專利名稱：：合益素混合物的制作方法合益素混合物發(fā)明的領(lǐng)域本發(fā)明涉及包含益生菌(probiotic)和益生元(prebiotic)混合物的制品，其特異性的設(shè)計(jì)為增強(qiáng)益生菌的效率和功效，以及為包含所迷制品的食物產(chǎn)品設(shè)計(jì)。
背景技術(shù)：
：人類的結(jié)腸被多種細(xì)菌所建群，所述細(xì)菌對(duì)消化道生理具有正面和負(fù)面的雙重作用，也具有其它系統(tǒng)性的影響。結(jié)腸中所發(fā)現(xiàn)的細(xì)菌的優(yōu)勢(shì)類群包括類菌體、雙歧桿菌、真細(xì)菌、梭菌和乳桿菌。所存在的細(xì)菌響應(yīng)結(jié)腸中的底物有效性、氧化還原電位、pH、02張力和分布，具有變化的活性。通常，腸內(nèi)的細(xì)菌可分為對(duì)宿主潛在發(fā)揮危害或有益作用的物種。致病作用(例如，其可能由梭菌或類菌體引起)包括腹瀉、感染、肝臟損害、致癌作用和腸腐爛。健康促進(jìn)作用可以由有害細(xì)菌的生長(zhǎng)和建群抑制、免疫功能的刺激、增強(qiáng)必需營(yíng)養(yǎng)成分的消化和吸收以及維生素的合成所引起。具有健康促進(jìn)作用的細(xì)菌物種(例如雙歧桿菌屬(^^fe^cteW"m)和乳桿菌屬(丄tfcto6fla7/附))在數(shù)量和/或活性上的增加;l值得期望的。在不久前，一些細(xì)菌菌林已經(jīng)吸引了大量的注意力，因?yàn)榘l(fā)現(xiàn)如果攝入它們，就表現(xiàn)出對(duì)人類有價(jià)值的性質(zhì)。特別是，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)乳桿菌屬(Lactobacilli)和雙歧桿菌(Bifidobacteria)屬的特定菌林能夠在腸黏膜上至少暫時(shí)的建群，降低病原菌附著到腸上皮上的能力，從而具有免疫調(diào)節(jié)的效果，并幫助維持健康。此類細(xì)菌一般被稱為益生菌。已經(jīng)開展了廣泛的研究來鑒別新的益生菌。例如，EP0199535、EP0768375、WO97/00078、EP0577卯3和WO00/53200公開了特定的乳桿菌和雙歧桿菌菌林，和它們有利的效果。可以把益生菌定義為活的微生物飼料添加物，其通過改善腸道微生物平衡有利的影響宿主動(dòng)物。已經(jīng)證實(shí)，乳桿菌和雙歧桿菌的一些菌林(例如，類干酪乳桿菌(Lactobacillusparacasei)CNCM1-2116、鼠李糖乳桿菌(Lactobacillusrhamnosus)ATCC53103、乳雙歧桿菌(Bifidobacteriumlactis)BB12、長(zhǎng)雙歧桿菌(Bifidobacteriumlongum)ATCCBAA-999、路氏乳桿菌(Lactobacillusreuteri)ATCC55730和短雙歧桿菌(Bifidobacteriumbreve)M-16V⑧)具有這些性質(zhì)。已經(jīng)在人類食品中常規(guī)的添加此類益生乳桿菌和雙歧桿菌，例如發(fā)酵的乳產(chǎn)品。已知益生菌一般對(duì)胃腸道的病原感染(例如由梭菌屬(Clostridia)和沙門氏菌屬(Salmonella)引起的那些感染)具有預(yù)防性和治療性的效果。在EP卯4784中，建議使用三種不同類型的益生菌的組合來治療胃腸道疾病。近期，已經(jīng)提示一些益生菌菌林在預(yù)防和治療上呼吸道感染也是有效的(BritishMedicalJournal2001,322:1-5)。特別就嬰兒來說，可以認(rèn)為嬰兒的胃腸道直至出生前都是無菌的。在出生的過程中，其遭遇了來自母親消化道和皮膚的細(xì)菌并開始建群。針對(duì)嬰兒的喂養(yǎng)，消化道小型生物群的組成存在大的差異。母乳喂養(yǎng)的嬰兒的糞便菌群包括可觀群體的雙歧桿菌和一些乳桿菌物種，而配方乳喂養(yǎng)的嬰兒具有更復(fù)雜的小型生物群，雙歧桿菌、類菌體、梭菌和鏈球菌一般都存在。斷乳后，開始建立類似成/4莫式的消化道小型生物群才莫式。對(duì)于所有的嬰兒均建議使用母乳。但是，在一些情況下，母乳喂養(yǎng)是不充分的，或者出于醫(yī)學(xué)原因是不成功的，或者母親選擇不用母乳喂養(yǎng)。針對(duì)這些情況開發(fā)了嬰兒配方乳(infantformulae)。建議向嬰兒配方乳中添加益生菌，增加腸道建群的發(fā)生，并促進(jìn)"好"細(xì)菌(雙歧桿菌和乳桿菌)而非有害細(xì)菌(病原菌例如梭菌等)的建群。典型的添加最小10、fu/g配方乳，雖然一般更大的量是優(yōu)選的，例如多達(dá)l(^cfWg配方乳。向食品中添加益生元是促進(jìn)結(jié)腸中有益細(xì)菌的數(shù)量和/或活性的另一種方法。益生元是不消化的食品成分，其通過選擇性的刺激結(jié)腸中一種或有限數(shù)量的細(xì)菌的生長(zhǎng)和/或活性來有益的影響宿主，從而增進(jìn)宿主健康。此類成分是不消化的，因?yàn)槠湓谖富蛐∧c中不能被分解和吸收，從而可以完整的通過并到達(dá)結(jié)腸，在此處由有益細(xì)菌選擇性的進(jìn)行發(fā)酵。益生元的實(shí)例包括某些，，例如果寡糖(FOS)和半乳，(GOS)。已知人乳比大多數(shù)其它動(dòng)物乳含有更大量的不能消化的寡糖。