAlaProAsnAlaArgArgValSer150155160gtcatcggcgaattcaacggctgggacagccgccgccatgccatgcgt706ValIleGlyGluPheAsnGlyTrpAspSerArgArgHisAlaMetArg165170175ccgcacacaggcaacggcctgtgggacatctttatccccggcgtcggc754ProHisThrGlyAsnGlyLeuTrpAspIlePheIleProGlyValGly180185190195ctcaacgcgctgtataaattctccgtactcgatgccaacggcaacatc802LeuAsnAlaLeuTyrLysPheSerValLeuAspAlaAsnGlyAsnIle200205210cgcgaaaaagccgacccctacgcattcggcgcggagctgcgcccgacc850ArgGluLysAlaAspProTyrAlaPheGlyAlaGluLeuArgProThr215220225accgcatccgtggtgcgcggcttgccggccaaagccgaagcgcccgct898ThrAlaSerValValArgGlyLeuProAlaLysAlaGluAlaProAla230235240ttccgccgccgcgccaactccgtggaagcgcccatcagcatttacgaa946PheArgArgArgAlaAsnSerValGluAlaProIleSerIleTyrGlu245250255gtccatctcggctcgtggcggcgcaatcccgaaaacaactactggctc994ValHisLeuGlySerTrpArgArgAsnProGluAsnAsnTyrTrpLeu260265270275acctacacgcagctggccgacgaattggtgaactatgtaaaagacatg1042ThrTyrThrGlnLeuAlaAspGluLeuValAsnTyrValLysAspMet280285290ggcttcacccacatcgagctgctgcccttgtccgaatatccgttcgac1090GlyPheThrHisIleGluLeuLeuProLeuSerGluTyrProPheAsp295300305ggctcatggggctaccaagccaccggcctgtatgcaccgaccagccgc1138GlySerTrpGlyTyrGlnAlaThrGlyLeuTyrAlaProThrSerArg310315320ttcggctcgcccgatgagctgaaagccctgattgacgccgcccacgcc1186PheGlySerProAspGluLeuLysAlaLeuIleAspAlaAlaHisAla325330335gccggcatcagcgtgattctcgactgggtagcggggcacttccccacc1234AlaGlyIleSerValIleLeuAspTrpValAlaGlyHisPheProThr340345350355gacgaccacggcctcaacaccttcgacggcacggcgctttacgaacac1282AspAspHisGlyLeuAsnThrPheAspGlyThrAlaLeuTyrGluHis360365370gccgacccgcgcgaaggctaccatcaggattggaacacgctgatttac1330AlaAspProArgGluGlyTyrHisGlnAspTrpAsnThrLeuIleTyr375380385aacttcggccgcaacgaagtcaaaaacttcctgcagggcaacgcgctc1378AsnPheGlyArgAsnGluValLysAsnPheLeuGlnGlyAsnAlaLeu390395400tactggattgagcgtttcggcttcgacggcatccgcgtggacgccgtg1426TyrTrpIleGluArgPheGlyPheAspGlyIleArgValAspAlaVal405410415gcctcgatgatttaccgcaactactcgcgcaaagacggcgagtggatt1474AlaSerMetIleTyrArgAsnTyrSerArgLysAspGlyGluTrpIle420425430435cccaaccgctacggcggcagcgaaaatctggaagccatcgcctttttg1522ProAsnArgTyrGlyGlySerGluAsnLeuGluAlaIleAlaPheLeu440445450cgccaaaccaatgccgtcttaaaaagcgaaacacccggcgccggctcg1570ArgGlnThrAsnAlaValLeuLysSerGluThrProGlyAlaGlySer455460465tttgccgaagaatcgacttcctttgccgacgtaacccgcgaagccggc1618PheAlaGluGluSerThrSerPheAlaAspValThrArgGluAlaGly470475480ctgaacttcgatttcaaatggaatatgggctggatgaacgacaccctg1666LeuAsnPheAspPheLysTrpAsnMetGlyTrpMetAsnAspThrLeu485490495cgctatatgcaggaagaccccgtccaccgcaaataccaccacggcaaa1714ArgTyrMetGlnGluAspProValHisArgLysTyrHisHisGlyLys500505510515atgacattcggcatgatgtaccaatacagcgaaaacttcgttctgccc1762MetThrPheGlyMetMetTyrGlnTyrSerGluAsnPheValLeuPro520525530ctgtcgcacgacgaagtggtacacggcaaacgctcgctgctgggcaaa1810LeuSerHisAspGluValValHisGlyLysArgSerLeuLeuGlyLys535540545atgccgggcgactgctggcagcagtttgccaacctgcgcgcctattac1858MetProGlyAspCysTrpGlnGlnPheAlaAsnLeuArgAlaTyrTyr550555560ggctttatgtacggcttccccggcaaaaaactcctatttatgggcaac1906GlyPheMetTyrGlyPheProGlyLysLysLeuLeuPheMetGlyAsn565570575gaatttgcccaaggccgcgagtggaattatcaggaaggactggattgg1954GluPheAlaGlnGlyArgGluTrpAsnTyrGlnGluGlyLeuAspTrp580585590595catctgctcgacgaagcgggcggctggcacaaaggcgtgcaggattat2002HisLeuLeuAspGluAlaGlyGlyTrpHisLysGlyValGlnAspTyr600605610gtacgcgacctgaaccacatctacaccgcccacgccccgctctaccag2050ValArgAspLeuAsnHisIleTyrThrAlaHisAlaProLeuTyrGln615620625ctcgaccagcagcccgagggctttgaatggctggtggccgacgacagc2098LeuAspGlnGlnProGluGlyPheGluTrpLeuValAlaAspAspSer630635640gacaattcggtattcgtattcgagcgccgcgaccgcgcaggcaaccgc2146AspAsnSerValPheValPheGluArgArgAspArgAlaGlyAsnArg645650655atcatcgtcatcagcaactttaccccggtggtgcgcgaacactaccgc2194IleIleValIleSerAsnPheThrProValValArgGluHisTyrArg660665670675ttcggcgtcaacgcgcccggccgctataccgaaatcctgaattccgac2242PheGlyValAsnAlaProGlyArgTyrThrGluIleLeuAsnSerAsp680685690cgcacgcagtatcaaggcagcggcatcgcaaacggcgcggacatcacg2290ArgThrGlnTyrGlnGlySerGlyIleAlaAsnGlyAlaAspIleThr695700705gcggaaaacgtgccttcgcacggcaaagcgcagtcgctgagcctgacc2338AlaGluAsnValProSerHisGlyLysAlaGlnSerLeuSerLeuThr710715720ctgccgccgctggccacggtctatctgtatcagaaagccgcgcccgca2386LeuProProLeuAlaThrValTyrLeuTyrGlnLysAlaAlaProAla725730735acggaaattcagacggccttgcgcgccgacaagcagccggcggtaaaa2434ThrGluIleGlnThrAlaLeuArgAlaAspLysGlnProAlaValLys740745750755gataagcaggcaaaagccaaataaagcggcaccatactgcc2475AspLysGlnAlaLysAlaLys760<210>2<211>762<212>PRT<213>反硝化奈瑟氏球菌<400>2MetAsnArgAsnArgHisIleArgArgGlyTyrHisProGluAlaGly151015GluArgGlnIleIleAspSerLeuPheAlaAlaThrHisSerAspPro202530PheAlaTyrLeuGlyArgHisArgValAsnAspGluArgGluAlaVal354045ArgValLeuArgProAspAlaHisHisIleAspIleIleAspArgHis505560ThrGlyAlaValIleMetProSerGluLysIleAspGluArgGlyLeu65707580PheAlaAlaValLeuProGluHisAlaProAspTyrAlaLeuLeuVal859095ThrTyrHisGluGlyGluAlaAlaValArgGluGluAspAspTyrArg100105