專利名稱：：有效治療腫瘤或其他需要除去或破壞細胞的病癥的肽的制作方法有效治療腫瘤或其他需要除去或破壞細胞的病癥的肽相關申請的交叉參考本申請要求2006年2月28日提交的美國臨時申請No.60/776,933的優(yōu)先權，在此將它們全文并入以供參考。
背景技術：
：1.發(fā)明領域本發(fā)明包括用基于小肽的化合物治療需要除去或破壞細胞元件(cellularelement),如良性或惡性腫瘤的人類病癥的方法。所述方法包括，但不限于，肌內、經(jīng)口、靜脈內、鞘內、腫瘤內、鼻內、局部、透皮等單獨或與載體聯(lián)合給予所述化合物。2.相關技術的描述許多醫(yī)學治療和處理方法的實質包括除去或破壞有害或不需要的組織。這種重要治療的例子包括手術切除癌性生長物、通過化療破壞轉移性腫瘤和減少腺(如前列腺)增生。其它例子包括除去不需要的面部毛發(fā)、除去疣、以及除去不需要的脂肪組織。明顯需要有效試劑能破壞以便除去或抑制有害或不需要細胞和組織的進一步生長，但主要具有局部效應而全身毒性最小或沒有。該類試劑描述于待審批美國專利申請序列號10/092,934，題為"用神經(jīng)絲狀蛋白治療腫瘤和相關病癥的方法(MethodsofTreatingTumorsandRelatedConditionsUsingNeuralThreadProteins)";序列號10/153,334，題為"有效治療腫瘤和其它需要除去或破壞細胞的病癥的肽(PeptidesEffectiveInTheTreatmentOfTumorsAndOtherConditionsRequiringTheRemovalOrDestructionOfCells)";序列號10/198,069，題為"有效治療腫瘤和其它需要除去或破壞細胞的病癥的肽(PeptidesEffectiveInTheTreatmentOfTumorsAndOtherConditionsRequiringTheRemovalOrDestructionOfCells)";序列號10/198,070，題為"有效治療腫瘤和其它需要除去或破壞細胞的病癥的肽(PeptidesEffectiveInTheTreatmentOfTumorsAndOtherConditionsRequiringTheRemovalOrDestructionOfCells)";序列號10/294,891，題為"有效治療腫瘤和其它需要除去或破壞細胞的病癥的肽(PeptidesEffectiveInTheTreatmentOfTumorsAndOtherConditionsRequiringTheRemovalOrDestructionOfCells)";以及序列號10/920,313，題為"有效治療腫瘤和其它需要除去或破壞細胞的病癥的肽(PeptidesEffectiveInTheTreatmentOfTumorsAndOtherConditionsRequiringTheRemovalOrDestructionOfCells)",它們各自的內容全部納入本文供參考。本文披露的是一種此類肽試劑(SEQIDNO.1:Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys國Leu-Glu-Ile-Lys-Arg陽Cys-Leu)的組合物、片段和亞序列，它們還可用于治療腫瘤和其他需要除去或破壞細胞的病癥。癌是細胞內部調節(jié)機制發(fā)生的異常，導致不受控制的細胞生長和繁殖。正常細胞構成組織，當這些細胞失去作為專門化、受控制和協(xié)同單元的能力(去分化)時，這種缺陷會導致細胞群發(fā)生混亂。當它發(fā)生時，即形成腫瘤。組織的良性過度生長是異常情況，此時需要從機體中除去細胞。良性腫瘤是不會全身轉移但能引起病癥癥狀的細胞增殖。如果這種腫瘤位于器官如腦中難以到達的區(qū)域，它們可能是致命的。良性腫瘤存在于許多器官中，包括肺、腦、皮膚、垂體、甲狀腺、腎上腺皮質和腎上腺髓質、卵巢、子宮、睪丸、結締組織、肌肉、腸、耳、鼻、喉、扁桃腺、口、肝臟、膽囊、胰、前列腺、心、以及其他器官。在癌癥治療中手術通常是第一步。手術的目的不同。有時用手術盡可能多地除去明顯的腫瘤，或至少使它"除塊"(除去主要的腫瘤塊從而減少對其它方法治療的需要)。取決于癌種類和位置，手術也可為病人提供一些癥狀緩解。例如，如果手術切除了大部分擴增的腦腫瘤，顱內壓將減少，使病人的癥狀改善。不是所有的腫瘤都適于手術。一些腫瘤可能位于不能完全除去的身體部位。這些腫瘤例子是腦干(腦中控制呼吸的部分)中的腫瘤或生長在主要血管中和周圍的腫瘤。在這些情況中，由于腫瘤切除相關的高風險，手術的作用有限。在一些情況中，不用手術切除腫瘤塊，因為簡單不需要。一個例子是霍奇金淋巴瘤，這是對化療和放療組合有良好反應的淋巴結癌癥。在霍奇金淋巴瘤中，很少需要手術來實現(xiàn)治愈，而手術幾乎都是用于確定診斷?；熓前┌Y治療的另一種常用形式。其實質上包括使用能特異性攻擊全身中快速分裂細胞(如腫瘤中所見的細胞)的藥物(通常通過口服或注射給予)。這使化療可用于治療轉移癌以及通過血液和淋巴系統(tǒng)擴散的可能性高但尚未明顯超過原發(fā)性腫瘤部位的腫瘤?；熞部捎糜谔岣呔植磕[瘤對手術和放療的反應。例如對于一些頭部和頸部的癌癥。不幸的是，人體中正?？焖俜至训钠渌毎?如胃的內皮層和毛發(fā))也會受到化療影響。由于這個原因，許多化療劑會導致不良副作用如惡心、嘔吐、貧血、脫發(fā)或其它癥狀。這些副作用是暫時性的，目前的藥物可幫助減輕許多這些副作用。隨著我們的知識持續(xù)增長，學者們設計了更新的化療劑，它們不僅能更好地殺死癌細胞且對病人的副作用更小?；熕幬锟梢远喾N方式給予病人。一些是藥丸，一些通過靜脈內或其它部位注射給藥。就可注射的化療藥物而言，病人須到醫(yī)生診所或醫(yī)院接受治療。其它化療劑需要一天24小時連續(xù)輸入血流中。對于這些類型的化療藥物，可進行小手術給病人植入小泵。用泵慢慢給藥。在許多情況中，須在病人靜脈中安置永久性輸液管口以免需要反復針刺。放療是常用的另一種抗癌武器。放射線通過破壞腫瘤細胞內的DNA來殺死癌(細胞)。射線可用不同方式傳送。最普通的方法包括以高精確方式使放射線束指向病人，集中照射在腫瘤上。為此，病人須躺在臺上光束圍繞他/她周圍移動。此可程持續(xù)幾分鐘，但可每天進行，連續(xù)數(shù)周(取決于腫瘤類型)以達到特定的總處方放射量。有時采用稱為近程治療的另一種放射方法，包括采用放射性小丸("輻射盒(seed)")或電線，將它們植入身體的腫瘤區(qū)域中。植入物可以是暫時或永久性的。就永久性植入而言，輻射盒中的射線在幾天或幾周中"衰變"從而病人不會有放射性。就暫時性植入而言，總放射劑量通常須在數(shù)天中輸入，病人在此時間中必須住院。對于這兩種近程治療，一般須將放射線遞送精確區(qū)域以獲得對癌癥的局部控制(此與全身治療，如化療相反)。一些高度選擇的病人可求助于骨髓移植。通常進行此種治療是因為病人患有顯著的侵襲性癌或因為他們經(jīng)常規(guī)療法治療后癌癥復發(fā)。骨髓移植是一復雜的過程。有許多種類且它們引起副作用和治愈的可能性不同。大多數(shù)移植須在特定的醫(yī)療中心進行，在許多情況中采用移植認為是研究性的。有許多其它治療方法，盡管大部分仍在臨床考核中探索，未成為標準治療方法。例子包括免疫治療、單克隆抗體、抗血管生成因子和基因治療。免疫治療設計了多種技術以促進病人自身免疫系統(tǒng)抵抗癌癥，這與放療或化療完全不同。為達到此目的，學者們常用特制疫苗給病人注射。單克隆抗體:利用癌和非癌細胞之間抗原性或/或其它特征的差異設計用于粘附癌細胞(而非正常細胞)的抗體?？贵w可單獨給予病人，或與各種細胞毒化合物偶聯(lián)或采用放射性形式，從而使抗體優(yōu)先靶向癌性細胞，藉此將毒性劑或放射劑遞送給需要的細胞。抗血管生成因子由于癌細胞迅速分裂和腫瘤生長，它們可能很快長得超過其血液供應。為補償這點，一些腫瘤可分泌據(jù)信能協(xié)助誘導其周圍血管生長的物質，從而向癌細胞提供血管來源的營養(yǎng)物。已設計了實驗性療法以阻止血管長入腫瘤?；虔煼ò┌Y是一系列突變的產(chǎn)物，最終導致癌細胞產(chǎn)生及其過度增殖。治療癌癥可通過將能阻止或停止癌增殖的基因引入癌細胞、開啟細胞的程序性細胞(死亡)機制以破壞癌細胞、增強細胞的免疫識別、或表達能轉變成毒性代謝物的前體藥物或抑制腫瘤生長的細胞因子。良性腫瘤和畸形也可通過多種方法治療，包括手術、放療、藥物治療、熱和電燒灼、冷凍療法等。盡管良性腫瘤不轉移，它們可長大且可復發(fā)。手術根除良性腫瘤通常有困難和手術副作用，而一些良性腫瘤，如垂體腺瘤、腦膜瘤、前列腺增生等須要反復進行手術。還有其它一些疾患包含不需要的細胞元件，需要選擇性去除這些細胞。例如心臟病和中風一般由動脈粥樣硬化所引起，而動脈粥樣硬化是纖維脂肪和改性的平滑肌元件的增殖性損傷致使血管壁扭曲、血管腔狹窄、血流收縮、易發(fā)病灶性血栓并最終導致阻塞和梗塞。治療動脈粥樣硬化的各種方法包括旁路移植；人工移植；采用血管再通、刮除、放射、激光或其它去除阻塞的血管成形術；通過降低脂質抑制動脈粥樣硬化的藥物療法；抗血凝治療；和飲食、鍛煉及生活方式的常規(guī)手段。仍需要一種除去動脈粥樣硬化性損傷而無手術過程的風險和副作用的方法。其它需要選擇性去除不想要的細胞元件的例子包括病毒誘導的生長物如疣。另一個例子是炎癥情況中所見的肥大炎性塊和肥大疤痕或瘢痕瘤。其它例子見于化妝美容時例如除去不想要的毛發(fā)如面部汗毛，或為美容目的須除去面部皮膚和結締組織中或四肢皮膚和結締組織中皺縮的不需要的組織區(qū)域。其他需要選擇性細胞除去或抑制細胞增殖的不需要細胞元件的例子包括循環(huán)系統(tǒng)中的任何動脈、瓣膜或管，包括但不限于瓣膜(例如包括大動脈瓣膜孔狹窄的大動脈狹窄)，冠狀動脈的(例如包括冠狀動脈口狹窄的冠狀口硬化)，頸動脈和腎動脈的狹窄或再狹窄。其他例子包括抑制或去除不良細胞生長或聚集，這些生長或聚集導致例如置于或移植于血管內用于治療其中的狹窄、縮窄或動脈瘤，或置于或移植于尿道和膽管內的醫(yī)療設備部分或完全阻塞。其它例子是此領域一般技術人員知道的。在所有或大部分這些例子中，都需要能除去或破壞不想要的細胞元件而無常規(guī)療法的風險和副作用，和更精確除去不想要細胞元件的治療方法。在包括上述相關領域描述在內的整篇說明書中，本文所述的任何和所有公開文獻，包括任何和所有美國專利均專門全文納入本文以供參考。上述相關領域的描述不是以任何方式承認包括待審批美國專利申請在內的任何本文所述文獻是本發(fā)明的現(xiàn)有技術。此外，本文描述的與這些產(chǎn)品、方法和/和儀器有關的缺點不是為了限制本發(fā)明。事實上，本發(fā)明的各方面可以包括所述產(chǎn)品、方法和/或儀器的某些特征，而不受其缺點所限。發(fā)明概述此領域仍需要新的、毒性較弱的治療不需要的細胞元件的方法。本發(fā)明可滿足這些需求。本發(fā)明部分基于發(fā)現(xiàn)某些肽，包括氨基酸序列Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser陽Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile-Lys陽Arg-Cys-Leu描述的特定肽，能夠治療和/或殺死不需要的細胞增殖。這些不需要的細胞增殖包括例如良性和惡性腫瘤、腺(如前列腺)增生、不需要的面部毛發(fā)、疣和不需要的脂肪組織等。