事實(shí)上，不能消化的寡糖代表了母乳中第三大固體成分(在乳糖和脂類之后)，初乳中存在的濃度是12-15g/l,成熟乳汁中以5-8g/l存在。人乳寡糖非常耐受酶水解，表明這些^t可以顯示出與其熱值不直接相關(guān)的關(guān)鍵性功能。由于對(duì)人乳的組成已經(jīng)有更好的了解，已經(jīng)建議將益生元添加到嬰兒配方乳中。多種補(bǔ)充了益生元例如果寡糖和半乳寡糖混合物的嬰兒配方乳是可商購的。但是，此類混合物只是粗略的近似人乳中的S^混合物。在人乳中已經(jīng)檢測(cè)到超過100種不同的寡糖成分，其中一些至今尚未在動(dòng)物乳例如牛乳中檢測(cè)到，或僅檢測(cè)到少量。僅以非常小的量存在于牛乳和初乳中或者完全不存在的人乳寡糖類型的實(shí)例是唾液酸化和巖藻糖基化的寡糖。在持續(xù)尋求中建議還已經(jīng)建議嬰兒配方乳既含有益生菌又含有益生元，以產(chǎn)生盡可能的復(fù)制人乳的組成和效果的嬰兒配方乳。例如在WO2005/000748中，建議在嬰兒配方乳中補(bǔ)充短雙歧桿菌菌林、半乳寡糖和果寡糖(菊粉)的混合物。聲稱被描述為合益素的該混合物，調(diào)節(jié)嬰兒結(jié)腸中的雙歧桿菌種群，使補(bǔ)充配方乳使用更"嬰兒樣"的種群，即，更少的鏈狀歡歧軒菌(^^fi^6flCc"附ca&w"/a/w附;)、假鏈狀歡歧軒菌(^^///6^"^^7'"附psewfifocflteMw/fl似附)和青春雙山支軒菌(^fy^06fl"^7'w附fl^to/cscewris)物種，并且更多的嬰兒雙岐桿菌CB折甴6fl"en'w附/"/""他)、短雙歧桿菌(&7甴^1"^77/附Ave)和長(zhǎng)雙歧桿菌(5,yMo6flcten.w附/owgw附)物種。還陳述了混合物可用于預(yù)防和治療免疫病癥。然而，仍然需要包含益生菌和益生元混合物的制品，其特別的為增強(qiáng)益生菌的效率和功效而i殳計(jì)。發(fā)明概述意料之外地，發(fā)現(xiàn)包含5-70wt。/。的至少一種N-乙?；烟?，20-90wt%的至少一種中性寡糖，以及5-50wt。/o的至少一種唾液酸化的S^瞎的益生元混合物極有效的增加了與益生元混合物共同施用的益生菌的有益效果和效率，所述N-乙?；烟沁x自GalNAcal，3Gal(31，4Glc和Gal(31，6GalNAcal，3Gaipi，4Glc,所述中性寡糖選自Gal卩l(xiāng)，6Gal、Gaipi，6Galpl，4GIc、Gal卩l(xiāng)，6Gaipi，6Glc、Galpl，3Gaipi，3Glc、Gal卩l(xiāng)，3Gaipi，4Glc、Gaipi，6Gal(51，6Gaipi，4Glc、Gal(31，6Gaipi，3Gaipi,4Glc、Galpl,3Gaipi，6Gaipi，4Glc和Gaipi，3Gaipi，3Gaipi，4Glc,所迷唾液酸化的寡糖選自NeuAca2，3Gaipi，4Glc和NeuAca2，6Gal卩l(xiāng)，4Glc。因此，在第一個(gè)方面，本發(fā)明提供了包含益生菌菌林和益生元混合物的制品，所述益生元混合物包含5-70wt。/。的至少一種N-乙?；烟?，20-95wt。/。的至少一種中性寡糖，以及2-50wt。/。的至少一種唾液酸化的寡糖，其中所述N-乙酰化寡糖選自GalNAcal,3Gaipi,4Glc和Gaipi，6GalNAcal，3Gaipi，4Glc，所述中性寡糖選自Gaipi,6Gal、Gal(51，6Gaipi，4Glc、Ga職，6Gal卩l(xiāng)，6Glc、Gaipi，3Ga職，3GIc、Gaipi,3Gaipi，4Glc、Gal(U,6Gaipi，6Gaipi，4Glc、Gaipi，6Gaipi,3Gal(51，4Glc、Gal(31,3Gaipi，6Gaipi，4Glc和Gaipi，3Gal(31，3Gaipi，4Glc，所述唾液酸化絲選自NeuAca2,3Gal卩l(xiāng)，4Glc和NeuAca2，6GalJ51，4Glc。在第二個(gè)方面，本發(fā)明提供了益生菌菌林和包含5-70wt。/。的至少一種N-乙?；痎瞎，20-95wt。/。的至少一種中性絲，以及2-50wt。/。的至少一種唾液酸化寡糖的益生元混合物在制備用于預(yù)防和/或治療胃腸道的致病感染的藥物中的用途，所述N-乙?；烟沁x自GalNAcal，3Gaipi，4Glc和Gaipi，6GalNAcal，3Gaipi，4Glc，所述中性寡糖選自Gal(31，6Gal、Gaipi，6Gaipi，4Glc、Gal(31，6Gaipi，6Glc、Galpl，3Gaipi，3Glc、Gaipi，3Ga職，4Glc、Gaipi，6Gaipi，6Gaipi，4Glc、GalJ31，6Gaipi，3Ga職，4Glc、Gal卩l(xiāng)，3Gal卩l(xiāng)，6Gaipi，4Glc和Gaipi，3Gaipi，3Gaipi，4Glc，所述唾液酸化S^選自NeuAca2，3Gal卩l(xiāng),4Gk和NeuAca2，6Gal(31，4Glc。在笫三個(gè)方面，本發(fā)明提供了益生菌菌林和包含5-70wt%的至少一種N-乙?；?，，20-95wt。/。的至少一種中性寡糖，以及2-50wt。A的至少一種唾液酸化^#的益生元混合物在制備用于預(yù)防或治療免疫病癥的藥物中的用途，所述N-乙?