110PheGlySerAlaLeuGlnHisThrAspAlaTrpLeuLeuGlyGluGly115120125ThrHisLeuArgProTyrGluThrLeuGlyAlaHisPheAlaGluMet130135140AspGlyValSerGlyValArgPheAlaValTrpAlaProAsnAlaArg145150155160ArgValSerValIleGlyGluPheAsnGlyTrpAspSerArgArgHis165170175AlaMetArgProHisThrGlyAsnGlyLeuTrpAspIlePheIlePro180185190GlyValGlyLeuAsnAlaLeuTyrLysPheSerValLeuAspAlaAsn195200205GlyAsnIleArgGluLysAlaAspProTyrAlaPheGlyAlaGluLeu210215220ArgProThrThrAlaSerValValArgGlyLeuProAlaLysAlaGlu225230235240AlaProAlaPheArgArgArgAlaAsnSerValGluAlaProIleSer245250255IleTyrGluValHisLeuGlySerTrpArgArgAsnProGluAsnAsn260265270TyrTrpLeuThrTyrThrGlnLeuAlaAspGluLeuValAsnTyrVal275280285LysAspMetGlyPheThrHisIleGluLeuLeuProLeuSerGluTyr290295300ProPheAspGlySerTrpGlyTyrGlnAlaThrGlyLeuTyrAlaPro305310315320ThrSerArgPheGlySerProAspGluLeuLysAlaLeuIleAspAla325330335AlaHisAlaAlaGlyIleSerValIleLeuAspTrpValAlaGlyHis340345350PheProThrAspAspHisGlyLeuAsnThrPheAspGlyThrAlaLeu355360365TyrGluHisAlaAspProArgGluGlyTyrHisGlnAspTrpAsnThr370375380LeuIleTyrAsnPheGlyArgAsnGluValLysAsnPheLeuGlnGly385390395400AsnAlaLeuTyrTrpIleGluArgPheGlyPheAspGlyIleArgVal405410415AspAlaValAlaSerMetIleTyrArgAsnTyrSerArgLysAspGly420425430GluTrpIleProAsnArgTyrGlyGlySerGluAsnLeuGluAlaIle435440445AlaPheLeuArgGlnThrAsnAlaValLeuLysSerGluThrProGly450455460AlaGlySerPheAlaGluGluSerThrSerPheAlaAspValThrArg465470475480GluAlaGlyLeuAsnPheAspPheLysTrpAsnMetGlyTrpMetAsn485490495AspThrLeuArgTyrMetGlnGluAspProValHisArgLysTyrHis500505510HisGlyLysMetThrPheGlyMetMetTyrGlnTyrSerGluAsnPhe515520525ValLeuProLeuSerHisAspGluValValHisGlyLysArgSerLeu530535540LeuGlyLysMetProGlyAspCysTrpGlnGlnPheAlaAsnLeuArg545550555560AlaTyrTyrGlyPheMetTyrGlyPheProGlyLysLysLeuLeuPhe565570575MetGlyAsnGluPheAlaGlnGlyArgGluTrpAsnTyrGlnGluGly580585590LeuAspTrpHisLeuLeuAspGluAlaGlyGlyTrpHisLysGlyVal595600605GlnAspTyrValArgAspLeuAsnHisIleTyrThrAlaHisAlaPro610615620LeuTyrGlnLeuAspGlnGlnProGluGlyPheGluTrpLeuValAla625630635640AspAspSerAspAsnSerValPheValPheGluArgArgAspArgAla645650655GlyAsnArgIleIleValIleSerAsnPheThrProValValArgGlu660665670HisTyrArgPheGlyValAsnAlaProGlyArgTyrThrGluIleLeu675680685AsnSerAspArgThrGlnTyrGlnGlySerGlyIleAlaAsnGlyAla690695700AspIleThrAlaGluAsnValProSerHisGlyLysAlaGlnSerLeu705710715720SerLeuThrLeuProProLeuAlaThrValTyrLeuTyrGlnLysAla725730735AlaProAlaThrGluIleGlnThrAlaLeuArgAlaAspLysGlnPro740745750AlaValLysAspLysGlnAlaLysAlaLys755760<210>3<211>27<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列描述人工序列<400>3tctagaggaattaatcggcatggcggc27<210>4<211>25<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列描述人工序列<400>4gtcgacgctggcgcacacgacgagc25<210>5<211>26<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列描述人工序列<400>5tctagactgcaaaatggcaactacta26<210>6<211>26<212>DNA<213>人工序列<220><123>人工序列描述人工序列<400>6gtcgacggtttcatttggagtagtta26<210>7<211>92<212>PRT<213>馬鈴薯<400>7MetAlaThrThrLysSerPheLeuIleLeuPhePheMetIleLeuAla151015ThrThrSerSerThrCysAlaLysLeuGluGluMetValThrValLeu202530SerIleAspGlyGlyGlyIleLysGlyIleIleProAlaIleIleLeu354045GluPheLeuGluGlyGlnLeuGlnGluValAspAsnAsnLysAspAla505560ArgLeuAlaAspTyrPheAspValIleGlyGlyThrSerThrGlyGly65707580LeuLeuThrAlaMetIleThrThrProAsnGluThr8590<210>8<211>25<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列描述人工序列<400>8tctagacgtactccgccatgaccac25<210>9<211>24<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列描述人工序列<400>9gtcgacgatctgggccctgatggg24<210>10<211>26<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列描述人工序列<400>10ctcgagatgttgacccccacgcagca26<210>11<211>23<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列描述人工序列<400>11ctgcagacggcatttgggaagcg23<210>12<211>27<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列描述人工序列<400>12gtcgacatgaaccgaaaccgccatatc27<210>13<211>29<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列描述人工序列<400>13cctgcaggtatggtgccgctttatttggc29<210>14<211>35<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列描述人工序列<400>14ggcgcgtctagatgagtaattccttagggaataac35<210>15<211>36<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列描述人工序列<400>15gcgccggtcgacagcatgaggagaactagaaaaagc3權(quán)利要求1.一種遺傳修飾的轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞，其中所述的遺傳修飾是引入外源核酸分子或引入幾種外源核酸分子，它們的存在或表達(dá)可使得淀粉蔗糖酶蛋白的活性和分支酶的活性比相應(yīng)的遺傳未改變的野生型植物細(xì)胞得到提高。2.權(quán)利要求1所述的轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞，它可合成無法由相應(yīng)的非遺傳修飾的野生型植物細(xì)胞合成的在0-6-位上帶有改變的支化度的α-1，6支鏈α-1，4-葡聚糖類或合成無法由相應(yīng)的非遺傳修飾的野生型植物細(xì)胞合成的改性淀粉。3.權(quán)利要求1或2所述的轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞，其中所述的淀粉蔗糖酶來源于奈瑟氏球菌屬的細(xì)菌。4.權(quán)利要求1-3中任意一項所述的轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞，其中所述的分支酶來源于奈瑟氏球菌屬的細(xì)菌。5.