專利名稱：：發(fā)酵生產(chǎn)木霉菌酯素的方法及所用的發(fā)酵培養(yǎng)基的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及微生物領(lǐng)域，具體地說是一種用于紫杉木霉(7yc/70ctem7atex/')液體深層發(fā)酵生產(chǎn)木霉菌酯素的培養(yǎng)基及其工藝。
背景技術(shù)：
：由立枯絲核菌(尺A/zoctoA7/'aso/aA7/')引起的紋枯病和立枯病、由灰葡萄孢菌(8of:yf/sc/'nerea)引起的灰霉病是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的重要病害，目前生產(chǎn)上主要靠農(nóng)業(yè)防治和化學(xué)防治控制其危害，如灰霉病化學(xué)防治主要依賴施佳樂、速克靈等化學(xué)藥劑。由于抗藥性問題等，從天然動植物、微生物中尋找新型生物活性物質(zhì)，并進(jìn)行新型生物農(nóng)藥的研究開發(fā)是現(xiàn)代農(nóng)藥工業(yè)的一個(gè)重要研究領(lǐng)域。從南方紅豆杉分離得到的內(nèi)生真菌菌株ZJUF0986(中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保存編號CGMCC1672)屬于一種木霉屬新種紫杉木霉，其產(chǎn)生的新結(jié)構(gòu)化合物木霉菌酯素(trichodermisin)對重要植物病原真菌立枯絲核菌和灰葡萄孢菌有很強(qiáng)的抑制作用(申請?zhí)?00610050963.5)。篩選配方簡單、原料易得且價(jià)格便宜、產(chǎn)物量多的發(fā)酵培養(yǎng)基，是紫杉木霉菌株ZJUF0986能盡早應(yīng)用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)首先要解決的問題。不同菌種發(fā)酵培養(yǎng)需要的營養(yǎng)條件是不相同的，雖然所采用的原材料大同小異，哪怕是配比有極少的變化，其發(fā)酵結(jié)果也會不盡相同。在某一特定的場合，采用一種獨(dú)特配方的培養(yǎng)基和一種特定的工藝，將會使發(fā)酵效果增強(qiáng)、產(chǎn)物成份含量穩(wěn)定、有效成份顯著增加。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種以紫杉木霉液體發(fā)酵生產(chǎn)木霉菌酯素的方法及所用的發(fā)酵培養(yǎng)基，該種發(fā)酵培養(yǎng)基原料易得且價(jià)格便宜，使用本發(fā)明的方法生產(chǎn)木霉菌酯素，具有產(chǎn)物量多的特點(diǎn)。為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種發(fā)酵培養(yǎng)基，該發(fā)酵培養(yǎng)基的組成為葡萄糖15.816.2g/L、淀粉25.626.Qg/L、蛋白胨1.92.1g/L、硫酸鎂0.91.1g/L、硝酸鈉0.40.6g/L、磷酸氫二銨1.92.1g/L和氯化鉀0.40.6g/L，其余為水。也就是說將葡萄糖、淀粉、蛋白胨、硫酸鎂、硝酸鈉、磷酸氫二銨和氯化鉀溶于水形成混合液，葡萄糖、淀粉、蛋白胨、硫酸鎂、硝酸鈉、磷酸氫二銨和氯化鉀在混合液中的濃度分別是15.816.2g/L、25.626.0g/L、1.92.1g/L、0.91.1g/L、0.40.6g/L、1.92.1g/L和0.40.6g/L。作為本發(fā)明的發(fā)酵培養(yǎng)基的改進(jìn)，發(fā)酵培養(yǎng)基的組成為葡萄糖16.0g/L、淀粉25.8g/L、蛋白胨2.0g/L、硫酸鎂1.0g/L、硝酸鈉0.5g/L、磷酸氫二銨2.0g/L和氯化鉀0.5g/L，其余為水。