本發(fā)明部分基于這項令人吃驚且出乎意料的發(fā)現(xiàn)，即肽Ile-Asp-Gln-Gln隱Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys陽Leu-GIu-Ile-Lys-Arg-Cys-Leu("S05A肽")的某些肽片段和亞序列也能夠治療和/或殺死不需要的細胞增殖。一些實施方式涉及治療不需要的細胞增殖(良性或惡性腫瘤、腺(如前列腺)增生、不需要的面部毛發(fā)、疣和不需要的脂肪組織)的方法，該方法包括給予有此需要的哺乳動物治療有效量的S05A肽。這種S05A肽可單獨或者結合載體或抗體施用。用通過肌內、經(jīng)口、靜脈內、腹膜內、腦內(實質內)、腦室內、腫瘤內、病灶內(interlesionally)、真皮內、鞘內、鼻內、眼內、動脈內、局部、透皮、通過氣霧劑、灌輸、推注、移植裝置、緩釋系統(tǒng)等單獨或結合載體施用S05A肽。另外，由于遺傳改變或其它方式，可通過施用表達S05A肽的基因、通過施用誘導這類生成的疫苗或通過引入體內表達該肽的細胞、細菌或病毒而在體內表達S05A肽。此外，S05A肽可結合其它療劑使用來治療良性和惡性腫瘤和其它不需要或有害的細胞生長。上述一般描述和以下詳述是示范性和說明性的，是對所宣稱發(fā)明的進一步說明。從以下的發(fā)明詳述中，其它目標、優(yōu)點和特征對于本領域技術人員是顯而易見的。優(yōu)選實施方式詳述在描述本發(fā)明的蛋白質、核苷酸序列、肽等和方法之前，應理解本發(fā)明不限于所述的具體方法、方案、細胞系、載體和試劑，因為這些都可以變化。還應該理解本文所用的術語僅為描述具體實施例，不是要限制本發(fā)明的范圍，該范圍僅由權利要求來限制。除非另有說明，這里使用的術語和詞組按如下定義。除非文中另有明確指出，在整篇說明書中，單數(shù)"一"包括復數(shù)意義。因此例如"一個宿主細胞"包括多個這樣的宿主細胞，而述及"一種抗體"述及了一種或多種抗體及其本領域技術人員已知的等價物，依此類推?？筛鶕?jù)下表提供的所接受的單字母或三字母密碼述及本文所述的氨基酸和氨基酸殘基。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>術語"肽"在本文中是指至少有兩個氨基酸的鏈，包括該肽的同源物、衍生物、片段和變體。表述"S05A肽"指含有SEQIDNO.1(Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile-Lys-Arg-Cys-Leu)所示肽的至少一個片段或亞序列的肽，除非另有說明，還包括該肽的任何同源物、片段、衍生物、變體、融合蛋白和肽模擬物。表述"S05A肽"包括(但不限于)包含至少一個選自下組的肽的肽a)SEQIDNO.2(Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile)中的氨基酸序列表示的肽；b)SEQIDNO.3(Lys-Leu-Glu-Ile-Lys-Arg-Cys-Leu)中的氨基酸序列表示的肽；c)SEQIDNO.4(Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys)中的氨基酸序列表示的肽；d)SEQIDNO.5(Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile-Lys)中的氨基酸序列表示的肽；e)SEQIDNO.6(Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile-Lys誦Arg-Cys-Leu)中的氨基酸序列表示的肽；和f)SEQIDNO.7(Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu陽Ile)中的氨基酸序列表示的肽。術語"片段"或"亞序列"是指由蛋白質或肽的氨基酸序列的連續(xù)亞序列構成的蛋白質或多肽，包括天然產(chǎn)生的片段，如剪接變體以及體內蛋白酶活性天然產(chǎn)生的片段。這種片段可在氨基末端、羧基末端和/或中間(如自然剪接)截短。可將這種片段制備成含或不含氨基末端甲硫氨酸。術語"片段"包括來自相同蛋白質或肽的片段，可以相同或不同，共有或沒有毗連的氨基酸序列，直接或通過接頭連在一起。其結果是，包含SEQIDNO.1片段的任何肽可以是選自以上的任何肽，其他片段或亞序列將是本領域技術人員顯而易見的，為簡便起見在文中不再贅述。技術人員利用文中列出的指導和方法能夠選擇合適的片段用于本發(fā)明。術語"變體"指一種蛋白質或多肽，其中與該蛋白或肽的氨基酸序列相比存在一個或多個氨基酸取代、缺失和/或插入，并包括天然產(chǎn)生的蛋白或肽的等位基因變體或者旁路剪接變體。術語"變體"包括用類似或同源氨基酸或不相似氨基酸的置換肽序列中的一個或多個氨基酸。可根據(jù)許多標準將氨基酸分為類似或同源的(Gu皿arvonHeijne，《分子生物學的序列分析》(SequenceAnalysisinMolecularBiology),123-39頁，學術出版社(AcademicPress),紐約，紐約州，1987)。優(yōu)選的變體包括一個或多個氨基酸位置的丙氨酸取代。其它優(yōu)選的取代包括對蛋白質的整體凈電荷、極性或疏水性影響小或沒有影響的保守性取代。保守性取代列于下表2中。表2保s卩性氨基酸取代<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>表3列出氨基酸取代的另一種方案:表3<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>其它變體可由保守性較小的氨基酸取代組成，如選擇的殘基在它們維持(a)取代區(qū)域中多肽主鏈的結構，例如片層或螺旋構型，(b)分子靶位點的電荷或疏水性，(C)側鏈大小的作用不同更為顯著。通常預期對功能有更顯著作用的取代是(a)甘氨酸和/或脯氨酸被另一種氨基酸取代或缺失或插入；(b)親水性殘基如絲氨?；蛱K氨酰取代(或被)疏水性殘基，如亮氨酰、異亮氨酰、苯丙氨酰、纈氨酰或丙氨酰(取代)；(c)半胱氨酸殘基取代(或被)任何其它殘基(取代)；(d)具有正電荷側鏈的殘基如賴氨酰、精氨?；蚪M氨酰取代(或被)具有負電荷的殘基如谷氨?；蛱於滨?取代)；或(e)具有大側鏈的殘基如苯丙氨酸取代(或被)沒有這種側鏈的殘基如甘氨酸(取代)。其它變體包括設計為產(chǎn)生新的糖基化和/或磷酸化位點的，或設計為缺失現(xiàn)有糖基化和/或磷酸化位點的那些殘基。變體包括糖基化位點、蛋白酶切割位點和/或半胱氨酸殘基處的至少一個氨基酸取代。變體還包括在接頭肽上該蛋白或肽氨基酸序列之前或之后具有其它氨基酸殘基的蛋白或肽。例如，可將半胱氨酸殘基加在S05A肽的氨基和羧基末端以形成二硫鍵從而使該肽環(huán)化。術語"變體"還包括具有S05A肽的氨基酸序列的多肽，它在S05A肽的3'或5'末端側接有至少1個和至多達25個或更多額外的氨基酸。術語"衍生物"指化學修飾的蛋白質或多肽，它們通過天然過程如加工和其它翻譯后修飾而被化學修飾，也可通過化學修飾技術如加入一個或多個聚乙二醇分子、糖、磷酸鹽和/或其它這種分子，其中這類分子不是天然結合于野生型蛋白或S05A肽的分子。衍生物包括鹽。這種化學修飾描述可見基礎教材和更詳細的專論以及大量研究文獻中，它們是本領域技術人員所熟知的。應該知道，給定蛋白質或多肽的一些位點上可以存在程度相同或不同的相同類型的修飾。同樣，給定蛋白質或多肽可包含許多種類的修飾。修飾可發(fā)生在蛋白質或多肽的任何地方，包括肽主鏈、氨基酸側鏈和氨基或羧基末端。修飾包括例如乙?；Ⅴ；?、ADP-核糖基化、酰胺化、黃素的共價結合、血紅素部分的共價結合、核苷酸或核苷酸衍生物的共價結合、脂質或脂質衍生物的共價結合、磷脂酰肌醇的共價結合、交聯(lián)、環(huán)化、二硫鍵形成、脫甲基化、形成共價交聯(lián)、形成半胱氨酸、形成焦谷氨酸、甲?；?、Y-羧基化、糖基化、GPI錨(anchor)形成、羥基化、碘化、甲基化、豆蔻酰化、氧化、蛋白酶解加工、磷酸化、異戊二烯化、外消旋化、糖基化、脂質結合、硫酸化、谷氨酸殘基的Y-羧基化、羥基化和ADP-核糖基化、硒基化(selenoylation)、轉運RNA介導的氨基酸加入蛋白質，如精氨酰化和泛素化。參見例如《蛋白質-結構和分子性質》(Proteins-StructureAndMolecularProperties),第二版，T.E.Creighton，WHF公司(T.E.Creighton，W.H.FreemanandCompany),紐約(1993)和Wold，F(xiàn).，"翻譯后蛋白質修飾觀點和前景"(PosttranslationalProteinModifcation:PerspectiveandProspects),刊于《蛋白質的翻譯后共價修飾》(PosttranslationalConvalentModificationofProteins),1-12頁，B.C.Johnson編，學術出版社，紐約(1983);Seifter等，Meth.Enzymol.182:626-646(1990)和Rattan等，"蛋白質合成翻譯后修飾和衰老"(PosttranslationalModifcationandAging)，Ann.N.Y.Acad.Sci.663:48-62(1992)。術語"衍生物"包括化學修飾導致蛋白質或多肽變成分支狀或者有或沒有分支的環(huán)狀。環(huán)狀、分支狀和分支環(huán)狀蛋白質或多肽可能由翻譯后天然加工產(chǎn)生并也可完全由合成方法產(chǎn)生。術語"同源物"指根據(jù)常用于比較兩種多肽的氨基酸位置相似性的標準方法測定到氨基酸序列與S05A肽的氨基酸序列至少有60。/。相同的蛋白質。兩種蛋白質之間的相似性或相同性程度不難用已知方法計算，包括但不限于以下所描述的那些方法《計算分子生物學》(ComputationalMolecularBiology),Lesk，A.M.編，牛津大學出版社(OxfordUniversityPress),紐約，1988;《生物計算信息學禾口基因組計戈ll》(Biocomputing:InformaticsandGenomeProjiects)，Smith,D.W.編，學術出版社，紐約，1993;《序列數(shù)據(jù)的計算機分析》(ComputerAnalysisofSequenceData),第I部分，Griffin,A.M.禾BGriffin，H.G.編，休瑪納出版社(HumanaPress),新澤西州，1994);《分子生物學序列分析》(S叫uenceanalysisinMolecularBiology),vonHeinje，G.，學術出版社，紐約，1987);《序列分析引物》(S叫uenceanalysisPrimery)，Gribskov，M.和Devereux，J.編，MS出版社(MStocktonPress),紐約，1991;CarilloH.和Lipman，D.，SIAM，J.AppliedMath.，48:1073(1988)。設計了測定相同性的優(yōu)選方法來給出測試序列之間的最大匹配。在公眾可得到的計算機程序中編入了測定相同性和相似性的方法。用于確定兩種序列之間相同性和相似性的優(yōu)選計算機程序方法包括但不限于GCG程序包(Devereux，J.等，NucleicAcidsResearch,12(1):387(1984))，BLASTP，BLASTN和FASTA，Atschul，S,F.等，J.Molec.Biol.，215:403-410(1990)。公眾可從NCBI和其它來源獲得BLASTX程序(BLAST手冊，Altschul，S.等，NCBINLMNIHBethesda，Md.20894;Altschul，S.等，J.Mol.Biol.，215:403-410(1990)。例如采用計算機算法如GAP(遺傳學計算機組，威斯康星州大學(UniversityofWisconsin),威斯康星州麥迪遜(Madison，Wis.))，排列對比兩種待測定的蛋白質或多肽的序列相同性百分比用于最佳匹配它們各自的氨基酸(算法確定"匹配范圍")?？瘴婚_放罰分(gapopeningpenalty)(計算為3x平均對角線；"平均對角線"是所用比較矩陣的對角線平均值；"對角線"是通過特定比較矩陣賦予各優(yōu)選氨基酸的評分或數(shù)值)和空位延伸罰分(gapextensionpenalty)(通常是空位開放罰分的1/10)以及比較矩陣例如PAM250或BLOSUM62可與此算法結合使用。算法也可使用標準的比較矩陣(PAM250比較矩陣參見Dayhoff等，《蛋白質序列和結構圖譜集》(AtlasofProteinSequenceandStructure),第5巻，增補本3[1978];BLOSUM62比較矩陣參見Henikoff等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89:10915-10919)。然后用該算法計算相同性百分比。同源物與對照蛋白或肽相比，通常具有一個或多個氨基酸取代、缺失和/或插入，視情況而定。術語"融合蛋白"指一種蛋白質，其中一條或多條肽重組融合或化學偶聯(lián)(包括共價或非共價)于一蛋白質，例如(但不限于)抗體或抗體片段，如Fab片段或短鏈Fv等。術語"融合蛋白"還指肽的多聚體(即二聚體、三聚體、四聚體和更高的多聚體)。這些多聚體包括含有一種肽的同聚多聚體、含有一種以上肽的異聚多聚體及含有至少一種肽和至少一種其他蛋白質的異聚多聚體。這些多聚體可以是疏水、親水、離子和/或共價作用、鍵或接頭的作用，可以是用接頭分子交聯(lián)形成，或可以通過例如，形成脂質體而間接連接。術語"肽模擬物"或"模擬物"指能模擬肽或蛋白質的生物活性但在化學性質上不再是肽的生物活性化合物，即它們不再含任何肽鍵(即氨基酸間的酰胺鍵)。這里術語肽模擬物用于更廣泛含義，包括性質上不再完全是肽的分子如假肽、半肽和擬肽(peptoid)。廣泛含義的肽模擬物的例子(其中肽的一部分被缺乏肽鍵的結構取代)在下面描述。無論完全是或部分是非肽，本發(fā)明的肽模擬物提供了反應性化學部分的空間排列，所述部分與肽模擬物所依據(jù)的肽中活性基團的三維排列極其相似。由于這種相似的活性位點的幾何結構，肽模擬物對生物系統(tǒng)的作用類似于該肽的生物活性。本發(fā)明的肽模擬物優(yōu)選在三維形狀和生物活性上基本上類似于本文所述的肽。在結構上修飾本領域已知的肽以產(chǎn)生肽模擬物的方法的例子包括倒置主鏈手性中心產(chǎn)生D-氨基酸殘基結構，具體是在N-末端，從而增強了對蛋白酶降解的穩(wěn)定性而不會不利地影響活性。在論文"含氚D-丙氨酸i-肽T結合(TritriatedD-ala.sup.l-PeptideTBinding)",SmithC.S.等，DrugDevelopmentRes.，15，371-379頁(1988)中描述了一個例子。第二種方法是為穩(wěn)定性改變環(huán)狀結構，如N到C鏈間的二酰亞胺和內酰胺(Ede等，Smith和Rivier編，《肽的化學和生物學》(Peptides:ChemistryandBiology),Escom，Leiden，1991，268-270頁)。例子見構型限制的胸腺五肽樣化合物，如美國專利號4,457,489(1985)，Goldstein,G.等所公開的那樣，其內容全部納入本文供參考。第三種方法是用能賦予蛋白水解抗性的假肽鍵替換肽中的肽鍵。許多假肽鍵一般不影響肽的結構和生物活性。此方法的一個例子是取代逆反(retro-inverso)假肽鍵("胸腺五肽的生物活性逆反類似物")(Biologicallyactiveretroinversoanalogueofthymopentin)，SistoA等，Rivier,J.E.禾口Marshall,G.R.編，"肽、化學、結構和生物學"(Peptides,Chemistry,StructureandBiology),Escom，Leiden，1990，722-773頁)禾卩Dalpozzo等(1993)，Int.J.PeptideProteinRes.，41:561-566，納入本文供參考)。根據(jù)此修飾，肽的氨基酸序列可能與上述肽的序列相同，除了一個或多個肽鍵被逆反假肽鍵所取代。優(yōu)選大部分N-末端肽鍵被取代，因為這種取代是通過外肽酶作用于N-末端而能賦予蛋白水解抗性。也可用其它類似結構的化學基團替代氨基酸的化學基團作進一步修飾。另一種已知可提高對酶切割穩(wěn)定性而生物活性沒有或很少損失的合適假肽鍵是還原型等構物(reducedisostere)假肽鍵(Couder等(1993)，Int.J.PeptideProteinRes.，41:181-184，全部納入本文供參考)。因此，這些肽的氨基酸序列可能與某肽的序列相同，除了一個或多個肽鍵被等構排物假肽鍵替代外。優(yōu)選大部分N-末端肽鍵被取代，因為這種取代是通過外肽酶作用于N-末端而能賦予蛋白水解抗性。合成具有一個或多個還原型等構物排假肽鍵的肽是本領域已知的(Couder等，(1993)，上面所引用)。其它例子包括導入酮亞甲基(ketomethylene)鍵或甲基硫化物(methylsulfide)鍵來替代肽鍵。肽的擬肽衍生物代表了另一類肽模擬物，擬肽保留了生物活性的重要結構決定簇，但去除肽鍵，從而賦予蛋白水解抗性(Simon等，1992，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，89:9367-9371，全部納入本文供參考)。擬肽是N-取代的甘氨酸的寡聚物。已報道了一些N-烷基基團，各對應于天然氨基酸的側鏈(Simon等，1992，上面所引用)。肽的一些或所有氨基酸用對應于替代氨基酸的N-取代甘氨酸所替代。術語"肽模擬物"或"模擬物"還包括下面定義的反-D肽和對映異構體。術語"反-D肽"指與肽的L-氨基酸序列相比，由反向順序排列的D-氨基酸組成的生物活性蛋白質或肽。因此，L-氨基酸肽的羧基末端殘基成為D-氨基酸肽的氨基末端，等等。例如，該肽的ETESH變成HdSdEdTdEd，其中Ed、Hd、Sd和Td是分別對應于L-氨基酸E、H、S和T的D-氨基酸。術語"對映異構體"指一種生物活性蛋白質或肽，其中肽的氨基酸序列中一個或多個L-氨基酸殘基被相應的D-氨基酸殘基替代。本文所用的"組合物"廣義上指含有列舉的肽或氨基酸序列的任何組合物。該組合物可包括干制劑、水溶液或滅菌組合物?？衫煤牡慕M合物作為雜交探針。該探針可以凍干形式保存，并可以加入穩(wěn)定劑如碳水化合物。雜交時，該探針可在含鹽如NaCl、洗滌劑如十二烷基硫酸鈉(SDS)和其它組分，例如Denhardt溶液、干奶粉、鮭魚精子DNA等的水溶液中使用。本發(fā)明涉及含有如本發(fā)明上文所定義的S05A肽的組合物。此外，本發(fā)明包括含有全部或部分S05A肽的其他蛋白質，從而該蛋白質優(yōu)選具有與該肽相同、類似或增強的生物活性。采用本文所提供的指導，此領域的一般技術人員能夠根據(jù)任何S05A肽的氨基酸序列合成特定蛋白質，所述S05A肽發(fā)現(xiàn)是造成細胞死亡的有效試劑并測試了它們作為導致細胞死亡試劑的效力。衍生自S05A肽(發(fā)現(xiàn)它們是造成細胞死亡的有效試劑)的其它肽序列也是造成細胞死亡的有效試劑。根據(jù)本文的教導，此領域的一般技術人員無需過度實驗，就可合成跨越該蛋白質的整個氨基酸序列的有效肽的片段，以便鑒定其它有效的肽序列。特別優(yōu)選的實施方式中的S05A肽包括包括，但不限于，以下這些SEQIDNO.2IDQQVLSRIIle-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-IleSEQIDNO,3KLEIKRCLLys-Leu-Glu-Ile-Lys-Arg-Cys-LeuSEQIDNO.4VLSRIKVal國Leu隱Ser-Arg-Ile-LysSEQIDNO.5RIKLEIKArg-Ile-Lys-Leu-Glu陽Ile-Lys-ArgSEQIDNO.6VLSRIKLEIKRCLVal-Leu陽Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile-Lys-Arg-Cys-LeuSEQIDNO.7IDQQVLSRIKLEIIle-Asp-Gln陽Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile本領域技術人員能夠明白，可選擇上述S05A肽的其它較小片段，而使這些片段具有相同或相似的生物學活性。本領域技術人員可選擇其他片段，而使這些肽具有相同或相似的生物學活性。本發(fā)明的肽包含這些其他片段?？偟恼f來本發(fā)明的肽具有至少6個氨基酸，優(yōu)選至少5個氨基酸，更優(yōu)選至少4個氨基酸。本發(fā)明還包括含有連接在一起的兩條或多條S05A肽的S05A肽。只要一條S05A肽具有所需生物活性，兩條這樣的肽也具有所需生物活性。可用本領域技術人員已知的方法制備本發(fā)明包括的S05A肽及其片段、變體、衍生物、同源物、融合蛋白和模擬物，例如重組DNA技術、蛋白質合成和分離天然產(chǎn)生的肽、蛋白、AD7c-蛋白和其片段、變體、衍生物和同源物。采用本領域技術人員已知的方法，可從其它肽、蛋白質及其片段、變體、衍生物、同源物制備S05A肽及其片段、變體、衍生物、同源物、融合蛋白和模擬物。這些方法包括(但不限于)用蛋白酶將肽或蛋白切割成所需的S05A肽。S05A肽可用熟知的重組DNA技術方法制備，如列于Sambrook等，《分子克隆實驗室手冊》(MolecularCloning:ALaboratoryManual),冷泉港實驗室出版社(ColdSpringHarborLaboratoryPress),紐約州冷泉港(ColdSpringHarbor,N.Y.))和/或Ausubel等編的《新編分子生物學實驗指南》(CurrentProtocolsinMolecularBiology),格林出版社有限公司(GreenPublishersInc.)及威利父子公司(WileyandSons),紐約州(N.Y.)的方法?？赏ㄟ^，例如篩選基因組或cDNA文庫或通過PCR擴增獲得編碼S05A肽的基因或cDNA。用于篩選文庫的探針或引物可依據(jù)其它已知基因或相同或相關基因家族的基因片段的序列信息，如在其它肽或蛋白中發(fā)現(xiàn)的保守基序產(chǎn)生。此外，如果鑒定了編碼S05A肽的基因，該基因的全部或部分可用作探針以鑒定同源基因。探針或引物可用于從認為表達S05A肽基因的多種組織來源中篩選cDNA文庫。