專利名稱：：產(chǎn)量增加的植物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明一般地涉及分子生物學(xué)領(lǐng)域，并涉及相對于對照植物而增加植物產(chǎn)量的方法。更具體地，本發(fā)明涉及增加植物產(chǎn)量的方法，包括增加編碼MYB(DNA-結(jié)合)結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)錄因子(MYB-TF)多肽的核酸序列在植物中的表達(dá)。一個特定實施方案中，本發(fā)明涉及增加植物產(chǎn)量的方法，包括優(yōu)先地在植物種子的胚乳中增加編碼MYB-TF多肽的核酸序列的表達(dá)。本發(fā)明還涉及編碼MYB結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)錄因子多肽的核酸序列表達(dá)增加的植物，以及編碼MYB結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)錄因子多肽的核酸序列優(yōu)先在種子胚乳中表達(dá)增加的植物，該植物相對于對照植物產(chǎn)量增加。本發(fā)明還提供用于本發(fā)明方法的構(gòu)建體。
背景技術(shù)：
：鑒于世界人口不斷增長而農(nóng)業(yè)可耕種土地的供給逐漸縮小，激起提高農(nóng)業(yè)效率方面的研究。作物和園藝改良的常規(guī)方法是利用選育技術(shù)來鑒定具有期望特性的植物。然而，這樣的選育技術(shù)有若干缺點(diǎn)，即這些技術(shù)通常是勞動密集型的，并且產(chǎn)生通常含有從親本植物遺傳的異源遺傳組分的植物，這些遺傳組分并非總是產(chǎn)生期望性狀。分子生物學(xué)的*已經(jīng)允許人類改造動物和植物的生殖質(zhì)(germplasm)。植物遺傳工程需要分離和操作遺傳物質(zhì)(通常為DNA或RNA的形式)及隨后將所述遺傳物質(zhì)引入植物。這樣的技術(shù)能夠提供具有多種改良的經(jīng)濟(jì)、農(nóng)業(yè)或園藝性狀的作物或植物。特別具有經(jīng)濟(jì)利益的性狀是產(chǎn)量，就許多植物而言是種子的產(chǎn)量。產(chǎn)量通常定義為作物產(chǎn)生的具有經(jīng)濟(jì)價值的可衡量產(chǎn)物。其可以從數(shù)量和/或質(zhì)量方面定義。產(chǎn)量直接取決于幾種因素，例如器官的數(shù)量和大小，植物結(jié)構(gòu)(例如分枝數(shù))，種子產(chǎn)出等等。根的發(fā)育，營養(yǎng)吸收和脅迫耐性也是決定產(chǎn)量的重要因素。因此優(yōu)化上述因素之一可以有助于增加作物產(chǎn)量。植物種子是人類和動物營養(yǎng)的重要來源。諸如谷物、稻類、小麥、油菜(canola)和大豆的作物占人類總熱量才聶入的一半以上，而不論是通過直接消耗種子本身，還是消耗由加工的種子所飼養(yǎng)的肉類產(chǎn)品的情況。它們也是工業(yè)加工所用的糖類、油類和多種代謝物的來源。種子含有胚(萌發(fā)后新枝和根的來源)和胚乳(在萌發(fā)和幼苗早期生長期間胚生長的營養(yǎng)源)。種子的發(fā)育涉及許多基因，并且需要代謝物自根、葉和莖轉(zhuǎn)移至正在生長的種子。特別是胚乳可以同化糖類、油類和蛋白質(zhì)的代謝前體，將其合成為貯存高分子，以使谷粒飽滿。增加植物種子產(chǎn)量的能力，不論是通過種子數(shù)目、種子生物量、種子發(fā)育、種子飽滿度，或者是通過任何其它種子相關(guān)的性狀來增加種子產(chǎn)量，都將在農(nóng)業(yè)上具有許多應(yīng)用，甚至具有許多非農(nóng)業(yè)用途，例如在諸如藥物、抗體或者疫苗等物質(zhì)的生物4支術(shù)生產(chǎn)中的應(yīng)用。MYB結(jié)構(gòu)域蛋白質(zhì)是具有高度保守的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域的轉(zhuǎn)錄因子。MYB結(jié)構(gòu)域最初于禽類成髓細(xì)胞性白血病病毒的癌基因(v-myb)中公開(Klempnauer等人(1982)Cell:453-63)。MYB蛋白質(zhì)含有包含50-53個氨基酸的保守序列的一至四個不完全同向重復(fù)序列，該保守序列編碼參與DNA結(jié)合的螺旋-轉(zhuǎn)角-螺旋結(jié)構(gòu)(Rosinski&Atchley(1998)JMolEvol46:74-83)。MYB結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)錄因子多肽已經(jīng)在包含;f直物的許多高等真核生物中鑒定出來(Jiang等人(2004)GenomeBiology5:R46)。MYB結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)錄因子多肽構(gòu)成植物中最大轉(zhuǎn)錄因子家族之一(在擬南芥(Jm^^/w/s^a//ami)中至少為130個)，但是在MYB結(jié)構(gòu)域之外卻具有很少的序列保守性。因此，基于MYB編碼區(qū)之外鑒定的保守基序?qū)⑺鼈兙垲悶椴煌瑏喨?Jiang等人，見上文)。來自稻的一個MYB結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)錄因子多肽OsMYB4通過^f吏用玉米編碼CIMYB的核酸分子作為探針進(jìn)行雜交而克隆得到(Suzuki等人(1997)Gene198:393-398;NCBI蛋白質(zhì)檢索號BAA23340)。OsMYB4的MYBDNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域由兩個重復(fù)序列形成，該重復(fù)序列最相似于通常在動物MYBDNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域中發(fā)現(xiàn)的三個重復(fù)序列(R1、R2和R3)中的第二和第三重復(fù)序列，因此是R2R3-型MYB多肽家族的一部分。OsMYB4mRNA水平優(yōu)先地在發(fā)育的種子中觀察到，因此推定OsMYB4在種子成熟中發(fā)揮作用(Suzuki等人，見上文)。WO03/007699公開了編碼OsMYB4轉(zhuǎn)錄因子的核酸序列。其還公開了使用多核苷酸改變植物對脅迫的抗性或者耐受性的方法，以及使用多核苷酸改變生物途徑和改變基因表達(dá)的方法。美國專利申請2004/0045049和2004/0019927提供了編碼OsMYB4轉(zhuǎn)錄因子和其擬南芥直向同源物(在申請中稱為G211)的核^列。據(jù)報道，在擬南芥中過表達(dá)G211影響葉和花序的發(fā)育，產(chǎn)生小的叢生植物，其具有比野生型對照低的種子產(chǎn)量。
發(fā)明內(nèi)容目前令人驚訝地發(fā)現(xiàn)增加編碼MYB(DNA-結(jié)合)結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)錄因子(MYB-TF)多肽的核酸序列在植物中的表達(dá)產(chǎn)生產(chǎn)量比對照植物增加的植物。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)優(yōu)先增加編碼MYB-TF多肽的核酸序列在植物種子胚乳中的表達(dá)，產(chǎn)生相對于對照植物，產(chǎn)量增加的植物。本發(fā)明提供了相對于對照植物增加植物產(chǎn)量的方法，其包括增加編碼MYB-TF多肽的核酸序列在植物中的表達(dá)。在特定的實施方案中，本發(fā)明提供了相對于對照植物增加植物產(chǎn)量的方法，包括優(yōu)先地增加編碼MYB-TF多肽的核酸序列在植物種子胚乳中的表達(dá)。術(shù)語"多肽，，和"蛋白質(zhì)"在本文可以替換使用，并且指任何長度的氮基酸多聚體形式。術(shù)語"多核苷酸"、"核酸序列"、"核苷酸序列"在本文可以替換使用，并且指任何長度的核苷酸多聚體形式，其或者是核糖核苷酸或者是脫氧核糖核普酸或者是兩者的組合。選擇對照植物是實驗設(shè)置的常規(guī)部分，并且可以包括相應(yīng)的野生型植物或不含目的基因的相應(yīng)植物。對照植物通常與待評估植物為同一植物物種，或者甚至為同一品種。對照植物還可以是待評估植物的失效合子(nullizygote)。本文所用的"對照植物"不僅指完整植物，而且指植物部分，包括種子和種子部分。本文中所定義的術(shù)語"增加的產(chǎn)量"指植物一部分或者多部分生物量(重量)的增加，該植物部分可以包含地上(可收獲)部分和/或地下(可收獲)部分。特別地，這些可收獲部分是種子，并且實施本發(fā)明方法產(chǎn)生種子產(chǎn)量比對照植物的種子產(chǎn)量增加的植物。種子產(chǎn)量的增加可以表現(xiàn)為下述一個或者多個方面a)種子生物量(種子總重量)的增加，其可以是單個種子l^出上的和/或每^M直物和/或每公項或者每英畝上的種子生物量的增加；b)每林植物花朵數(shù)的增加；c)(飽滿)種子數(shù)的增加；d)種子飽滿率的增加，種子飽滿率表示為飽滿種子數(shù)除以種子總數(shù)的比率；e)增加的收獲指數(shù)，收獲指數(shù)表示為可收獲的部分(例如種子)的產(chǎn)量除以總生物量的比率；以及f)增加的千粒重(TKW)，其從計數(shù)的飽滿種子數(shù)和它們的總重量而外推得出。增加的TKW可以由增加的種子大小和/或種子重量引起，也可以由胚和/或胚乳大小的增加引起。種子產(chǎn)量的增加也可以表現(xiàn)為種子大小和/或種子體積的增加。另外，種子產(chǎn)量的增加也可以表現(xiàn)為種子表面積和/或種子長度和/或種子寬度和/或種子外周長的增加。增加的產(chǎn)量也可以產(chǎn)生改良的結(jié)構(gòu)，或者由于改良的結(jié)構(gòu)而可以發(fā)生產(chǎn)量的增加。以玉米為例，產(chǎn)量增加可以表現(xiàn)為以下一個或多個方面每公項或每英畝植物數(shù)量的增加，每林植林穗數(shù)的增加，穗行數(shù)、行粒數(shù)、粒重、千粒重、谷穗長度/直徑的增加，種子飽滿率(其為飽滿種子數(shù)除以種子總數(shù)乘以100)的增加，等等。以稻為例，產(chǎn)量增加可以表現(xiàn)為以下一個或多個方面每公項或每英畝的植物數(shù)量的增加、每^N直林的圓錐花序數(shù)量的增加、每個圓錐花序的小穗數(shù)量的增加、每個圓錐花序的花(小花)數(shù)量(其表示為飽滿種子數(shù)對主圓錐花序(primarypanicles)數(shù)目的比率)的增加、種子飽滿率(其為飽滿種子數(shù)除以種子總數(shù)乘以100)的增加、千粒重的增加，等等。根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的特征，實施本發(fā)明方法產(chǎn)生相對于對照植物種子產(chǎn)量增加的植物。因此根據(jù)本發(fā)明，提供了相對于對照植物種子產(chǎn)量而增加植物種子產(chǎn)量的方法，該方法包括增加編碼MYB結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)錄因子多肽的核酸序列在植物中的表達(dá)。在特定的實施方案中，提供相對于對照植物的種子產(chǎn)量而增加植物種子產(chǎn)量的方法，該方法包括優(yōu)先地增加編碼MYB結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)錄因子多肽的核酸序列在植物種子胚乳中的表達(dá)。由于本發(fā)明的轉(zhuǎn)基因植物具有增加的產(chǎn)量，相對于對應(yīng)野生型植物在其生命周期相應(yīng)階段的生長速率而言，這些植物可能呈現(xiàn)出增加的生長速率(至少在其部分生命周期中)。增加的生長速率可以是植物的一個或多個部分(包括種子)特有的，或者可以基本上遍及整林植物。生長速率增加的植物甚至可以表現(xiàn)出較早的開花。生長速率的增加可以出現(xiàn)在植物生命周期的一個或多個階段，或者出現(xiàn)在基本上整個植物生命周期的過程中。在植物生命周期的早期階段，生長速率的增加可以反映出增強(qiáng)的活力(萌發(fā)時增加的幼苗活力)。生長速率的增加可以改變植物的收獲周期，使植物能夠比原來可能的情況更晚播種和/或更早收獲。如果生長速率充分增加，可以允許再播種同一植物物種的種子(例如完全在一個常規(guī)的生長期內(nèi)，播種和收獲稻類植物、接著再播種和收獲稻類植物)。與之類似，如果生長速率充分地增加，可以允許再播種不同植物物種的種子(例如播種和收獲稻類植物，隨后，例如，播種和任選地收獲大豆、馬鈴薯或任何其他適宜的植物)。就一些作物植物而言，也有可能從同一砧木收獲更多的次數(shù)。改變植物的收獲周期可以導(dǎo)致每平方米年生物量產(chǎn)量的增加(這是由于(比方說在一年中)任何特定植物可以生長和收獲的次數(shù)的增加)。與野生型對應(yīng)物相比，生長速率的增加還使得能夠在更廣闊的地域栽培轉(zhuǎn)基因植物，因為種植作物的地域限制通常由種植時(早季)或收獲時(晚季)不利的環(huán)境條件所決定。如果縮短收獲周期，可以避免這類不利條件。可以由生長曲線獲取多種參數(shù)，來確定生長速率，這類^可以是T-Mid(植物達(dá)到其最大大小50。/。所需的時間)和T-90(植物達(dá)到其最大大小90%所需的時間)，等等。實施本發(fā)明的方法產(chǎn)生具有增加的生長速率的植物。因此，本發(fā)明提供了增加植物生長速率的方法，所述方法包括增加編碼MYB-TF多肽的核酸序列在植物中的表達(dá)。特定實施方案中，提供增加植物生長速率的方法，該方法包括優(yōu)先地增加編碼MYB-TF多肽的核酸序列在植物種子胚乳中的表達(dá)。無論植物是處于非脅迫條件下還是暴露于各種脅迫，相對于對照植物，都發(fā)生產(chǎn)量和/或生長速率的增加。通常植物通過更加緩慢的生長來應(yīng)答脅迫接觸。在重度脅迫條件下，植物甚至可以完全停止生長。另一方面，輕度脅迫在文中定義為當(dāng)植物接觸時不導(dǎo)致植物完全停止生長、喪失重新開始生長能力的任何脅迫。本發(fā)明意義上的輕度脅迫導(dǎo)致受脅迫植物的生長與非脅迫條件下的對照植物相比，下降低于40%、35%或30%，優(yōu)選低于25%、20%或15%，更優(yōu)選低于14%、13%、12%、11%或10%或更{氐。由于耕作方法(灌溉、施肥、農(nóng)藥處理)的發(fā)展，栽培的作物植物常常不會遇到重度脅迫。因此，由輕度脅迫誘導(dǎo)的受損的生長通常成為農(nóng)業(yè)中不期望的因素。輕度脅迫可以是植物接觸的日常生物和/或非生物(環(huán)境)脅迫。非生物脅迫可以因干旱或過量的水、缺氧脅迫、鹽脅迫、營養(yǎng)缺失、化學(xué)毒性、氧化脅迫以及熱、冷或冰凍溫度而引起。非生物脅迫可以是由于水脅迫(特別是由于干旱)、鹽脅迫、氧化脅迫或離子脅迫引起的滲透脅迫。生物脅迫一般是由病原體如細(xì)菌、病毒、真菌和昆蟲引起的那些脅迫。特別地，本發(fā)明的方法可以在非脅迫條件或者輕度干旱的條件下實施，以產(chǎn)生相對于對照植物種子產(chǎn)量增加的植物。