本發(fā)明還同時(shí)提供了利用上述發(fā)酵培養(yǎng)基發(fā)酵生產(chǎn)木霉菌酯素的方法，包括以下步驟1)、先將保存編號為CGMCC1672的紫杉木霉菌株ZJUF0986在PDA培養(yǎng)基上進(jìn)行活化；活化后，用打孔器切取菌落邊緣菌餅；2)、將上述菌餅接種到內(nèi)裝液體種子培養(yǎng)基的培養(yǎng)容器中，于28'C3(TC、180r/min的條件下避光培養(yǎng)72小時(shí)，得種子液；3)、將種子液接入內(nèi)裝發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中依次進(jìn)行以下發(fā)酵步驟，所述種子液與發(fā)酵培養(yǎng)基的體積比為1:10:初期溫度控制在28'C30'C，通氣攪拌，培養(yǎng)時(shí)間為120小時(shí)，中期將溫度降低到25'C，提高通氣比；當(dāng)還原糖濃度降到9.510.5g/L且溶解氧開始緩慢上升時(shí)，補(bǔ)加質(zhì)量濃度為20%的淀粉溶液；所述淀粉溶液中的淀粉是發(fā)酵培養(yǎng)基中的淀粉重量的30%，控制發(fā)酵罐中的PH值為5.06.0，培養(yǎng)時(shí)間為48小時(shí)；后期降低通氣比至初期狀態(tài)，培養(yǎng)時(shí)間為72小時(shí)；得發(fā)酵液。在上述發(fā)酵步驟的初期pH自然調(diào)節(jié)；即不需要進(jìn)行pH人工的調(diào)節(jié)，任其自然即可。在上述發(fā)酵步驟的中期可利用氫氧化鈉人工調(diào)節(jié)的方式來控制發(fā)酵罐中的PH值。在上述發(fā)酵步驟的后期當(dāng)還原糖降到1g/L以下時(shí)，鏡檢可知菌絲開始自溶，形成節(jié)孢子停止培養(yǎng)，得發(fā)酵液。作為本發(fā)明的發(fā)酵生產(chǎn)方法的改進(jìn)將上述發(fā)酵液離心分離后得澄清液，再將澄清液依次經(jīng)萃取、干燥和真空濃縮后得木霉菌酯素粗提物。作為本發(fā)明的發(fā)酵生產(chǎn)方法的進(jìn)一步改進(jìn)整個(gè)步驟3)的發(fā)酵過程中，發(fā)酵罐內(nèi)的壓力控制在0.03MPa0.05Mpa;步驟3)的初期通氣比為1:0.5V/V/min，攪拌轉(zhuǎn)速為200r/min;中期通氣比為1:1V/V/min;后期通氣比為1:0.5V/V/min。作為本發(fā)明的發(fā)酵生產(chǎn)方法的進(jìn)一步改進(jìn)步驟2)將10粒直徑為5mm的菌餅接入200ml液體種子培養(yǎng)基中，以1000ml種子瓶作為培養(yǎng)容器。作為本發(fā)明的發(fā)酵生產(chǎn)方法的進(jìn)一步改進(jìn)，該液體種子培養(yǎng)基組成為葡萄糖20.0g/L、淀粉15.0g/L、蛋白胨2.0g/L、尿素0.5g/L、硫酸鎂1.0g/L、硝酸鈉0.5g/L、磷酸氫二銨2.0g/L、氯化鉀0.5g/L和碳酸鈣0.4g/L，其余為水。作為本發(fā)明的發(fā)酵生產(chǎn)方法的進(jìn)一步改進(jìn)步驟i)在28'C30。C活化培養(yǎng)5天。本發(fā)明的發(fā)明人在發(fā)明過程中，對紫杉木霉菌株ZJUF0986在以往的研究基礎(chǔ)上采用均勻設(shè)計(jì)，在并采用二項(xiàng)多次逐步回歸建模，選取初步優(yōu)化點(diǎn)進(jìn)行驗(yàn)證，最后確定紫杉木霉液體深層發(fā)酵生產(chǎn)木霉菌酯素的最佳培養(yǎng)基配方。紫杉木霉菌株ZJUF0986液體深層發(fā)酵培養(yǎng)基的篩選，具體步驟如下1、在初步實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上確定葡萄糖及淀粉這2個(gè)因子為重要的變量，設(shè)12個(gè)水平數(shù)；其余8個(gè)因子(即蛋白胨、酵母粉、磷酸氫二銨、尿素、氯化鉀、硝酸鈉、硫酸鎂、碳酸鈣)設(shè)置6個(gè)水平數(shù)。按照方開泰等研究的均勻設(shè)計(jì)試驗(yàn)方法，利用唐啟義等編制的DPS數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)進(jìn)行設(shè)計(jì)。由于試驗(yàn)中各因子的水平數(shù)不相等，應(yīng)用混合水平均勻設(shè)計(jì)方法構(gòu)造混合水平的均勻設(shè)計(jì)表。