權(quán)利要求3或4所述的轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞，其中所述的分支酶來源于反硝化奈瑟氏球菌。6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任意一項所述的轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞，其中所述的外源核酸分子帶有一種或多種介導(dǎo)淀粉蔗糖酶蛋白和分支酶蛋白的液泡定位的蛋白質(zhì)引導(dǎo)信號序列。7.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任意一項所述的轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞，其中所述的外源核酸分子帶有一種或多種介導(dǎo)淀粉蔗糖酶蛋白和分支酶蛋白的質(zhì)體定位的蛋白質(zhì)引導(dǎo)信號序列。8.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任意一項所述的轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞，其中所述的外源核酸分子帶有一種或多種介導(dǎo)淀粉蔗糖酶蛋白和分支酶蛋白的細(xì)胞壁特異性定位的蛋白質(zhì)引導(dǎo)信號序列。9.一種含有權(quán)利要求1-8中任意一項的轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞的轉(zhuǎn)基因植物。10.權(quán)利要求9所述的轉(zhuǎn)基因植物，它可產(chǎn)生比相應(yīng)的非遺傳修飾的野生型植物提高的產(chǎn)量。11.權(quán)利要求9或10所述的轉(zhuǎn)基因植物，它是一種纖維化的或儲藏油的或儲藏淀粉的或儲藏糖的或儲藏蛋白質(zhì)的植物。12.權(quán)利要求9或10所述的轉(zhuǎn)基因植物，它是一種食物或蔬菜植物。13.一種用于生產(chǎn)可獲得比相應(yīng)非遺傳修飾的野生型植物提高的產(chǎn)量的轉(zhuǎn)基因植物的方法，其中(a)通過引入一種或多種外源核酸分子對植物細(xì)胞進(jìn)行遺傳修飾，所述的外源核酸分子的存在或表達(dá)使得具有淀粉蔗糖酶蛋白活性的蛋白質(zhì)的活性和具有分支酶活性的蛋白質(zhì)的活性均得到提高；(b)從按照(a)生產(chǎn)的細(xì)胞中再生植物；和(c)選擇性地由按照步驟(b)生產(chǎn)的植物生產(chǎn)其它植物。14.一種用于生產(chǎn)可合成無法由相應(yīng)的非遺傳修飾的野生型植物細(xì)胞合成的在O-6-位上帶有改變的支化度的α-1，6支鏈α-1，4-葡聚糖類的轉(zhuǎn)基因植物的方法，其中(a)通過引入一種或多種外源核酸分子對植物細(xì)胞進(jìn)行遺傳修飾，所述的外源核酸分子的存在或表達(dá)使得具有淀粉蔗糖酶蛋白活性的蛋白質(zhì)的活性和具有分支酶活性的蛋白質(zhì)的活性均得到提高；(b)從按照(a)生產(chǎn)的細(xì)胞中再生植物；和(c)選擇性地由按照步驟(b)生產(chǎn)的植物生產(chǎn)其它植物。15.一種用于生產(chǎn)與相應(yīng)非遺傳修飾的野生型植物相比可合成改性淀粉的轉(zhuǎn)基因植物的方法，其中(a)通過引入一種或多種外源核酸分子對植物細(xì)胞進(jìn)行遺傳修飾，所述的外源核酸分子的存在或表達(dá)使得具有淀粉蔗糖酶蛋白活性的蛋白質(zhì)的活性和具有分支酶活性的蛋白質(zhì)的活性均得到提高；(b)從按照(a)生產(chǎn)的細(xì)胞中再生植物；和(c)選擇性地由按照步驟(b)生產(chǎn)的植物生產(chǎn)其它植物。16.一種通過權(quán)利要求13-15中任意一項的方法獲得的轉(zhuǎn)基因植物。17.權(quán)利要求9-12或16中任意一項的植物的繁殖或采收材料。18.一種或多種編碼具有淀粉蔗糖酶酶活性的蛋白質(zhì)和具有分支酶酶活性的蛋白質(zhì)的核酸分子在生產(chǎn)植物中的應(yīng)用，其中所述的植物與野生型植物相比可以獲得提高的產(chǎn)量和/或合成與來自野生型植物的淀粉相比得到改性的淀粉和/或與相應(yīng)非遺傳修飾的野生型植物相比合成在O-6-位上帶有改變的支化度的α-1，6支鏈α-1，4-葡聚糖類。全文摘要本發(fā)明提供了具有提高的淀粉蔗糖酶蛋白活性和提高的分支酶活性的轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞和植物。這類植物細(xì)胞和植物合成改性淀粉和/或合成在0－6－位上帶有改變的支化度的α－1,6支鏈α－1,4－葡聚糖類和/或與相應(yīng)的非遺傳修飾的野生型植物(植物細(xì)胞)相比獲得較高產(chǎn)量。文檔編號C12N9/10GK1355840SQ00807908公開日2002年6月26日申請日期2000年5月26日優(yōu)先權(quán)日1999年5月27日發(fā)明者M(jìn)·庫安茲申請人:普蘭泰克生物技術(shù)研究與開發(fā)有限公司