如Wang等(Planta(2003)"8:i-;u)所報道的那樣，非生物脅迫引起一系列的形態(tài)學(xué)、生理學(xué)、生物化學(xué)和分子變化，對植物生長和生產(chǎn)力造成不利影響。已知干旱、鹽度、極端溫度和氧化脅迫相互聯(lián)系，并可以通過相似的機(jī)制誘導(dǎo)生長和細(xì)胞損害。Rabbani等(PlantPhysio1(2003)133:1755-1767)公開了在干旱脅迫和高鹽度脅迫之間特別高程度的"對話"。例如，干旱和/或鹽堿化主要表現(xiàn)為滲透脅迫，導(dǎo)致破壞細(xì)胞中的穩(wěn)態(tài)和離子分布。氧化脅迫通常與高溫或低溫、鹽度或干旱脅迫相伴，可以引起功能及結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)的變性。所以，這些多種多樣的環(huán)境脅迫通常激活相似的細(xì)胞信號傳導(dǎo)路徑和細(xì)胞應(yīng)答，例如脅迫蛋白的產(chǎn)生，抗氧化劑的上調(diào)、可混溶溶質(zhì)的累積以及生長阻抑。本文所用的術(shù)語"非脅迫"條件為允許植物最佳生長的環(huán)境條件。本領(lǐng)域技術(shù)人員知曉給定地點(diǎn)的正常土壤條件和氣候條件。物，其種子產(chǎn)量相對于在相當(dāng)條件下生長的對照植物而增加。因此，才艮據(jù)本發(fā)明，提供增加非脅迫條件下或者輕度千旱條件下生長的植物的產(chǎn)量的方法，該方法包括增加如上定義的編碼MYB-TF多肽的核酸序列在植物中的表達(dá)。一個特定實施方案中，本發(fā)明涉及增加生長在非脅迫條件下或者生長在輕度千旱條件下的植物產(chǎn)量的方法，包括優(yōu)先地增加編碼MYB-TF多肽的核酸序列在植物種子胚乳中的表達(dá)。可以有利地對任何植物應(yīng)用本發(fā)明的方法。本文所用術(shù)語"植物"包括整林植物、植物的祖先和后代以及植物部分，包括種子、枝條、莖、葉、根(包括塊莖)、花以及組織和器官，其中上述每一種都包含目的基因/核酸序列。術(shù)語"植物，，也涵蓋植物細(xì)胞、懸浮培養(yǎng)物、愈傷組織、胚、分生組織區(qū)、配子體、孢子體、花粉和小孢子，同樣其中上述每一種都包含目的基因/核酸序列。在本發(fā)明方法中尤其有用的植物包括所有屬于植物界(Viridiplantae)超家族的植物，特別是單子葉和雙子葉植物，包括選自以下的飼料或豆科牧草、觀賞植物、糧食作物、喬木或灌木槭樹屬物種04cersp/).),獼猴桃屬物種^4"/mVZ/tf5/尸.)，秋蔡屬物種(^6e/附ow力"s5/7/;.)，劍麻(jg"ve、tf/""a)，冰草屬物種(Jg/Y/7j;/wi5/7/7.)，匍旬莖剪股穎(jgms,/ss,o/om/em),;^、屬物種C4〃/w附5p/7.)，莧屬物種(』附"nm^Mss/7/;.),^4/M/wo/7/i"a(wewflWfl,鳳梨(j"""fls，番茶枝屬物種(y4朋o"a卿.)，旱萍(々/"附gr"v^/ews)，落花生屬物種(」mc/^卿)，木菠蘿屬物種(^tocw77ws卿.),石刁才白(J5/)"mg"soj^">ia//s)，燕麥屬物種(Jve"fl5/7/7.)(例:i口，燕麥(Jve"astfftV"),野^^麥(^vewfl/fl似")，t匕贊燕、麥(^vew"6j^m&Vm)，爿vew"/a,""vw.s""va，雜種燕麥(^vew"/^^7V/fl))，陽杉匕(Jve/TAo"cwfl附6o/")，箣竹屬物種(必a附6wsas/7/7)，冬瓜(J5ew/wcosfltA/s/iV/"),巴西栗(必er狄o"eri"excefeefl)，甜菜(必e似vw/g"r&)，蕓苔屬物種(必m^/c"s/7/7.)(例如歐洲油菜(5mw/cff/"/7'"oyfl，茶(CVwie〃/"s/"e附/s)，美人蕉(C"w麵/"d/ctf),C"ww"6/s1sa"Vfl，辣椒屬物種(CVl戶'cm附5/7/7.)，C"rde/fl/"，番木瓜(OWcfl/7fl/7fl")，大花假虎刺(C"r/^"附fl(7Y7Cfl,/7")，山核杉匕屬物種(C"/J"5/7/.)，紅花(03^幼fl/WWS,/""0/7'WS)，栗屬物種(CflW,""e"5//7.)，吉貝/eW似Wf/尸ff)，栽培菊苣(CVAoWw附eW力V/"」，掉屬物種(C7"冊附0附W附s/7/7.)，西瓜(Ow〃附/flWfl/W51)，斥甘桔屬物種(O附W，/7.)，椰子屬物種(0CM印/7.)，咖啡屬物種(CWj^fl5/7/7.)，野芋(C。/"Cfl5"/flC5iw/e",fl)，CWtf5/7/7.，黃麻屬物種(C^t力Or"s)，芫荽(Co〃Virtfi^w附sff,/vw附)，榛屬物種(CVfj/ws5/7/7.)，山楂屬物種(Oa似egws5/7/7.)，番纟工花(CWcwss"&'vms)，南瓜屬物種(C"c"r/j/似5/7/7.)，黃瓜屬物種(CV/"/附/s5/7/7.)，菜莉?qū)傥锓N(C]pm尸"s/7/;.),野胡蘿卜(Dtf，山馬埴屬物種(Des7worf/w附5/7/7.)，龍B艮(D/附ocar/7ws/o"gflfi)，薯蕷屬物種(Z>/MXW*efl5/7/7.)，才,樹屬物種(Z)/0S/7JTfW5/3/7.)，；f卑屬物種(jEV^/"OC/j/ofl5/3/7.)，油棕屬物種(^7tf"》(例如油棕(五/"e/sgw,Vi^"w's)，美洲油棕(￡7fle/s,子(E7ews/wecwttcfl鹿),jEW做幼附5/7/7，批把(EWo6o/fjfl乂tf/w"/ca)，桉屬物種(五wcfl(v/^ws5/7/7.)，紅寸子果(^"gg",Vzm/wy/ora)，蕎麥屬物種(FflgO/7jtm附)，水青岡屬物種(F"g船5/7/7.)，萃狀羊茅(/VW"Cfl"/W^VlflCe")，無花果(jF7cWSc""V")，金桔屬物種(For似We〃fl5/7/7.)，草莓屬物種(尸mg肌'fl卿.)，銀杏(G7"紐o),大豆屬物種(G7戸Vie卿.)(例如大豆(G7戸'"e附ax，/r/5/7/t/"或iS咖附紅))，陸地棉(Gos柳/m附/|,>5^似附)，向日葵屬物種(/^〃《"http://|">^5/3/7.)(例長口向日葵(7/CVm^i/s""rtwws)，萱草(Z/e附mca〃/s/m/va)，木槿屬物種(歷6/sc"s5//.)，大麥屬物種(/f(n/cm附5/7/7.)(例如大麥(Z/o/y/"《附vw/gfl^)),甘薯(//70附06"6"似,flS)，核湘匕屬物種(/"g/flws5/7/7.)，萵苣(L""wcflm&'v")，香豌豆屬物種(丄W/y;ras5/>/7.),兵豆(丄ewsCM//Man's)，亞麻(i^Viw附ws/似"sw'附w附)，茶才支(Z^7cA/c/Vi^fs&),百脈4艮屬物種(Z^"ss/，p.),棱角絲瓜(1"#""c"似wg"to)，羽扇豆屬物種(丄"p/"船卿.)，丄wz"/"sy,vtf,/ai，番癡屬物種(丄戸戸wcwi卿.)(命J番癡(Zj;co/7^sicowe5rw/ew,w/w)，丄j;co/;ery/cf7W(vco/7ers7cww，Z^co/7e/^/co"/j^w/o,附"，石更皮豆屬物種(Afac7Y^v/o/wa5/^.)，蘋果屬物種((Ma/ws5/y,)，凹^^金虎尾(Ma/p/g/^Vie附"rg/wfl似9，曼密蘋果(Af"w附e"tfwm'cwifl)，芒果(Mawg^m/"flf'Va)，木薯屬物種(Ma"《7iW卿.)，人心果)，草木樨屬物種(7V^///^^卿.)，薄荷屬物種(臉"幼"卿.)，芒(M/scart^"51s/"ms/s)，苦瓜屬物種(Mo附ord/c"s/7/>.)，黑桑(Afw"s"Zgm)，芭蕉屬物種(Af"^r5/7/>.)，煙草屬物種(Atoria"a卿.)，木犀欖屬(0/e"卿,)，仙人掌屬物種(O戶油'fl卿.)，鳥足豆屬物種(O"她o拜卿)，稻屬物種(Or拜卿).(例如稻(Or，贈Vfl)，闊葉稻，稷(Pfl"/c"附附,7,Vxeew附),柳枝稷(P""/cw附v,Vgfl^/附)，雞蛋果(尸"柳y/om^/w//s)，歐防風(fēng)(尸fl幼'"flc"s"rtVfl)，狼尾草屬物種(尸^m/A'"w附5/7/7.)，歸梨屬物種(/^S^！5p/7.)，歐芽(iP^msd'wM附Cr/5/7w/w),，廬(i^a/tf尸/5"/*Wf//aCCfl)，《i^^^t(i^AflSCO/M5"5/7/7.),尸/r/cw附/7rfl&w5^，殺'j蔡屬物種(尸/^cw^x:s/7/7.)，南方,蘋(P/r尸ag附/tes""Wm/Zs)，酸漿屬物種(尸&>^//5^/7.)，松屬物種(朽"WS^7尸.)，阿月渾子(P&似CZ"y"fl)，豌豆屬物種(尸/SMWI5/7/7.)，早熟禾屬物種(尸0"5p/7.)，楊屬物種(尸，/wS卿.)，牧豆樹屬物種(/V,/7&卿.)，李屬物種(尸簡附卿.)，番石插屬物種(i^fVZ/"附，石插(jP""/c"grflrtflfM/M)，西洋梨(jF^VWSa附附Mw/s)，櫟屬物種(Qwm^s)，藍(lán)花子(iap/mwMSsflft'vns)，波葉大黃(7/rew附r/r"6flr6"rw附)，茶薦子屬物種(/幼<^sp/7.)，蓖麻(//c/"wsco附附w"/s),懸鉤子屬物種(i"A"s5p/.」，甘蔑屬物種(5""cc/rflr"/wsp/;.)，杉卩屬物種(S"/^:5/7/7.)，接骨木屬物種(S"/w6"c";5//7.)，黑麥(^""/ece^"/e)，胡麻屬物種(5^"附w附S/7/7.)，白芥屬物種(57wfl/^S5/V.)，癡屬物種(S。/"rtWM5/7/7.)(，J^(口馬鈴箸(5V/fl"w附,"^erayw附)，紅癡(5^/""w附/wfe^7yb/,'w附)或番癡(5^/做m附/j;co/7emVw附))，兩色蜀泰(iSWg/r"附Wa/or)，菠菜屬物種(S/;/w""Vis/，/.)，蒲桃屬物種(5^j^'"w5/^.)，萬壽菊屬物種(T"g"Ms/^.)，酸豆(r"w"Wm/附,VirfZc")，可可樹(77ieo6ro附"c"c卯)，牟軸草屬物種(7Wyb//w/w5/7/7.)，7>/ft'cosecflfer/附/7"w/,小麥屬物種(7Wft'cw附s/7/7.)(伊j3口普通小麥(7WftV"woes,/vw附)，*更普通小麥(7Wftcw附dwr"附)，圓柱小麥(7WY/cmw,MfgiV/ww),7>/&'c"/w^y6erww附，馬卡d、麥(7h'f/c"附附"cA")，普通小麥(7Wricw附s"ftV歸)或普通小麥(7Wftw附vw/g"re))，小金蓮花(7>y/;"e</w/w附/w"s)，金蓮花(71ro/meo/w附/w<(/5)，越枯屬物種(Fiacc/w/w附卿.)，野豌豆屬物種(F油卿.)，扛豆屬物種(F/g"fl卿.)，香堇(K她Mo/*",")，葡萄屬物種(F她)，玉蜀黍(Zea附，)，沼生恭(Zfe朋/"/7fl/"欲/5^，棗屬物種(Z/Z—附)等等。根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的實施方案，植物為作物植物。作物植物的實例包括大豆、向曰葵、油菜(canola)、苜蓿、油菜籽、棉花、番茄、馬鈴薯和煙草。還優(yōu)選植物為單子葉植物。單子葉植物的實例包含甘蔗。更優(yōu)選植物是谷類。谷類的實例包含稻、玉米、小麥、大麥、粟(millet)、黑麥、小黑麥、高粱或燕麥。本文定義的術(shù)語"MYB-TF多肽，，指任何如下多肽，該多肽從N端至C端含有(i)包含兩個MYB重復(fù)序列的R2R3MYB結(jié)構(gòu)域；(ii)與由SEQIDNO:38，SEQIDNO:27或SEQIDNO:28中任何一個或者多個所示的MYB4結(jié)構(gòu)域以遞增的優(yōu)選順序具有至少55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、卯％、95%、98%、99%或者更高的序列同一性的MYB4結(jié)構(gòu)域。上文定義的MYB-TF多肽的實例在實施例1的表A中給出。作為備選地或者另外地，本文定義的"MYB-TF多肽"指任何如下多肽序列，該序列當(dāng)用于構(gòu)建MYB系統(tǒng)樹(例如圖3中所示的系統(tǒng)樹)時，傾向于與包含如SEQIDNO:2和SEQIDNO:4所示多肽序列的多肽序列群組(圖3，粗箭頭；圓圏顯示系統(tǒng)樹上該群組的起點(diǎn))成簇聚類(cluster)，而不與任何其它群組成簇聚類。產(chǎn)生系統(tǒng)樹的優(yōu)選方法公開在Kranz等人(1998)PlantJournal16(2):263-276)中。本領(lǐng)域技術(shù)人員使用已知的制作這種系統(tǒng)樹的技術(shù)和軟件，例如，GCG，EBI或CLUSTAL軟件包，使用缺省參數(shù)，可以容易地確定討論的任何多肽序列是否符合"MYB-TF多肽，，的定義。聚類在包含如SEQIDNO:2和SEQIDNO:4表示的多肽序列的群組中的任何序列都被認(rèn)為符合上述的"MYB-TF多肽"定義，并且被認(rèn)為適合用于本發(fā)明的方法。作為備選地或者另外地，本文定義的"MYB-TF多肽"指任何這樣的多肽序列，其按遞增的優(yōu)選順序與SEQIDNO:2所示多肽序列具有至少35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%、99%或者更高的序列同一性。MYB-TF多肽的同源物也可以用于實施本發(fā)明的方法。蛋白質(zhì)的"同源物"包含肽、寡肽、多肽、蛋白質(zhì)和酶，其相對于討論中的未修飾蛋白具有氨基酸取代、缺失和/或插入，并且具有與其所來源自的未修飾蛋白質(zhì)相似的生物學(xué)活性和功能活性。缺失指從蛋白質(zhì)中移除一個或者多個氨基酸。插入指將一個或者多個氨基酸殘基引入到蛋白質(zhì)的預(yù)定位點(diǎn)。插入可以包含N端和/或C端融合以及單個或者多個氨基酸的序列內(nèi)插入。通常，M酸序列內(nèi)的插入小于N或者C端融合，數(shù)量級為大約l-10個殘基。N因子的結(jié)合結(jié)構(gòu)域或者激活結(jié)構(gòu)域、噬菌體外殼蛋白質(zhì)、(組氨酸)6標(biāo)簽、谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶標(biāo)簽、蛋白質(zhì)A、麥芽糖結(jié)合蛋白、二氬葉酸還原酶、Tag-100表位、c-myc表位、FLAG⑧-表位、lacZ、CMP(釣調(diào)蛋白結(jié)合肽)、HA表位、蛋白質(zhì)C表位和VSV表位。取代指使用具有相似特性(例如相似的疏水性、親水性、抗原性、形成或者打破a-螺旋結(jié)構(gòu)或者P-折疊結(jié)構(gòu)的傾向)的其它氨基酸代替蛋白質(zhì)中的氨基酸。氨基酸取代通常是單個殘基取代，但是視施加于多肽的功能限制而定，也可以是成簇取代；插入通常是在大約1-10個氨基酸殘基的數(shù)量級上。氨基酸取代優(yōu)選是保守M酸取代。保守取代表是本領(lǐng)域所熟知的(參見例3口Creighton(1984)Proteins.W.H.Freeman和Company和下述表1)。表l:1呆守M酸取4戈的實例<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>氨基酸取代、缺失和/或插入可以使用本領(lǐng)域熟知的肽合成技術(shù)(例如固相肽合成等等)或者通過重組DNA操作而容易地完成。操作DNA序列以產(chǎn)生蛋白質(zhì)的取代、插入或者缺失變體的方法是本領(lǐng)域熟知的。