首先在DPS電子表格中輸入、定義有關(guān)參數(shù)，然后在系統(tǒng)菜單方式下點(diǎn)擊"試驗(yàn)設(shè)計(jì)"—"均勻設(shè)計(jì)"—"混合水平均勻設(shè)計(jì)"，然后在系統(tǒng)提示的對話框中輸入試驗(yàn)次數(shù)及要求隨機(jī)優(yōu)化運(yùn)行時(shí)間的限制，后點(diǎn)擊"確認(rèn)"按鈕后即可運(yùn)行。2、發(fā)酵生產(chǎn)木霉菌酯素，依次進(jìn)行以下步驟1)、先將保存編號為CGMCC1672的紫杉木霉菌株ZJUF0986在PDA培養(yǎng)基上進(jìn)行活化；活化后，用打孔器切取菌落邊緣菌餅。具體內(nèi)容同以下實(shí)施例2的步驟1)。2)、將上述菌餅接種到內(nèi)裝液體種子培養(yǎng)基的培養(yǎng)容器中避光培養(yǎng)；得種子液。具體內(nèi)容同以下實(shí)施例2的步驟2)。3)、將種子液以發(fā)酵培養(yǎng)基10%(體積比)的比例分別接入內(nèi)裝100mL不同配方的供試發(fā)酵培養(yǎng)基的500mL三角瓶中，依次進(jìn)行以下發(fā)酵步驟初期溫度控制在28i:3CrC，通氣攪拌，轉(zhuǎn)速為200r/min;pH自然調(diào)節(jié)；反應(yīng)時(shí)間為120小時(shí)；中、后期將溫度降低到25'C，培養(yǎng)一段時(shí)間后鏡檢菌絲開始自溶，形成節(jié)孢子后停止培養(yǎng)，得發(fā)酵液。發(fā)酵培養(yǎng)基在滅菌之前調(diào)節(jié)初始pH值為5.5，裝瓶后按121'C/20min的條件進(jìn)行蒸汽高壓滅菌備用。這些不同配方的供試發(fā)酵培養(yǎng)基具體如表1所示。表1、供試發(fā)酵培養(yǎng)基(g/L)試驗(yàn)方案及產(chǎn)生的木霉菌酯素(pg/mL);<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>積的色譜純乙腈，混勻后離心去除沉淀，用高效液相色譜檢測木霉菌酯素含量。試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果如表1所示。此基礎(chǔ)培養(yǎng)基配方為蔗糖10.8g/L、淀粉20.0g/L、蛋白胨0.93g/L、酵母粉0.86g/L、尿素0.5g/L、硫酸鎂0.25g/L、硝酸鈉0.12g/L、磷酸氫二銨0.73g/L、氯化鉀0.17g/L、碳酸鈣0.43g/L。菌株ZJUF0986采用基礎(chǔ)培養(yǎng)基液體深層發(fā)酵制備生產(chǎn)木霉菌酯素，所得的發(fā)酵液HPLC圖譜具體如圖2所示。我們將試驗(yàn)設(shè)計(jì)結(jié)果通過二次多項(xiàng)次回歸建模分析，相關(guān)系數(shù)R-I.OOOOO、F值=22727.23864、顯著水平p=0.0052、剩余標(biāo)準(zhǔn)差S=0.00435、調(diào)整后的相關(guān)系Ra=0.99998，得回歸方程Y=249.3657508-77.67414990X4+4.154517113X5-102.75389793X7-218.13832655X10+16.941006108X6*X6-23116645668X9*X9+25.958161454X1*X7+9.514581383X1*X10+0.4416517784X2*X3+14.827696642X2*X8-203.21954043X3*X8+105,50280591X3*X9-26.027309738X4*X6-255.78291240X4*X7-146.49737981X4*X9+350.9823963X4*X10-45.44974055X5*X6-72.29890786X5*X10+108.45180454X6*X9-0.5115435996X6*X10+1166,9989311X8*X9-1210.1287644X8*X10因此所得的優(yōu)化培養(yǎng)基配方為葡萄糖16.0g/L、淀粉25.8g/L、蛋白胨2.0g/L、磷酸氫二銨2.0g/L、硝酸鈉0.5g/L、硫酸鎂1.0g/L、氯化鉀0.5g/L，其余為水。