專利名稱：：用于抑制腫瘤細(xì)胞生長的漆斑霉菌絲體萃取物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明是關(guān)于一種用于抑制腫瘤細(xì)胞生長的化合物，尤其是關(guān)于一種自漆斑霉(A^ra^zec/wwsp.)菌絲體萃耳又物中分離純化而得且可用于抑制肺癌、肝癌與前列腺癌細(xì)胞生長的化合物。
背景技術(shù)：
：二十世紀(jì)之后，癌癥已成為危害人類健康的頭號殺手，根據(jù)衛(wèi)生署2002年6月所公布的資料，自1982年起至今，惡性腫瘤連續(xù)20年位居國人十大死因之首，其死亡率每十萬人口為147.68人，2001年約有三萬三千人死于惡性胂瘤，因此，尋找有效且副作用和緩的抗癌物質(zhì)就顯得更為迫切。單端孢霉烯族化合物(trichothecenes)屬于具有廣泛生理活性的倍半碎類(sesquiterpenoids)物質(zhì)，其主要由鐮孢霉(Fw^hww)、聚端孢霉(Jh'c/zof/e"'謂)、木霉(7h'c/70(ierma)、漆斑霉(^A^rc^/ze"'讓)、頭孑包霉(Ce一a/ospon'wn)、葡萄狀穩(wěn)霉(5"to^y6of，)和柱果霉(CWw6/raca;7xw)等真菌所產(chǎn)生，研究指出單端孢霉烯族化合物具抗菌活性，且在體外試驗(yàn)中還證實(shí)其具有抑制細(xì)胞活性(cytostaticactivity)的效用；此外，單端孢霉烯族化合物可依其結(jié)構(gòu)再區(qū)分為開環(huán)和巨環(huán)內(nèi)酯(macrolides)類，而具有巨環(huán)內(nèi)酯單端孢霉晞族化合物(macrocyclictrichothecenes)的真菌毒素(Mycotoxin)例^口verrucarins、roridins、satratoxin、vertisporin、baccharinoid為單端孑包霉烯族化合物中較受矚目并具生物活性的物質(zhì)，這些物質(zhì)可通過單端孢霉烯族化合物與真核細(xì)胞上的聚核糖體(polysomes)和80S核糖體(ribosomes)結(jié)合，使得蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)譯功能無法被活化啟動，進(jìn)而干擾蛋白質(zhì)合成。前述這些真菌毒素大都應(yīng)用于制成可抑制病菌生長的抗生素以及抗發(fā)炎療效與免疫調(diào)節(jié)功能(immunomodulatory)方面,其中verrucarins(另'J名muconomycin)由漆斑霉(Myra^ec/wwsp.)等真菌所產(chǎn)生，依其化學(xué)結(jié)構(gòu)式又可分為verrucarinA(別名muconomycinA)、verrucarinJ(另U名muconomycinB)以及verrucarinK等,5研究指出verrucarin為可長效性抑制蛋白質(zhì)與糖蛋白(glycoprotein)合成的物質(zhì)，并具有免疫抑制活性，其亦可用于對抗特定種類的蟲害與抑制新城雞瘟病毒(Newcastlevirus)和煙草花葉病毒活性。前述verrucarin的相關(guān)應(yīng)用中，并未有將verrucarin用于抑制肺癌、肝癌與前列腺癌的研究，故若能將verrucarin應(yīng)用于抑制前述癌癥方面上，對于人類肺癌、肝癌與前列腺癌的治療將產(chǎn)生莫大的幫助。為研究出可有效抑制癌細(xì)胞生長的物質(zhì)，本發(fā)明由漆斑霉(MyraAec/wwsp.)的菌絲體中分離純化出具下列結(jié)構(gòu)式的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>(1)如式(1)結(jié)構(gòu)式的化合物，其化學(xué)名為verrucarinA(別名muconomycinA),分子式為C27H3208,分子量為484。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>(2)如式(2)結(jié)構(gòu)式的化合物，其化學(xué)名為verrucarinJ(別名muconomycinB)，分子式為C27H3409，分子量為502。