例如，在DNA的預(yù)定位點(diǎn)造成取代突變的技術(shù)是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的，包括M13誘變，T7-Gen體外誘變(USB，Cleveland,OH)，QuickChange定點(diǎn)誘變(Stratagene，SanDiego，CA)、PCR介導(dǎo)的定點(diǎn)誘變或者其它定點(diǎn)i秀變方法。同源物(或者同源蛋白質(zhì))可以使用本領(lǐng)域熟知的常規(guī)技術(shù)，如序列比對而容易地鑒定。用于對比的序列比對方法是本領(lǐng)域所熟知的，這樣的方法包含GAP、BESTFIT、BLAST、FASTA和TFASTA。GAP使用Needleman和Wunsch算法((1970)JMolBiol48:443-453)發(fā)現(xiàn)兩個全序列的比對，該比對將最大化匹配數(shù)并最小化空位數(shù)。BLAST算法(Altschul等人(1"0)JMolBiol215:403-10)計算序列同一性的百分比并實施兩個序列之間的相似性統(tǒng)計學(xué)分析。用于實施BLAST分析的軟件通過美國國家生物信息中心(NationalCentreforBiotechnologyInformation)而可公開獲得?？梢匀菀椎罔b定同源物，例如使用可以從位于京都大學(xué)生物信息中心(KyotoUniversityBioinformaticsCenter)的GenomeNetservice獲得的ClustalW多重序列比對算法(1.83版)，采用缺省成對比對參數(shù)和百分比的打分方法而鑒定?？梢赃M(jìn)行少量人工編輯以最優(yōu)化保守基序之間的比對，這對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是清楚明白的。同源物也包含涵蓋用于描述基因的祖先關(guān)系的進(jìn)化概念的直系同源物和旁系同源物。旁系同源物是相同物種內(nèi)通過祖先基因的加倍而起源的基因，直系同源物是來自不同生物的通過物種形成而起源的基因。可通過進(jìn)行所謂的交互blast研究，容易地發(fā)現(xiàn)直系同源物和旁系同源物。這可通過第一blast(涉及針對任何序列數(shù)據(jù)庫，例如公眾可獲得的NCBI數(shù)據(jù)庫，對查詢序列(例如，SEQIDNO:1或SEQIDNO:2)進(jìn)行blast分析)來進(jìn)行。當(dāng)始于核苷酸序列時，可使用BLASTN或TBLASTX(使用標(biāo)準(zhǔn)缺省值)，當(dāng)始于蛋白質(zhì)序列時，可使用BLASTP或TBLASTN(使用標(biāo)準(zhǔn)缺省值)?？扇芜x地過濾BLAST結(jié)果。然后將過濾的結(jié)果或未濾過的結(jié)果中的全長序列對來自查詢序列所來源的生物的序列進(jìn)行反向BLAST分析(第二BLAST)(當(dāng)查詢序列是SEQIDNO:1或SEQIDNO:2時，第二blast因此將針對稻序列進(jìn)行)。然后比較第一和第二BLAST的結(jié)果。如果來自第二blast的高級別命中事件與查詢序列源于相同的物種，那么鑒定為旁系同源物；如果高級別命中事件與查詢序列源于不相同的物種，那么鑒定為直系同源物。高級別命中事件是具有低E值的命中事件。E值越低，得分越顯著(或換句話說，偶然發(fā)現(xiàn)該命中事件的概率越低)。E值的計算在本領(lǐng)域內(nèi)是熟知的。在大家族的情況下，可使用ClustalW，然后構(gòu)建鄰接樹，以幫助顯現(xiàn)相關(guān)基因的聚類和鑒定直系同源物和旁系同源物。除了E值之外，還可以通過同一性百分比來對比較進(jìn)行打分。同一性百分比指在特定長度上兩個比較的核酸(或多肽)序列之間相同的核苷酸(或者氬基酸)數(shù)目。優(yōu)選MYB-TF多肽同源物與SEQIDNO:2所示未修飾MYB-TF多肽按遞增的優(yōu)選順序具有至少25%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或者更高的序列同一性或者相似性(功能同一性)。一般"^人為MYB-TF多肽同源物之間在MYB結(jié)構(gòu)域之外的同一性百分比低。優(yōu)選地，MYB-TF多肽同源物是表A中所給出的任何多肽序列，或者是表A中所給出的任何SEQIDNOs的4壬何直向同源物或者旁系同源物。MYB-TF多肽可以是SEQIDNO:2的衍生物。"衍生物，，包括肽、寡肽、多肽，其相比較于蛋白質(zhì)的天然形式的M酸序列，如SEQIDNO:2所示序列，可以包括非天然氨基酸殘基對氛基酸的取代或者非天然氨基酸殘基的添加。任何表A中所給出的多肽序列的衍生物，或者表A中所給出的任何SEQIDNOs的任何直向同源物或者旁系同源物的衍生物都是適合用于本發(fā)明方法的其它實例。蛋白質(zhì)的"衍生物"還包括這樣的肽、寡肽、多肽，其相比較于多肽的天然形式的氨基酸序列可以包含天然改變的(糖基化、?；⒎核鼗?、異戊二烯化、磷酸化、豆蔻?；?，硫酸化等等)或者非天然改變的氨基酸殘基。衍生物相比較于衍生其的M酸序列也可以包含一個或者多個非氨基酸取代或者添加，例如共價或者非共價結(jié)合至氨基酸序列的報告分子或者其它配體，例如結(jié)合至序列以有利于序列被檢測的報告分子，和相比較于天然蛋白質(zhì)的M酸序列而言的非天然氨基酸殘基。術(shù)語"結(jié)構(gòu)域"指沿著進(jìn)化相關(guān)蛋白質(zhì)的序列比對(如上文所述實施)在特定位點(diǎn)保守的一組氨基酸。在同源物之間其它位點(diǎn)的氨基酸可以改變，而在特定位點(diǎn)高度保守的氨基酸表明這些氨基酸對于蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)、穩(wěn)定性或者活性是必要的氨基酸。由于它們通過在蛋白質(zhì)同源物家族的比對序列中的高度保守性而被鑒定，因此它們可以被用作鑒定子以確定具有新近確定的序列的多肽是否屬于已前鑒定的多肽家族。使用專門數(shù)據(jù)庫可以鑒定MYB-TF多肽中的MYB結(jié)構(gòu)域(包括MYB重復(fù)序列)，例如SMART(Schultz等人(1998)Proc.Natl.Acad.Sci.USA95，5857-5864;Letunic等人(2002)NucleicAcidsRes30，242-244;由德國海德堡EMBL托管)，InterPro(Mulder等人，(2003)Nucl.Acids.Res.31，31S-318;由英國歐洲生物信息學(xué)研究所(EBI)托管)，Prosite(Bucher和Bairoch(1994)，Ageneralizedprofilesyntaxforbiomolecularsequencesmotifsanditsfunctioninautomaticsequenceinterpretation.(In)ISMB-94;分子生物學(xué)智能系統(tǒng)第二次國際大會會漢錄，AltmanR.,BrutlagD.，KarpP.，LathropR.，SearlsD.編著，pp53-61，AAAIPress,MenloPark;Hulo等人，Nucl.Acids.Res.32:D134-D137，(2004)，作為對科學(xué)團(tuán)體的服務(wù)而提供ExPASy蛋白質(zhì)組學(xué)服務(wù)器(由瑞士的瑞士生物信息研究所(SIB)托管)或Pfam(Bateman等人，NucleicAcidsResearch30(1):276-280(2002)，由英國Sanger研究所托管。MYB結(jié)構(gòu)域包含多達(dá)4個不完全重復(fù)序列，每個形成大約53個氨基酸的螺旋-轉(zhuǎn)角-螺旋結(jié)構(gòu)。MYB重復(fù)序列的特征是規(guī)律間隔色氨酸殘基。如SEQIDNO:38((謹(jǐn))(D/A)XF(S/T/P/畫)SFL(腸)(S/A)L(I/M)N(E/D)所示，如SEQIDNO:27((D/N)(D/A)XF(S/T/國)SFL(N/D)SL(I/M)N(E/D)所示(其中X是任何氨基酸，并且其中-表示沒有氨基酸)，和/或如SEQIDNO:28(DDDFSSFLDSLIND)所示的MYB4結(jié)構(gòu)域可以一使用如上文公開的用于比較的序列比對方法進(jìn)行鑒定。在一些情況中，可以調(diào)整缺省參數(shù)以修改搜索的嚴(yán)格性。例如使用BLAST,報道針對數(shù)據(jù)庫序列的匹配的統(tǒng)計學(xué)顯著性閾值(稱為"預(yù)期"值)可以提高以顯示低嚴(yán)格性的匹配。通過這種方法，可以鑒定短的幾乎完全的匹配，包括沒有改變、或者具有在任何位點(diǎn)的一個或者多個保守改變、或者具有在任何位點(diǎn)的一個、兩個或者三個非保守改變；或者具有在任何位點(diǎn)的一個缺失的SEQIDNO:38的MYB4結(jié)構(gòu)域和/或SEQIDNO:27的MYB4結(jié)構(gòu)域。例如SEQIDNO:2所示的稻MYB-TF多肽的MYB4結(jié)構(gòu)域在SEQIDNO:28(DDDFSSFLDSLIND)中給出。優(yōu)選地，用于實施本發(fā)明方法的MYB-TF多肽包含這樣的MYB4結(jié)構(gòu)域，其與由SEQIDNO:38，SEQIDNO:27或SEQIDNO:28之任一個或者多個所示的MYB4結(jié)構(gòu)域按遞增的優(yōu)選順序具有至少55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、卯％、95%、98%、99%或者更高的序列同一性。另外，MYB-TF多肽(至少以其天然形式)通常具有DNA結(jié)合活性和激活結(jié)構(gòu)域。使用常規(guī)的技術(shù)和方法，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以容易地確定激活結(jié)構(gòu)域和DNA結(jié)合活性的存在。使用對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)可以容易地鑒定與MYB-TF多Abf目互作用的蛋白質(zhì)(例如在轉(zhuǎn)錄復(fù)合物中與MYB-TF多^目互作用的蛋白質(zhì))。編碼MYB-TF多肽的核酸序列的實例包括但不限于表A中給出的任何核酸序列，或者編碼表A中給出的任何SEQIDNOs的直向同源物或者旁系同源物的任何核酸序列。編碼MYB-TF多肽的核酸序列的變體可以適合用于本發(fā)明方法中。適合的變體包括編碼MYB-TF多肽的核酸序列的部分和/或能夠與編碼MYB-TF多肽的基因/核酸序列雜交的核酸序列。其它變體包括編碼MYB-TF多肽的核酸序列的剪接變體和等位基因變體。本文定義的術(shù)語"部分"指編碼多肽的DNA的片段，其中該多肽從N端至C端包含(i)含有兩個MYB重復(fù)序列的R2R3MYB結(jié)構(gòu)域；(ii)與SEQIDNO:38，SEQIDNO:27或SEQIDNO:28中任何一個或者多個所示的MYB4結(jié)構(gòu)域按遞增的優(yōu)選順序具有至少55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、卯％、95%、98%、99%或者更高的序列同一性的MYB4結(jié)構(gòu)域。部分可以例如通過在編碼MYB-TF多肽的核酸序列中產(chǎn)生一個或者多個缺失而制備。該部分可以以分離的形式使用，或者可以融合到其它編碼(或者非編碼)序列上，以便例如產(chǎn)生組合幾種活性的蛋白質(zhì)。當(dāng)融合到其它編碼序列上，一旦翻譯產(chǎn)生的多肽可以比預(yù)測的MYB-TF部分大。優(yōu)選該部分編碼具有基本上與SEQIDNO:2的MYB-TF多肽相同的生物活性的多肽。優(yōu)選地，該部分是由表A中給出的任何核^f列之一所表示的核^列的一部分，或者是編碼表A給出的任何SEQIDNOs的直向同源物或者旁系同源物的任何核酸序列的一部分。最優(yōu)選，該部分是SEQIDNO:l所示核酸序列的一部分?？捎糜诒景l(fā)明方法的、編碼MYB-TF多肽的核酸序列的另一種變體是能夠在降低的嚴(yán)格條件，優(yōu)選在嚴(yán)格條件下與衍生自如上定義的核酸序列的探針雜交的核酸序列，該雜交序列編碼這樣的多肽，該多肽從N端至C端包含(i)含有兩個MYB重復(fù)序列的R2R3MYB結(jié)構(gòu)域；(ii)與SEQIDNO:38，SEQIDNO:27或SEQIDNO:28中任何一個或者多個所示的MYB4結(jié)構(gòu)域按遞增的優(yōu)選順序具有至少55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%、99%或者更高的序列同一性的MYB4結(jié)構(gòu)域。優(yōu)選地，該雜交序列能夠雜交表A中給出的任何核酸序列(或者衍生自其的探針)，或者能夠雜交編碼表A給出的任何SEQIDNOs的直向同源物或者旁系同源物的任何核酸序列，或者能夠雜交任何上述序列(耙序列)的一部分。最優(yōu)選，雜交序列能夠與SEQIDNO:l(或者衍生自其的探針)雜交。探針通常在長度上小于1000bp，優(yōu)選小于500bp。通常，對于DNA-DNA雜交，例如Southern印跡，探針長度在100-500bp之間變化，然而針對DNA-DNA雜交，例如在PCR擴(kuò)增中，探針中的雜交區(qū)通常短于50個核苷酸，但是長于10個核苷酸。本文定義的"雜交"是一個過程，其中基本上同源互補(bǔ)的核苷酸序列彼此退火。雜交過程可以完全在溶液中發(fā)生，即互補(bǔ)核酸分子兩者都在溶液中。雜交過程也可以發(fā)生于其中互補(bǔ)核酸分子之一固定在基質(zhì)，例如磁珠、瓊脂糖珠或者任何其它樹脂上時。雜交過程還可以發(fā)生于互補(bǔ)核酸分子之一固定在固相栽體(例如硝酸纖維素或者尼龍膜)上或者通過例如照相平板印刷術(shù)固定在例如硅質(zhì)玻璃支持物上(后者稱為核酸陣列或者樣吏陣列或者核酸芯片)時。為了使雜交發(fā)生，通常熱變性或者化學(xué)變性核酸分子，以使得雙鏈融化為兩個單鏈，和/或從單鏈核酸分子中除去發(fā)夾或者其它二級結(jié)構(gòu)。術(shù)語"嚴(yán)格性"指雜交發(fā)生的條件。雜交的嚴(yán)格性受多種條件的影響，例如溫度、鹽濃度、離子強(qiáng)度和雜交緩沖液組成。通常，選擇的低嚴(yán)格條件為在確定的離子強(qiáng)度和pH，比具體序列的熱解鏈溫度(Tm)低大約30°C。中等嚴(yán)格條件是溫度比Tm低20。C,高嚴(yán)格條件是溫度比TJ氐10。C。高嚴(yán)格雜交條件通常用于分離其與靶核酸序列具有高序列相似性的雜交序列。然而，因為遺傳密碼的簡并性，核酸序列可以互相不同并且仍然編碼基本上相同的多肽。因此，可能有時需要中等嚴(yán)格雜交條件以鑒定這樣的核酸分子。Tm是在確定的離子強(qiáng)度和pH下，50%的耙序列與完全匹配的探針雜交時的溫度。Tm取決于溶液條件以及探針的威基組成和長度。例如，更長的序列在更高的溫度下特異性雜交。低于Tm大約16°C至32°C獲得最大雜交速率。雜交溶液中一價陽離子的存在減少了2條核酸鏈之間的靜電排斥，從而促進(jìn)雜交體形成；該效應(yīng)對于不超過0.4M的鈉濃度是可見的(對于更高濃度，該效應(yīng)可以凈皮忽略)。甲酰胺降4氐DNA-DNA和DNA-RNA雙鏈體的解鏈溫度，每1。/。的甲酰胺降低0.6至0.7。C，50%曱酰胺的加入允許在30至45'C下進(jìn)行雜交，盡管雜交速率將降低。堿基對錯配降低雜交速率和雙鏈體的熱穩(wěn)定性。