按優(yōu)化配方進(jìn)行驗(yàn)證，測試結(jié)果接近理論擬合值。本發(fā)明的關(guān)鍵是以淀粉為主要碳源，誘導(dǎo)菌體酶的分泌，促使淀粉快速分解為還原糖，提高碳源的利用率，從而促使菌體的快速生長。本發(fā)明所述的培養(yǎng)基原料為常見、廉價(jià)的農(nóng)副產(chǎn)品，用量少，成本低，可以大規(guī)模的擴(kuò)大生產(chǎn)。本發(fā)明的另一重要發(fā)明點(diǎn)是紫杉木霉利用本發(fā)明的培養(yǎng)基及其工藝進(jìn)行液體深層發(fā)酵產(chǎn)物單一，副產(chǎn)物少；木霉菌酯素基本上都分泌在發(fā)酵液中，且產(chǎn)素水平比基礎(chǔ)培養(yǎng)基明顯提高，而且發(fā)酵液透明澄清，大大簡化了提取工藝，提取簡單、純化容易。在以相同的紫杉木霉菌株ZJUF0986作為原料，且其余發(fā)酵生產(chǎn)方法步驟和內(nèi)容相同的前提下，采用本發(fā)明的發(fā)酵培養(yǎng)基所得的產(chǎn)素量是基礎(chǔ)培養(yǎng)基的2.4倍。在本發(fā)明中，高效液相色譜檢測所用的方法同本申請人同一天申請的另一篇專利《木霉菌酯素的測定方法及用途》。具體內(nèi)容如下1、色譜條件1)、WatersC18分析柱(sunfireC185|jm4.6X250mm)2)、Waters的二元高壓梯度泵(1525binaryHPLCpump)3)、Waters2487檢測器(Waters2487DualAAbsorbanceDetector)4)、77251手動進(jìn)樣器(KIT72251Manualinjector1500series)5)、流動相為乙腈水=3:2(V:V)6)、流速0.8ml_/min1.2mL/min，例如為1.0mL/min7)、進(jìn)樣量20iJL8)、檢測波長為193nm9)、溫度室溫2、所用儀器設(shè)備1)、Waters液相色譜儀，配Waters的二元高壓梯度泵(1525binaryHPLCpump)、Waters2487檢測器(Waters2487DualAAbsorbanceDetector)、77251手動進(jìn)樣器(KIT72251Manualinjector1500series)2)、色譜工作站Breeze3)、高速臺式離心機(jī)Sigma1-15K4)、電子天平METTLERAB204-E5)、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器RE-52AA6)、P關(guān)定儀METTLERTOLEDO3203、所用試劑1)、乙腈HPLC美國WestonScientific2)、水三蒸水(自帝!J)3)、其它所用試劑均為國產(chǎn)分析純。'下面結(jié)合附圖對本發(fā)明的具體實(shí)施方式作進(jìn)一步詳細(xì)說明。圖1為菌株ZJUF0986采用本發(fā)明的發(fā)酵培養(yǎng)基液體深層發(fā)酵制備生產(chǎn)木霉菌酯素的發(fā)酵液HPLC圖譜；圖2為菌株ZJUF0986采用基礎(chǔ)培養(yǎng)基液體深層發(fā)酵制備生產(chǎn)木霉菌酯素的發(fā)酵液HPLC圖譜(與實(shí)施例2的區(qū)別為以基礎(chǔ)培養(yǎng)基替代了發(fā)酵培養(yǎng)基)；圖3為利用本發(fā)明的發(fā)酵培養(yǎng)基發(fā)酵生產(chǎn)木霉菌酯素的工藝流程圖。具體實(shí)施例方式實(shí)施例l、制作發(fā)酵培養(yǎng)基將葡萄糖、淀粉、蛋白胨、硫酸鎂、硝酸鈉、磷酸氫二銨和氯化鉀溶于水形成混合液，葡萄糖、淀粉、蛋白胨、硫酸鎂、硝酸鈉、磷酸氫二銨和氯化鉀在混合液中的濃度分別是16.0g/L、25.8g/L、2.0g/L、1.0g/L、0.5g/L、2.0g/L和0.5g/L。即所得的發(fā)酵培養(yǎng)基的組成為葡萄糖16.0g/L、淀粉25.8g/L、蛋白胨2.0g/L、硫酸鎂1.0g/L、硝酸鈉0.5g/L、磷酸氫二銨2.0g/L和氯化鉀0.5g/L，其余為水。