通常，可使用高嚴謹性條件來盡可能減少篩選獲得的假陽性數(shù)量。另一種制備編碼S05A肽的基因的方法采用化學合成，使用技術人員熟知的方法，如Engels等(Angew.Chem.Intl.Ed.，28:716-734)描述的方法。這些方法包括磷酸三酯、亞磷酰胺、H-膦酸酯等方法來合成核酸。這種化學合成的優(yōu)選方法是使用標準亞磷酰胺化學的聚合物-支持的合成D—般，編碼肽的DNA長度為幾百個核苷酸?？捎眠@些方法將大于約IOO個核苷酸的核酸合成為幾個片段。然后片段可連接在一起形成全長的肽或蛋白質。通常，編碼蛋白質的氨基末端的DNA片段具有編碼甲硫氨酸的ATG。此甲硫氨酸可以或可不存在于蛋白或肽的成熟形式，這取決于宿主細胞中產(chǎn)生的蛋白質是否設計成從該細胞中分泌。編碼S05A肽的基因、cDNA或其片段可用標準連接技術插入合適表達或擴增載體中。通常選擇在所用具體宿主細胞中有功能的載體(即載體與宿主細胞機制相容，從而可擴增基因和/或表達基因)。編碼S05A肽的基因、cDNA或其片段可在原核、酵母、昆蟲(桿狀病毒系統(tǒng))和/或真核宿主細胞中擴增/表達。宿主細胞的選擇部分取決于S05A肽是否糖基化和/或磷酸化。如果這樣，優(yōu)選酵母、昆蟲或哺乳動物宿主細胞。通常，任何宿主細胞中所用的載體包含至少一個5'側翼序列(也稱為"啟動子")，還包含其它調節(jié)元件，例如增強子、復制元件的起點、轉錄終止元件、含供體和受體剪接位點的完整內含子序列、信號肽序列、核糖體結合位點元件、多腺苷酸化序列、用于插入編碼待表達多肽的核酸的多接頭區(qū)域、可選擇的標記元件。下文各自討論了這些元件。任選的是，載體可包含標簽序列，即位于蛋白或肽編碼序列的5'或3'末端的寡核苷酸分子；寡核苷酸分子編碼多組氨酸(PolyHis)(如六組氨酸(HexaHis))或其它標簽如FLAG、HA(流感病毒血凝素)或存在商品化抗體的myc。此標簽常在表達多肽時融合到多肽，從而可作為親和純化宿主細胞的蛋白或肽的方法。例如可使用抗該標簽的抗體作為親和基質，通過柱層析完成親和純化。任選地，隨后通過多種方法如用某些肽酶從純化的蛋白或肽中去除標簽。本領域技術人員可將人免疫球蛋白鉸鏈和Fc區(qū)在S05A肽的N-或C-末端融合。隨后可用A蛋白親和柱純化Fc融合蛋白。已知Fc體內表現(xiàn)的藥物動力學半衰期長且發(fā)現(xiàn)融合Fc的蛋白質在體內表現(xiàn)出的半衰期顯著大于未融合蛋白質。同樣，融合至Fc區(qū)使對一些分子的生物活性有用的分子二聚化/多聚化。5'側翼序列可以是同源(即來自與宿主細胞相同的種類和/或菌株)、異源(即來自與宿主細胞不同的種類或菌株)、雜合(即來自超過一個來源的5'側翼序列組合)、合成的，或可以是天然蛋白或肽基因5'側翼序列。同樣，5'側翼序列的來源可以是單細胞原核或真核生物、任何脊椎動物或無脊椎動物、或任何植物，只要5'側翼序列有功能且可被宿主細胞機制活化。本發(fā)明載體中有用的5'側翼序列可通過任何本領域中熟知的幾種方法獲得。通常，本文除了蛋白或肽基因側翼序列外的有用5'側翼序列在以前通過作圖和/或限制性內切酶消化得到鑒定，因此可用合適的限制性內切酶從適當組織來源中分離。在一些情況中，5'側翼序列的全核苷酸序列可以是已知的。這里可用上述核酸合成或克隆的方法合成5，側翼序列。當5'側翼序列的全部或僅部分已知時，它可用用合適的寡核苷酸和/或相同或另一種類的5'側翼序列片段，采用PCR和/或通過篩選基因組文庫獲得。如果不知道5'側翼序列，可從包含例如編碼序列或甚至另一種基因或多種基因的較大片段DNA中分離含5'側翼序列的DNA片段?？捎靡环N或多種仔細選擇的酶，通過限制性內切酶消化完成分離，從而分離適當?shù)腄NA片段。消化后，所需片段可通過瓊脂糖凝膠純化、Qiagen⑧柱或技術人員已知的其它方法來分離。選擇適當酶以達到此目的對此領域的一般技術人員是顯然的。復制元件的起點通常是商業(yè)購買的原核表達載體的一部分，其協(xié)助宿主細胞中的載體擴增。在一些情況中，載體擴增到一定拷貝數(shù)對最佳表達蛋白或肽是重要的。如果所選載體不包含復制位點的起點，可根據(jù)已知序列化學合成起點并連接入載體。轉錄終止元件一般位于蛋白或肽編碼序列的3'末端，其用于終止蛋白或肽的轉錄。通常，原核細胞中的轉錄終止元件是后面有聚T序列的G-C豐富片段。雖然可從文庫克隆或作為載體部分商業(yè)購買元件，但用上述核酸合成方法也不難合成?？蛇x擇的標記基因元件編碼宿主細胞在選擇性培養(yǎng)基中存活和生長所必需的蛋白質。典型的選擇標記基因元件編碼的蛋白質能(a)賦予原核宿主細胞對抗生素或其它毒素的抗性，如氨卡青霉素、四環(huán)素或卡那霉素，(b)補充細胞的營養(yǎng)缺陷型缺乏；或(C)提供復合培養(yǎng)基沒有的關鍵營養(yǎng)物。優(yōu)選的可選擇標記是卡那霉素抗性基因、氨卡青霉素抗性基因和四環(huán)素抗性基因。一般稱為SD序列(Shine-Dalgamosequence)(原核生物)或Kozak序列(真核核生物)的核糖體結合元件對mRNA翻譯起始通常是必需的。該元件通常連接于啟動子的3'端和待合成的蛋白或肽編碼序列的5'端。SD序列不同但一般是聚嘌呤(即A-G含量高)。鑒定了許多SD序列，用上述方法不難合成各序列并可用于原核載體。在需要S05A肽從宿主細胞分泌的情況中，可使用信號序列指導肽到合成它的宿主細胞外，且可刪除蛋白質的羧基末端部分以防止膜錨定。通常，信號序列位于S05A肽基因或cDNA的編碼區(qū)域，或直接在S05A肽基因編碼區(qū)的5'末端。鑒定了許多信號序列，任何在所選宿主細胞中有功能的序列可與該肽的基因或cDNA結合使用。因此信號序列可與該肽的基因或cDNA同源或異源，且可與該肽的基因或cDNA同源或異源。另外，信號序列可用上述方法化學合成。在大部分情況中，通過信號肽的存在從宿主細胞分泌多肽會導致多肽的氨基末端甲硫氨酸中去除。在許多情況中，S05A肽基因或cDNA的轉錄可通過載體中存在一個或多個內含子來增加；當S05A肽在真核宿主細胞，特別是哺乳動物宿主細胞中產(chǎn)生時尤其如此。所用內含子可以是S05A肽基因中天然產(chǎn)生的，特別是當所用基因是全長基因組序列或其片段時。當內含子不在基因中天然產(chǎn)生時(對于大部分eDNAs)，內含子可獲自另一來源。由于內含子必須轉錄有效，內含子相對側翼序列和S05A肽基因的位置一般是重要的。同樣，當插入表達載體中的S05A肽基因是cDNA分子時，內含子的優(yōu)選位置是轉錄起始位點3'端和多A轉錄終止序列5'端。對于該肽的cDNA優(yōu)選的是，一個或多個內含子位于cDNA一側或另一側(即5'或3')從而使它不中斷此編碼序列。如果內含子與其插入的宿主細胞相容，任何來源的任何內含子可用于實踐本發(fā)明，來源包括任何病毒、原核和真核(植物或動物)生物。本文還包括合成內含子。任選地，在載體中可使用超過一個的內含子。當上述一個或多個元件不存在于待使用的載體中時，它們可單獨獲得并連接入載體。用于獲得各元件的方法是技術人員熟知的，且與上述方法(即合成DNA、文庫篩選等)相當。用于實踐本發(fā)明的最終載體可從起始載體，如商業(yè)購買的載體構建。這種載體可以包含或不包含包括在完整載體中的一些元件。如果沒有所需元件存在于起始載體中，可通過用合適的限制性內切酶切割載體使待接入的元件末端和載體末端對于連接是相容的，從而將各元件單獨連接入載體。在一些情況中，必須使要連接一起的末端成為"平端"以獲得滿意的連接。通過首先用KlenowDNA聚合酶或T4DNA聚合酶在所有四種核苷酸存在時填補"粘端"來獲得平端。此過程在本領域熟知，在例如Sambrook等(同上)中有所描述。另夕卜，待插入載體的兩個或多個元件可首先連接一起(如果它們的位置彼此相鄰)，隨后連接入載體。另一種構建載體的方法在一種反應混合物中同時進行多種元件的所有連接。這里，由于元件的不適當連接或插入產(chǎn)生許多無義和無功能載體，然而可通過限制性內切酶消化來鑒定和選擇功能性載體。實踐本發(fā)明的優(yōu)選載體是與細菌、昆蟲和哺乳動物宿主細胞相容的那些載體。這種載體包括pCRII、pCR3和pcDNA3.1(加州圣地亞哥英杰公司)InvitrogenCompany,SanDiego，Calif.))、pBSII(加州拉卓拉斯圖特基因公司(StratageneCompany,LaJolla，Calif.))、pET15b(威斯康星州麥迪遜諾弗根公司(Novagen，Madison,Wis.))、PGEX(新澤西州皮斯卡塔韋法瑪西亞生物技術公司(PharmaciaBiotech,Piscataway，N丄))、pEGFP-N2(加州帕洛阿托克隆技術有限公司(Clontech，PaloAlto，Calif.))、pETL(BlueBacII;英杰公司)和pFastBacDual(Gibco/BRL，紐約州格蘭特島(GrandIsland,N.Y.))。在載體構建和將編碼全長或截短的蛋白或肽的核酸分子插入載體的適當位點后，完整載體可插入合適的宿主細胞用于擴增和/或多肽表達。宿主細胞可以是原核宿主細胞(如大腸桿菌)或真核宿主細胞(如酵母細胞、昆蟲細胞或脊椎動物細胞)。當宿主細胞在合適條件下培養(yǎng)時，可合成蛋白或肽，該蛋白或肽隨后從培養(yǎng)基中(如果宿主細胞將其分泌到培養(yǎng)基中)或直接從生成它的宿主細胞(如果它不被分泌)中收集。收集后，S05A肽可用分子篩層析、親和層析等方法純化。選擇產(chǎn)生蛋白或肽的宿主細胞部分取決于該肽是否糖基化或磷酸化(該情況中優(yōu)選真核宿主細胞)、宿主細胞能將蛋白質折疊成其天然三級結構(如二硫橋的適當方向等)的方式從而通過具生物活性的肽制備生物活性蛋白質，合成后可用下面討論的合適化學條件折疊該肽。合適的細胞或細胞系可以是哺乳動物細胞，如中國倉鼠卵巢細胞(CHO)、人胚胎腎(HEK)293或293T細胞或3T3細胞。本領域已知選擇合適的哺乳動物宿主細胞和轉化、培養(yǎng)、擴增、篩選和產(chǎn)物生成及純化的方法。其它合適的哺乳動物細胞系是猴COS-l和COS-7細胞系及CV-1細胞系。其它示范性哺乳動物宿主細胞包括靈長類細胞系和嚙齒動物細胞系，包括轉化的細胞系。正常二倍體細胞、衍生自初級組織體外培養(yǎng)的細胞株以及原代外植體也是合適的。候選細胞可以是選擇基因中的遺傳型缺陷或可包含顯性開放選擇基因。其它合適的哺乳動物細胞系包括但不限于小鼠成神經(jīng)細胞瘤N2A細胞、海拉細胞、小鼠L-929細胞、衍生自Swiss、Balb-c或NIH小鼠的3T3系、BHK或HaK倉鼠細胞系。與適合于本發(fā)明的宿主細胞同樣有用的是細菌細胞。例如，多種大腸桿菌菌株(如HB101、DH5a、DH10和MC1061)是生物
技術領域：