平均地和對于大的探針，每1%堿基錯配，Tm減少大約rC。取決于雜交體的類型，可使用下列公式計算Tm:DNA-DNA雜交體(Meinkoth和Wahl，Anal.Biochem"138:267-284，1984):Tm=81.5。C+16.6xlog[Na+a+0.41x%[G/Cb]—500x[LT1—0.61x。/o甲酰胺DNA-RNA或RNA-RNA雜交體Tm=79.8+18.5(log10[Na+]a)+0.58(%G/Cb)+11.8(%G/Cb)2-820/Lc.寡DNA或寡RNAd雜交體對于<20個核苷酸Tm=2(ln)對于20-35個核苷酸Tm=22+1.46(ln)a或?qū)τ谄渌粌r陽離子，但是只有在0.01-0.4M范圍內(nèi)是準(zhǔn)確的。b只對在30。/o至75Vo的范圍內(nèi)的。/oGC是準(zhǔn)確的。cL=堿基對中的雙鏈體的長度d寡，寡核苷酸；ln，引物的有效長度-2x(G/C的數(shù)目)+(A/T的數(shù)目)。可以使用多種已知技術(shù)之一來控制非特異性結(jié)合，例如使用含有蛋白質(zhì)的溶液封閉膜、向雜交緩沖液中添加異源RNA，DNA和SDS以及使用Rnase處理。對于非同源探針，可以通過改變下述內(nèi)容之一實施一系列的雜交(i)漸進(jìn)性降低退火溫度(例如從68°C降低至42°C)或者(ii)漸進(jìn)性降低甲酰胺濃度(例如從50%降低至0%)。本領(lǐng)域技術(shù)人員明白多種參數(shù)可以在雜交過程中改變并且其將維持或者改變條件的嚴(yán)格性。除了雜交條件，雜交特異性一般也是雜交后洗滌的函數(shù)。為了除去由非特異性雜交產(chǎn)生的背景，使用稀鹽溶液洗滌樣品。這樣洗滌的關(guān)鍵因素包括終洗滌溶液的離子強(qiáng)度和溫度越低的鹽濃度和越高的洗滌溫度，則洗滌嚴(yán)格性越高。洗滌條件通常以等于或者低于雜交嚴(yán)格性實施。陽性雜交給出至少是背景兩倍的信號。一般地，核酸雜交試驗或者基因擴(kuò)增檢測方法的合適嚴(yán)格條件在上文列出。也可以選擇較高或者較低的嚴(yán)格條件。本領(lǐng)域技術(shù)人員明白多種參數(shù)可以在洗滌過程中改變以及其將維持或者改變條件的嚴(yán)格性。例如，對于長度超過50個核苷酸的DNA雜交體，通常高嚴(yán)格雜交條件包括在65。C，1xSSC中或者在42。C，lxSSC和50。/。曱酰胺中雜交，接著在65°C，0.3xSSC中洗滌。對于長度超過50個核苷酸的DNA雜交體，中等嚴(yán)格雜交條件的實例包括在50。C，4xSSC中或者在40。C，6xSSC和50%甲酰胺中雜交，接著在50°C，2xSSC中洗滌。雜交體的長度是預(yù)期的雜交的核酸分子的長度。當(dāng)雜交已知核酸序列時，雜交體長度可以通過如本文所述比對序列和鑒定保守區(qū)而確定。1xSSC是0.15MNaCl和15mM檸檬酸鈉；雜交和洗滌可以另外包含5xDenhardt，s試劑，0.5-1.0%SDS，100|ig/ml變性的片段化的鮭精DNA，0.5%焦磷酸鈉。為了定義嚴(yán)格性的水平，可以方便地參考Sambrook等人(2001)MolecularCloning:alaboratorymanual,第三版，ColdSpringHarborLaboratoryPress,CSH，NewYork或者參考CurrentProtocolsinMolecularBiology,JohnWiley&Sons,N.Y.(1989和每年更新)。MYB-TF多肽可以由可變剪接變體編碼。此處使用的術(shù)語"可變剪接變體"包括其中已切除、置換或添加選定的內(nèi)含子和/或外顯子或其中已縮短或增長內(nèi)含子的核酸序列的變體。此類變體是其中蛋白質(zhì)的基本生物學(xué)活性得到保留的變體，可通過選擇性保留蛋白質(zhì)的功能片段而獲得這樣的變體?？稍谧匀唤缰邪l(fā)現(xiàn)或可人工制備此類剪接變體。用于產(chǎn)生此類剪接變體的方法在本領(lǐng)域內(nèi)是已知的。優(yōu)選的剪接變體是編碼MYB-TF多肽的核酸序列的剪接變體，該多肽從N端至C端包含(i)含有兩個MYB重復(fù)序列的R2R3MYB結(jié)構(gòu)域；(ii)與SEQIDNO:38、SEQIDNO:27或SEQIDNO:28中任何一個或者多個所示的MYB4結(jié)構(gòu)域按照遞增的優(yōu)選順序具有至少55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%、99%或者更高的序列同一性的MYB4結(jié)構(gòu)域。其它編碼包含上述特征的MYB-TF多肽的核酸序列的優(yōu)選剪接變體是如表A中給出的核酸序列的剪接變體，或者是編碼表A中給出的任何SEQIDNOs的直向同源物或者旁系同源物的任何核酸序列的剪接變體。最優(yōu)選的是SEQIDNO:l所示核酸序列的剪接變體。MYB-TF多肽也可以由編碼如下多肽的核酸序列的等位基因變體編碼，其中所述多肽從N端至C端包含(i)含有兩個MYB重復(fù)序列的R2R3MYB結(jié)構(gòu)域；(ii)與SEQIDNO:38、SEQIDNO:27或SEQIDNO:28中任何一個或者多個所示的MYB4結(jié)構(gòu)域按遞增的優(yōu)選順序具有至少55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%、99%或者更高的序列同一性的MYB4結(jié)構(gòu)域。編碼包含如上定義特征的MYB-TF多肽的核酸序列的優(yōu)選等位基因變體是如表A中給出的核酸序列的等位基因變體，或者是編碼表A中所示任何SEQIDNOs的直向同源物或者旁系同源物的任何核^列的等位基因變體。最優(yōu)選的是由SEQIDNO:l所示核酸序列的等位基因變體。等位基因變體天然存在，并且本發(fā)明方法包括對這些天然等位基因變體的使用。等位基因變體包括單核苷酸多態(tài)性(SNP)，以及小的插入/缺失多態(tài)性(INDEL)。INDEL的大小通常小于100bp。在大多數(shù)生物天然存在的多態(tài)性林系中，SNP和INDEL形成了最大的序列變體集合。也可以使用定向進(jìn)化(或者基因改組)以產(chǎn)生編碼MYB-TF多肽的核酸序列變體。其由反復(fù)的DNA改組和然后適當(dāng)?shù)暮Y選和/或選擇組成，以產(chǎn)生編碼MYB-TF多肽或者其具有修飾生物學(xué)活性的同源物或者部分的核酸序列或者其部分的變體(Castle等人，(2004)Science304(5674):1151-4;US專利5，811，238和6,395,547)?？梢允褂枚c(diǎn)誘變以產(chǎn)生編碼MYB-TF多肽的核酸序列變體。多種方法可使用以完成定點(diǎn)誘變，最常用的方法是基于PCR的方法(CurrentProtocolsinMolecularBiology.Wiley編輯)。編碼MYB-TF多肽的核酸序列可以衍生自任何天然或者人工來源。通過考慮周到的人工操作可以對組合物和/或基因組環(huán)境中的核酸序列的天然形式進(jìn)行〗務(wù)飾。一個實施方案中，MYB-TF核酸序列來自植物，優(yōu)選來自單子葉植物，更優(yōu)選來自禾本科，更優(yōu)選來自稻屬，最優(yōu)選地核酸序列來自稻(oryzasativa)?？梢酝ㄟ^將遺傳修飾引入植物，優(yōu)選引入MYB-TF基因座而獲得編碼MYB-TF多肽的核酸序列表達(dá)的增加。本文定義的基因座指基因座區(qū)域，其包含目的基因和編碼區(qū)上下游10KB的區(qū)域。特定實施方案中，編碼MYB-TF多肽的核酸序列的表達(dá)優(yōu)先地在植物種子胚乳中增加?？梢岳缤ㄟ^下述方法任何之一或者多種引入遺傳修飾T-DNA激活，TILLING和同源重組，或者可以通過在植物中引入和表達(dá)編碼MYB-TF多肽的核酸序列來引入遺傳f務(wù)飾。編碼MYB-TF多肽的核酸的表達(dá)增加。特定實施方案中，編碼MYB-TF多肽的核酸序列的表達(dá)優(yōu)先地在植物種子胚乳中增加。遺傳修飾引入之后，接著任選地基于編碼MYB-TF多肽的核酸序列在植物中的表達(dá)增加，進(jìn)行篩選步驟，其中所述增加的表達(dá)導(dǎo)致相對于對照植物具有產(chǎn)量增加的植物。在特定實施方案中，遺傳修飾引入之后，接著任選地基于編碼MYB-TF多肽的核酸序列優(yōu)先地在植物種子胚乳中的表達(dá)增加，進(jìn)行篩選步驟，其中所述增加的表達(dá)導(dǎo)致相對于對照植物具有產(chǎn)量增加的植物。T曙DNA激活標(biāo)簽(Hayashi等人Science(1992)1350-1353)包括將通常含有啟動子(也可以是翻譯增強(qiáng)子或者內(nèi)含子)的T-DNA插入到目的基因的基因組區(qū)或者基因編碼區(qū)上下游IOkb區(qū)，以產(chǎn)生使得啟動子指導(dǎo)靶基因表達(dá)的構(gòu)型。一般地，破壞耙基因天然啟動子對其表達(dá)的調(diào)控，并且使得基因接受新插入啟動子的調(diào)控。啟動子通常嵌入T-DNA。將此T-DNA隨機(jī)插入植物基因組中，例如通過農(nóng)桿菌(Agrobacterium)感染插入，并引起在插入T-DNA附近的基因的表達(dá)改變。獲得的轉(zhuǎn)基因植物將由于在引入的啟動子附近的基因的表達(dá)改變而顯示出顯性表型。待引入的啟動子可以是任何能夠增加編碼MYB-TF多肽的核酸序列在植物中表達(dá)的啟動子。特定實施方案中，所選啟動子優(yōu)先地增加在植物種子胚乳中的表達(dá)。也可以4吏用TILLING(定向誘導(dǎo)基因組局部突變技術(shù))，在編碼MYB-TF多肽的基因的基因座中引入遺傳修飾。其是可以用于產(chǎn)生和/或鑒定具有改變的表達(dá)和/或活性的MYB-TF多肽編碼核酸序列的誘變技術(shù)。TILING也允許選擇帶有該突變變體的植物。這些突變的變體可以展示出表達(dá)在強(qiáng)度或位置或時間上的改變(例如，如果突變影響啟動子的話)。這些突變的變體可以展示出比其天然形式的基因更高的MYB-TF活性。TILLING將高密度誘變與高通量歸選方法結(jié)合在一起。TILLING中通常進(jìn)行的步驟是(a)EMS謙變(RedeiGP和KonczC(1992)，MethodsinArabidopsisResearch,KonczC，ChuaNH，SchellJ，編.Singapore,WorldScientificPublishingCo,pp.16—82;Feldmann等人,(1994)，MeyerowitzEM,SomervilleCR，編,Arabidopsis.ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,NY，pp137-172;LightnerJ和CasparT(1998)，JMartinez-Zapater，JSalinas,編,MethodsonMolecularBiology,笫82巻.HumanaPress,Totowa,NJ，pp91-104);(b)個體的DNA制備和合并(pooling);(c)目的區(qū)域的PCR擴(kuò)增；(d)變性和退火以使異源雙鏈體能夠形成；(e)DHPLC，其中合并物中異源雙鏈體的存在在色譜圖中檢測為額外的峰；(f)突變個體的鑒定；和(g)突變PCR產(chǎn)物的測序。用于TILLING的方法在本領(lǐng)域內(nèi)是眾所周知的(McCallum等人，(2000)NatBiotechnol18:455-457;由Stemple(2004)NatRevGenet5(2):145-50進(jìn)行綜述)。攜帶這些突變變體的植物具有增加的編碼MYB-TF多肽的核酸序列的表達(dá)。特定實施方案中，攜帶這些突變變體的植物具有在植物種子胚乳中優(yōu)先增加的編碼MYB-TF多肽的核,列的表達(dá)。T-DNA激活和TILLING是能夠產(chǎn)生遺傳修飾的技術(shù)實例，該遺傳修飾包括在植物中增加編碼MYB-TF多肽的核酸序列的表達(dá)，或者包括優(yōu)先地在植物種子胚乳中增加編碼MYB-TF多肽的核酸序列的表達(dá)。同源重組允許在確定的選定位置將選定的核酸導(dǎo)入基因組。同源重組是生物科學(xué)中常規(guī)用于低等生物例如酵母或苔蘚劍葉蘚屬(Physcomitrella)的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)。不僅針對模式植物(Offringa等人(19卯)EMBOJ9(10):3077-84)而且還針對農(nóng)作物植物例如稻(Terada等人(2002)NatBiotech20(10):1030-4;Iida和Terada(2004)CurrOpinBiotech15(2):132-8)描述了用于在植物中進(jìn)行同源重組的方法。待靶向的核酸序列優(yōu)選是在植物中調(diào)控編碼MYB-TF多肽的核酸序列的天然表達(dá)的區(qū)域。可以將強(qiáng)組成型啟動子或者將強(qiáng)胚乳特異性啟動子引入此區(qū)域，從而部分地或者基本上全部地將其取代。引入遺傳修飾(在本發(fā)明中其不必位于MYB-TF基因的基因座中)的優(yōu)選方法是在植物中引入和表達(dá)如上定義的編碼MYB-TF多肽的核,列。編碼MYB-TF多肽的核酸的表達(dá)被增加。在特定實施方案中，引入遺傳修飾(在本發(fā)明中其不必位于MYB-TF基因的基因座中)的優(yōu)選方法是引入如上定義的編碼MYB-TF多肽的核酸序列并且優(yōu)先地增加其在植物種子胚乳中的表達(dá)。待？1入植物中的核酸序列可以是全長核酸序列，或者可以是如上定義的部分或者雜交序列或者其它核酸變體。本發(fā)明方法依賴在植物中增加編碼MYB-TF多肽的核酸序列的表達(dá)。特定實施方案中，本發(fā)明方法依賴優(yōu)先地增加編碼MYB-TF多肽的核^J列在植物種子胚乳中的表達(dá)。增加基因或者基因產(chǎn)物表達(dá)的方法是本領(lǐng)域眾所周知的，包含例如由合適啟動子引發(fā)的過表達(dá)，使用轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)子或者翻譯增強(qiáng)子?？梢詫⑵饐幼踊蛘咴鰪?qiáng)子元件作用的分離核^列引入非異源形式的多核苷酸的合適位置(通常是上游)，以便上調(diào)編碼MYB-TF多肽的核^列的表達(dá)。例如可以通過突變、缺失和/或取代體內(nèi)改變內(nèi)源性啟動子(參見，Kmiec，U.S.Pat.No.5,565,350;Zarling等人，PCT/US93/03868)，或者可以將分離的啟動子以合適方向和離本發(fā)明基因合適的距離引入植物細(xì)胞中，以便調(diào)控基因表達(dá)。如果期望多肽表達(dá)，通常期望將多腺苷酸化區(qū)域包括在多核苷酸編碼區(qū)3'-末端。多腺苷酸化區(qū)域可以來自天然基因，來自多種其它植物基因或者來自T-DNA。待添加的3'末端序列可以衍生自例如胭脂堿合酶或章魚堿合酶基因，或者作為備選來自其它植物基因，或者較不優(yōu)選地來自任何其它真核生物基因。還可向5，非翻譯區(qū)或部分編碼序列的編碼序列中加入內(nèi)含子序列，以增加在細(xì)胞溶膠中積累的成熟信使的量。已顯示在植物和動物表達(dá)構(gòu)建體的轉(zhuǎn)錄單位中包含可剪接內(nèi)含子可以使基因的表達(dá)在mRNA和蛋白質(zhì)水平上增加多達(dá)1000倍，Buchman和Berg，Mol.Cellbiol.8:4395-4405(1988);Callis等人，GenesDev.1:1183-1200(1987)。