實(shí)施例2、一種發(fā)酵生產(chǎn)木霉菌酯素的方法，依次進(jìn)行以下步驟(如圖3所示)1)、先將低溫(即-20'C)保存的編號為CGMCC1672的紫杉木霉菌株ZJUF0986接種在PDA培養(yǎng)基上，于28'C3(TC活化培養(yǎng)5天，活化處理后，用打孔器切取菌落邊緣菌餅；2)、將上述直徑為5mm的菌餅10粒接入到內(nèi)裝液體種子培養(yǎng)基的1000mL三角瓶中(1000mL的三角瓶裝200mL液體種子培養(yǎng)基)，28。C30。C、180r/min避光培養(yǎng)72小時(shí)，得種子液。液體種子培養(yǎng)基組成葡萄糖20.0g/L、淀粉15.0g/L、蛋白胨2.0g/L、尿素0.5g/L、硫酸鎂1.0g/L、硝酸鈉0.5g/L、磷酸氫二銨2.0g/L、氯化鉀0.5g/L、碳酸鈣0.4g/L，其余為水。3)、選用10升機(jī)械通氣發(fā)酵罐(FJG-10，江蘇格瑞生物技術(shù)有限公司)作為發(fā)酵罐，選用實(shí)施例1所得的發(fā)酵培養(yǎng)基。將上述步驟2)所得的種子液以發(fā)酵培養(yǎng)基10%(體積比)的比例接入內(nèi)裝發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，依次進(jìn)行以下發(fā)酵步驟(在整個(gè)發(fā)酵過程中罐壓控制在0.03MPa0.05MPa之間，培養(yǎng)時(shí)間共為240小時(shí))初期溫度控制在28'C3(TC，通入空氣進(jìn)行攪拌，通氣比1:0.5V/V/min，攪拌轉(zhuǎn)速為200r/min,pH自然調(diào)節(jié)；培養(yǎng)時(shí)間為120小時(shí)，中期將溫度降低到25'C，提高通氣比，使通氣比為1:1V/V/min，當(dāng)還原糖濃度降到10g/L左右、溶解氧(DO)開始緩慢上升時(shí)補(bǔ)加質(zhì)量濃度為20%的淀粉溶液，一次性補(bǔ)加量為淀粉溶液中的淀粉是發(fā)酵培養(yǎng)基中的淀粉重量的30%，用氫氧化鈉人工調(diào)節(jié)的方式來控制發(fā)酵罐中的PH值為5.06.0，培養(yǎng)時(shí)間為48小時(shí)；后期溫度保持在25"C，停止補(bǔ)加碳源，降低通氣比，使通氣比為1:0.5V/V/min;當(dāng)還原糖降到1g/L以下時(shí)，鏡檢發(fā)現(xiàn)菌絲開始自溶，形成節(jié)孢子后將所得的發(fā)酵液放罐;培養(yǎng)時(shí)間為72小時(shí)。所得的發(fā)酵液HPLC圖譜如圖1所示。4)、收集上述發(fā)酵液，離心分離后得澄清液5升，再將澄清液用5升石油醚分三次萃取，將有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥后，50°C真空濃縮得淡黃色粗提物6.0克。最后，還需要注意的是，以上列舉的僅是本發(fā)明的若干個(gè)具體實(shí)施例。顯然，本發(fā)明不限于以上實(shí)施例，還可以有許多變形。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員能從本發(fā)明公開的內(nèi)容直接導(dǎo)出或聯(lián)想到的所有變形，均應(yīng)認(rèn)為是本發(fā)明的保護(hù)范圍。權(quán)利要求1、一種發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于所述發(fā)酵培養(yǎng)基的組成為葡萄糖15.8～16.2g/L、淀粉25.6～26.0g/L、蛋白胨1.9～2.1g/L、硫酸鎂0.9～1.1g/L、硝酸鈉0.4～0.6g/L、磷酸氫二銨1.9～2.1g/L和氯化鉀0.4～0.6g/L，其余為水。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于所述發(fā)酵培養(yǎng)基的組成為葡萄糖16.0g/L、淀粉25.8g/L、蛋白胨2.0g/L、硫酸鎂1.0g/L、硝酸鈉0.5g/L、磷酸氫二銨2.0g/L和氯化鉀0.5g/L，其余為水。