；烟沁x自GalNAcal，3Gaipi，4Glc和Gaipi，6GalNAcod,3Galpl，4Glc，所述中性寡糖選自Galpl，6Gal、G孝，6Gaipi，4Gk、Gal卩l(xiāng)，6Gal卩l(xiāng)，6Glc、Gaipi，3Ga職，3Glc、Gaipi，3GalJ51，4Glc、Gaipi，6Galpl，6Gal卩l(xiāng),4Gk、Gaipi，6Gaipi，3Galf51，4Glc、Gaipi，3Gal(31，6Gaipi，4Glc和Gaipi，3Gal(51，3Gaipi，4Glc，所述唾液酸4匕S^選自NeuAca2,3Gal卩l(xiāng)，4Glc和NeuAca2，6Gal卩l(xiāng)，4Glc。在第四個(gè)方面，本發(fā)明提供了益生菌菌林和包含5-70wt%的至少一種N-乙酰化，，20-95wt。/。的至少一種中性,，以及2-50wtVo的至少一種唾液酸化，的益生元混合物在制備用于預(yù)防或治療上呼吸道感染的藥物中的用途，所述N-乙?；烟沁x自GalNAcal，3Galpl，4Glc和Gaipi，6GalNAml，3Galpl，4Gk，所述中性寡糖選自Gal卩l(xiāng)，6Gal、GalJ31，6Gal(51，4Glc、GalJU，6Ga職，6Glc、GalJU，3Gaipi，3Glc、Gaipi，3Gaipi，4Glc、Gal(51，6Gaipi，6Gal(31,4GIc、Gaipi，6Gaipi,3GalJ51，4Glc、Galpl，3Galjil,6Gaipi,4Glc和Gaipi，3Gaipi，3Gaipi，4Glc,所述唾液酸化絲選自NeuAca2,3Gaipi，4Glc和NeuAca2，6Gaipi，4Glc。在第五個(gè)方面，本發(fā)明提供了在需要其的受試者中預(yù)防或治療胃腸道的致病感染的方法，其包括向受試者施用治療量的制品，所述制品包含益生菌菌抹和^^有5-70wt。/。的至少一種N-乙?；痎瞎，20-95wt。/o的至少一種中性M，以及2-50wt。/。的至少一種唾液酸化，的益生元混合物，其中，所述N-乙酰化寡糖逸自GalNAcal，3Gaipi，4Glc和Gaipi，6GalNAcal，3Gaipi，4Glc，所述中性寡糖選自Gaipi，6Gal、Galpl，6Gal卩l(xiāng)，4Glc、Gaipi，6Gal卩l(xiāng)，6Glc、Gal(51，3Gal(51，3Glc、Gaipi，3Gal(51，4Glc、Gaipi，6Gaipi，6Gal(Jl，4Glc、Gaipi，6Gaipi，3Gaipi，4Glc、Gaipi,3Galpl，6Gal卩l(xiāng),4Glc和Gaipi，3Gaipi，3Gaipi，4Glc，所述唾液酸化S^t選自NeuAca2，3Gaipi，4Glc和NeuAca2，6Gaipi，4Glc。在第六個(gè)方面，本發(fā)明提供了在需要其的受試者中預(yù)防或治療免疫病癥的方法，其包括向受試者施用治療量的制品，所述制品包含益生菌菌林和含有5-70wt。/。的至少一種N-乙?；烟?，20-95wty。的至少一種中性寡糖，以及2-50wtV。的至少一種唾液酸化^l的益生元混合物，其中，所述N-乙?；烟沁x自GalNAcal，3Gal(51，4Glc和Gaipi，6GalNAcal，3Gal(31，4Glc，所述中性寡糖選自Gal(31，6Gal、Gal卩l(xiāng),6Gaipi，4Glc、Gal卩l(xiāng)，6Gaipi，6Glc、Gaipi，3Ga叫3Glc、Galpl,3Galpl,4Glc、Gaipi，6Gal(51，6Gal(31，4Glc、Gaipi，6Gaipi，3Gal(31，4Glc、Gaipi，3Gaipi，6Gaipi，4Glc和Gaipi，3Galpl3Galj31，4Glc，所迷唾液酸化S^選自NeuAca2，3GalJ51，4Glc和NeuAca2，6Gaipi，4Glc。在第七個(gè)方面，本發(fā)明提供了在需要其的受試者中預(yù)防或治療上呼吸道感染的方法，其包括向受試者施用治療量的制品，所述制品包含益生菌菌林和含有5-70wt。/o的至少一種N-乙?；烟牵?0-95wt。/。的至少一種中性，，以及2-50wt。/o的至少一種唾液酸化^l的益生元混合物，其中，所述N-乙?；烟沁x自GalNAcal，3Gaipi，4Glc和Gaipi，6GalNAcal，3Gal(51，4Glc，所述中性寡糖選自Gal(31，6Gal、Gaipi,6Gal(il，4Glc、Galj31，6Gal(31,6Glc、Galj31,3Gal(51，3Glc、Gaipi，3Gal(31，4Glc、Gaipi，6Gaipi，6Gal(51，4Glc、Galpl，6Galpl，3Gaipi，4Glc、Galpl，3Gaipi，6Galpl，4Glc和Galpl，3Gaipi，3Gaipi，4Glc，所述唾液酸化S^t選自NeuAca2，3Gaipi，4GIc和NeuAca2，6Gal(51，4Glc。附圖的簡(jiǎn)要說明附圖1顯示了與制品的組分單獨(dú)產(chǎn)生的保護(hù)效果相比，本發(fā)明的制品針對(duì)艱難梭菌(Clostridiumdifficile)的毒素A的保護(hù)效果；附圖2顯示了由附圖1中使用的益生菌菌林結(jié)合本領(lǐng)域已知的多種不同的益生元所賦予的針對(duì)艱難梭菌的毒素A的保護(hù)效果；附圖3比較了在管飼人嬰兒小型生物群和伺喂本發(fā)明的制品的定菌小鼠的小腸內(nèi)的短雙歧桿菌計(jì)數(shù)，和飼喂了制品的單獨(dú)組分的小鼠中的短雙歧桿菌計(jì)數(shù)；附圖4比較了在用人嬰兒小型生物群管飼和銅喂本發(fā)明的制品的定菌小鼠的糞便中的葡萄球菌(Staphylococci)計(jì)數(shù)，和飼喂了制品的單獨(dú)組分的小鼠中的葡萄球菌計(jì)數(shù)；附圖5比較了在用人嬰兒小型生物群管飼和祠喂本發(fā)明的制品的定菌小鼠的小腸中的產(chǎn)氣莢膜梭菌(a^fr/力'"附/^"http://7'^/1)計(jì)數(shù)，和銅喂了制品的單獨(dú)組分的此類小鼠中的產(chǎn)氣莢膜梭菌計(jì)數(shù)；和附圖6比較了在用人嬰兒小型生物群管飼和飼喂本發(fā)明的制品的無菌小鼠中兩周的時(shí)期內(nèi)的定居長(zhǎng)雙歧桿菌的相對(duì)代謝活性，和飼喂了制品的單獨(dú)組分的此類小鼠中的定居長(zhǎng)雙歧桿菌的相對(duì)代謝活性。