當(dāng)置于轉(zhuǎn)錄單位的5'末端附近時，基因表達(dá)的該內(nèi)含子增強(qiáng)作用通常最大。玉米內(nèi)含子Adhl-S內(nèi)含子l、2和6、Bronze-l內(nèi)含子的用途在本領(lǐng)域內(nèi)是已知的。關(guān)于一般信息參見TheMaizeHandbook,116章，F(xiàn)reeling和Walbot，Eds"Springer,N.Y.(1994)。其它調(diào)控序列(除了啟動子、增強(qiáng)子、沉默子、內(nèi)含子序列、3'UTR和/或5'UTR區(qū))可以是蛋白質(zhì)和/或RNA穩(wěn)定元件。本發(fā)明還提供了遺傳構(gòu)建體和載體，以有助于本發(fā)明方法中有用的核酸序列的引入和/或優(yōu)先在植物種子胚乳中的表達(dá)。因此，本發(fā)明提供了構(gòu)建體，其包含(i)編碼上文所定義MYB-TF多肽的核酸序列；(ii)能夠驅(qū)動(a)的核酸序列在植物、植物部分或者植物細(xì)胞中表達(dá)的一個或者多個調(diào)控序列；任選地(iii)轉(zhuǎn)錄終止序列。優(yōu)選地，調(diào)控序列之一是至少下述之一(i)組成型啟動子，優(yōu)選GOS2啟動子；或者(ii)胚乳特異性啟動子，優(yōu)選谷醇溶蛋白啟動子?？墒褂帽绢I(lǐng)域技術(shù)人員熟知的重組DNA技術(shù)構(gòu)建用于本發(fā)明的方法的構(gòu)建體。可將基因構(gòu)建體插入適合用于轉(zhuǎn)化入植物和適合用于在轉(zhuǎn)化細(xì)胞中表達(dá)目的基因的載體，該載體可商購獲得。使用包含目的序列(即編碼MYB-TF多肽的核酸序列)的載體轉(zhuǎn)化植物。本領(lǐng)域凈支術(shù)人員非常清楚那些為了成功轉(zhuǎn)化、選擇和繁殖含有目的序列的宿主細(xì)胞而必須存在于栽體中的遺傳元件。將目的序列有效地連接到一種或者多種調(diào)控序列(至少啟動子)上。術(shù)語"調(diào)控元件"、"調(diào)控序列，，和"啟動子，，在本文都可以互換使用，并且應(yīng)廣義地理解為指能實現(xiàn)與其連接的序列的表達(dá)的調(diào)控性核酸序列。上述術(shù)語包括來源于經(jīng)典真核基因組基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列(包括準(zhǔn)確的轉(zhuǎn)錄起始所必需的TATA盒，具有或不具有CCAAT盒序列)和響應(yīng)發(fā)育和/或外部刺激或以組織特異性的方式改變基因表達(dá)的額外調(diào)控元件(即，上游激活序列、增強(qiáng)子和沉;i^因)。該術(shù)語還包括經(jīng)典原核基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列，在該情況下其可包含-35盒序列和/或-10盒轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列。術(shù)語"調(diào)控元件"還包括賦予、激活或增強(qiáng)核酸分子在細(xì)胞、組織或器官中的表達(dá)的合成的融合分子或衍生物。此處使用的術(shù)語"有效連接"是指啟動子序列和目的基因之間的功能性連接，這樣啟動子序列就能夠起始目的基因的轉(zhuǎn)錄。本文所用術(shù)語"組成型啟動子"是指在至少一種細(xì)胞、組織或器官(例如，植物種子胚乳)中在大多數(shù)，但不必是所有的，生長和發(fā)育期中在大多數(shù)環(huán)境條件下具有轉(zhuǎn)錄活性的啟動子。下表2給出組成型啟動子的實例。組成型啟動子在本發(fā)明方法中特別有用。應(yīng)該清楚的是，本發(fā)明的應(yīng)用不局限于如SEQIDNO:l所示的編碼MYB-TF多肽的核酸序列，本發(fā)明的應(yīng)用也不局限于由組成型啟動子驅(qū)動的、編碼MYB-TF多肽的核^列的表達(dá)。表2:組成型啟動子的實例<table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table>器官特異性或者組織特異性啟動子是能夠優(yōu)先地在某些器官或者組織，例如葉、根、種子組織等等中啟始轉(zhuǎn)錄的啟動子。例如"根特異性啟動子"是主要在植物根中，并基本上排除在任何其它植物部分中有轉(zhuǎn)錄活性的啟動子，不過仍然允許在這些其它植物部分中存在滲漏表達(dá)。胚乳特異性啟動子是指能夠優(yōu)先地在植物種子的胚乳中驅(qū)動目的基因表達(dá)的任何啟動子。此處提及的"優(yōu)先地"在植物種子的胚乳中驅(qū)動表達(dá)，用于表示在胚乳組織中驅(qū)動與其有效連接的任何序列表達(dá)，而且除了由于滲漏啟動子表達(dá)導(dǎo)致的任何殘留表達(dá)外，基本上排除在植物的其他地方驅(qū)動表達(dá)。例如，谷醇溶蛋白啟動子在植物種子胚乳中顯示強(qiáng)表達(dá)，而在分生組織，更特別地莖分生組織和/或分生組織的discriminationcentre中具有滲漏表達(dá)。胚乳特異性啟動子可以是天然或者合成啟動子。優(yōu)選，胚乳特異性啟動子是從谷醇溶蛋白基因分離的啟動子，例如由SEQIDNO:29或SEQIDNO:41表示的稻谷醇溶蛋白RP6啟動子(Wen等人，(1993)PlantPhysiol101(3):1115-6)，或具有與該稻谷醇溶蛋白啟動子相似強(qiáng)度和/或相似表達(dá)沖莫式的啟動子。可以例如通過將啟動子與^L告基因偶聯(lián)，然后在植物的組織中檢測報告基因的功能來分析相似的強(qiáng)度和/或相似的表達(dá)模式。一個眾所周知的報告基因是(3-葡糖醛酸糖苷酶和用于在植物組織中顯現(xiàn)p-葡糖醛酸糖苷酶活性的比色GUS染色。應(yīng)該清楚的是，本發(fā)明的應(yīng)用不局限于編碼如SEQIDNO:2所示的MYB-TF多肽的核酸序列，本發(fā)明的應(yīng)用也不局限于由谷醇溶蛋白啟動子驅(qū)動的、編碼MYB-TF多肽的核酸的表達(dá)?？梢杂糜趯嵤┍景l(fā)明方法的其它胚乳特異性啟動子實例在下表3中顯示。表3:本發(fā)明使用的胚乳特異性啟動子的實例<table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table>其它組織特異性啟動子的實例是能夠優(yōu)先地在年幼的正在擴(kuò)展的組織中起始轉(zhuǎn)錄的啟動子，例如p-擴(kuò)展蛋白啟動子。優(yōu)選地，p-擴(kuò)展蛋白啟動子來自稻類，更優(yōu)選基本上相似于SEQIDNO:40所示的序列，最優(yōu)選是由SEQIDNO:40所示的序列。這樣的啟動子也可以用于實施本發(fā)明方法。任選地，一種或者多種終止序列(也是調(diào)控序列)可以用于引入植物的構(gòu)建體中。術(shù)語"終止子，，包括如下調(diào)控序列，所述調(diào)控序列是在轉(zhuǎn)錄單位的末端為初級轉(zhuǎn)錄物的3，加工和多腺苷酸化以及轉(zhuǎn)錄的終止提供信號的DNA序列。另外的調(diào)控元件可包括轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)子和翻譯增強(qiáng)子。本領(lǐng)域^a術(shù)人員知道可適合用于進(jìn)行本發(fā)明的終止子和增強(qiáng)子序列。此類序列是已知的或可容易地通過本領(lǐng)域技術(shù)人員獲得。本發(fā)明的遺傳構(gòu)建體還可包含為了在特定的細(xì)胞類型中維持和/或復(fù)制所必需的復(fù)制起點(diǎn)序列。一個實例是需要在細(xì)菌細(xì)胞中以附加型遺傳元件(例如質(zhì)?；蛘沉７肿?保持遺傳構(gòu)建體的時候。優(yōu)選的復(fù)制起點(diǎn)包括但不限于fl-ori和colEl。遺傳構(gòu)建體可以任選地包含選擇標(biāo)記基因。本文所用術(shù)語"選擇標(biāo)記基因"包括任何如下基因，所述基因?qū)Ρ磉_(dá)其的細(xì)胞賦予表型，從而幫助鑒定和/或選擇被本發(fā)明的核酸構(gòu)建體轉(zhuǎn)染或轉(zhuǎn)化的細(xì)胞。適宜的標(biāo)記可選自賦予抗生素或除草劑抗性，導(dǎo)入新的代謝性狀或允許目測選擇的標(biāo)記。選擇標(biāo)記基因的實例包括賦予對抗生素(例如磷酸化新霉素和卡那霉素的nptll,或磷酸化潮霉素的hpt，或賦予對例如博來霉素、鏈霉素、四環(huán)素、氯霉素、氨芐青霉素、慶大霉素、遺傳霉素(G418)、壯觀霉素或殺稻瘟素的抗性的基因)、除草劑(例如提供對Basta⑧的抗性的bar;提供抗草甘膦的抗性的aroA或gox，或者賦予抗例如。米唑啉酮，膦絲菌素或磺酰脲抗性的基因)的抗性的基因，或提供代謝性狀的基因(例如允許植物使用甘露糖作為唯一碳源的manA，或者用于木糖利用的木糖異構(gòu)酶，或者例如抗2-脫氧葡萄糖的抗?fàn)I養(yǎng)標(biāo)記)?？梢晿?biāo)記基因?qū)е骂伾?例如P-葡糖醛酸糖苷酶，GUS)、發(fā)光(例如螢光素酶)或熒光(綠色焚光蛋白，GFP和其衍生物)的形成?？梢晿?biāo)記基因的表達(dá)導(dǎo)致顏色形成(例如P-葡糖醛酸糖苦酶、GUS或者P-半乳糖苷酶及其生色底物，例如X-Gal)、發(fā)光(例如螢光素/螢光素酶系統(tǒng))或者熒光(綠色熒光蛋白、GFP及其衍生物)。這個列表僅僅代表少量可能標(biāo)記。本領(lǐng)域技術(shù)人員熟悉這些標(biāo)記。優(yōu)選根據(jù)不同生物體和選擇方法來^f吏用不同的標(biāo)記。本發(fā)明還涵蓋通過本發(fā)明方法可獲得的植物。因此本發(fā)明提供通過本發(fā)明方法可獲得的植物、其植物部分或者植物細(xì)胞，該植物或者其部分或者細(xì)胞含有處于如上定義組成型啟動子調(diào)控下的編碼MYB-TF多肽的分離核酸。特定實施方案中，本發(fā)明提供通過本發(fā)明方法可獲得的植物、其植物部分或者植物細(xì)胞，該植物或者其部分或者細(xì)胞包含處于胚乳特異性啟動子調(diào)控下的編碼MYB-TF多肽的分離核酸。本發(fā)明還提供用于產(chǎn)生相比較于對照植物產(chǎn)量增加的轉(zhuǎn)基因植物的方法，包括將編碼MYB-TF多肽的核酸序列引入植物并且在植物中表達(dá)該核酸。特定實施方案中，本發(fā)明提供用于產(chǎn)生相比較于對照植物產(chǎn)量增加的轉(zhuǎn)基因植物的方法，包括引入編碼MYB-TF多肽的核#列并且優(yōu)先在植物種子胚乳中表達(dá)該核酸。更特別地，本發(fā)明提供用于產(chǎn)生相比較于對照植物產(chǎn)量增加的轉(zhuǎn)基因才直物的方法，該方法包括(i)在植物、植物部分或者植物細(xì)胞中引入并表達(dá)編碼MYB-TF多肽的核酸序列；(H)在促進(jìn)植物生長和發(fā)育的條件下培育該植物細(xì)胞，并且其中編碼MYB-TF多肽的核酸序列由組成型啟動子或者由胚乳特異性啟動子驅(qū)動表達(dá)?？梢灾苯訉⒑薧列引入植物細(xì)胞或者植物自身(包含引入植物的組織、器官或者任何其它部分)。根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的特征，優(yōu)選通過轉(zhuǎn)化將核*列引入植物。此處提及的術(shù)語"轉(zhuǎn)化"包括將外源多核苷酸轉(zhuǎn)移入宿主細(xì)胞，而無論用于轉(zhuǎn)移的方法如何。可用本發(fā)明的遺傳構(gòu)建體轉(zhuǎn)化能夠隨后進(jìn)行克隆繁殖(通過器官發(fā)生或胚發(fā)生)的植物組織，然后從其再生完整的植物。選擇的具體組織可發(fā)生變化，這取決于可獲得的和最適合于將被轉(zhuǎn)化的特定物種的克隆繁殖系統(tǒng)。示例性組織靶標(biāo)包括葉盤、花粉、胚、子葉、下胚軸、雌配子、愈傷組織、現(xiàn)有的分生組織(例如，頂端分生組織、腋芽和根分生組織)以及誘導(dǎo)的分生組織(例如，子葉分生組織和下胚軸分生組織)?？蓪⒍嗪塑账崴矔r或穩(wěn)定地導(dǎo)入宿主細(xì)胞，其可保持非整合狀態(tài)例如作為質(zhì)粒?？蛇x擇地，可將其整合入宿主基因組。然后以本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法將所得的轉(zhuǎn)化的植物細(xì)胞用于再生轉(zhuǎn)化的植物。植物物種的轉(zhuǎn)化現(xiàn)在是相當(dāng)常規(guī)的技術(shù)。有利地，可使用幾種轉(zhuǎn)化方法中的任一方法將目的基因?qū)脒m宜的祖先細(xì)胞。轉(zhuǎn)化方法包括脂質(zhì)體的使用、電穿孔、增加游離DNA攝取的化學(xué)物質(zhì)、DNA至植物的直接注射、基因槍轟擊(particlegunbombardment)、使用病毒或花粉的轉(zhuǎn)化以及顯微注射。方法可選自用于原生質(zhì)體的釣/聚乙二醇方法(Krens,F.A.等人,(1982)Nature296，72-74;NegrutiuI等人(1987)PlantMolBiol8:363-373)、原生質(zhì)體的電穿孔(ShillitoR.D.等人(1985)Bio/Technol3，1099-1102)、植物材料的顯微注射(CrosswayA等人，(1986)Mol.GenGenet202:179-185);DNA或RNA包被的微粒轟擊(KleinTM等人，(1987)Nature327:70);使用(非整合型)病毒的感染等。優(yōu)選通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化，使用任何熟知的用于稻轉(zhuǎn)化的方法，例如在下列文獻(xiàn)資料之一中描述的方法，產(chǎn)生具有增加的MYB-TF多肽編碼基因/核,列表達(dá)的轉(zhuǎn)基因稻植物乂^開的歐洲專利申請EP1198985Al，Aldemita和Hodges(Planta199:612-617，1996);Chan等人(PlantMolBiol22(3):491-506，1993)，Hiei等人(PlantJ6(2):271-282，1994)(其公開內(nèi)容完整地引入本文作為參考)。在玉米轉(zhuǎn)化的情況下，優(yōu)選方法是如Ishida等人(Nat.Biotechnol14(6):745-50，1996)或Frame等人(PlantPhysiol129(1):13-22，2002)(其公開內(nèi)容完整地引入此處作為參考)中描述的方法。一般在轉(zhuǎn)化之后，篩選存在一種或者多種標(biāo)記的植物細(xì)胞或者細(xì)胞群，該標(biāo)記由與目的基因共轉(zhuǎn)移的可以在植物中表達(dá)的基因編碼，之后將該轉(zhuǎn)化的材料再生為整a物。DNA轉(zhuǎn)移和再生之后，可以評估推定轉(zhuǎn)化的植物中目的基因的存在、拷貝數(shù)和/或基因組組成的情況，例如使用Southern分析。作為備選或者另外地，可以使用Northern和/或Western分析，或者定量PCR，監(jiān)測新引入DNA的表達(dá)水平，所有技術(shù)對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員而言是熟知的。產(chǎn)生的轉(zhuǎn)化植物可以通過多種方式進(jìn)行繁殖，例如通過克隆繁殖或者經(jīng)典育種技術(shù)。