3、一種利用權(quán)利要求1或2所述的發(fā)酵培養(yǎng)基發(fā)酵生產(chǎn)木霉菌酯素的方法，其特征在于包括以下步驟1)、先將保存編號為CGMCC1672的紫杉木霉菌株ZJUF0986在PDA培養(yǎng)基上進(jìn)行活化；活化后，用打孔器切取菌落邊緣菌餅；2)、將上述菌餅接種到內(nèi)裝液體種子培養(yǎng)基的培養(yǎng)容器中，于28'C3(TC、180r/min的條件下避光培養(yǎng)72小時(shí)，得種子液；3)、將種子液接入內(nèi)裝發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中依次進(jìn)行以下發(fā)酵步驟，所述種子液與發(fā)酵培養(yǎng)基的體積比為1:10:初期溫度控制在28'C30'C，通氣攪拌，培養(yǎng)時(shí)間為120小時(shí)，中期將溫度降低到25'C，提高通氣比；當(dāng)還原糖濃度降到9.510.5g/L且溶解氧開始緩慢上升時(shí)，補(bǔ)加質(zhì)量濃度為20%的淀粉溶液；所述淀粉溶液中的淀粉是發(fā)酵培養(yǎng)基中的淀粉重量的30%，控制發(fā)酵罐中的PH值為5.06.0，培養(yǎng)時(shí)間為48小時(shí)；后期降低通氣比至初期狀態(tài)，培養(yǎng)時(shí)間為72小時(shí)；得發(fā)酵液。4、根據(jù)權(quán)利要求3所述的發(fā)酵生產(chǎn)木霉菌酯素的方法，其特征是將所述發(fā)酵液離心分離后得澄清液，再將澄清液依次經(jīng)萃取、干燥和真空濃縮后得木霉菌酯素粗提物。5、根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的發(fā)酵生產(chǎn)木霉菌酯素的方法，其特征是整個(gè)步驟3)的發(fā)酵過程中，發(fā)酵罐內(nèi)的壓力控制在0.03MPa0.05Mpa;步驟3)的初期通氣比為1:0.5V/V/min，攪拌轉(zhuǎn)速為200r/min;中期通氣比為1:1V/V/min;后期通氣比為1:0.5V/V/min。6、根據(jù)權(quán)利要求5所述的發(fā)酵生產(chǎn)木霉菌酯素的方法，其特征是所述步驟2)將10粒直徑為5mm的菌餅接入200ml液體種子培養(yǎng)基中，以1000m附子瓶作為培養(yǎng)容器。7、根據(jù)權(quán)利要求6所述的發(fā)酵生產(chǎn)木霉菌酯素的方法，其特征是所述液體種子培養(yǎng)基組成為葡萄糖20.0g/L、淀粉15.0g/L、蛋白胨2.0g/L、尿素0.5g/L、硫酸鎂1.0g/L、硝酸鈉0.5g/L、磷酸氫二銨2.0g/L、氯化鉀0.5g/L和碳酸鈣0.4g/L，其余為水。8、根據(jù)權(quán)利要求7所述的發(fā)酵生產(chǎn)木霉菌酯素的方法，其特征是所述步驟1)在28'C30'C活化培養(yǎng)5天。全文摘要本發(fā)明公開了一種發(fā)酵培養(yǎng)基，其組成為葡萄糖15.8～16.2g/L、淀粉25.6～26.0g/L、蛋白胨1.9～2.1g/L、硫酸鎂0.9～1.1g/L、硝酸鈉0.4～0.6g/L、磷酸氫二銨1.9～2.1g/L和氯化鉀0.4～0.6g/L，其余為水。本發(fā)明還公開了利用上述發(fā)酵培養(yǎng)基發(fā)酵生產(chǎn)木霉菌酯素的方法，包括以下步驟1)先將保存編號為CGMCC1672的紫杉木霉菌株ZJUF0986在PDA培養(yǎng)基上進(jìn)行活化；2)將活化所得的菌餅接種到內(nèi)裝液體種子培養(yǎng)基的培養(yǎng)容器中培養(yǎng)，得種子液；3)將種子液接入內(nèi)裝發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中進(jìn)行發(fā)酵。使用本發(fā)明的方法生產(chǎn)木霉菌酯素，具有產(chǎn)物量多的特點(diǎn)。文檔編號C12P7/62GK101168757SQ20071015639公開日2008年4月30日申請日期2007年11月2日優(yōu)先權(quán)日2007年11月2日發(fā)明者林福呈,王國平,章初龍,鄭必強(qiáng)申請人:建德市大洋化工有限公司