中熟知的宿主細胞?？莶菅挎邨U菌(B.subtilis)、假單胞菌屬(Pseudomonasspp.)、其它芽孢桿菌屬(Bacillusspp.)、鏈霉菌屬(Streptomycesspp.)等的多種菌株可用于此方法。本領域技術人員已知的許多酵母細胞菌株也可作為表達本發(fā)明多肽的宿主細胞。另外，需要時昆蟲細胞系統(tǒng)可用于本發(fā)明的方法。在例如Kitts等(Biotechniques，14:810-817)、Lucklow(Curr.Opin.Biotechnol.，4:564-572)和Lucklow等(J.Virol.，67:4566-4579)中已描述了這種系統(tǒng)。優(yōu)選的昆蟲細胞是Sf-9和Hi5(加州卡爾斯拜德英杰公司(Invitrogen，Carlsbad,Calif.))。插入(也稱為轉化或轉染)載體到所選宿主細胞中可用例如氯化鈣、電穿孔、顯微注射、脂轉染或DEAE-葡聚糖方法等方法實現(xiàn)。選擇的方法部分是待使用宿主細胞類型的功能。這些方法和其它合適方法是技術人員熟知的，見諸例如Sambrook等，同上。含載體(即轉化的或轉染的)的宿主細胞可用技術人員熟知的標準培養(yǎng)基培養(yǎng)。培養(yǎng)基通常包含所有細胞生長和存活必需的營養(yǎng)物。培養(yǎng)大腸桿菌細胞的合適培養(yǎng)基是例如LuriaBroth(LB)和/或TerrificBroth(TB)。培養(yǎng)真核細胞的合適培養(yǎng)基是RPMI1640、MEM、DMEM，它們都可添加血清和/或培養(yǎng)特定細胞系所需的生長因子。培養(yǎng)昆蟲(細胞)的合適培養(yǎng)基是Grace培養(yǎng)基，其視需要添加有必需的酵母提取物(yeastolate)、乳白蛋白水解產(chǎn)物和/或胎牛血清。通常，抗生素或其它僅用于選擇性生長轉化細胞的化合物作為添加物加入培養(yǎng)基。待使用化合物由轉化宿主細胞的質粒上存在的可選擇標記元件決定。例如，當可選擇標記元件是卡那霉素抗性時，加入培養(yǎng)基的化合物是卡那霉素。宿主細胞中產(chǎn)生的S05A肽的量可用本領域已知的標準方法評估。這種方法包括但不限于蛋白質印跡分析、SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳、非變性凝膠電泳、HPLC分離、質譜、免疫沉淀和/或活性試驗如DNA結合凝膠移位試驗。如果蛋白或肽設計為從宿主細胞中分泌，大部分蛋白或肽可在細胞培養(yǎng)基中發(fā)現(xiàn)。以此方法制備的蛋白質通常不具有氨基末端甲硫氨酸，因為它從細胞中分泌時被去除。然而如果蛋白或肽不從宿主細胞中分泌，它會存在于細胞質和/或核中(真核宿主細胞)或在細胞溶質中(革蘭氏陰性菌宿主細胞)，且可具有氨基末端甲硫氨酸。就位于宿主細胞細胞質和/或核中的S05A肽而言，通常首先通過機械方式或用去垢劑破碎宿主細胞以釋放胞內成分到緩沖溶液中。然后可從此溶液中分離該肽。從溶液中純化S05A肽可用多種技術完成。如果合成的蛋白質含標簽如六組氨酸(例如肽/六組氨酸)或其它小肽如FLAG(密歇根州圣路易斯西格瑪公司(Sigma-Aldritch，StLouis,MI))或在其羧基或氨基末端含有鈣調蛋白-結合肽(加州拉卓拉斯圖特基因公司)，基本上可通過一步方法使溶液穿過親和柱來純化，其中柱基質對標簽或直接對蛋白質有高親和性(即特異識別該肽的單克隆抗體)。例如，多組氨酸以高親和性和特異性結合鎳、鋅及鈷；因而使用鎳親和樹月旨(如用于恰根公司(Qiagene)的QIAexpress系統(tǒng)或英杰公司的Xpress系統(tǒng))或鈷親和樹脂(如用于BDBiosciences-CLONTECH的Talon系統(tǒng))的固定金屬離子親和層析可用于純化肽/多組氨酸。(參見例如，Ausubel等編的《新編分子生物學實驗指南》第10.11.8章，約翰威利父子公司(JohnWiley&Sons),紐約)。當制備的S05A肽未結合標簽且無抗體可用時，可使用其它熟知的純化方法。這些方法包括但不限于離子交換層析、羥磷灰石層析、疏水作用層析、分子篩層析、HPLC、結合凝膠洗脫的天然凝膠電泳以及制備型等電聚焦(Isoprime機器/技術，侯弗科技公司(HoeferScientific))。一些情況下，可將這些技術中的兩種或多種組合以得到較高純度。如果預期S05A肽主要發(fā)現(xiàn)于胞內，可用技術人員已知的任何標準技術從宿主細胞中提取胞內物質(包括革蘭氏陰性菌的包含體)。例如可通過弗氏壓碎器、勻槳化和/或超聲處理，然后離心來裂解宿主細胞以釋放周質/細胞質的內含物。如果該肽在細胞溶質中形成包含體，包含體通?？山Y合內和/或外細胞膜，因此離心后主要在沉淀物質中發(fā)現(xiàn)。然后可在極端pH或在有還原劑，如堿性pH的二硫蘇糖醇或酸性pH的三羧乙基膦存在下用離液劑如去垢劑、胍、胍衍生物、尿素或尿素衍生物處理沉淀物質以釋放、斷裂和溶解包含體。然后可用凝膠電泳、免疫沉淀等分析目前處于可溶形式的肽。如果需要分離該肽，可用標準方法完成分離，如下文和Marston等(Meth.Enz.，182:264-275)列出的方法。在一些情況中，S05A肽分離后可以沒有生物活性?？刹捎迷僬郫B或將多肽轉化成其三級結構并產(chǎn)生二硫鍵的多種方法恢復生物活性。這些方法包括使溶解的多肽暴露于通常高于7的pH中且存在特定濃度的離液劑。離液劑的選擇非常類似于用于溶解包含體的選擇，但通常濃度較低且未必是溶解所用的相同離液劑。在大部分情況中，再折疊/氧化溶液也包含還原劑或特定比例的還原劑加其氧化形式，以產(chǎn)生成特定氧化還原電勢使二硫化物改組形成蛋白質的半胱氨酸橋。一些常用的氧化還原對包括半胱氨酸/胱胺、谷胱甘肽(GSH)/二硫雙GSH(d他iobisGSH)、氯化銅、二硫蘇糖醇(DTT)/二噻烷DTT、2-巰基乙醇(bME)/二硫-b(ME)。在許多情況中，需要共溶劑提高再折疊的效率，用于此目的更多常規(guī)試劑包括甘油、不同分子量的聚乙二醇和精氨酸。如果宿主細胞中不形成顯著程度的S05A肽包含體，細胞勻漿離心后發(fā)現(xiàn)S05A肽主要位于上清液中，S05A肽可用下列方法從上清液中分離。在優(yōu)選部分或完全分離S05A肽的情況中，可用技術人員熟知的標準方法完成純化。這些方法包括但不限于電泳分離，接著電洗脫、各種類型的層析(免疫親和、分子篩和/或離子交換)、和/或高壓液相層析。在一些情況中，優(yōu)選使用超過一種的這些方法來完全純化。除了用重組DNA技術制備和純化S05A肽，S05A肽和它們的片段、變體、同源物、融合蛋白、肽模擬物和衍生物可使用本領域已知技術通過化學合成方法制備(如固相肽合成)，例如Merrifield等(J.Am.Chem.Soc,，85:2149)、Houghten等(Proc.Natl.Acad.Sci.USA,85:5132)、Stewart和Young(《固相肽合成》(SolidPhasePeptideSynthesis),伊利諾斯州羅克福德皮爾斯化學制品公司(PierceChemicalCo.，Rockford，IL))中所述?？梢院铣稍诎被┒擞谢驔]有甲硫氨酸的這種肽?；瘜W合成的S05A肽可用參考文獻所列方法氧化以形成二硫橋。預期S05A肽具有可與重組產(chǎn)生或純化自天然來源的肽相當?shù)纳锘钚?，因此可與重組或天然肽交換使用。其中肽與聚合物相連的化學修飾S05A肽組合物包括在本發(fā)明范圍內。所選聚合物通?？扇苡谒畯亩沟门c它結合的蛋白質不會在水性環(huán)境，如生理環(huán)境中沉淀。所選聚合物通常被修飾以具有單個反應基團如用于?；幕钚怎セ蛴糜谕榛娜?，從而可如本方法所提供的控制聚合程度。聚合物可以是任何分子量，可以是分支或未分支。包括在肽聚合物范圍中的是聚合物的混合物。在一些情況中，需要制備天然產(chǎn)生S05A肽的核酸和/或氨基酸變體。核酸變體可用定點誘變、PCR擴增或其它合適方法產(chǎn)生，其中引物有所需點突變(誘變技術的描述參見Sambrook等，同上，Ausubel等，同上)。使用Engels等(同上)所述的化學合成方法也可用于制備這種變體。其它技術人員已知的方法也可使用。優(yōu)選的核酸變體是包含在產(chǎn)生S05A肽的宿主細胞中導致密碼子偏好的核苷酸取代的那些核酸。這種"密碼子最優(yōu)化"可通過計算機算法確定，所述算法結合密碼子頻率表如"Ecohigh.Cod"作為高度表達細菌基因的密碼子偏好，例如威斯康星州麥迪遜市威斯康星州立大學9.0版本軟件包，遺傳學計算機組提供。其它有用的密碼子頻率表包括"Celegans—high.cod"、"Celegans一low.cod"、"Drosophila—high.cod，，、"Human—high.cod"、"Maize—high.cod"和"YeastJiigh.cod"。其它優(yōu)選變體是編碼與野生型相比上述保守性氨基酸變化(如其中天然產(chǎn)生氨基酸側鏈的電荷或極性不因用不同氨基酸的取代而顯著改變)的變體、和/或設計為產(chǎn)生新的糖基化和/或磷酸化位點的變體、或設計為刪除現(xiàn)存糖基化和/或磷酸化位點的變體。S05A肽及其片段、同源物、變體、融合蛋白、肽模擬物、衍生物和鹽可用技術人員已知的常規(guī)肽合成技術產(chǎn)生。這些技術包括化學偶聯(lián)方法(參見Wunch，E:"有機化學方法"(MethodenderorganischenChemie)，第15巻，1+2區(qū)，"肽合成"(SynthesevonPeptiden)，thimeVerlag，斯圖加特(Stuttgart)(1974)禾口Barrany，G.;Marrifield，R.B.:"肽"(ThePeptides),E.Gross,J.Meienhofer編，第2巻，第1章，1-284頁，學術出版社(1980))、酶偶聯(lián)方法(參見Widmer，F(xiàn).Johansen，J.T.，CarlsvergRes.Commun.，第44巻，37-46頁(1979)和Kullmann,W.:"酶肽合成"(EnzymaticPeptideSynthesis),CRC出版社公司(CRCPressInc.),BocaRaton，F(xiàn)la.(1987)和Widmer，F(xiàn).，Johansen，J.T.，"生物和醫(yī)學中的合成月太"(SyntheticPeptidesinBiologyandMedicines),Alitalo，K.，Partanen，P.，Vatieri，A.編，79-86頁，Elsevier,Amsterdam(1985))、或化學和酶方法的組合，如果這對于方法設計和經(jīng)濟有優(yōu)勢。使用本文提供的指南和教導，本領域技術人員能改變S05A肽的肽序列以產(chǎn)生具有與原始或天然S05A肽相同或類似生物活性的同源物。使用給定的S05A肽的模擬物而不是該肽本身具有優(yōu)點。通常，與蛋白質和肽相比，肽模擬物的生物利用度更高，作用時間更長且生產(chǎn)成本更低。因此，上述肽可用于開發(fā)具有類似生物活性從而具有類似治療作用的小化學化合物。可使用組合化學技術和本領域已知的其它技術開發(fā)S05A肽的肽模擬物(參見例如《第20屆歐洲肽專題討論會記錄》(Proceedingsofthe20thEuropeanPeptideSymposium),G.Jung，E.Bayer編，289-336頁，和其中的參考文獻)。結構上修飾肽以產(chǎn)生肽模擬物的本領域已知方法的例子包括倒置主鏈手性中心產(chǎn)生D-氨基酸殘基結構，具體是在N-末端，從而增強了蛋白酶降解穩(wěn)定性而沒有不利地影響活性。在論文"含氚D-丙氨酸L肽T結合"(TritriatedD-ala.sup.l-PeptideTBinding),SmithC.S.等，DrugDevelopmentRes.，15，371-379頁(1988)中給出了一個例子。