例如，第一代轉(zhuǎn)化植物(或T1)可以自交以產(chǎn)生純合第二代(或T2)轉(zhuǎn)化體，以及T2植物進(jìn)一步通過經(jīng)典育種技術(shù)繁殖。所產(chǎn)生的轉(zhuǎn)化生物可采取多種形式。例如，它們可以是轉(zhuǎn)化細(xì)胞和未轉(zhuǎn)化細(xì)胞的嵌合體；克隆性轉(zhuǎn)化體(例如，所有細(xì)胞經(jīng)被轉(zhuǎn)化而包含表達(dá)盒)；轉(zhuǎn)化的和未轉(zhuǎn)化的組織的嫁接物(例如，在植物中，嫁接至未轉(zhuǎn)化的接穗上的轉(zhuǎn)化的砧木)。植物，并可以擴(kuò)展到其所有的植物部分和繁殖體。更特別地，本發(fā)明提供通過本發(fā)明方法可獲得的植物、植物部分或者植物細(xì)胞，其中所述植物或者其部分或者細(xì)胞包含編碼MYB-TF多肽的分離核酸，該核酸有效地連接組成型啟動子或者胚乳特異性啟動子。本發(fā)明進(jìn)一步延及至包括通過上述方法中的任何方法產(chǎn)生的原代轉(zhuǎn)化的或轉(zhuǎn)染的細(xì)胞、組織、器官或整個植物的后代，唯一的要求是該后代展和/或表型特征。本發(fā)明還包括包含編碼MYB-TF的分離的核酸的宿主細(xì)胞。本發(fā)明的優(yōu)選宿主細(xì)胞是植物細(xì)胞。本發(fā)明還延伸至植物的可收獲部分例如，但不限于種子、葉、果實、花、莖、根莖、塊莖和球莖。本發(fā)明還涉及來源于，優(yōu)選地直接來源于，這樣的植物的可收獲部分的產(chǎn)品，例如干顆粒伺料(pellet)或干粉、油、脂肪和脂肪酸、淀粉或蛋白質(zhì)。本發(fā)明還包含編碼MYB-TF多肽的核酸序列以及MYB-TF多肽在本發(fā)明方法中增加上文定義的植物產(chǎn)量的用途。編碼MYB-TF多肽的核酸序列，或MYB-TF多肽可用于育種程序，在所述育種程序中鑒定可與MYB-TF基因遺傳連鎖(geneticallylink)的DNA標(biāo)記。該基因/核酸序列，或MYB-TF多肽可用于定義分子標(biāo)記。然后可將該DNA或蛋白質(zhì)標(biāo)記用于育種程序以選擇在本發(fā)明方法中具有上文定義的增加的產(chǎn)量的植物。MYB-TF基因/核酸序列的等位基因變體也可用于標(biāo)記輔助的育種程序。此類育種程序有時需要使用例如EMS誘變，通過對植物進(jìn)行誘變處理來導(dǎo)入等位基因變異；可選擇地，該程序可始于非有意產(chǎn)生的所謂"天然"來源的等位基因變體的集合。然后通過例如PCR進(jìn)行等位基因變體的鑒定。之后進(jìn)行目的序列的優(yōu)良等位基因變體的選擇，所述優(yōu)良等位基因變體導(dǎo)致增加的產(chǎn)量。通常通過監(jiān)測包含目的序列的不同等位基因變體的植物的生長性能來進(jìn)行選擇?？稍跍厥一蛱镩g監(jiān)測生長性能。其他任選步驟包括將其中鑒定到了優(yōu)良的等位基因變體的植物與其它植物雜交。這可用于例如產(chǎn)生有意義的表型特征的組合。編碼MYB-TF多肽的核酸序列還可用作對基因(所述MYB-TF核酸是所述基因的部分)進(jìn)行遺傳和物理作圖的探針，和作為與這些基因連鎖的性狀的標(biāo)記。這些信息可用于植物育種以產(chǎn)生具有期望的表型的品系。MYB-TF核酸序列的該用途只需要長度為至少15個核苷酸的核酸序列。MYB-TF核酸序列可用作限制性片段長度多態(tài)性(RFLP)標(biāo)記。可用MYB-TF核酸序列探測限制性酶消化的植物基因組DNA的Southern印跡(SambrookJ,FritschEF和ManiatisT(1989)MolecularCloning,ALaboratoryManual)。然后使用計算機(jī)程序例如MapMaker(Lander等人(1987)Genomics1:174-181)將所得的帶型進(jìn)行遺傳分析以構(gòu)建遺傳圖i普。此外，可使用該核酸序列探測包含限制性核酸內(nèi)切酶處理的一組個體的基因組DNA的Southern印跡，其中該組個體代表確定的遺傳雜交的親本和后代。記錄DNA多態(tài)性的分離，將其用于計算MYB-TF核酸序列在之前使用該群體獲得的遺傳圖譜中的位置(Botstein等人(1980)Am.J.Hum.Genet.32:314-331)。在Bernatzky和Tanksley(1986)PlantMol.Biol.Reporter4:37-41中描述了用于遺傳作圖的植物基因來源的探針的制備和應(yīng)用。許多出版物描述了使用上述方法學(xué)或其變型對特定cDNA克隆進(jìn)行的遺傳作圖。例如，F(xiàn)2雜交群體、回交群體、隨機(jī)交配群體、近等基因系(nearisogenicline)和其他個體組可用于作圖。此類方法對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是熟知的。核酸探針還可用于物理作圖(即，序列在物理圖鐠上的放置；參見Hoheisel等人In:Non-mammalianGenomicAnalysis:APracticalGuide,Academicpress1996，pp.319-346，和其中引用的參考文獻(xiàn))。在另一個實施方案中，核酸探針可用于直接熒光原位雜交(FISH)作圖(Trask(1991)TrendsGenet.7:149-154)。盡管FISH作圖的現(xiàn)有方法有利于大克隆(數(shù)kb至數(shù)百kb;參見Laan等人(1995)GenomeRes.5:13-20)的使用，但靈敏度的提高可允許使用較短的探針進(jìn)行FISH作圖?？墒褂煤怂嵝蛄羞M(jìn)行多種用于遺傳和物理作圖的基于核酸擴(kuò)增的方法。實例包括等位基因特異性擴(kuò)增(Kazazian(l989)J.Lab.Clin.Med11:95-96)、PCR擴(kuò)增的片段的多態(tài)性(CAPS;Sheffield等人(1993)Genomics16:325-332)、等位基因特異性連接(Landegren等人(1988)Science241:1077-1080)、核苷酸延伸反應(yīng)(Sokolov(1990)NucleicAcidRes.18:3671)、放射性雜交作圖(Walter等人(1997)Nat.Genet.7:22畫28)和Happy作圖(Dear和Cook(1989)NucleicAcidRes.17:6795-6807)。對于這物對。這樣的引物的設(shè)計對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是熟知的。在使用基于PCR的遺傳作圖的方法中，可能必需鑒定作圖雜交(mappingcross)的兩親本在相應(yīng)于;Mt酸序列的區(qū)域中的DNA序列差異。然而，這對于作圖方法通常不是必需的。根據(jù)本發(fā)明的方法產(chǎn)生具有如上定義的產(chǎn)量增加的植物。此增加的產(chǎn)量還可以與其它經(jīng)濟(jì)學(xué)有利性狀相結(jié)合，所述其它有利性狀為例如其它增加產(chǎn)量的性狀、對其它非生物和生物脅迫的抗性、改良各種結(jié)構(gòu)特征(architecturalfeature)和/或生物化學(xué)和/或生理學(xué)特征的性狀。附圖描述本發(fā)明現(xiàn)將參考下述附圖進(jìn)行描述，其中圖1顯示MYB-TF多肽的示意結(jié)構(gòu)，從N端至C端包含含有兩個MYB重復(fù)序列(兩個小圏)的R2R3MYBDNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域(大圏)，和MYB4結(jié)構(gòu)域(加框的)。這些結(jié)構(gòu)域之外的多肽區(qū)域是可變的區(qū)域。圖2為由美國基因研究所(TIGR)(TC924083)暫時性匯編的與MYB-TF多肽相關(guān)的序列的列表?？梢岳谜婧松锘蛑毕蛲次?EGO)數(shù)據(jù)庫，通過關(guān)鍵詞搜索或者通過使用目的核酸或者多肽序列以及BLAST算法，筌定這些相關(guān)序列。這個列表是非窮盡的，可以使用數(shù)據(jù)庫序列搜索工具在美國國家生物技術(shù)信息中心(NCBI)的Entrez核苷酸數(shù)據(jù)庫中鑒定更相關(guān)的序列。圖3是植物R2R3MYB-TF多肽的系統(tǒng)樹，由Kranz等人(1998)PlantJournal16(2):263-276產(chǎn)生。包含目的進(jìn)化枝的區(qū)域已從原樹上被力文大。顯示了SEQIDNO:2(來自稻)和SEQIDNO:4(來自擬南芥)，并且使用粗箭頭標(biāo)出其在系統(tǒng)樹上的位置。圓圏標(biāo)出目的進(jìn)化枝的起點(diǎn)。圖4是MYB-TF多肽序列的比對。使用VectorNTIsuite(InforMax，Bethesda,MD)的AlignX程序進(jìn)行序列比對。采用空位開放罰分為10，以及空位延伸為0.01而進(jìn)行多重比對。在有必要更好地放置一些保守區(qū)時，還實施了小量的人工編輯。所示的線將可用于實施本發(fā)明方法的MYB-TF多肽序列與其它MYB-TF多肽序列分離。跨所有顯示的序列以大框標(biāo)出兩個MYB重復(fù)序列(R2和R3)。在這兩個重復(fù)序列中的3個螺旋以小框標(biāo)出。箭頭標(biāo)出保守Trp(W)殘基。比對的多肽序列C末端的MYB4結(jié)構(gòu)域^皮黑色框線框出，但是該框僅僅涵蓋可以用于實施本發(fā)明方法的MYB-TF多肽序列。圖5顯示在稻中表達(dá)編碼MYB-TF多肽的稻核酸序列的載體，該核酸處于GOS2啟動子(pGOS2)或者谷醇溶蛋白啟動子(pProl)或者P-擴(kuò)展蛋白啟動子(pExp)的調(diào)控下。圖6詳述了可以用于實施本發(fā)明方法的序列的實例。實施例現(xiàn)參考只用于舉例說明目的下列實施例來描述本發(fā)明。下列實施例不旨在完全確定或以其它方式限定本發(fā)明的范圍。^滋辦7;蔞定與本發(fā)勞才法炎^時裙^/y;^^^^/y使用數(shù)據(jù)庫序列搜索工具例如基本局部比對工具(BasicLocalAlignmentTool)(BLAST)(Altschul等人(1990)J.Mol.Biol.215:403-410;和Altschul等人(1997)NucleicAcidsRes.25:3389-3402)，在美國國家生物技術(shù)信息中心(NCBI)Entrez核苷酸數(shù)據(jù)庫維護(hù)的序列中，鑒定與本發(fā)明方法中所用核酸序列相關(guān)的序列(全長cDNA、EST或基因組序列)。該程序通過將核酸或多肽序列與序列數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比較，以及通過計算匹配的統(tǒng)計學(xué)顯著性，用于尋找序列之間具有局部相似性的區(qū)域。例如，本發(fā)明核酸序列編碼的多肽被用于TBLASTN算法，使用缺省設(shè)置，開啟過濾器，以忽略低復(fù)雜度序列。分析的輸出視窗為兩兩比較，并根據(jù)概率分值(E值)排序，其中分值反映特定比對偶然發(fā)生的概率(E值越低，命中事件的顯著性越高)。除了E值之外，還對比較進(jìn)行同一性百分比記分。同一性百分比數(shù)。在有些'i^況4:可以調(diào)整缺省參數(shù)以更改搜索的-":度。侈二:可:提高E值以顯示較低嚴(yán)格度的匹配。這樣，可以鑒定短的幾乎確切的匹配。表A:與本發(fā)明方法中使用的核酸序列相關(guān)的核酸序列<table>tableseeoriginaldocumentpage40</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage41</column></row><table>一些情況中，相關(guān)序列已由研究機(jī)構(gòu)，例如美國基因組研究所(TIGR)暫時匯編并予以/>布?？梢允褂谜婧松锘蛑毕蛲次?EGO)數(shù)據(jù)庫，通過關(guān)鍵詞搜索或者通過采用目的核酸或者多肽序列的BLAST算法，鑒定此類相關(guān)序列。這種搜索的輸出結(jié)果可以參見圖2.實施例2:相關(guān)多肽序列的比對來自VectorNTI(Invitrogen)的AlignX基于普遍使用的漸進(jìn)比對的聚類算法(Clustalalgorithm)(Thompson等人(1997)NucleicAcidsRes25:4876-4882;Chenna等人(2003).NucleicAcidsRes31:3497-3500)?？墒褂绵徑泳垲愃惴?gòu)建系統(tǒng)樹?？瘴婚_放罰分的缺省值為10，空位延伸罰分的缺省值為0.1，選擇的權(quán)重矩陣是Blosum62(如果比對多肽)。圖4顯示了在鑒定用于實施本發(fā)明方法的多肽中使用相關(guān)多肽進(jìn)行多重序列比對的結(jié)果。使用VectorNTIsuite(InforMax，Bethesda，MD)的AlignX程序進(jìn)行序列比對。采用空位開放罰分為10和空位延伸為0.01進(jìn)行多重序列比對。當(dāng)有必要更好放置一些保守區(qū)域時，還進(jìn)行了少量的人工編輯。顯示的線將可以用于實施本發(fā)明方法的MYB-TF多肽序列與其它MYB-TF多肽序列分開。跨所有序列，以黑框框出兩個MYB重復(fù)序歹'J(R2和R3)。這兩個重復(fù)序列中的3個螺旋采用淡框框出。保守Trp(W)殘基使用箭頭標(biāo)出。僅僅針對可以用于實施本發(fā)明方法的MYB-TF多肽序列，用黑框框出比對的多肽序列C末端的MYB4結(jié)構(gòu)域。實施例3:計算可用于實施本發(fā)明方法的多肽序列之間的全局百分比同一性(globalpercentageidentity)使用可在本領(lǐng)域內(nèi)獲得的一個方法MatGAT(矩陣全局比對工具(MatrixGlobalAlignmentTool))軟件(BMCBioinformatics.20034:29.MatGAT:anapplicationthatgeneratessimilarity/identitymatricesusingproteinorDNAsequences.CampanellaJJ，BitinckaL，SmalleyJ;由LedionBitincka托管的軟件)，確定可以用于實施本發(fā)明方法的全長多肽序列之間的全局相似性和同一性百分比。MatGAT軟件無需對數(shù)據(jù)進(jìn)行預(yù)比對，即可產(chǎn)生DNA或蛋白質(zhì)序列的相似性/同一性矩陣。該程序利用Myers和Miller全局比對算法(空位開放罰分為12，而空位延伸罰分為2)進(jìn)行一系列的兩兩比對，利用例如Blosum62(對于多肽而言)計算相似性和同一性，然后將結(jié)果排列成距離矩陣。序列相似性示于對角線下半部，而序列同一性示于對角線上半部。比較所用的參數(shù)有記分矩陣Blosum62首個空位12延伸空位2多肽序列全長范圍(將部分多肽序列排除在外)的全局相似性和同一性的軟件分析結(jié)果示于表B。對角線上方給出同一性百分比，而對角線下方給出相似性百分比。與SEQIDNO:2相比，可用于實施本發(fā)明方法的多肽序列之間的百分比同一性介于40%和56%之間。