本發(fā)明中式(1)、式(2)的化合物分離純化自漆斑霉菌絲體的有機(jī)溶劑萃取物，有機(jī)溶劑可包括甲醇、乙醇或丙醇等醇類溶液，其中較佳者為乙醇。但并不以此為限，凡是可自漆斑霉菌絲體萃取出式(1)、式(2)化合物的有機(jī)溶劑包括酯類(例如乙酸乙酯)、烷類(例如己烷)或卣烷(例如氯曱烷、氯乙烷)等皆可應(yīng)用于此。通過前述化合物，本發(fā)明將其應(yīng)用于抑制肺瘤細(xì)胞生長上，使能進(jìn)一步用于治療癌癥的醫(yī)藥組成份中，增益癌癥的治療效果。本發(fā)明化合物得應(yīng)用的范圍包括抑制肺癌腫瘤細(xì)胞、肝癌腫瘤細(xì)胞與前列腺癌腫瘤細(xì)胞等的生長，使所述腫瘤細(xì)胞無法迅速生長，進(jìn)而抑制腫瘤的增生，延緩肺瘤的惡化，因此，可進(jìn)一步利用于肺癌、肝癌與前列腺癌等癌癥的治療。另一方面，本發(fā)明中還可將式(1)或/與式(2)的化合物利用于治療肺癌、肝癌與前列腺癌等醫(yī)藥組合物的成分中，藉以抑制所述肺瘤細(xì)胞的生長。前述醫(yī)藥組合物除包括有效劑量的式(1)或/與式(2)的化合物外，尚可包括藥學(xué)上可接受的載體。載體可為賦形劑(如水)、填充劑(如蔗糖或淀粉)、黏合劑(如纖維素衍生物)、稀釋劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑或甜味劑，但并未僅限于此。本發(fā)明醫(yī)藥組合物可依一般習(xí)知藥學(xué)的制備方法生產(chǎn)制造，將式(1)或/與式(2)有效成分劑量與一種以上的載體相混合，制備出所需的劑型，此劑型可包括錠劑、粉劑、粒劑、膠嚢或其它液體制劑，但未以此為限。以下將配合附圖進(jìn)一步說明本發(fā)明的實(shí)施方式，下述所列舉的實(shí)施例用以闡明本發(fā)明，并非用以限定本發(fā)明的范圍，任何熟習(xí)此技藝者，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍內(nèi)，當(dāng)可做些許更動與潤飾，因此本發(fā)明的保護(hù)范圍當(dāng)視后附的權(quán)利要求所界定者為準(zhǔn)。具體實(shí)施例方式首先進(jìn)行漆斑霉屬(M,oAedwwsp.)菌絲體的培養(yǎng)，藉以獲得該菌林的菌絲體。接著將該菌絲體利用習(xí)知的萃取方式，以有機(jī)溶劑進(jìn)行萃取，藉以取得漆斑霉菌絲體的有機(jī)溶劑萃取物。其中，有機(jī)溶劑可包括醇類(例如曱醇、乙醇或丙醇)、酯類(例如乙酸乙酯)、烷類(例如己烷)或卣烷(例如氯曱烷、氯乙烷)，但并不以此為限。其中較佳者為醇類，更佳者為95%乙醇。經(jīng)萃取過后的漆斑霉菌絲體有機(jī)溶劑萃取物，可進(jìn)一步通過高效液相層析加以分離純化，之后再對每一分液(fraction)進(jìn)行生物活性的測試。最后，則針對具抑癌效果的分液進(jìn)行成分分析，將可能產(chǎn)生抑癌效果的成分再分別進(jìn)一步做癌癥腫瘤細(xì)胞的抑制效果測試。最終即發(fā)現(xiàn)本發(fā)明中如式(1)/式(2)的化合物具有抑制肺癌、肝癌與前列腺癌等癌癥肺瘤細(xì)胞生長的效果。為證實(shí)式(1)/式(2)化合物對肺瘤細(xì)胞生長的抑制效果，本發(fā)明中以MTT分析法，根據(jù)美國國家癌癥研究所(NationalCancerInstitute,NCI)抗胂瘤藥物篩檢模式，對包括肺癌、肝癌與前列腺癌等腫瘤細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞存活率的測試。由這些測試^正實(shí)verrucarinA及verrucarinJ對于月申癌月中瘤細(xì)月包(包4舌A549)、肝癌肺瘤細(xì)胞(包括Hep3B與HepG2)以及前列腺癌肺瘤細(xì)胞(包括LNCaP與DU-145)等可降低其存活率，相對之下并可同時其生長半抑制率所需濃度(即IC5o值)，因此得將verrucarinA及verrucarinJ應(yīng)用于肺癌、肝癌與前列腺癌等胂瘤細(xì)胞的生長抑制上，而進(jìn)一步可利用于肺癌、肝癌與前列腺癌等癌癥的治療。