發(fā)明的詳細(xì)i兌明在本說明書中，在閱讀和理解說明書、實(shí)施例和權(quán)利要求時(shí)必須考慮對(duì)下列詞語所給出的定義。"雙歧腸內(nèi)小型生物群(bifidogenicintestinalmierobiota)"意指對(duì)于嬰兒這樣的腸內(nèi)小型生物群，其由x^桿菌(例如短雙歧桿菌、嬰兒xML桿菌和長(zhǎng)雙歧桿菌)占多數(shù)，并且排除了可評(píng)估群體的物種，例如類菌體、梭菌和鏈球菌，其通常與母乳飼養(yǎng)的嬰兒中發(fā)現(xiàn)的相當(dāng)?shù)摹?嬰兒"意指年齡低于12個(gè)月的兒童。"嬰兒配方乳，，在生命前四至六個(gè)月期間用于嬰兒的完全營(yíng)養(yǎng)的食物，并且作為12個(gè)月以上的嬰兒的其它食品的補(bǔ)充。"N-乙?；疭^瞎，，意指具有N-乙酰殘基的S^。NCC表示NestleCultureCollection"中性^t，，意指不帶電也沒有N-乙酰殘基的寡糖；"益生菌，，意指對(duì)宿主的健康或康樂具有有益影響的微生物細(xì)胞制品或孩i生物細(xì)胞組分(SalmmenS，OuwehandA.BennoY.等人"Probiotics:howshouldtheybedefined"TrendFoodSci.Technol.1999:10107-10)。"益生元"意指通過選擇性的刺激結(jié)腸中一種或有限數(shù)量的細(xì)菌的生長(zhǎng)和/或活性來有利的影響宿主，從而增強(qiáng)宿主健康的不可消化的食物成分。。(Gibson和Roberfroid"DietaryModulationoftheHumanColonicMicrobiota:IntroducingtheConceptofPrebioties'，J.Nuti*125:1401-1412);"寡糖"意指具有2至20范圍(包括端值)的聚合度(DP)但不包括乳糖的糖類；和"唾液酸化^t"意指具有有關(guān)聯(lián)電荷的唾液酸殘基的寡糖。優(yōu)選的益生元混合物包含10-70wt。/。的N-乙?；痎4t，20-80wt。/。的中性寡糖和10-50wt。/。的唾液酸化寡糖。更優(yōu)選的益生元混合物包含15-40wt。/o的N-乙?；疭^瞎，40-60wt。/。的中性S^和15-30wt。/。的唾液酸化寡糖。特別優(yōu)選的益生元混合物包含30wt。/o的N-乙?；烟?，50wt%的中性^J瞎和20wt。/。的唾液酸化寡糖?？蛇x的，混合物可以方4更的包含5-20wt。/。的特定的一種或多種N-乙?；烟牵?0-95wto/。的特定的一種或多種中性寡糖和2-30wt。/。的特定的一種或多種唾液酸化，。可以從一種或多種動(dòng)物乳中制備本發(fā)明的益生元混合物?？梢詮娜魏尾溉閯?dòng)物中獲得乳，特別是從奶牛、山羊、水牛、馬、大象、駱駝或綿羊?？蛇x的可以通過購買和混合單個(gè)組分來制備益生元混合物。例如，合成的半乳^t，例如商標(biāo)為Vivinal⑧和Elix，or⑧的Gal(51,6Gal(il，4Glc、Gal(31，6Gal(51，6Glc、Galpl，3Gal|51，4Glc、Gaipi，6Gal卩l(xiāng)，6Gal卩l(xiāng)，4Glc、Gal(31,6Galj51，3Gaipi，4Glc和Gal|31，3Gaipi，6Gaipi，4Glc及其混合物是可商購的。其它寡糖供應(yīng)商是西格瑪-阿爾德里克化學(xué)公司德斯科實(shí)驗(yàn)室(DextraLaboratories,Sigma-AldrichChemieGmbH)和可瓦哈克公司(KyowaHakkoKogyo公司)。可選的，可以使用特定的糖基轉(zhuǎn)移酶例如半乳糖基轉(zhuǎn)移酶來生產(chǎn)中性寡糖。可以通過氨基葡糖苷酶和/或氨基半乳糖香酶對(duì)N-乙?；?葡萄糖和/或N-乙?；肴樘堑淖饔脕碇苽銷-乙酰化M。相同的，N-乙?；?半乳糖基轉(zhuǎn)移酶和/或N-乙?；?糖基轉(zhuǎn)移酶也可以用于該目的。還可以通過使用不同的酶(重組的或天然的)的發(fā)酵技術(shù)和/或微生物發(fā)酵來生產(chǎn)N-乙?；烟?。在后一種情況下，微生物可以表達(dá)它們的天然的酶和底物，或者可以被改造為生產(chǎn)不同的底物和酶?？梢允褂脝蝹€(gè)微生物培養(yǎng)物或混合培養(yǎng)物。可以從DP-1起始的任何聚合度(DP)開始，通過接納體底物開始N-乙?；烟切纬?。另一個(gè)選擇是從游離或與寡糖(例如，乳酮糖)結(jié)合的己酮糖(例如，果糖)化學(xué)轉(zhuǎn)換為N-乙酰己糖胺或含有寡糖的N-乙酰己糖胺，如Wrodnigg，T.M.;Stutz，A.E.