表B:可用于實施本發(fā)明方法的MYB-TF多肽序列在全長上的全局相似性和同一性的MatGAT結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage43</column></row><table>由SEQIDNO:28(DDDFSSFLDSLIND)所示的保守MYB4結(jié)構(gòu)域包含在SEQIDNO:2(氨基酸坐標(biāo)231-244;參見圖4)中。當(dāng)計算用于實施本發(fā)明方法的多肽序列的l呆守MYB4結(jié)構(gòu)域與SEQIDNO:28所示的保守MYB4結(jié)構(gòu)域之間(而非全長多肽之間)的同一性百分比時，至少達(dá)到60%的"tj^酸同一性。例如，當(dāng)與SEQIDNO:28所示保守MYB4結(jié)構(gòu)域比對時，如果與保守MYB4結(jié)構(gòu)域有5個氨基酸殘基差異，那么計算出氨基酸同一性是64%。實施例4:可用于實施本發(fā)明方法的多肽序列中包含的結(jié)構(gòu)域的鑒定蛋白質(zhì)家族、結(jié)構(gòu)域和位點(diǎn)整合資源(IntegratedResourceofProteinFamilies,DomainsandSites(InterPro))數(shù)據(jù)庫是進(jìn)4亍基于文本以;Sjf列的搜索常用的標(biāo)簽數(shù)據(jù)庫的整合界面。InterPro數(shù)據(jù)庫將這些數(shù)據(jù)庫結(jié)合起息，以獲得蛋白質(zhì)標(biāo)簽。合作數(shù)據(jù)庫包括SWISS-PROT、PROSITE、TrEMBL、PRINTS、ProDom和Pfam、Smart和TIGRFAMs。每個數(shù)據(jù)庫有其自己的搜索算法和entry檢索號。Interpro由位于英國的歐洲生物信息學(xué)研究所(EuropeanBioinformaticsInstitute)托管。SEQIDNO:2所示多肽序列的InterPro掃描結(jié)果示于表C和圖1，4。表C:SEQIDNO:2所示多肽序列的InterPro掃描結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage44</column></row><table>轉(zhuǎn)錄因子,施辦5:^發(fā)力于本發(fā)'銀才法尹的核鯁淨(jìng)/{/DNA操作除非另有說明，否則重組DNA技術(shù)根據(jù)Sambrook(2001)MolecularCloning:alaboratorymanual,第三版，ColdSpringHarborLaboratoryPress,CSH，NewYork或者A謂bel等人(1994)，CurrentProtocolsinMolecularBiology,CurrentProtocols,巻1和2中公開的標(biāo)準(zhǔn)方法實施。植物分子工作4吏用的標(biāo)準(zhǔn)材料和方法^Hf在PlantMolecularBiologyLabfase(1993)，R.D.D.Croy,BIOSScientificPublicationsLtd出版(UK)和BlackwellScientificPublications(UK)。本發(fā)明方法中使用的核酸序列通過使用定制的稻幼苗cDNA文庫(pCMVSport6.0中；Invitrogen，Paisley,UK)作為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增得到。在標(biāo)準(zhǔn)條件下，使用HifiT叫DNA聚合酶實施PCR，其中在50jalPCR混合物中使用200ng模板。使用的引物是prm05233(SEQIDNO:30;有義，起始密碼子用粗體表示，AttBl位點(diǎn)以斜體表示5，-GG3')和prm05234(SEQIDNO:31;反向，互補(bǔ)，AttB2位點(diǎn)以斜體表示CTGT3，)，其包含用于Gateway重組的AttB位點(diǎn)。也使用標(biāo)準(zhǔn)方法純化擴(kuò)增的PCR片段。然后實施Gateway方法的第一步，BP反應(yīng)，其間PCR片段體內(nèi)與pDONR201質(zhì)粒重組，根據(jù)Gateway術(shù)語法，產(chǎn)生"入門克隆(entryclone)",pMYB-TF。作為Gateway⑧技術(shù)的一部分，質(zhì)粒pDONR201購自Invitrogen。,施辦6;表這我伴神建隨后在LR反應(yīng)中使用入門克隆和用于稻轉(zhuǎn)化的目的載體。該載體含有位于T-DNA邊界內(nèi)的功能性元件植物選擇標(biāo)記；可篩選標(biāo)記表達(dá)盒；以及Gateway盒，其旨在用于與已經(jīng)克隆到入門克隆中的目的核酸序列進(jìn)行LR體內(nèi)重組。在一個實施例中，用于組成型表達(dá)的稻GOS2啟動子(pGOS2;SEQIDNO:39)定位于jt匕Gateway盒的上游。在第二實施例中，用于胚乳特異性表達(dá)的稻谷醇溶蛋白啟動子(pProl;SEQIDNO:29或SEQIDNO:41)定位于此Gateway盒的上游。在第三實施例中，用于在年幼的擴(kuò)展組織中表達(dá)的稻P-擴(kuò)展蛋白啟動子(pExp;SEQIDNO:40)定位于此Gateway盒上游。LR重組步驟之后，獲得的表達(dá)載體pGOS2::MYB-TF，pProl::MYB-TF和pExp::MYB-TF(圖5)根據(jù)本領(lǐng)域熟知的方法獨(dú)立地轉(zhuǎn)化入農(nóng)桿菌菌林LBA4044中。,淋/7.'控絲化稻的轉(zhuǎn)化使用包含表達(dá)載體的兩個農(nóng)桿菌菌林分別獨(dú)立地轉(zhuǎn)化稻植物。使稻栽培種日本晴(ricejaponicaculdvarNipponbare)的成熟干種子脫殼。通過在70%的乙醇中孵育1分鐘，然后在0.2%HgCl2中孵育30分鐘，之后用無菌蒸餾水洗滌6次，每次15分鐘來進(jìn)行消毒。然后在包含2，4-D的培養(yǎng)基(愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基)中萌發(fā)無菌種子。在黑暗中溫育4周后，切取小盾板來源的胚發(fā)生愈傷組織，然后在相同的培養(yǎng)基上進(jìn)行繁殖。2周后，通過在相同的培養(yǎng)基上傳代培養(yǎng)再另外2周來繁殖或增殖愈傷組織。在共培養(yǎng)前3天在新鮮培養(yǎng)基上傳代培養(yǎng)胚發(fā)生愈傷組織塊(以增強(qiáng)細(xì)胞分裂活性)。包含表達(dá)載體的農(nóng)桿菌林系LBA4404用于共培養(yǎng)。將農(nóng)桿菌接種在具有適宜的抗生素的AB培養(yǎng)基上，在28。C下培養(yǎng)3天。然后收集細(xì)菌，將其懸浮在液體共培養(yǎng)培養(yǎng)基中直至大約為1的密度(OD6。0)。然后將懸浮液轉(zhuǎn)移至培^jDL(Petridish)，將愈傷組織浸漬在懸浮液中15分鐘。然后將愈傷組織在濾紙上吸干，之后轉(zhuǎn)移至固化的共培養(yǎng)培養(yǎng)基，在25。C黑暗中溫育3天。然后在選擇劑存在的情況下在28。C黑暗中，在包含2，4-D的培養(yǎng)基上生長共培養(yǎng)的愈傷組織4周。在此期間，產(chǎn)生了快速生長的抗性愈傷組織島。在將該物質(zhì)轉(zhuǎn)移至再生培養(yǎng)基和在光照下孵育后，胚發(fā)生潛力被釋放，在接下來的4至5周中發(fā)育出芽。將芽從愈傷組織切下，然后在包含生長素的培養(yǎng)基上孵育2至3周，然后將它們從所述培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至土壤中。在溫室中在高濕度和短日照下生長出變硬的芽。對于每一個構(gòu)建體產(chǎn)生大約35個獨(dú)立的TO稻轉(zhuǎn)化體。將原代轉(zhuǎn)化體從組織培養(yǎng)室轉(zhuǎn)移至溫室。在進(jìn)行確認(rèn)T-DNA插入物的拷貝數(shù)的定量PCR分析后，只保留展示對選擇劑具抗性的單拷貝轉(zhuǎn)基因植物用于Tl種子的收獲。然后在移植后3至5個月收獲種子。該方法以50。/。多的比率產(chǎn)生單基因座轉(zhuǎn)化體(Aldemita和Hodgesl996，Chan等人1993，Hiei等人1994)?！蹲蘜S:^型^估才法6.1評估，沒置產(chǎn)生大約35個獨(dú)立T0稻轉(zhuǎn)化體。將原代轉(zhuǎn)化體從組織培育室轉(zhuǎn)移到溫室，以生長和收獲T1種子。保留5至7個獨(dú)立事件，在所述事件中T1后代就轉(zhuǎn)基因的存在/不存在而言發(fā)生3:l分離。對于這些事件的每個，通過監(jiān)測可視標(biāo)記表達(dá)而選擇大約10個含有轉(zhuǎn)基因(雜合子和純合子)的Tl幼苗，和大約10個缺少轉(zhuǎn)基因(失效合子)的Tl幼苗。轉(zhuǎn)基因植物和對應(yīng)的失效合子以隨機(jī)位置并行生長。溫室條件為短日照(日照12小時)，日間為28°C以及夜間為22。C，相對濕度為70%。對T2代實施評估時，方法與用于T1代的方法相同，只是每個事件有更多個體。從播種階段直到成熟階段，使植物多次通過數(shù)字影像室。在每個時間點(diǎn)上，對每^Nt物從至少6個不同角度采集數(shù)字影像(2048x1536像素，l千6百萬色素)。使用合適軟件從影像推導(dǎo)出地上生物量。為了檢測根相關(guān)參數(shù)，使植物生長在特別設(shè)計的具有透明底的盆中，以便允許觀察根。植物生長過程中用數(shù)字相機(jī)通過盆底記錄影像。使用合適軟件從影像推導(dǎo)出根的特征，例如總投影面積(其可以與總根體積相關(guān))、某粗度閾值之上的根的平均直徑和長度(粗根長度或細(xì)根長度)。這些參數(shù)的變化反映根生物量的變化，例如增加的根面積、增加的根長度或者增加的粗根數(shù)都可以指示根生物量的增加。6,2統(tǒng)計學(xué)分析F檢驗使用雙因素ANOVA(方差分析)作為統(tǒng)計學(xué)模型，整體評估植物表型特征。對本發(fā)明基因轉(zhuǎn)化的所有事件的所有植物的所有測定參數(shù)實施F檢驗。實施F檢驗以檢查基因?qū)τ谒修D(zhuǎn)化事件的效應(yīng)，以及證實基因的總體效應(yīng)，也稱為"總體基因效應(yīng)"。對于此F檢驗，真實的總體基因效應(yīng)的顯著性閾值設(shè)定在5%的概率水平上。顯著性F檢驗值表明"基因"效應(yīng)，意味著引M型差異的不僅僅只是該基因的存在或者定位。6.3參數(shù)測量生物量相關(guān)參數(shù)測量從播種階段到成熟階段，植物多次通過數(shù)字影像室。在每個時間點(diǎn)上，對每抹植物從至少6個不同角度采集數(shù)字影像(2048x1536像素，1千6百萬色素)。從區(qū)別于背景的地上植物部分的數(shù)字影像中通過計數(shù)總像素數(shù)而確定植物地上面積(或者葉生物量)。針對在相同時間點(diǎn)從不同角度采集的圖像，對該值進(jìn)行平均，并且通過校準(zhǔn)將其轉(zhuǎn)化為以平方毫米表示的物理表面積數(shù)值。實發(fā)汪明這種方法測量的地上植物面積與地上植物部分的生物量相關(guān)聯(lián)。地上面積是在植物已經(jīng)達(dá)到其最大葉生物量時測量的面積。早期活力(earlyvigour)是萌發(fā)后三周植物(幼苗)的地上面積。另外，從開花之前地上生物量的影像推導(dǎo)其它參數(shù)綠度指數(shù)，其是開花之前最后影像中綠色和暗綠色像素的比例(以％表述)。根生物量增加表現(xiàn)為總根生物量增加(測量為植物生命期間觀察到的根最大生物量)；或者表現(xiàn)為根/枝條指數(shù)的增加(測量為根和枝條的活躍生長期中根生物量和枝條生物量之間的比例)；或者表現(xiàn)為粗根的增加；或者表現(xiàn)為細(xì)根的增加。種子相關(guān)參數(shù)測量收獲成熟的主圓錐花序、計數(shù)、袋裝、用條形碼標(biāo)記，然后在37。C在烘箱中干燥3天。然后對圓錐花序脫粒，收集所有種子并進(jìn)行計數(shù)。使用鼓風(fēng)機(jī)將飽滿谷殼與空谷殼分離。棄去空谷殼，然后對剩余級分再次計數(shù)。在分析天平上稱取飽滿谷殼的重量。通過計數(shù)在分離步驟后留下的飽滿谷殼的數(shù)目來確定飽滿種子的數(shù)目。通過稱#植物收獲的所有飽滿谷殼的重量來測量每林植物的總種子重量。通過計數(shù)從植物收獲的谷殼的數(shù)目來測量每休tt物的總種子數(shù)目。根據(jù)計數(shù)的飽滿種子的數(shù)目和其總重量推算千粒重(TKW)。本發(fā)明中的收獲指數(shù)(HI)定義為總種子重量和地上面積(mm"之間的比率乘以因子106。本發(fā)明中定義的每圓錐花序的花的總數(shù)是種子總數(shù)與成熟的主圓錐花序的數(shù)目之間的比率。本發(fā)明中定義的種子飽滿率是飽滿種子的數(shù)目占種子(或小花)的總數(shù)的比率(以％表示)。,滋辦9;脊差^/^控參4藝^估^潛果，^尹該農(nóng)浙逸舍義;f遂^源^^之7"編碼A/TB-rF^農(nóng)時^"i^/y3口表D,斤示，出苗時的幼苗活力(seedlingvigoratemergence或出苗勢(emergencevigor)),粗根數(shù)，(開花前)綠度指數(shù)，種子飽滿率，每林植物總種子重，飽滿種子數(shù)和收獲指數(shù)在組成型表達(dá)編碼MYB-TF多肽的核酸序列的轉(zhuǎn)基因植物Tl代中，相比較于對照植物都增加。表D顯示了兩個最好的獨(dú)立轉(zhuǎn)基因事件中，其Tl代相比較于對照植物，在幼苗的出苗勢，粗根數(shù)，(開花前)綠度指數(shù)，種子飽滿率，每林植物總種子重，飽滿種子數(shù)和收獲指數(shù)上的平均增加百分比。紐增加的百分比<table>tableseeoriginaldocumentpage49</column></row><table>泉施辦/仏'轉(zhuǎn)差西;^控參4型伴估^潛耒，^尹該植#逸舍義于嚴(yán)#乙'勝啟動于源^^之7"竊碼^/T5-rF/庶^凝^/y如表E所示，相比較于對照植物，優(yōu)先在胚乳中增加編碼MYB-TF*^1物總種子重量、飽滿種子數(shù)和收獲指數(shù)。表E顯示了相比較于對照植物，獨(dú)立轉(zhuǎn)基因事件在Tl代和T2代中于產(chǎn)量(每林植物總種子重量)、飽滿種子數(shù)和收獲指數(shù)上的平均增加百分比。<table>tableseeoriginaldocumentpage50</column></row><table>相比較于對照植物，優(yōu)先在(植物種子)胚乳中增加編碼MYB-TF多肽的核^列的表達(dá)的轉(zhuǎn)基因植物也具有增加的總種子數(shù)、飽滿率和出苗勢。,滋辦"^^差^;^控浙4型伊估的潛果，^尹該農(nóng)#逸舍義于^于在半訪的^^l逸織哞4這的啟^f源控之7"的、薦竭M(jìn)I^-7T,農(nóng)的核凝顛在p-擴(kuò)展蛋白啟動子(用于在年幼的擴(kuò)展組織中的表達(dá))控制下表達(dá)編碼MYB-TF多肽的核酸序列的轉(zhuǎn)基因植物，在Tl代相比較于對照植物，顯示出增加的收獲指數(shù)。(參見表F)。表F顯示了獨(dú)立轉(zhuǎn)基因事件的Tl代相比較于對照植物在收獲指數(shù)上的平均增加百分比。