茲對前述實(shí)施方式詳盡說明如下實(shí)施例1:漆斑霉菌絲體的培養(yǎng)先調(diào)配適于漆斑霉屬(M,oAec/wmsp.)菌株生長的培養(yǎng)基，其培養(yǎng)基的配置方法如下所述分別種取0.1-2克的氯化鈉(NaCl)、5-10克的蛋白胨(pepton)、l-2克的酵母萃出物(yeastextract)、3-10克的瓊脂(agar)、3-10克的榖類(榖類可選自米、小麥、糯米或玉米等)、l-2克的氮源(氮源種類為NH4NCb或KN03)、1-3克碳源(碳源種類為葡萄糖、果糖或蔗糖)及少許磷酸鹽，并加入微量金屬離子(例如鎂[Mg]或鈣[Ca]等)。加入800-1000毫升(mL)的二次蒸餾水至上述材料中，攪拌均勻后，以1N氬氧化鈉(NaOH)或IN鹽酸(HC1)調(diào)整混合液的pH值至6.5~7.5后，將混合液倒入錐形瓶中，以棉花封口，置120。C以上高溫滅菌至少20分鐘以上，待涼后，于無菌搡作臺上將漆斑霉菌屬菌抹例如疣孢漆斑菌(M,o//^dww)或露濕漆斑菌(Myra^ec/wwra&wwto血)等植入培養(yǎng)基中，并置于培養(yǎng)箱中以20-30。C溫度培養(yǎng)4-8周，即可獲得漆斑霉屬菌抹的菌絲體，其中，漆斑霉屬菌抹的取得來源，是從臺灣南部雪山山脈山腰的樹木下土壤中采得，經(jīng)臺大曾顯雄教授鑒定而得，且漆斑霉屬菌抹的種類并不僅限于此，凡是可由菌絲體中分離得4b合物verrucarinA及verrucarinJ的菌種皆可應(yīng)用于jt匕。實(shí)施例2:分離具抗癌活性的化合物取實(shí)施例l培養(yǎng)好的漆斑菌屬菌抹的菌絲體約100克，置入三角錐形瓶中，加入95%醇類溶液，在2025。C下攪拌萃取至少1小時以上，之后以濾紙及0.45pm濾膜過濾，收集萃取液。其中，該醇類溶液可包括曱醇、乙醇或丙醇等，較佳者為乙醇，但并不以此為限。將前述收集的漆斑霉菌絲體醇類萃取液，利用高效能液相層析儀(HighPerformanceLiquidchromatography),以填充有娃膠(Silicagel)的層析管柱進(jìn)行分析，并以正己烷(hexane)與乙酸乙酯(ethylacetate,EA)等溶液進(jìn)行沖提，同時以紫外-可見光全波長偵測器分析，最后分離出10段分液(fraction),之后再對每一分液進(jìn)行生物活性分析。最后，則再針對具生物活性的分液進(jìn)行成分分析，通過不同比例的正己烷與丙酮(acetone)沖提之，并分離出具前述式(1)結(jié)構(gòu)的化合物與具前述式(2)結(jié)構(gòu)的化合物。經(jīng)比對后，式(1)結(jié)構(gòu)的化合物為verrucarinA,其分子式為C27H3208,分子量484;式(2)結(jié)構(gòu)的化合物為verrucarinJ，其分子式為C27H3409，分子量502。實(shí)施例3:體外抗肝癌腫瘤細(xì)胞的活性測試為進(jìn)一步測試verrucarinA與verrucarinJ化合物對肺瘤細(xì)胞的抑制效果，本實(shí)施例將根據(jù)美國國家癌癥研究所(NationalCancerInstitute,NCI)抗腫瘤藥物篩檢模式進(jìn)行，首先取實(shí)施例2中所分離的verrucarinA與verrucarinJ化合物，加入含有Hep3B與HepG2人類肝癌腫瘤細(xì)胞的培養(yǎng)液中，以進(jìn)行腫瘤細(xì)胞存活率的測試。細(xì)胞存活率的測試可釆習(xí)知的MTT分析法進(jìn)行分析，而Hep3B與HepG2皆是人類的肝癌胂瘤細(xì)胞系，此兩種肝癌腫瘤細(xì)胞購自財團(tuán)法人食品工業(yè)研究所，其編號分別為BCRC60434及BCRC60025。MTT分析法是一種常見用于分析細(xì)胞增生(cellproliferation),存活率(percentofviablecells)以及細(xì)胞毒性(cytotoxicity)的分析方法。