(1999)Angew.Chem.Int.Ed.38:827-828中描述的。可以通過色譜或過濾技術(shù)從天然來源例如動(dòng)物乳中分離唾液酸化的寡糖3，唾液酸-乳糖和6，唾液酸-乳糖?？蛇x的，可以通過使用特定的唾液酸轉(zhuǎn)移酶的生物技術(shù)來生產(chǎn)它們，所述生物技術(shù)或者是通過基于酶的發(fā)酵技術(shù)(重組的或天然的酶)或者是通過微生物發(fā)酵技術(shù)。在后一種情況下，微生物可以表達(dá)它們的天然的酶和底物，或者可以被改造為生產(chǎn)不同的底物和酶?？梢允褂脝蝹€(gè)微生物培養(yǎng)物或混合培養(yǎng)物?？梢詮腄P4起始的任何聚合度(DP)開始，通過接納體底物開始唾液酸^t形成。細(xì)菌菌林可以選自滿足益生菌定義的任何菌林，并且具有對(duì)于本發(fā)明制品所待被摻入的產(chǎn)品而言可接受的保存期限。例如，要求嬰兒配方乳在高達(dá)36個(gè)月內(nèi)維持穩(wěn)定和有效。當(dāng)然，本發(fā)明的制品不需要被摻入到另一產(chǎn)品如食品中，而可以原樣^^或者混合合適的賦形劑，以粉末、膠嚢或壓制成片劑的形式4聶入。益生菌菌抹優(yōu)選的是乳桿菌或雙歧桿菌。優(yōu)選地使用只生產(chǎn)L(+)乳酸的菌林。優(yōu)選的乳桿菌物種的實(shí)例是鼠李糖乳桿菌、類千酪乳桿菌和路氏乳桿菌。特別優(yōu)選的菌林是鼠李糖乳桿菌ATCC53103、鼠李糖乳桿菌CGMCCL3724、路氏乳桿菌ATCC55730和類干酪乳桿菌CNCM1-2116。優(yōu)選的雙歧桿菌物種的實(shí)例乳雙歧桿菌、短雙歧桿菌和長(zhǎng)雙歧桿菌。特別優(yōu)選的菌林是丹麥的克里斯蒂安漢森(ChristianHansen)公司出售的商標(biāo)為Bbl2的乳雙歧桿菌菌林和可從日本的莫里塔乳公司(MorinagaMilkIndustryCo.Ltd.)獲得的商標(biāo)為BB536的長(zhǎng)雙歧桿菌ATCCBAA-999。本發(fā)明的制品可以提供爭(zhēng)克益生元混合物102和101Gcfu之間的益生菌。在本發(fā)明的優(yōu)選的方面，將上述制品摻入到食物產(chǎn)品中。在本發(fā)明的上下文中，在本發(fā)明的背景中，術(shù)語"食物產(chǎn)品"意在涵蓋任何可消費(fèi)的物質(zhì)。因此，它可以是意在被人消費(fèi)的產(chǎn)品，特別是嬰兒配方乳、生長(zhǎng)乳(growingupmilk)等。但是，制品的消費(fèi)不限于嬰兒和二通。特別的，本發(fā)明的制品可以摻入到脫7jC奶粉或谷類混合物中。如果將本發(fā)明的制品摻入到嬰兒配方乳或其它基于乳的營(yíng)養(yǎng)組合物中，可以以本領(lǐng)域已知的任何合適的方法制備組合物。例如，可以通過將蛋白質(zhì)源、除乳糖以外的任何糖類和脂肪源以合適的比例混合在一起來制備嬰兒配方乳。如果需要可以添加乳化劑。此時(shí)可加入維生素和礦物質(zhì)，但通常隨后再加入以避免熱降解。任何親脂性維生素、乳化劑等都可以在混合之前溶解于脂肪源中。水，優(yōu)選的已經(jīng)過反滲透的水，可隨后混合進(jìn)去以形成液體混合物。然后，可以對(duì)液體混合物加熱處理以減少細(xì)菌負(fù)栽量(load)。例如，可以快速加熱液體混合物到約80。C至約110。C范圍的溫度約5秒鐘至約5分鐘。這可以通過注蒸汽或通過熱交換器例如板式熱交換器來完成。然后，將液體混合物冷卻至約60'C至約85'C，例如通過瞬時(shí)冷卻。然后將液體混合物攪勻，例如以兩個(gè)階段進(jìn)行，在第一階段中在大約7Mpa至大約40Mpa下，第二階段中在大約2Mpa至大約14Mpa下。然后進(jìn)一步冷卻攪勻的混合物，以添加任何熱敏感成分例如維生素和礦物質(zhì)。此時(shí)方便的對(duì)攪勻的混合物的pH和固體含量進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。將攪勻的混合物轉(zhuǎn)移至合適的干燥設(shè)備中，例如噴霧干燥器或冷凍干燥器，將其轉(zhuǎn)變?yōu)榉勰Ｔ摲勰?yīng)該具有以重量計(jì)少于約5%的含濕量。可以預(yù)先制備本發(fā)明的制品并通過干燥混合將其直接添加到營(yíng)養(yǎng)組合物中。但是，優(yōu)選的，可以將制品的單個(gè)組分分別添加到營(yíng)養(yǎng)組合物中，在這種情況下，益生元混合物優(yōu)選的在干燥前被直接添加在液相中，而益生菌菌林優(yōu)選的通過干燥混合被添加到干燥的組合物中?？梢愿鶕?jù)本領(lǐng)域已知的任何合適的方法培養(yǎng)所選擇的益生菌菌林，并通過例如冷凍干燥或噴霧干燥制備用于添加到嬰兒配方乳中?？蛇x的，可以從專門供應(yīng)商例如克里斯蒂安漢森公司(ChristianHansen)和莫里塔公司(Morinaga)購買以合適形式制備好的細(xì)菌菌林，用于添加到食物產(chǎn)品如嬰兒配方乳中。如果益生元混合物是從動(dòng)物乳中制備的，例如如下所述，并且用于添加到嬰兒配方乳中，則可以在不首先去除所有乳糖的條件下適宜的添加所述混合物。由于嬰兒配方乳含有的碳水化合物成分通常全部或部分的由乳糖構(gòu)成，對(duì)本領(lǐng)域沖支術(shù)人員而言顯而易見地，考慮到與益生元混合物一起添加的額外的糖類，需要調(diào)整嬰兒配方乳中的糖類的量。