<table>tableseeoriginaldocumentpage50</column></row><table>實施例12:其它谷物轉(zhuǎn)化的實例玉米轉(zhuǎn)化使用由Ishida等人(1996)NatureBiotech14(6):745-50描述的方法的改進(jìn)方法進(jìn)行玉米(Zeamays)的轉(zhuǎn)化。在玉米中轉(zhuǎn)化是基因型依賴性的，有特定的基因型易于進(jìn)行轉(zhuǎn)化和再生。近交系A(chǔ)188(Universityof口y、但也可成功地使用其他基因型。在授粉后(DAP)大約11天，當(dāng)未成熟的胚的長度為大約1至1.2mm時，從玉米植物收獲穗子。將未成熟的胚與包含表達(dá)載體的才艮瘤農(nóng)桿菌(Agrobacteriumtumefaciens)共培養(yǎng)，通過器官發(fā)生重獲轉(zhuǎn)基因植物。將切離的胚培養(yǎng)在愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，然后培養(yǎng)在包含選擇劑(例如咪唑啉酮，但可使用不同的選擇標(biāo)記)的玉米再生培養(yǎng)基上。在光照的情況下在25。C孵育培養(yǎng)皿2至3周，或直至芽產(chǎn)生。將綠色的芽從各胚胎轉(zhuǎn)移至玉米生根培養(yǎng)基，在25。C孵育2-3周，直至根產(chǎn)生。然后將生根的芽移植至溫室土壤中。從展示對選擇劑的抗性且包含單拷貝T-DNA插入物的植物產(chǎn)生Tl種子。小麥轉(zhuǎn)化使用由Ishida等人(1996)NatureBiotech14(6):745-50描述的方法進(jìn)行小麥的轉(zhuǎn)化。通常將栽培品種Bobwhite(可從CIMMYT，Mexico獲得)用于轉(zhuǎn)化。將未成熟的胚與包含表達(dá)載體的根瘤農(nóng)桿菌共培養(yǎng)，通過器官發(fā)生恢復(fù)轉(zhuǎn)基因植物。在與農(nóng)桿菌孵育后，將胚在愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上進(jìn)行體外培養(yǎng)，然后在包含選擇劑(例如咪唑啉酮，但可使用不同的選擇標(biāo)記)的再生培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。在光照的情況下在25。C下孵育培^JHL2至3周，或直至芽產(chǎn)生。將綠色的芽從各胚轉(zhuǎn)移至生根培養(yǎng)基，在25。C下孵育2-3周，直至根產(chǎn)生。將生根的芽移植至溫室土壤中。從展示對選擇劑的抗性且包含單拷貝T-DNA插入物的植物產(chǎn)生Tl種子。大豆轉(zhuǎn)化按照TexasA&M專利US5,164,310中描述的方法的改進(jìn)方法轉(zhuǎn)化大豆。幾種商品化大豆品種易于通過該方法進(jìn)行轉(zhuǎn)化。通常將栽培品種Jack(可從IllinoisSeedfoundation獲得)用于轉(zhuǎn)化。對大豆種子消毒以便體外播種。從7日齡幼苗切取下胚軸、胚根和一片子葉。讓上胚軸和剩下的子葉進(jìn)一步生長產(chǎn)生腋節(jié)(axillarynode)。切取這些腋節(jié)，將其與包含表達(dá)載體的根瘤農(nóng)桿菌一起溫育。在共培養(yǎng)處理后，洗滌外植體，然后轉(zhuǎn)移至選擇培養(yǎng)基。切取再生的芽，將其置于芽伸長培養(yǎng)基上。將長度不超過lcm的芽置于生根培養(yǎng)基上直至根產(chǎn)生。將生根的芽轉(zhuǎn)移至溫室的土壤中。從展示對選擇劑的抗性且包含單拷貝T-DNA插入物的植物產(chǎn)生Tl種子。油菜/Canola的轉(zhuǎn)化5-6日齡的幼苗的子葉柄和下胚軸用作組織培養(yǎng)的外植體，按照Babic等人(1998,PlantCellRep17:183-188)對其進(jìn)行轉(zhuǎn)化。商業(yè)栽培品種Westar(AgricultureCanada)是用于轉(zhuǎn)化的標(biāo)準(zhǔn)品種，但也可使用其他品種。對Canola種子進(jìn)行表面消毒以進(jìn)行體外播種。從體外幼苗切取具有附著的子葉的子葉柄外植體，然后通過將子葉柄外植體的切口末端浸入細(xì)菌懸浮液中接種農(nóng)桿菌(包含表達(dá)載體)。然后將外植體在23。C、16小時光照下，在包含3mg/1BAP、3%蔗糖、0.7%Phytagar的MSBAP-3培養(yǎng)基上培養(yǎng)2天。在與農(nóng)桿菌共培養(yǎng)2天后，將子葉柄外植體轉(zhuǎn)移至包含3mg/1BAP、頭孢氨蓉將、羧千青霉素或替卡西林-克拉維酸(300mg/l)的MSBAP-3培養(yǎng)基上培養(yǎng)7天，然后在具有頭孢氨漆肟、羧節(jié)青霉素或替卡西林-克拉維酸和選擇劑的MSBAP-3培養(yǎng)基上培養(yǎng)直至芽再生。當(dāng)芽的長度為5-10mm時，將其切離，然后轉(zhuǎn)移至芽伸長培養(yǎng)基(MSBAP-0.5,包含0.5mg/IBAP)。將長度大約2cm的芽轉(zhuǎn)移至生根培養(yǎng)基(MSO)以進(jìn)行根誘導(dǎo)。將生根的芽移植至溫室的土壤中。從展示對選擇劑的抗性且包含單拷貝T-DNA插入物的植物產(chǎn)生Tl種子。紫苜蓿的轉(zhuǎn)化使用(McKersie等人，1999PlantPhysiol119:839—847)的方法轉(zhuǎn)化紫苜蓿(Medicagosativa)的再生克隆。紫苜蓿的再生和轉(zhuǎn)化是基因型依賴性的，因而需要再生的植物。已描述了用于獲得再生植物的方法。例如，這些再生植物可選自栽培品種Rangdander(AgricultureCanada)或由BrownDCW和AAtanassov(1985.PlantCellTissueOrganCulture4:111-112)描述的任何其他商業(yè)紫苜蓿品種?？蛇x擇地，已選擇RA3品種(UniversityofWisconsin)用于組織培養(yǎng)(Walker等人，1978AmJBot65:654-659)。將子葉柄外植體與包含表達(dá)載體的根瘤農(nóng)桿菌C58C1pMP90(McKersie等人，1999PlantPhysiol119:839—847)或LBA4404的過夜培養(yǎng)物共培養(yǎng)。將外植體在黑暗中在包含288mg/LPro、53mg/L硫代脯氨酸、4.35g/LK2S04和100乙酰丁香酮的SH誘導(dǎo)培養(yǎng)基上共培養(yǎng)3天。在一半濃度的Murashige-Skoog培養(yǎng)基(Murashige和Skoog,1962)中洗滌外(以抑制農(nóng)桿菌的生長)的相同SH誘導(dǎo)培養(yǎng)基上。在幾周后，將體細(xì)胞胚轉(zhuǎn)移至不含生長調(diào)節(jié)劑、無抗生素但含有50g/L蔗糖的BOi2Y發(fā)育培養(yǎng)基中。隨后在一半濃度的Murashige-Skoog培養(yǎng)基上萌發(fā)體細(xì)胞胚。將生根的幼苗移植入花盆和生長在溫室中。從展示對選擇劑的抗性且包含單拷貝T-DNA插入物的植物產(chǎn)生Tl種子。權(quán)利要求1.相對于對照植物增加植物產(chǎn)量的方法，包括增加編碼MYB結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)錄因子(MYB-TF)多肽的核酸序列在植物中的表達(dá)，和任選地選擇具有產(chǎn)量增加的植物。2.根據(jù)權(quán)利要求l的方法，其中該表達(dá)優(yōu)先地在植物種子胚乳中增加。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的方法，其中所述MYB-TF多肽為任何如下多肽，該多肽從N端至C端包刺i洽有兩個MYB重M列的R2R3MYB結(jié)構(gòu)域；(ii)與SEQIDNO:38、SEQIDNO:27或SEQIDNO:28中任何一個或者多個所示的MYB4結(jié)構(gòu)域按照遞增的優(yōu)選順序具有至少55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%、99%或者更高的序列同一性的MYB4結(jié)構(gòu)域。4.根據(jù)在先權(quán)利要求任何一項的方法，其中所述MYB-TF多肽為任何如下多肽序列，該多肽序列當(dāng)用于構(gòu)建MYB系統(tǒng)樹，例如圖3中所描述的系統(tǒng)樹時，如圖3所示的，傾向于與包含SEQIDNO:2和SEQIDNO:4所示序列的多肽序列群組成簇聚類，而非與任何其它群組成簇聚類。5.根據(jù)在先權(quán)利要求任何一項的方法，其中所述MYB-TF多肽為與SEQIDNO:2所示多肽序列按照遞增的優(yōu)選順序具有至少35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、卯％、95%、98%、99%或者更高的序列同一性的任何多肽序列。6.根據(jù)權(quán)利要求1或2的方法，其中所述增加的表達(dá)通過將遺傳修飾引入植物，優(yōu)選引入編碼MYB-TF多肽的基因的基因座中而實現(xiàn)。7.根據(jù)權(quán)利要求6的方法，其中所述遺傳修飾通過T-DNA激活、TILLING和同源重組中的任何一種或者多種而實現(xiàn)。8.相對于對照植物增加植物產(chǎn)量的方法，包括將編碼MYB-TF多肽的核酸序列51入植物并在植物中表達(dá)。9.根據(jù)權(quán)利要求8的方法，其中所述核酸序列有效地連接組成型啟動子，優(yōu)選連接GOS2啟動子。10.根據(jù)權(quán)利要求l、6或8中任何一項的方法，其中所述植物產(chǎn)量是下述一種或者多種(i)增加的出苗時幼苗活力；(ii)增加的才艮生物量；(iii)(開花前)增加的綠度指數(shù)；(iv)增加的種子飽滿率；(v)增加的每林植物的種子總重量；(vi)增加的飽滿種子數(shù)或者(vii)增加的收獲指數(shù)。11.相對于對照植物增加植物產(chǎn)量的方法，包括引入編碼MYB-TF多肽的核酸序列，并優(yōu)先地在植物種子胚乳中增加該核酸序列的表達(dá)。12.根據(jù)權(quán)利要求ll的方法，其中所述核酸序列有效地連接胚乳特異性啟動子，優(yōu)選連接谷醇溶蛋白啟動子。13.根據(jù)權(quán)利要求2、6或11中任何一項的方法，其中所述植物產(chǎn)量是下述一種或者多種(i)增加的每#^物的種子總重量；(ii)增加的飽滿種子數(shù)或者(iii)增加的收獲指數(shù)。14.根據(jù)在先權(quán)利要求任何一項的方法，其中所述核酸序列是表A中給出的核^列的一部分或者其等位基因變體或者其剪接變體或者能夠與其雜交的序列，其中所述部分、等位基因變體、剪接變體或者雜交序列編碼MYB-TF多肽。15.根據(jù)權(quán)利要求14的方法，其中所述部分、等位基因變體、剪接變體或者雜M列編碼MYB-TF多肽的直向同源物或者旁系同源物。16.才艮據(jù)在先^C利要求任何一項的方法，其中所述編碼MYB-TF多肽的核酸序列來自植物，優(yōu)選來自單子葉植物，更優(yōu)選來自禾本科，更優(yōu)選來自稻屬，最優(yōu)選來自稻。17.根據(jù)在先權(quán)利要求任何一項的方法可獲得的植物、植物部分或者植物細(xì)胞，其中所述植物或者其部分或者細(xì)胞包含編碼MYB-TF多肽的分離的核酸，該分離的核酸有效地連接組成型啟動子或者連接胚乳特異性啟動子。18.構(gòu)建體，其包含a.編碼MYB-TF多肽的核齡列；b.能夠驅(qū)動(a)的核酸序列在植物、植物部分或者植物細(xì)胞中表達(dá)的一個或者多個調(diào)控序列；以及，任選地C.轉(zhuǎn)錄終止序列。19.根據(jù)權(quán)利要求18的構(gòu)建體，其中所述調(diào)控序列之一是下述之一(i)組成型啟動子，優(yōu)選GOS2啟動子；或者(ii)胚乳特異性啟動子，優(yōu)選谷醇溶蛋白啟動子。20.根據(jù)權(quán)利要求18或者19的構(gòu)建體在增加植物產(chǎn)量中的用途。21.由根據(jù)權(quán)利要求19或者20的構(gòu)建體轉(zhuǎn)化的植物、植物部分或者植物細(xì)胞。22.產(chǎn)生相對于對照植物產(chǎn)量增加的轉(zhuǎn)基因植物的方法，該方法包括(i)將編碼MYB-TF多肽的核酸序列引入植物、植物部分或者植物細(xì)胞并在其中表達(dá)，其中所述核酸序列的表達(dá)由組成型啟動子或者由胚乳特異性啟動子驅(qū)動；(ii)在促進(jìn)植物生長和發(fā)育的條件下培育該植物部分或者植物細(xì)胞。23.相對于對照植物產(chǎn)量增加的轉(zhuǎn)基因植物，所述產(chǎn)量的增加歸因于編碼MYB-TF多肽的核酸轉(zhuǎn)基因在植物中表達(dá)的增加。24.權(quán)利要求23的轉(zhuǎn)基因植物，其中所述表達(dá)優(yōu)先地在植物種子胚乳中增力口。25.根據(jù)權(quán)利要求17、21、23或24中任何一項的轉(zhuǎn)基因植物，其中所述植物是作物植物或者單子葉植物或者谷類，例如稻、玉米、小麥、大麥、粟、黑麥、小黑麥、高粱和燕麥。26.根據(jù)權(quán)利要求17、21、23、24或25中任何一項的植物的可收獲部分，其中所述可收獲部分是種子。27.衍生自根據(jù)權(quán)利要求25的植物和/或根據(jù)權(quán)利要求26的植物可收獲部分的產(chǎn)品。28.編碼MYB-TF多肽的核酸序列在相對于對照植物增加植物產(chǎn)量中的用途，其中該核酸序列有效地連接組成型啟動子。29.根據(jù)權(quán)利要求28的用途,其中所述植物產(chǎn)量是下述一種或者多種(i)增加的出苗時幼苗活力；(ii)增加的粗根數(shù)；(iii)(開花前)增加的綠度指數(shù);(iv)增加的種子飽滿率；(v)增加的每沐隨物的種子總重量；(vi)增加的飽滿種子數(shù)或者(vii)增加的收獲指數(shù)30.編碼MYB-TF多肽的核酸序列在相對于對照植物增加植物產(chǎn)量中的用途，其中該核酸序列有效地連接胚乳特異性啟動子。31.根據(jù)權(quán)利要求30的用途，其中所述增加的植物產(chǎn)量是下述一種或者多種(i)增加的每抹植物的種子總重量；(ii)增加的飽滿種子數(shù)或者(iii)增加的收獲指數(shù)。全文摘要本發(fā)明一般地涉及分子生物學(xué)領(lǐng)域，并涉及相對于對照植物而增加植物產(chǎn)量的方法。更具體地，本發(fā)明涉及增加植物產(chǎn)量的方法，包括增加編碼MYB(DNA-結(jié)合)結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)錄因子(MYB-TF)多肽的核酸序列在植物中的表達(dá)。一個特定實施方案中，本發(fā)明涉及增加植物產(chǎn)量的方法，包括優(yōu)先地增加編碼MYB-TF多肽的核酸序列在植物種子胚乳中的表達(dá)。本發(fā)明還涉及具有增加的編碼MYB-TF多肽的核酸序列的表達(dá)的植物，以及具有優(yōu)先地在種子胚乳中增加的編碼MYB-TF多肽的核酸序列的表達(dá)的植物，該植物相對于對照植物而言產(chǎn)量增加。本發(fā)明還提供用于本發(fā)明方法中的構(gòu)建體。文檔編號C12N15/82GK101432430SQ200780015109公開日2009年5月13日申請日期2007年2月27日優(yōu)先權(quán)日2006年2月28日發(fā)明者V·弗蘭卡德申請人:克羅普迪塞恩股份有限公司