其中，MTT(3隱[4,5-dimethylthiazol-2-yl]2，5隱diphenyltetrazoliumbromide)為黃色染劑，它可被活細(xì)胞吸收并被線粒體中的琥珀酸四唑還原酶(succinatetetmzoliumreductase)還原成不溶水性且呈藍(lán)紫色的formazan,因此通過formazan形成與否，即可判斷并計算細(xì)胞的存活率。首先將人類肝癌細(xì)胞Hep3B與HepG2分別于含有胎牛血清的培養(yǎng)液中培養(yǎng)24小時。將增生后的細(xì)胞以PBS清洗一次，并以1倍的胰蛋白酶-EDTA處理細(xì)胞，隨后于1,200rpm下離心5分鐘，將細(xì)〗包沉淀并丟棄上清液。之后加入10ml的新培養(yǎng)液，輕微搖晃使細(xì)胞再次懸浮，再將細(xì)胞分置于96孔微量盤內(nèi)。測試時，分別于每一孔內(nèi)加入100、30、10、3、1、0.3、0.1與0.03ng/ml漆斑霉菌絲體粗萃取物(對照組，未經(jīng)高效能液相層析純化分離的漆斑霉菌絲體乙醇總萃取物)以及IOO、30、10、3、1、0.3、0.1與0.03ng/mlverrucarinA與verrucarinJ(實(shí)驗(yàn)組)，于37°C、5%<:02下培養(yǎng)48小時。其后，于避光的環(huán)境下在每一孔內(nèi)加入2.5mg/ml的MTT,反應(yīng)4小時后再于每一孔內(nèi)加入100|il的lysisbuffer終止反應(yīng)。最后以酶聯(lián)免疫分析儀在570nm吸光波長下測定其吸光值，藉以計算細(xì)胞的存活率，并推算出其生長半抑制率所需濃度(即ICso值)，其結(jié)果如表l所示。表1:體外抑制肝癌肺瘤細(xì)胞生長的測試結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>由表1中可知，通過verrucarinA與verrucarinJ的作用，其可有效降低人類肝癌腫瘤細(xì)胞Hep3B及HepG2的存活率。verrucarinA與verrucarinJ對于人類肝癌腫瘤細(xì)胞Hep3B的IC5o值可分別降低至2.31ng/ml與3.12ng/ml，且ng/ml)對換算得IC5。值的降低比率分別約為90.3%與86.9%，而對于人類肝癌肺瘤細(xì)胞HepG2的IC5。值亦可分別降低至10.21ng/ml與13.31ng/ml，且經(jīng)與對照組(45.89ng/ml)比對換算得ICs。值的降低比率分別約為77.75%與71%，故這些IC5。數(shù)值相較于對照組漆斑霉菌絲體粗萃取物所測得的ICso值與系低的多，因此可證實(shí)漆斑霉菌絲體萃取物中所分離得的verrucarinA與verrucarinJ確實(shí)能夠利用于肝癌腫瘤細(xì)胞生長的抑制；此外，由表1中還可發(fā)現(xiàn)，經(jīng)verrucarinA處理后的癌細(xì)胞IC5。值低于經(jīng)verrucarinJ處理后的癌細(xì)胞ICso值，亦即僅需較少濃度的verrucarinA便可抑制半數(shù)肝癌腫瘤細(xì)胞的生長，此顯示verrucarinA抑制肝癌細(xì)胞的功效優(yōu)于verrucarinJ。實(shí)施例4:體外抗肺癌腫瘤細(xì)胞的活性測試本測試也是根據(jù)美國國家癌癥研究所抗腫瘤藥物篩檢模式進(jìn)行，將實(shí)施例2中所分離的verrucarinA與verrucarinJ化合物，加入含有A549人類肺癌肺瘤細(xì)胞的培養(yǎng)液中，并釆前述MTT分析法進(jìn)行分析，藉以測試肺癌腫瘤細(xì)胞存活率，其中，A549為人類的肺癌腫瘤細(xì)胞系，此肺癌肺瘤細(xì)胞購自財團(tuán)法人食品工業(yè)研究所，其編號為BCRC60074。首先將人類肺癌細(xì)胞A549分別于含有胎牛血清的培養(yǎng)液中培養(yǎng)24小時。將增生后的細(xì)胞以PBS清洗一次，并以1倍的胰蛋白酶-EDTA處理細(xì)胞，隨后于1,200rpm下離心5分鐘，將細(xì)胞沉淀并丟棄上清液。之后加入10ml的新培養(yǎng)液，輕微搖晃使細(xì)胞再次懸浮，再將細(xì)胞分置于96孔微量盤內(nèi)。