幼兒或嬰兒食物產(chǎn)品或配方乳中的本發(fā)明制品的終濃度以干物質(zhì)的重量計(jì)優(yōu)選的在0.3-6.0%，優(yōu)選的在0.75-4.0%。這對(duì)應(yīng)于每升復(fù)水配方乳0.2至8克的濃度，優(yōu)選的1至5g/1。但是，這些量不應(yīng)視為限制性的，并且應(yīng)該根據(jù)目標(biāo)人群進(jìn)行調(diào)整，例如，基于幼兒或嬰兒的體重和年齡或健康進(jìn)行調(diào)整。優(yōu)選的，每次喂養(yǎng)時(shí)給幼兒喂養(yǎng)含有本發(fā)明的,混合物的配方乳或食物。除了本發(fā)明的制品外，食物產(chǎn)品例如嬰兒配方乳可以包含一種或多種其它寡糖，所述寡糖各自添加至寡糖含量為復(fù)水配方乳或液體配方乳的10g/l。盡管補(bǔ)充特別針對(duì)嬰兒或幼兒營(yíng)養(yǎng)的食物產(chǎn)品是優(yōu)選的，但補(bǔ)充非特別針對(duì)的或針對(duì)成人群體的產(chǎn)品也可以是有益的。例如，可以將本發(fā)明的S^混合物整合到健康護(hù)理營(yíng)養(yǎng)品和老年人營(yíng)養(yǎng)品中。此類食物產(chǎn)品可包括基于乳飲料的混合物、酸奶、基于乳的發(fā)酵產(chǎn)品和冰激凌，以及基于谷類的產(chǎn)品等。令人驚訝的，發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的制品中的益生元混合物協(xié)同的增強(qiáng)了益生菌的抗病原和免疫調(diào)節(jié)性質(zhì)，從而產(chǎn)生治療效果，其顯著的優(yōu)于例如相同益生菌與單個(gè)益生元的混合物。因此，本發(fā)明的制品和含有它們的食物產(chǎn)品適合預(yù)防和治療由病原體(特別是細(xì)菌病原體)引起的胃腸道感染，以及上呼吸道感染如中耳炎。因此，含有才艮據(jù)本發(fā)明的制品的食物產(chǎn)品特別適合脆弱的群體，例如幼兒和老年人。此外，本發(fā)明的制品適合提高免疫防御，例如通過增強(qiáng)對(duì)疫苗的反應(yīng)和降低感染的持續(xù)時(shí)間和嚴(yán)重程度，以及預(yù)防和治療與嬰兒和幼兒的免疫系統(tǒng)功能障礙相關(guān)的病癥，例如食物超敏反應(yīng)、濕滲、變應(yīng)性鼻炎、特應(yīng)性皮炎和其他特應(yīng)性疾病。本發(fā)明的制品的另一個(gè)優(yōu)勢(shì)是它們通過增加主導(dǎo)該嬰兒腸內(nèi)小型生物群的雙歧桿菌物種的相對(duì)代謝活性，而促進(jìn)嬰兒中的雙歧腸內(nèi)小型生物群的建立。本發(fā)明將通過參考下列實(shí)施例進(jìn)行示例。實(shí)施例i將200,000升乳清超濾滲透物預(yù)濃縮至22。/。(w/w)總固體(TS)，在大約75。C巴氏消毒大約30秒，然后在60。C蒸發(fā)濃縮達(dá)到59。/0(w/w)的TS。在結(jié)晶器中以每小時(shí)2°C的速度將液體冷卻24小時(shí)至結(jié)晶出乳糖。洗滌結(jié)晶的乳糖，然后通過絞擰機(jī)(wringer)將其除去。將剩余的液體通過傾析器進(jìn)行澄清。將從澄清器(clarifier)獲得的17,7%TS的77000升通過60'C蒸發(fā)再濃縮到55。/。(w/w)的TS，并將其在與前面相同的務(wù)陣下進(jìn)4亍第二次乳糖結(jié)晶步驟。將因此獲得的29000升20.5%TS的液體通過電滲析和離子交換的組合以本身已知的方法進(jìn)行脫礦質(zhì)，獲得28500升的卯％脫礦質(zhì)的n.3。/。TS的液體。該液體含有每升大約L5克的下述的混合物約30wt%的GalNAcotl，3Gaipi，4Glc和Gal卩l(xiāng)，6GalNAcal，3Gaipi，4Glc,50wt。/o的Gal卩l(xiāng)，6Gaipi，4Glc和Gal卩l(xiāng)，3Gaipi，4Glc以及20wt%的NeuAca2，3Gaipi，4Glc和NeuAca2，6Gaipi，4Glc，才艮據(jù)起初原料，所述液體可以直接添加到食物產(chǎn)品例如嬰兒配方乳中，或者可以以本領(lǐng)域技術(shù)人員本身已知的方法進(jìn)一步濃縮。例如，可以將液體中殘留的乳糖水解為葡萄糖和半乳糖，這些單糖可以通過納米過濾去除或者如果需要的話，例如可以通過(3-半乳糖苷酶的作用將半乳糖至少部分地聚合以產(chǎn)生半乳S^，所述產(chǎn)生的半乳寡糖也將凈皮納米過濾膜保留。實(shí)施例250%TS的才艮據(jù)實(shí)施例1生產(chǎn)的100kg的益生元混合物在標(biāo)準(zhǔn)罐中加熱到60°C，調(diào)節(jié)pH為6至6.5。每克TS添加4.5mg的乳糖酶F(阿瑪諾公司(Amano)，日本)，并將混合物在60。C維持3小時(shí)。然后，通過直接蒸氣注入將溫度升高至110。Cll秒，使酶失活。獲得的液體每升含有約100克的下述混合物約10wt%GalNAcoil，3Gaipi，4Glc和Gaipi，6GalNAcal，3Gaipi，4Glc，87wt%的Gal(51，6Gaipi，6Glc、Galp1，6Gal(51，4Glc和Gal(51，3Gaipi，4Glc，以及3wt。/o的NeuAca2，3Gal卩l(xiāng)，4Glc和NeuAca2，6Gaipi，4Glc。可以將它直接添加到食物產(chǎn)品例如嬰兒配方乳中，或者可以如上迷進(jìn)一步濃縮。