第二種方法是改變穩(wěn)定性所需的環(huán)狀結構，如N到C鏈間的二酰亞胺和內酰胺(Ede等，Sm他和Rivier編，《肽化學和生物學》(Peptides:ChemistryandBiology),Escom，Leiden，1991，268-270頁)。例子見構型限制的胸腺五肽樣化合物，如美國專利號4,457,489(1985)，Goldstein,G.等所公開的那樣，其內容全部納入本文供參考。第三種方法是用能賦予蛋白水解抗性的假肽鍵替換S05A肽中的肽鍵。一般不影響肽的結構和生物活性的許多假肽鍵已見諸描述。此方法的一個例子是取代逆反假肽鍵("胸腺五肽的生物活性逆反同源物"(Biologicallyactiveretroinversoanaloguesofthymopentin)，SistoA等，Rivier,J.E.禾卩Marshall,G.R.編，"肽、化學、結構和生物學"(Peptides,Chemistry,StructureandBiology),Escom，Leiden,1990，722-773頁)禾卩Dalpozzo等(1993)，Int.J.PeptideProteinRes.，41:561-566，納入本文供參考)。根據(jù)此修飾，肽的氨基酸序列可能與上述肽的序列相同，除了一個或多個肽鍵被逆反假肽鍵所取代。優(yōu)選大部分N-末端肽鍵被取代，因為這種取代是通過外肽酶作用于N-末端而能賦予蛋白水解抗性。合成具一個或多個還原型逆反假肽鍵的肽在本領域已知(Sisto(1990)和Dalpozzo等(1993)，上面所引用)。因此肽鍵可用非肽鍵替代使肽模擬物獲得與原始肽相似的結構，從而生物活性相似。也可用其它類似結構的化學基團替代氨基酸的化學基團作進一步修飾。另一種已知可提高對酶切割的穩(wěn)定性而生物活性沒有或很少損失的合適假肽鍵是還原型等構物假肽鍵(Couder等(1993)，Int.J.PeptideProteinRes.，41:181-184，全部納入本文供參考)。因此，這些肽的氨基酸序列可能與某肽的序列相同，除了一個或多個肽鍵被等構物假肽鍵替代外。優(yōu)選大部分N-末端肽鍵被取代，因為這種取代是通過外肽酶作用于N-末端而能賦予蛋白水解抗性。合成具有一個或多個還原型等構物假肽鍵的肽是本領域已知的(Couder等，上面所引用)。另一個例子包括導入酮亞甲基鍵或甲基硫化物鍵來替代肽鍵。S05A肽的擬肽衍生物代表了另一類肽模擬物，擬肽保留了生物活性的重要結構決定簇，但去除肽鍵，從而賦予對蛋白水解的抗性(Simon等，1992，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89:9367-9371，全部納入本文供參考)。擬肽是N-取代的甘氨酸的寡聚物。已報道了一些N-垸基基團，各對應于天然氨基酸的側鏈(Simon等，1992，上面所引用)。該肽的一些或所有氨基酸用對應于替代氨基酸的N-取代甘氨酸替代?？赏ㄟ^NMR光譜學、結晶學和/或計算機-輔助的分子建模確定原始肽的三級結構來協(xié)助開發(fā)肽模擬物。這些技術幫助開發(fā)具有與原始肽相比效力更高禾口/或生物利用率更高和/或穩(wěn)定性更高的新組合物(Dean(1994)，BioEssays，16:683-687;Cohen和Shatzmiller(1993)，J.Mol.Graph.，11:166-173;Wiley和Rich(1993)，Med.Res.Rev.，13:327-384;Moore(1994),TrendsPharmacol.Sci.，15:124-129;Hruby(簡)，Biopolymers.，33:1073-1082;Bugg等(1993)Sci.Am.，269:92-98，全部納入本文供參考)。一旦一種潛在的肽模擬物化合物被鑒定，它可以用下面例子中概括的方法合成和分析以評估其活性。用上述方法獲得的具有肽的生物活性和類似三維結構的肽模擬化合物屬于本發(fā)明范圍。對于本領域技術人員顯而易見的是，肽模擬物可從攜帶一種或多種上述修飾的任何肽中產(chǎn)生。更顯然的是，本發(fā)明的肽模擬物除了作為治療化合物的效用，可進一步用于開發(fā)更有效的非肽化合物。今天許多機構都能夠合成本文所述的肽。例如，獲得一種S05A肽的序列，這些機構就能合成肽并提供合成的肽以及肽身份的隨附文件和證據(jù)。本發(fā)明還包括使用S05A肽和它們相應的核酸分子用于試驗，以定性或定量測試哺乳動物組織或體液樣品中是否存在S05A肽、S05A肽DNA、或相應RNA。S05A肽和它們相應的核酸分子可用于這些試驗的準備，無論該肽或者該肽的編碼DNA是否顯示生物活性。S05A肽核酸序列可作為有用的雜交探針源以定性或定量測試哺乳動物組織或體液樣品中是否存在該肽的DNA或相應RNA。本身不具生物活性的S05A肽核酸序列可用來制備識別和/或結合S05A肽的抗體。這種抗體可用標準方法制備。因此，與S05A肽反應或結合的抗體以及這種抗體的短鏈抗體片段和其它反應片段也屬于本發(fā)明范圍?？贵w可以是多克隆、單克隆、重組、嵌合、單鏈和/或雙特異性的。通常，抗體或其片段是人來源或"人源化"，即制備成在給予患者時能防止或盡可能降低對抗體的免疫反應。優(yōu)選的抗體是人抗體，無論多克隆或單克隆?？贵w片段可以是與本發(fā)明的肽反應的任何片段，如Fab、Fab'等。本發(fā)明也提供了雜交瘤，它是通過將任何S05A肽作為抗原呈遞給所選哺乳動物，接著用已知技術融合哺乳動物的細胞(如脾細胞)和某些癌細胞以產(chǎn)生無限增殖化細胞系而產(chǎn)生的。產(chǎn)生這種細胞系和抗所有或部分S05A的抗體的方法也屬于本發(fā)明范圍?？贵w還可用于體內和體外診斷或研究目的，如以標記形式來檢測體液或細胞樣品中是否存在S05A肽。本發(fā)明也包括一種或多種S05A肽在試驗中作為校驗標準品的應用，所述試驗定性或定量測試哺乳動物組織或體液樣品中是否存在S05A肽、蛋白、肽DNA、蛋白質DNA或相應的RNA。本發(fā)明涉及治療需要除去細胞的病癥的方法，如良性或惡性腫瘤、腺(如前列腺)增生、不需要的面部毛發(fā)、疣和不需要的脂肪組織，或抑制或防止不需要的細胞增殖，如支架(stent)的再狹窄。這種方法包括將治療有效量的S05A肽給予有此需要的哺乳動物，或用于涂布例如支架等裝置。所述病癥可以是，例如，肺、乳腺、胃、胰、前列腺、膀胱、骨、卵巢、皮膚、腎、竇、結腸、腸、胃、直腸、食道、血液、大腦和其覆蓋物、脊髓和其覆蓋物、肌肉、結締組織、腎上腺、副甲狀腺、甲狀腺、子宮、睪丸、垂體、生殖器官、肝臟、膽囊、眼、耳、鼻、喉、扁桃腺、口、淋巴結和淋巴系統(tǒng)及其它器官的腫瘤。如本文所用，術語"惡性腫瘤"包括人類癌、肉瘤和黑素瘤的所有形式，它們以低度分化、適度分化、高度分化的形式出現(xiàn)。本發(fā)明滿足本領域對于除去良性腫瘤而風險較低和手術的不良副作用較少的治療需要。特別需要去除手術危險區(qū)如體內深部(例如腦、心臟、肺等)良性腫瘤的方法。治療必須除去細胞的病癥的方法可與治療這些病癥的常規(guī)方法，如手術切除、化療和放療結合使用。肽可在這些常規(guī)治療之前、期間或之后施用。待治療的病癥也可以是組織增生、肥大或過度生長，所述組織選自肺、乳房、胃、胰、前列腺、膀胱、骨、卵巢、皮膚、腎、竇、結腸、腸、胃、直腸、食道、血液、大腦和其覆蓋物、脊髓和其覆蓋物、肌肉、結締組織、腎上腺、副甲狀腺、甲狀腺、子宮、睪丸、垂體、生殖器官、肝臟、膽囊、眼、耳、鼻、喉、扁桃腺、口、以及淋巴結和淋巴系統(tǒng)?？捎帽景l(fā)明方法治療的其它病癥包括但不限于病毒、細菌或寄生蟲改變的組織，所述組織選自肺、乳房、胃、胰、前列腺、膀胱、骨、卵巢、皮膚、腎、竇、結腸、腸、胃、直腸、食道、血液、大腦和其覆蓋物、脊髓和其覆蓋物、肌肉、結締組織、腎上腺、副甲狀腺、甲狀腺、子宮、睪丸、垂體、生殖器官、肝臟、膽囊、眼、耳、鼻、喉、扁桃腺、口、以及淋巴結和淋巴系統(tǒng)。待治療的病癥也可以是組織畸形或異常，所述組織選自肺、乳房、胃、胰、前列腺、膀胱、骨、卵巢、皮膚、腎、竇、結腸、腸、胃、直腸、食道、血液、大腦和其覆蓋物、脊髓和其覆蓋物、肌肉、結締組織、腎上腺、副甲狀腺、甲狀腺、子宮、睪丸、垂體、生殖器官、肝臟、膽囊、眼、耳、鼻、喉、扁桃腺、口、以及淋巴結和淋巴系統(tǒng)。具體是，待治療的病癥可以是扁桃體肥大、前列腺增生、銀屑病、濕疹、皮膚病或痔。待治療的病癥可以是血管病如動脈粥樣硬化或動脈硬化，或者是血管病如靜脈曲張、動脈或支架的狹窄或重狹窄。待治療的病癥也可以是例如皮膚、眼、耳、鼻、喉、口、肌肉、結締組織、毛發(fā)或乳房組織等組織的美容修飾。S05A肽的治療組合物屬于本發(fā)明范圍。這種組合物可包括與藥學上可接受載體混合的治療有效量的S05A肽。載體物質可以是注射用水，優(yōu)選添加溶液中常用的其它物質以施用給哺乳動物。通常，用于治療的S05A肽以組合物形式使用，組合物包括純化的肽結合一種或多種生理上可接受載體、賦形劑或稀釋劑。中性緩沖鹽水或與血清白蛋白混合的鹽水是適當載體的范例。優(yōu)選地，產(chǎn)物用合適賦形劑(如蔗糖)制成凍干物。如果需要可包括其它標準載體、稀釋劑和賦形劑。組合物包括此領域的一般技術人員已知的pH值范圍合適的緩沖液，包括約pH7.0-8.5的Tris緩沖液、或約pH4.0-5.5的乙酸緩沖液，緩沖液可進一步包括山梨醇或其合適的替代物。采用偶聯(lián)或連接或結合于抗體、抗體片段、抗體樣分子或對特異性腫瘤標記，如細胞受體、信號肽或過度表達的酶有高親和性的分子的S05A肽來耙向不需要的細胞元件也屬于本發(fā)明范圍。抗體、抗體片段、抗體樣分子或對特異性腫瘤標記有高親和性的分子用于將所述肽偶聯(lián)物靶向特定細胞或組織。例如，有特殊表面抗原或表達抗原的腫瘤可由抗體、抗體片段、抗體樣結合分子耙向且腫瘤細胞可被該肽殺死。這種使用抗體靶向的方法的優(yōu)點是降低劑量、提高結合和被耙細胞攝入的可能性、提高靶向和治療轉移性腫瘤和微觀大小腫瘤的效率。本發(fā)明也包括采用偶聯(lián)或連接或結合于蛋白質或其它分子的S05A肽以形成組合物，通過腫瘤-特異性或位點-特異性酶或蛋白酶或者通過靶向腫瘤或其它不需要的細胞的抗體偶聯(lián)物在腫瘤或其它不需要的細胞位置或者附近切割后能在腫瘤或其它不需要的細胞的位置或附近釋放該肽。本發(fā)明也包括使用偶聯(lián)或連接或結合于蛋白質或其它分子的S05A肽以形成組合物，在待治療組織暴露于光(如激光療法或其它光動力學或光活化療法)、其它形式電磁輻射，例如紅外線輻射、紫外線輻射、x射線或Y射線輻射、局部加熱、a或p輻射、超聲波射線或其它局部能量源后，組合物釋放該肽或該肽的一些生物活性片段。S05A肽可單獨、一起或結合其它藥物組合物使用，如適合于所治療適應癥的細胞因子、生長因子、抗生素、細胞凋亡誘導劑、抗炎癥和/或化療劑。本發(fā)明也包括使用樹狀聚體、富勒烯和其它合成分子、聚合物及大分子的S05A組合物，其中所述肽和/或其相應DNA分子通過其本身或與其它種類分子如腫瘤特異性標記一起，與上述分子、聚合物或大分子偶聯(lián)、結合或包含于其中。例如，美國專利號5,714,166《生物活性和/或靶向的樹狀聚體偶聯(lián)物》(Bioactiveand/orTargetedDendrimerConjugates)提供了制備和使用樹狀聚合物偶聯(lián)物的方法，該偶聯(lián)物包括至少一個樹狀聚體和導耙物以及至少一種與之偶聯(lián)的生物活性劑。美國專利5,714,166公開的內容總體納入本文以供參考。