測試時，分別于每一孔內(nèi)加入100、30、10、3、1、0.3、0.1ng/ml漆斑霉菌絲體粗萃取物(對照組，未經(jīng)高效能液相層析純化分離的漆斑霉菌絲體乙醇總萃取物)以及IOO、30、10、3、1、0.3、0.1ng/mlverrucarinA與verrucarinJ(實(shí)驗(yàn)組)，于37。C、5%(302下培養(yǎng)48小時。其后，在避光的環(huán)境下于每一孔內(nèi)加入2.5mg/ml的MTT,反應(yīng)4小時后再于每一孔內(nèi)加入100pi的lysisbuffer終止反應(yīng)。最后以酶免疫分析儀在570nm吸光波長下測定其吸光值，藉以計算細(xì)胞的存活率，并推算出其生長半抑制率所需濃度(IC5o值)，其結(jié)果如表2所示。表2:體外抑制肺癌腫瘤細(xì)胞生長的測試結(jié)果測試樣品IC50(ng/ml)A549對照組漆斑霉菌絲體粗萃耳又物52實(shí)驗(yàn)組verrucarinAverrucarinJ1.122.34由表2中可知，通過verrucarinA與verrucarinJ的作用，其可有效降低人類肺癌腫瘤細(xì)胞A549的存活率。相較于對照組漆斑霉菌絲體粗萃取物所測得的1(:5()值(52ng/ml)，經(jīng)verrucarinA處理人類肺癌肺瘤細(xì)胞A549后，其IC50值可大幅降低至1.12ng/ml，且與對照組比對換算得ICs()值的降低比率約為97.85%，而經(jīng)verrucarinJ處理人類肺癌肺瘤細(xì)胞A549后，其ICso值可大幅降低至2.34ng/ml，且與對照組比對換算得ICso值的降低比率約為95.5%,兩化合物所顯示的生長半抑制率所需濃度皆相對大幅低于對照組，因此可證實(shí)由漆斑霉菌絲體萃取物中所分離得的verrucarinA與verrucarinJ確實(shí)育fe句多利用于肺癌腫瘤細(xì)胞生長的抑制；此外，由表2中亦可發(fā)現(xiàn)，經(jīng)verrucarinA處理后的癌細(xì)胞ICso值低于經(jīng)verrucarinJ處理后的癌細(xì)胞IC5JI，亦即僅需較少濃度的verrucarinA便可抑制半數(shù)肺癌腫瘤細(xì)胞的生長，此顯示verrucarinA抑制肺癌細(xì)月包的功歲文4尤于verrucarinJ。實(shí)施例5:體外抗前列腺癌腫瘤細(xì)胞的活性測試本測試也是根據(jù)美國國家癌癥研究所抗腫瘤藥物篩檢模式進(jìn)行，將實(shí)施例2中所分離的verrucarinA與verrucarinJ化合物，加入LNCaP與DU-145人類前列腺癌腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)液中，并采前述MTT分析法進(jìn)4亍分析，藉以測試前列腺癌腫瘤細(xì)胞存活率。細(xì)胞存活率的測試可釆習(xí)知的MTT分析法進(jìn)行分析，而LNCaP與DU-145為人類的前列腺癌腫瘤細(xì)胞系，其中，前列腺癌是發(fā)源于前列腺腺體上皮細(xì)胞的癌癥，且癌細(xì)胞生長初期需倚賴男性荷爾蒙，因此又稱為男性荷爾蒙依賴型前列腺癌(androgen-dependentprostatecancer)，LNCaP即屬于此類型癌細(xì)胞，該型癌細(xì)胞可通過阻斷男性荷爾蒙而治療，但數(shù)年后約30%患者的腫瘤會再度復(fù)發(fā)，且該類病患體內(nèi)的男性荷爾蒙量已非常少，故復(fù)發(fā)的腫瘤遂轉(zhuǎn)變(progression)為不需要倚賴男性荷爾蒙便能夠生長，成為非男性荷爾蒙依賴型前歹'J&泉癌(androgen-independentprostatecancer),而這種復(fù)發(fā)的癌癥至今仍未發(fā)現(xiàn)有效的治療方式，DU-145便屬于此類型前列腺癌細(xì)胞，本發(fā)明所用前列腺癌腫瘤細(xì)胞LNCaP與DU-145購自財團(tuán)法人食品工業(yè)研究所，其編號分別為CCRC60088及CCRC60348。首先將人類前列腺癌細(xì)胞LNCaP與DU-145置于含有胎牛血清的培養(yǎng)液中培養(yǎng)24小時。