實(shí)施例3含有根據(jù)本發(fā)明的制品的嬰兒配方乳組合物的實(shí)例顯示如下<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>實(shí)施例4實(shí)施體外實(shí)驗(yàn)來比較使用兩種不同益生菌菌林的根據(jù)本發(fā)明的制品在預(yù)防致病感染的功效與相同益生菌和其它益生元的混合物在預(yù)防致病感染的功效。選擇艱難梭菌毒素A作為病原細(xì)菌的代表性毒素。與(i)單獨(dú)的益生菌，(ii)單獨(dú)的益生元，或(iii)益生菌和益生元的組合一起，孵育生長(zhǎng)在transwell板上的單層腸上皮T84細(xì)胞。在37GC、5%C02預(yù)孵育2小時(shí)后，用100ng/ml濃度的艱難梭菌的毒素A攻擊T84細(xì)胞。在高達(dá)24小時(shí)內(nèi)，定間隔監(jiān)控跨上皮電阻(TER)，其作為衡量防護(hù)毒素A作用的標(biāo)志。計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)化的防護(hù)分?jǐn)?shù)。益生菌菌林是類干酪乳桿菌(CNCMI-2116)和鼠李糖乳桿菌(ATCC53103)。兩種菌株使用的終濃度都是10、化/1。使用的益生元是1g/1的本文中描述的益生元混合物；果寡糖(RaftiloseP95，比利時(shí)奧拉夫提公司(Orafti，Belgium));半乳寡糖(VivinalGOS，DOMO，荷蘭)以及10g/1的唾液酸乳糖(共和發(fā)酵工業(yè)林式會(huì)社(KyowaHakkoKogyo)，日本)。附圖1和2中顯示了結(jié)果。附圖1比較了自單獨(dú)的益生菌、單獨(dú)的益生元混合物和兩種益生菌菌林的本發(fā)明的制品獲得的結(jié)果。附圖2比較了用附圖1中使用的相同的益生元菌林與20g/l的果^t;20g/l的半乳，和10g/1的唾液酸乳糖所獲得的結(jié)果。20g/1的乳糖(西格瑪公司(Sigma))作為對(duì)照。從附圖1中可見，與單個(gè)組分(即，益生元混合物和益生菌菌林)單獨(dú)提供的作用相比，本發(fā)明的制品具有顯著的抗艱難梭菌毒素A的協(xié)同作用。從附圖2中可見，當(dāng)測(cè)試相同的益生菌菌林與果寡糖、半乳寡糖或唾液酸乳糖分別組合時(shí)，沒有獲得可比較的作用。可以看到，使用鼠李糖乳桿菌與唾液酸乳糖組合可以獲得中等程度的保護(hù)，但僅在10g/1時(shí)而非1g/l(如本發(fā)明制品中)時(shí)。實(shí)施例5實(shí)施體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，在人類嬰兒小型生物群的定菌動(dòng)物模型中，比較補(bǔ)充單獨(dú)的益生元混合物、單獨(dú)的益生菌乳雙歧桿菌和根據(jù)本發(fā)明的制品對(duì)腸內(nèi)小型生物群的影響。向無菌小鼠管銅人嬰兒小型生物群的模型，并允許小型生物群自身建立兩周。然后將小鼠分為4組第一組在它們食物中接受3。/。(重量)的單獨(dú)的益生元混合物，第二組在它們的飲用水中接受乳雙歧桿菌CNCMI-3446(NCC2818),第三組同時(shí)接受補(bǔ)充益生元的食物和補(bǔ)充益生菌的水，第四組是對(duì)照組。在研究過程中(兩周)，監(jiān)控糞便小型生物群，在研究期末，處死動(dòng)物并研究小腸小型生物群。附圖3、4和5顯示了結(jié)果。從這些結(jié)果中可見，與根據(jù)本發(fā)明制品的單個(gè)組分相比，所述根據(jù)本發(fā)明的制品協(xié)同促進(jìn)了雙歧腸內(nèi)小型生物群，這由小腸中的短雙歧桿菌的計(jì)數(shù)(圖3)和糞便中減少的葡萄球菌和產(chǎn)氣莢膜梭菌計(jì)數(shù)(圖4和圖5)所證明。實(shí)施例6實(shí)施體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，比較補(bǔ)充單獨(dú)的益生元混合物、單獨(dú)的益生菌鼠李糖乳桿菌和根據(jù)本發(fā)明的制品，對(duì)在無菌小鼠的胃腸道中長(zhǎng)雙歧桿菌的建立和代謝活性的影響。用人嬰兒小型生物群的模型管飼無菌小鼠，并通過平板計(jì)數(shù)和評(píng)估表明代謝活性的16SrRNA水平，來監(jiān)控隨時(shí)間的小型生物群的建立。通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增16SrRNA，在變性梯度凝膠上分離產(chǎn)物，并且相對(duì)于作用為內(nèi)參的大腸桿菌(E.coli)的恒定16SrRNA水平定量。比較下列處理對(duì)照膳食和對(duì)照飲用物(水)；補(bǔ)充3%益生元混合物的對(duì)照膳食和水；對(duì)照膳食和含有鼠李糖乳桿菌CGMCC1.3724(NCC4007)的飲用水；補(bǔ)充3%益生元混合物的對(duì)照膳食和含有鼠李糖乳桿菌CGMCC1.3724的飲用水。附圖6中顯示了結(jié)果。在無菌小鼠中建立人嬰兒小型生物群的過程中，根據(jù)本發(fā)明的制品協(xié)同的增強(qiáng)了定居長(zhǎng)雙歧桿菌的一般代謝活性。