本發(fā)明也包括S05A和/或基因及藥物傳遞載體的治療組合物，所述載體如脂質乳劑、膠束聚合物、聚合物微球、電活化聚合物、水凝膠和脂質體。使用轉移到不需要細胞的S05A或相關基因或基因同等物也屬于發(fā)明范圍。腫瘤內過度表達肽可用于誘導腫瘤中的細胞死亡，因而減少腫瘤細胞群?；蚧蚧蛲任镛D移S05A以治療不需要的細胞元件，預計其優(yōu)點是所需劑量更少、被傳遞到靶細胞元件的細胞后代上從而使治療頻率更低、以及總體治療更少。本發(fā)明也包括將編碼含S05A的融合蛋白的基因轉移到不需要的細胞或其鄰近細胞，表達基因及產(chǎn)生和/或分泌融合蛋白后，融合蛋白由天然酶或蛋白酶或者前體藥物切割以釋放該肽到不需要的細胞或附近。使用克隆的重組肽-抗體偶聯(lián)物；克隆的重組肽-抗體片段偶聯(lián)物；克隆的重組肽-抗體樣蛋白偶聯(lián)物也屬于發(fā)明范圍。除了制造和標準化生產(chǎn)克隆的結合分子的優(yōu)點，克隆的S05A肽結合靶向偶聯(lián)物(如抗體、抗體片段、抗體樣分子或者對癌特異性受體或其它腫瘤標記有高親和性的分子)的優(yōu)點是這種分子組合上述的耙向優(yōu)點。本發(fā)明還包括采用S05A肽或基因或基因等價物的治療組合物作為包被醫(yī)療裝置如支架的成分，以消除、抑制或預防不良細胞增殖或累積?？诜┯玫墓腆w劑形包括但不限于膠囊、片劑、藥丸、粉末和顆粒。在這種固體劑量形式中，活性化合物與至少一種下列物質混合(a)—種或多種惰性賦形劑(或載體)，如檸檬酸鈉或磷酸二鈣；(b)填充劑或膨脹劑，如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；(c)粘合劑，如羧甲基纖維素、藻酸鹽、明膠、聚乙烯吡咯垸酮、蔗糖和阿拉伯樹膠；(d)保濕劑，如甘油；(e)崩解劑，如瓊脂-瓊脂、碳酸鈣、馬鈴薯或木薯淀粉、海藻酸、某些復合硅酸鹽和碳酸鈉；(f)溶液緩聚劑，如石蠟；(g)吸收加速劑，如季銨化合物；(h)潤濕劑，如乙酰醇和甘油單硬脂酸酯；(i)吸收劑，如高嶺土和膨潤土；(i)滑潤劑，如滑石粉、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、固體聚乙二醇、月桂基硫酸鈉和它們的混合物。就膠囊、片劑、藥丸而言，劑形也可包含緩沖劑。口服施用的液體劑形包括藥學上可接受乳劑、溶液、懸浮液、糖漿和酏劑。除了活性化合物，液體劑形可包含本領域常用的惰性稀釋劑如水或其它溶劑、增溶劑和乳化劑。乳化劑范例是乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、芐醇、苯甲酸芐酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺，油如棉子油、花生油、玉米胚芽油、橄欖油、蓖麻油和芝麻油，甘油、四氫糠醇、聚乙二醇、山梨聚糖的脂肪酸酯或這些物質的混合物等。除了這種惰性稀釋劑，組合物也可包含佐劑，如潤濕劑、乳化劑和懸浮劑、甜味劑、調味劑和香味劑。就具體組合物和施用方法而言，可改變發(fā)明組合物中活性成分的實際劑量水平以獲得能有效獲得所需治療反應的S05A肽量。因此選擇劑量水平取決于所需治療效果、施用途徑、所需治療的持續(xù)時間以及其它因素?？筛鶕?jù)體表面積給予哺乳動物包括人的有效量。用于不同大小、種類的動物和人的劑量相互關系(根據(jù)mg/體表的M2)描述于E.J.Freireich等，CancerChemother.Rep.，50(4):219(1966)。體表面積可從個體高度和重量大致確定(參見例如《科學表》(ScientificTables),吉格藥物公司(GeigyPharmaceuticals),阿德斯雷(Ardsley)，紐約537-538頁(1970))。施用給宿主的S05A肽的每天總劑量可以是單一或分開的劑量。劑量單位組合物包含構成每天劑量的用量的幾分之一。然而應該知道，任何具體病人的特定劑量水平取決于多種因素，包括體重、整體健康、性別、飲食、施用時間和途徑、施用藥物的效力、吸收和排泄的比例、與其它藥物的組合以及治療的具體病癥的嚴重性。根據(jù)本發(fā)明施用S05A肽組合物的方法包括但不限于肌內、經(jīng)口、靜脈內、腹膜內、大腦內(實質內)、腦室內、腫瘤內、病灶內、真皮內、鞘內、鼻內、眼內、動脈內、局部、透皮、通過氣霧劑、輸注、推注、移植裝置、緩釋系統(tǒng)等施用化合物。另一種施用發(fā)明S05A肽的方法是經(jīng)皮或透皮途徑。這種實施方案的一個例子是使用貼片。具體是，可在例如二甲亞砜(DMSO)或DMSO與棉子油的混合物中用肽的精細懸浮液制備貼片，使之接觸攜帶腫瘤的哺乳動物皮膚而遠離皮膚囊(pouch)內腫瘤定位部位。含其它溶劑和固體支持物的其它介質或其混合物也可同樣起作用。貼片可包含溶液或懸浮液形式的肽化合物。然后可將貼片應用于病人皮膚，例如將它插入借助針、夾子或其它夾持裝置將皮膚折疊和夾持在一起而形成的病人皮膚囊中。應確保囊與皮膚連續(xù)接觸而不受哺乳動物干擾。除了使用皮膚囊，可使用任何能保證將貼片牢固放置而與皮膚接觸的裝置。例如，可用粘附繃帶將貼片夾持在皮膚上。S05A肽可在緩釋制劑或制品中施用。緩釋制品的合適例子包括成形物品形式的半透性聚合物基質，如薄膜或微膠囊。緩釋基質包括聚酯、水凝膠、聚交酯(美國3,773,919、EP58，481)、L-谷氨酸和Y乙基-L-谷氨酰胺的共聚物(Sidman等，Biopolymers，22:547-556)、聚(2-羥乙基-甲基丙烯酸酉旨)(Langer等，J.Biomed.Mater.Res.，15:167-277和Langer等，Chem.Tech.，12:98-105)、乙烯乙酸乙烯酯(Langer等，同上)或聚-D(-)-3-羥基丁酸(EP133,988)。緩釋組合物也可包括脂質體，可由任何本領域已知的一些方法來制備(如Eppstein等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，82:3688-3692;EP36,676;EP88,046;EP143,949)。另一種施用本發(fā)明S05A肽的方法是使S05A肽直接或間接輸注到待治療的腫瘤或其它組織。這種實施方案的一個例子是直接注射肽到待治療的腫瘤或其它組織。治療可由單次注射、一段時間多次注射或在幾小時、幾天或幾個月期間內的一系列注射組成，通過活組織檢查、成像或其它監(jiān)控組織生長的方法監(jiān)控待治療腫瘤或其它組織的消退或破壞。注射入待治療的腫瘤或其它組織可通過插入孔，如鼻、口、耳、陰道、直腸或尿道中的裝置或經(jīng)切口到達體內的腫瘤或組織，并且可結合成像或光學系統(tǒng)如超聲波或纖維光鏡進行以確定注射的合適部位。這種實施方案的另一個例子是使用可使S05A肽恒定輸注組織的裝置。施用本發(fā)明S05A肽的另一種方法是結合手術或與物理切除、剝除或者殺死或破壞腫瘤或需要或希望除去或破壞其它組織或細胞元件所用相類似的過程，其中本發(fā)明的S05A肽施用給圍繞除去腫瘤或組織的區(qū)域的緊鄰區(qū)域，從而破壞或阻止未被該過程除去或破壞的任何腫瘤細胞或其它細胞元件的生長。施用本發(fā)明S05A肽的另一種方法是將某裝置移植到待治療的腫瘤或其它組織中。這種實施方案的一個例子是將含肽的薄片移植到待治療的腫瘤或其它組織中。薄片隨時間的推移將治療劑量的肽釋放到組織中。另外，可通過將吸收了S05A肽的膜、海綿或其它合適物質移植到受影響區(qū)域中而局部施用組合物。如果使用移植裝置，可將該裝置移植到任何合適的組織或器官，遞送肽可以是直接通過裝置，經(jīng)推注或經(jīng)連續(xù)施用或經(jīng)導管采用連續(xù)輸注。另一種施用方法是將一個或多個拷貝的S05A肽-編碼基因導入靶向的細胞，如果必要，誘導多拷貝的基因開始胞內產(chǎn)生肽。一種可應用基因治療的方式是使用S05A肽-編碼基因(基因組DNA、cDNA和/或編碼該肽(或其片段、變體、同源物或衍生物)的合成DNA),它可操作連接于組成型或可誘導啟動子以形成"基因治療DNA構建物"。如果啟動子在構建物插入的細胞或組織類型中具有活性，它可與內源性肽-編碼基因同源或異源。如果需要，基因治療DNA構建物的其它成分可任選地包括設計用于位點特異性整合的DNA分子(如用于同源重組的內源性側翼序列)，組織特異性啟動子、一個或多個增強子或一個或多個沉默子，能提供勝過親代細胞的選擇性優(yōu)勢的DNA分子、用于標記以鑒定轉化細胞的DNA分子、陰性選擇系統(tǒng)、細胞特異結合劑(例如用于細胞靶向)細胞特異性內在化因子、增強載體表達的轉錄因子以及能使載體生產(chǎn)的因子。體內或離體遞送基因到細胞或組織中的方法包括(但不限于)直接注射裸露DNA、彈道法(ballisticmethod)、脂質體介導的轉移、受體介導的轉移(配體-DNA復合體)、電穿孔和磷酸鈣沉淀，參見美國專利號4,970,154、WO96/40958、美國專利號5,679,559、美國專利號5,676,954和美國專利號5,593,875，各自的內容全部納入本文供參考。還包括采用病毒載體，如逆轉錄病毒、腺病毒、腺相關病毒、痘病毒、慢病毒、乳頭瘤病毒或單純皰疹病毒，采用DNA-蛋白偶聯(lián)物和采用脂質體。已報道了基因治療載體的應用，見美國專利5,672,344;5，399，346;5,631,236和5,635,399。這些專利各自的內容整體引入以供參考。可通過移植將S05A肽-編碼基因遞送到某些患者細胞中，細胞使用本文所述方法離體遺傳工程改造以表達和分泌S05A肽或其片段、變體、同源物或衍生物。這種細胞可以是動物或人細胞，可獲得自病人自身組織或來自人或非人的另一來源。任選地，細胞可以是無限增殖化或干細胞。然而為減少免疫應答的可能性，優(yōu)選將細胞包囊以防止周圍組織的滲透。包囊物質一般是生物相容的半透性聚合封閉物或膜，它們能使蛋白產(chǎn)物釋放但防止病人免疫系統(tǒng)或來自周圍組織的其它有害因素破壞細胞。用于膜包囊細胞的方法是技術人員所熟悉的，可制備包囊的細胞并移植到病人中而不需要過度的實驗。參見例如美國專利號4,892,538;5,001,472和5,106,627，它們公布的內容全部納入本文供參考。包囊活細胞的系統(tǒng)描述于PCTWO91/10425。制成多種其它持續(xù)或受控遞送方式的技術是本領域技術人員已知的，如脂質體載體、生物可侵蝕的顆?；蛑?，這些技術描述于例如美國專利號5,653,975，其內容全部納入本文供參考。有或沒有包囊的細胞可移植到病人的適當身體組織或器官中。治療需要除去或破壞細胞的病癥的方法的特別優(yōu)選實施方式中是給予一種或多種本發(fā)明肽，所述需要除去或破壞的細胞在這里是淋巴組織。其他優(yōu)選實施方式包括治療需要除去或破壞細胞的病癥，如任何一種單獨或組合選自下組的病癥扁桃體肥大、前列腺增生、血管病(動脈粥樣硬化或動脈硬化)、痔、靜脈曲張、銀屑病、濕疹、皮膚病、以及組織的美容修飾。其他可治療的病癥包括動脈或放置在或植入動脈內的支架的狹窄、再狹窄、封閉或堵塞。在優(yōu)選實施方式中可治療的合適組織包括皮膚、眼、耳、鼻、喉、口、肌肉、結締組織、毛發(fā)或乳房?？筛鶕?jù)本發(fā)明治療的其他優(yōu)選病癥包括選自下組的那些炎性疾病、自身免疫疾病、代謝疾病、遺傳疾病、創(chuàng)傷性疾病或生理損傷、營養(yǎng)缺乏性疾病、傳染病、淀粉樣疾病、纖維變性病、貯積病、先天性畸形、酶缺乏性疾病、中毒、醉酒、環(huán)境病、輻射病、內分泌疾病、變性性疾病和機能性疾病。