將增生后的細(xì)胞以PBS清洗一次，并以1倍的胰蛋白酶-EDTA處理細(xì)胞，隨后于1，200rpm下離心5分鐘，將細(xì)胞沉淀并丟棄上清液。之后加入10ml的新鮮培養(yǎng)液，輕微搖晃使細(xì)胞再次懸浮，再將細(xì)胞分置于96孔微量盤內(nèi)。測試時，分別于每一孔內(nèi)加入水(控制組)、濃度為4.2ng/ml的紫杉醇(對照組)、濃度為100、10、1、0.1與0.01ng/ml漆斑霉菌絲體粗萃取物(對照組，未經(jīng)高效能液相層析純化分離的漆斑霉菌絲體乙醇總萃取物)、以及濃度分另'J為100、10、1、0.1、0.01與0.001ng/ml的vermcarinA及verrucarinJ化合物(實(shí)驗(yàn)組)，于37。C、5%0)2下培養(yǎng)48小時。其后，在避光的環(huán)境下于每一孔內(nèi)加入2.5mg/ml的MTT試劑，反應(yīng)4小時后再于每一孔內(nèi)加入100pl的lysisbuffer終止反應(yīng)。最后以酶免疫分析儀(ELISAreader)在570nm吸光波長下測定其吸光值，藉以計算細(xì)胞的存活率，并推算出其半抑制率所需濃度(即IC5o值)，其結(jié)果如表3與表4所示。表3:體外抑制前列腺癌腫瘤細(xì)胞生長的測試結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>由表3中可知，通過verrucarinA與verrucarinJ的作用，其可有效降低人類前列腺癌腫瘤細(xì)胞LNCaP與DU-145的存活率。verrucarinA與verrucarinJ對于人類前列腺癌腫瘤細(xì)胞LNCaP的IC5o值可分別降低至2.85ng/ml與0.31ng/ml,且經(jīng)與對照組比(29.31ng/ml)對換算得1<:5()值的降低比率分別約為90.28%與98.94%,而對于人類前列腺癌腫瘤細(xì)胞DU-145的ICso值更可分別降低至0.02ng/ml與0.28ng/ml，且經(jīng)與對照組(33.16ng/ml)比對換算得IC50值的降低比率分別約為99.93%與99.16%,故這些ICs。數(shù)值相較于對照組漆斑霉菌絲體粗萃取物所測得的ICso值(29.31ng/ml與33.16ng/ml)低的多；此外，由表3中還可發(fā)現(xiàn)，經(jīng)verrucarinJ處理后的LNCaP癌細(xì)胞ICso值低于經(jīng)verrucarinA處理后的LNCaP癌細(xì)胞1(350值，此顯示verrucarinJ抑制LNCaP肝癌細(xì)力包的功效優(yōu)于verrucarinA;而經(jīng)verrucarinA處理后的DU-145癌纟田月包IC5o值低于經(jīng)verrucarinJ處理后的DU-145癌細(xì)胞ICs。值，此顯示verrucarinA抑制DU-145肝癌細(xì)胞的功效優(yōu)于verrucarinJ。表4:verrucarinA及verrucarinJ于體夕卜對前列l(wèi)^癌月中瘤細(xì)胞DU-145存活率的測試結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>另一方面,"i青參閱表4，通過verrucarinA及verrucarinJ的作用,其可有效降低人類前列腺癌肺瘤細(xì)胞DU-145的存活率，相對于控制組，當(dāng)以濃度介于1ng/ml100ng/ml的verrucarinA及verrucarinJ處J里時，癌細(xì)月包的存活率可降低至20%左右；而將verrucarinA及verrucarinJ與對照組的抑癌效果相比較后，可觀察到隨著漆斑霉菌絲體粗萃取物、verrucarinA及verrucarinJ的施用濃度增加，其各自的細(xì)胞存活率會隨之下降，反之，當(dāng)施用濃度減少時，其各自的細(xì)胞存活率便會上升，其中，當(dāng)其個別的施用濃度皆減少至10ng/ml時，漆斑霉菌絲體粗萃取物的細(xì)胞存活率會攀升至91.01%，而分離自漆斑霉菌絲體粗萃取物的verrucarinA及verrucarinJ的細(xì)胞存活率仍可低至19%左右，此結(jié)果證實(shí)verrucarinA及verrucarinJ的確為抑制人類前列癌腫瘤細(xì)胞DU-145的有效活性成分；此外，當(dāng)對照組紫杉醇(Taxol)的施用濃度為4.2ng/ml時，其細(xì)胞存活率為63.88%,而化合物verrucarinA及verrucarinJ的施用濃度介于1ng/ml10ng/ml時，其細(xì)胞存活率可大幅降低至20%以下，此結(jié)果顯示于相似施用濃度下，verrucarinA及verrucarinJ4卬制人類前歹'J癌月中瘤纟田月包DU-145的效果優(yōu)于紫杉醇，且當(dāng)verrucarinA及verrucarinJ的施用濃度極少時(0.1ng/mllng/ml)，其仍具有顯著的抑癌功效。此外，由表4還可發(fā)現(xiàn)，當(dāng)verrucarinA及verrucarinJ施用于DU-145細(xì)胞的濃度為1ng/ml以上(1ng/ml10ng/ml)時，其所呈現(xiàn)的細(xì)胞存活率數(shù)值非常相近，亦即于這些濃度范圍下，兩者具有近似的抑癌功效；而當(dāng)verrucarinA及verrucarinJ施用于DU-145細(xì)胞的濃度為0.1ng/ml以下(0.001ng/ml0.1ng/ml)時，即便用量已減少至極低的濃度，經(jīng)verrucarinA處理后的細(xì)胞存活率數(shù)值仍可j氐至21.01%以下，而經(jīng)verrucarinJ處理后的細(xì)胞存活率已因抑癌有效濃度過^[氐而升高至81,11%以上，此表示verrucarinA抑制DU-145肝癌細(xì)月包的功效4尤于verrucarinJ。由上述結(jié)果可證實(shí)漆斑霉菌絲體萃取物中所分離得的verrucarinA與verrucarinJ皆可有效抑制具有不同特性的前列腺癌腫瘤細(xì)胞LNCaP與DU-145的生長，此顯示verrucarinA與verrucarinJ除可應(yīng)用于抑制男性荷爾蒙依賴型前列腺癌細(xì)胞LNCaP,亦可利用于抑制非男性荷爾蒙依賴型前列腺癌細(xì)胞DU-145的生長上，藉以幫助于前列腺癌與再復(fù)發(fā)性前列腺癌的治療。權(quán)利要求1.一種用于抑制腫瘤細(xì)胞生長并具有下列結(jié)構(gòu)式的化合物，其中，所述腫瘤細(xì)胞為肝癌細(xì)胞、肺癌細(xì)胞或前列腺癌細(xì)胞2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于抑制腫瘤細(xì)胞生長的化合物，其中，所述化合物由漆斑霉(MyraAec/wmsp.)菌絲體所分離制得。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于抑制肺瘤細(xì)胞生長的化合物，其中，所述肝癌細(xì)胞為Hep3B或HepG2細(xì)胞系。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用于抑制腫瘤細(xì)胞生長的化合物，其中，所述化合物抑制肝癌細(xì)胞Hep3B生長半抑制率所需濃度(IC5G)為2.31ng/ml。5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用于抑制腫瘤細(xì)胞生長的化合物，其中，所述化合物抑制肝癌細(xì)胞HepG2生長半抑制率所需濃度(IC5Q)為10.21ng/ml。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于抑制腫瘤細(xì)胞生長的化合物，其中，所述肺癌細(xì)胞為A549細(xì)胞系。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的用于抑制腫瘤細(xì)胞生長的化合物，其中，所述化合物抑制肺癌細(xì)胞A549生長半抑制率所需濃度(IC5。)為1.12ng/ml。8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于抑制腫瘤細(xì)胞生長的化合物，其中，所述前列腺癌細(xì)胞為LNCaP或DU-145。