在對(duì)照組和接受單獨(dú)的益生菌和單獨(dú)的益生元混合物的組中，人嬰兒小型生物群定居長(zhǎng)雙歧桿菌計(jì)數(shù)在14天后位于相似的水平，然而，在給予根據(jù)本發(fā)明的制品的組中，相對(duì)代謝活性被協(xié)同的和顯著的增加(附圖6D與6A、B、C相比較)。權(quán)利要求1.含有益生菌菌株和益生元混合物的制品，所述混合物包含5-70wt％的至少一種N-乙?；烟牵?0-95wt％的至少一種中性寡糖，以及2-50wt％的至少一種唾液酸化的寡糖，所述N-乙酰化寡糖選自GalNAcα1，3Galβ1，4Glc和Galβ1，6GalNAcα1，3Galβ1，4Glc，所述中性寡糖選自Galβ1，6Gal、Galβ1，6Galβ1，4Glc、Galβ1，6Galβ1，6Glc、Galβ1，3Galβ1，3Glc、Galβ1，3Galβ1，4Glc、Galβ1，6Galβ1，6Galβ1，4Glc、Galβ1，6Galβ1，3Galβ1，4Glc、Galβ1，3Galβ1，6Galβ1，4Glc和Galβ1，3Galβ1，3Galβ1，4Glc，所述唾液酸化的寡糖選自NeuAcα2，3Galβ1，4Glc和NeuAcα2，6Galβ1，4Glc。2.權(quán)利要求1所述的制品，其中益生元混合物包含15-40wt。/。的N-乙?；痎4t,40-60wt。/o的中性^t，以及15-30wt。/o的唾液酸化的寡糖。3.權(quán)利要求1或2所述的制品，其中^t混合物包含30wt。/o的N-乙?；z，50wt。/。的中性絲，以及20wt。/。的唾液酸化的絲。4.權(quán)利要求1所述的制品，其中寡糖混合物包含5-20wt。/。的N-乙?；烟?，60-95wto/o的中性寡糖，以及2-30wt。/。的唾液酸化的寡糖。5.上述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的制品，其中益生菌菌林是乳桿菌屬(Z^"o6fl".〃M力菌林。6.權(quán)利要求6所述的制品，其中乳桿菌屬菌林是鼠李糖乳桿菌(Z^cto6""7/w51^"附w仍ws)、類干膝乳桿菌(丄^"06<1"7/51^p"mc"se/)或路氏乳軒菌(丄a"。6ff"7/"s/rwfm)。7.權(quán)利要求6所述的制品，其中乳桿菌屬菌林是鼠李糖乳桿菌CGMCC1.3724。8.權(quán)利要求6所述的制品，其中乳桿菌屬菌林是類干酪乳桿菌CNCM1-2116。9.權(quán)利要求l-4的任一項(xiàng)所述的制品，其中益生菌菌林是雙歧桿菌屬(^yifito6fl"er/M附)菌林。10.權(quán)利要求9所述的制品，其中雙歧桿菌屬菌林是乳雙歧桿菌(jBf77fifo6""c/w附長(zhǎng)雙歧桿菌(5,yMo6flcfe"M附/owgw柳)或短雙歧桿菌11.權(quán)利要求9或IO所述的制品，其中雙歧桿菌屬菌林是長(zhǎng)雙歧桿菌ATCCBAA畫999。12.包含任一項(xiàng)上述權(quán)利要求所述的制品的食物產(chǎn)品。13.權(quán)利要求12所述的食物產(chǎn)品，其是嬰兒配方乳。14.權(quán)利要求12或13所述的食物產(chǎn)品，其包含基于干物質(zhì)的0.3-4%(重量)的權(quán)利要求1至11中任一項(xiàng)所述的制品。15.根據(jù)權(quán)利要求1-11的任一項(xiàng)的制品在制備預(yù)防或治療胃腸道致病感染的治療性營(yíng)養(yǎng)組合物或藥物中的用途。16.權(quán)利要求15的用途，其中感染是由病原菌導(dǎo)致的。17.根據(jù)權(quán)利要求1-11的任一項(xiàng)的制品在制備預(yù)防或治療免疫病癥的治療性營(yíng)養(yǎng)組合物或藥物中的用途。18.根據(jù)權(quán)利要求1-11的任一項(xiàng)的制品在制備預(yù)防或治療上呼吸道感染的治療性營(yíng)養(yǎng)組合物或藥物中的用途。19.根據(jù)權(quán)利要求l-ll的任一項(xiàng)的制品在制備用于建立雙歧腸內(nèi)小型生物群和/或增加此類雙歧腸內(nèi)小型生物群的代謝活性的治療性營(yíng)養(yǎng)組合物或藥物中的用途。全文摘要本發(fā)明涉及含有益生菌菌株和益生元混合物的制品，所述混合物包含5-70wt％的選自GalNAcα1，3Galβ1，4Glc和Galβ1，6GalNAcα1，3Galβ1，4Glc中的至少一種N-乙?；烟牵?0-95wt％的選自Galβ1，6Gal、Galβ1，6Galβ1，4Glc、Galβ1，6Galβ1，6Glc、Galβ1，3Galβ1，3Glc、Galβ1，3Galβ1，4Glc、Galβ1，6Galβ1，6Galβ1，4Glc、Galβ1，6Galβ1，3Galβ1，4Glc、Galβ1，3Galβ1，6Galβ1，4Glc和Galβ1，3Galβ1，3Galβ1，4Glc中的至少一種中性寡糖，以及2-50wt％的選自NeuAcα2，3Galβ1，4Glc和NeuAcα2，6Galβ1，4Glc中的至少一種唾液酸化的寡糖。本發(fā)明擴(kuò)展至包含所述制品的食物產(chǎn)品以及制品在預(yù)防和治療感染中的用途。文檔編號(hào)A23L1/30GK101432007SQ200780015709公開日2009年5月13日申請(qǐng)日期2007年3月7日優(yōu)先權(quán)日2006年3月7日發(fā)明者C·謝爾巴特,F·摩根,M·布勞恩,N·斯普倫格,P·鄧肯,R·貝羅卡爾申請(qǐng)人:雀巢產(chǎn)品技術(shù)援助有限公司