在其他優(yōu)選的實施方式中，所述肽偶聯(lián)于、連接于或結合于一種分子，所述分子選自抗體、抗體片段和抗體樣結合分子，其中所述分子結合腫瘤或其它靶標的親和力高于結合其它細胞的親和力。在其他實施方式中，所述肽是一種新克隆的重組分子的一部分，所述重組分子由該肽和某種分子構成，所述分子選自抗體、抗體片段和抗體樣結合分子，其中所述分子結合腫瘤或其它靶標的親和力高于結合其它細胞的親和力。提供以下例子以闡明本發(fā)明。然而應理解的是本發(fā)明不限于這些例子中所述的具體條件和細節(jié)。在說明書中，包括美國專利在內的任何和所有公眾可得到的文獻專門納入以供參考。具體地說，本發(fā)明特別包括待批美國專利申請序列號10/092,934:"用神經(jīng)絲狀蛋白治療腫瘤和相關病癥的方法"中列出的實施例以供參考，該份申請顯示完整的AD7c-蛋白是在體外膠質瘤和成神經(jīng)細胞瘤培養(yǎng)物中以及體內正常嚙齒動物肌肉組織、皮下結締組織和真皮以及多種不同人和非人來源的腫瘤(包括嚙齒動物模型中的乳腺癌、皮膚癌和乳頭狀瘤、結腸癌、腦膠質瘤和其它腫瘤)中造成細胞死亡的有效試劑。本發(fā)明還特別包括待批美國專利申請序列號10/153,334，題為"有效治療腫瘤和其它需要除去或破壞細胞的病癥的肽";序列號10/198,069，題為"有效治療腫瘤和其它需要除去或破壞細胞的病癥的肽"；序列號10/198,070，題為"有效治療腫瘤和其它需要除去或破壞細胞的病癥的肽"；序列號10/294,891，題為"有效治療腫瘤和其它需要除去或破壞細胞的病癥的肽"；以及序列號10/920,313，題為"有效治療腫瘤和其它需要除去或破壞細胞的病癥的肽"中列出的實施例以供參考，它們各自揭示其中所述的某些肽是在體內正常嚙齒動物肌肉組織、皮下結締組織、真皮和其它組織中造成細胞死亡的有效試劑。實施例1此例子的目的是確定S05A肽對注射部位組織的效果。以下S05A肽采用標準方法合成S05A-2(SEQIDNO.2)IDQQVLSRI(Ile-Asp國Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile);S05A-3(SEQIDNO.3)KLEIKRCL(Lys-Leu-Glu-Ile-Lys隱Arg-Cys-Leu);S05A-4(SEQIDNO.4)VLSRIK(Val國Leu-Ser-Arg-Ile-Lys);S05A-5(SEQIDNO.5)RIKLEIK(Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile國Lys);S05A國6(SEQIDNO.6)VLSRIKLEIKRCL(Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile-Lys-Arg-Cys-Leu);S05A-7(SEQIDNO.7)IDQQVLSRIKLEI(Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-GIu-IIe)。在前列腺可視手術后，用乙醚麻醉雄性Sprague-Dawley大鼠(300克重量范圍)并通過前列腺內輸注給予上述S05A肽之一，對照僅注射生理鹽水或不注射。注射由300piS05A肽(用PBSpH7.4配成1mg/ml)(1.0mg/kg)(薩36)構成。24小時(11=12)、72小時(『12)或7天(i^l2)后無痛殺死大鼠。摘除前列腺，在10%緩沖的福爾馬林中固定24小時，石蠟包埋，切片，并用H&E染色。各只動物的完整前列腺都作包埋和切片。用組織學方法檢查和測定所有的染色切片。每個前列腺至少檢査2張組織切片，檢測每張組織切片彼此呈90度的兩個橫切面直徑(D)(每個前列腺總共測量大于等于8次)。根據(jù)V-4/3;u(D/2)s用各組的平均橫截面直徑(D)估算體積，并計算各組的平均體積。按照以下標準評估組織學改變<formula>formulaseeoriginaldocumentpage39</formula>結論下面的表4列出了觀察到的細胞死亡的組織學改變。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage40</column></row><table>與對照相比，預計注射S05A肽S05A-2和S50A-7的大鼠中前列腺體積的整體減小平均>40%。用S50A-2和S50A-7處理的大鼠顯示出廣泛的細胞死亡、壞死、腺上皮流失和萎縮。對照顯示出最小改變或沒有改變，包括注射部位的急性炎癥和針頭的灶性微出血。本領域技術人員應理解，可對本發(fā)明的方法和組合物作出多種改進和改變而不背離發(fā)明的精神或范圍。權利要求1.一種分離的肽，所述肽由SEQIDNO.1(Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile-Lys-Arg-Cys-Leu)所示氨基酸序列構成的肽的片段構成。2.如權利要求l所述的肽，其特征在于，所述肽選自下組a)由SEQIDNO.2(Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile)所示氨基酸序列構成的肽；b)由SEQIDNO.3(Lys-Leu-Glu-Ile-Lys-Arg-Cys-Leu)所示氨基酸序列構成的肽；c)由SEQIDNO.4(Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys)所示氨基酸序列構成的肽；d)由SEQIDNO.5(Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile-Lys)所示氨基酸序列構成的肽；e)由SEQIDNO.6(Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile-Lys-Arg-Cys-Leu)所示氨基酸序列構成的肽；和f)由SEQIDNO.7(Ile-Asp-Gln國Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile)所示氨基酸序列構成的肽。3.—種組合物，所述組合物包含至少一種如權利要求1所述的肽和載體。4.一種如權利要求1所述的肽的模擬物。5.—種分離的肽，所述肽包含由SEQIDNO.1(Ile—Asp-Gln-Gln—Val—Leu曙Ser濕Arg—IlG-Lys—Leu-Glu—Ile—Lys—Arg—Cys-Leu)W^M基酸序列構成的肽的至少兩個片段。6.—種分離的肽，所述肽包含由SEQIDNO.1(Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile-Lys-Arg-Cys-Leu)所示氨基酸序列構成的肽的片段的至少兩個重復。7.—種分離的肽，根據(jù)由SEQIDNO.1(Ile-Asp-Gln-Gln隱Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-IIe-Lys-Arg-Cys-Leu)所示氨基酸序列構成的肽的片段的氨基酸序列，該分離的肽包含的氨基酸序列為反-D順序。8.—種分離的肽，所述肽包含與抗體、抗體片段或抗體樣分子融合的由SEQIDNO.1(Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile-Lys-Arg-Cys-Leu)所示氨基酸序列構成的肽的片段。9.一種分離的肽，所述肽包含由SEQIDNO.1(Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile-Lys-Arg-Cys-Leu)所示氨基酸序列構成的肽的片段和至少1個到至多25個側接在該肽3'或5'末端的額外氨基酸，其中所述分離的肽不包含由SEQIDNO.1(Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile陽Lys-Arg-Cys-Leu)所示氨基酸序列構成的肽。10.—種核酸，所述核酸編碼與權利要求1所述的肽及其同源物、片段和變體相對應的氨基酸序列。11.一種組合物，所述組合物包含一種或多種核酸如權利要求IO所述的核酸和藥學上可接受的載體。12.—種治療哺乳動物的病癥的方法，所述病癥要求除去或破壞細胞，所述方法包括給予所述哺乳動物治療有效量的如權利要求1所述的肽。13.如權利要求12所述的方法，其特征在于，所述肽通過選自下組的方法給予經(jīng)口、皮下、真皮內、鼻內、靜脈內、肌內、鞘內、鼻內、腫瘤內、局部、和透皮。14.如權利要求12所述的方法，其特征在于，在用選自下組的治療方法治療該哺乳動物之前、期間或之后對所述哺乳動物實施所述方法手術切除、移植、嫁接、化療、免疫療法、疫苗接種、熱或電消融、冷凍療法、激光療法、光療、基因療法、和放療。15.如權利要求12所述的方法，其特征在于，所述病癥是選自下組的組織的良性或惡性腫瘤肺、乳房、胃、胰、前列腺、膀胱、骨、卵巢、皮膚、腎、竇、結腸、腸、胃、直腸、食道、心、脾、唾液腺、血液、大腦和其覆蓋物、脊髓和其覆蓋物、肌肉、結締組織、腎上腺、副甲狀腺、甲狀腺、子宮、睪丸、垂體、生殖器官、肝臟、膽囊、眼、耳、鼻、喉、扁桃腺、口、以及淋巴結和淋巴系統(tǒng)。16.如權利要求12所述的方法，其特征在于，所述病癥是選自下組的組織的增生、肥大或過度生長肺、乳房、胃、胰、前列腺、膀胱、骨、卵巢、皮膚、腎、竇、結腸、腸、胃、直腸、食道、心、脾、唾液腺、血液、大腦和其覆蓋物、脊髓和其覆蓋物、肌肉、結締組織、腎上腺、副甲狀腺、甲狀腺、子宮、睪丸、垂體、生殖器官、肝臟、膽囊、眼、耳、鼻、喉、扁桃腺、口、以及淋巴結和淋巴系統(tǒng)。17.如權利要求12所述的方法，其特征在于，所述病癥是受病毒、細菌或寄生蟲改變的組織，所述組織選自肺、乳房、胃、胰、前列腺、膀胱、骨、卵巢、皮膚、腎、竇、結腸、腸、胃、直腸、食道、心、脾、唾液腺、血液、大腦和其覆蓋物、脊髓和其覆蓋物、肌肉、結締組織、腎上腺、副甲狀腺、甲狀腺、子宮、睪丸、垂體、生殖器官、肝臟、膽囊、眼、耳、鼻、喉、扁桃腺、口、以及淋巴結和淋巴系統(tǒng)。18.如權利要求12所述的方法，其特征在于，所述病癥是選自下組的組織的畸形肺、乳房、胃、胰、前列腺、膀胱、骨、卵巢、皮膚、腎、竇、結腸、腸、胃、直腸、食道、心、脾、唾液腺、血液、大腦和其覆蓋物、脊髓和其覆蓋物、肌肉、結締組織、腎上腺、副甲狀腺、甲狀腺、子宮、睪丸、垂體、生殖器官、肝臟、膽囊、眼、耳、鼻、喉、扁桃腺、口、以及淋巴結和淋巴系統(tǒng)。19.一種預防或抑制支架的狹窄、封閉或堵塞的方法，所述方法包括用至少治療有效量的如權利要求1所述肽涂布該支架。全文摘要本發(fā)明包括用小肽化合物治療需要除去或破壞細胞元件的人類病癥，如良性或惡性腫瘤的方法。所述方法包括，但不限于通過肌內、經(jīng)口、靜脈內、鞘內、腫瘤內、鼻內、局部、透皮等單獨或與載體偶聯(lián)給予所述化合物。文檔編號C12N15/12GK101389760SQ200780006719公開日2009年3月18日申請日期2007年2月28日優(yōu)先權日2006年2月28日發(fā)明者J·杰梅爾,P·A·艾弗白克申請人:尼莫克斯股份有限公司