9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的用于抑制腫瘤細(xì)胞生長的化合物，其中，所述化合物抑制前列腺癌細(xì)胞LNCaP生長半抑制率所需濃度(IC5o)為2.85ng/ml。10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的用于抑制腫瘤細(xì)胞生長的化合物，其中，所述化合物抑制前列腺癌細(xì)胞DU-145生長半抑制率所需濃度(ICs。)為0.02ng/ml。11.一種用于抑制肝癌、肺癌或前列腺癌細(xì)胞生長的醫(yī)藥組合物，其至少包括有效劑量如權(quán)利要求1所述的化合物以及醫(yī)學(xué)上可接受的載體。12.—種用于抑制腫瘤細(xì)胞生長并具有下列結(jié)構(gòu)式的化合物，其中，所述腫瘤細(xì)胞為肝癌細(xì)胞、肺癌細(xì)胞或前列腺癌細(xì)胞13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的用于抑制腫瘤細(xì)胞生長的化合物，其中，所述化合物由漆斑霉(Myra^ec/wmsp.)菌絲體所分離制得。14.根據(jù)權(quán)利要求12所述的用于抑制腫瘤細(xì)胞生長的化合物，其中，所述肝癌細(xì)胞為Hep3B或HepG2細(xì)胞系。15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的用于抑制腫瘤細(xì)胞生長的化合物，其中，所述化合物抑制肝癌細(xì)胞Hep3B生長半抑制率所需濃度(IC5。)為3.12ng/ml。16.根據(jù)權(quán)利要求14所述的用于抑制腫瘤細(xì)胞生長的化合物，其中，所述化合物抑制肝癌細(xì)胞HepG2生長半抑制率所需濃度(IC5Q)為13.31ng/ml。17.根據(jù)權(quán)利要求12所述的用于抑制腫瘤細(xì)胞生長的化合物，其中，所述肺癌細(xì)胞為A549細(xì)胞系。18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的用于抑制腫瘤細(xì)胞生長的化合物，其中，所述化合物抑制肺癌細(xì)胞A549生長半抑制率所需濃度(IC5Q)為2.34ng/ml。19.根據(jù)權(quán)利要求12所述的用于抑制腫瘤細(xì)胞生長的化合物，其中，所述前列腺癌細(xì)胞為LNCaP或DU-145。20.根據(jù)權(quán)利要求19所述的用于抑制腫瘤細(xì)胞生長的化合物，其中，所述化合物抑制前列腺癌細(xì)胞LNCaP生長半抑制率所需濃度(IC5Q)為0.31ng/ml。21.根據(jù)權(quán)利要求19所述的用于抑制肺瘤細(xì)胞生長的化合物，其中，所述化合物抑制前列腺癌細(xì)胞DU-145生長半抑制率所需濃度(IC5Q)為0.28ng/ml。22.—種用于抑制肝癌、肺癌或前列腺癌細(xì)胞生長的醫(yī)藥組合物，其至少包括有效劑量如權(quán)利要求12所述的化合物以及醫(yī)學(xué)上可接受的載體。全文摘要本發(fā)明是關(guān)于一種用于抑制腫瘤細(xì)胞生長的漆斑霉菌絲體萃取物，尤其是關(guān)于一種由漆斑霉(Myrotheciumsp.)菌絲體所分離出的化合物verrucarinA及verrucarinJ并可有效抑制肝癌、肺癌與前列腺癌細(xì)胞的生長。本發(fā)明中，化合物verrucarinA及verrucarinJ可應(yīng)用于抑制人類肝癌細(xì)胞Hep3B與HepG2、人類肺癌細(xì)胞A549以及人類前列腺癌細(xì)胞LNCaP與DU-145的生長，同時可用于抑制肝癌、肺癌與前列腺癌細(xì)胞生長的醫(yī)藥組合物中。文檔編號C12P17/18GK101407523SQ20071016272公開日2009年4月15日申請日期2007年10月8日優(yōu)先權(quán)日2007年10月8日發(fā)明者劉勝勇,溫武哲,郭茂田申請人:國鼎生物科技股份有限公司