專利名稱：無(wú)機(jī)磷診斷/測(cè)定試劑盒及無(wú)機(jī)磷濃度測(cè)定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種無(wú)機(jī)磷診斷/測(cè)定試劑盒，同時(shí)本發(fā)明還涉及測(cè)定無(wú)機(jī)磷 濃度的方法，屬于醫(yī)學(xué)/食品/環(huán)境檢驗(yàn)測(cè)定技術(shù)領(lǐng)域。
技術(shù)背景人體內(nèi)磷的87%都存在于骨骼中，血液中的磷和骨骼中的磷保持動(dòng)態(tài)平 衡，血中鈣、磷濃度之間有一定關(guān)系，正常人血鈣升高則血磷降低，反之亦 然。血槳中[鈣]、[磷]濃度的乘積保持在一定范圍；大約每100毫升血漿鈣 磷濃度的乘積為35——40。當(dāng)二者乘積大于40時(shí)，鈣和磷以骨鹽形式沉積 在骨組織，>70時(shí)，可發(fā)生轉(zhuǎn)移性鈣化。當(dāng)乘積<35時(shí)，則將妨礙骨組織 的鈣化，甚至使骨鹽再溶解，影響成骨作用，引起佝僂病或軟骨病。血漿[Ca]、 [Pi]的恒定，主要受維生素D，甲狀旁腺激素及降鈣素的調(diào)節(jié)。由于人體的磷目前還不能直接測(cè)定，所以無(wú)機(jī)磷的檢測(cè)實(shí)際上是分析磷 酸鹽陰離子(H2PO -， HP042')。常用的方法有磷鉬酸還原法，非還原法， 染料結(jié)合法，酶法，同位素稀釋質(zhì)譜法、原子吸收分光光度法和流動(dòng)注射分 析法等。決定性方法是同位素稀釋質(zhì)譜法，WHO推薦的中等實(shí)驗(yàn)室測(cè)定無(wú) 機(jī)磷的常規(guī)方法是比色法。磷鉬酸還原法又有無(wú)蛋白學(xué)濾液法和不去蛋白法，后者需在試劑中加入 非離子型表面活性劑以避免混濁。所用還原劑和表面活性劑種類很多，性能 比較穩(wěn)定的還原劑有硫酸亞鐵，硫酸亞鐵銨，硫酸肼，米吐?tīng)柕取１砻婊钚詣﹦t以聚乙二醇基苯基醚(TritonX-100)最理想。
磷鉬酸非還原法(直接紫外法)在340nrn或325nrn直接測(cè)定磷鉑酸雜聚化 合物，方法簡(jiǎn)便，便于自動(dòng)化。但黃疽，溶血，脂濁血清在340nm有光吸收， 必須做標(biāo)本空白，否則結(jié)果偏高。
酶法測(cè)定無(wú)機(jī)磷是發(fā)展趨勢(shì)，其優(yōu)點(diǎn)是無(wú)機(jī)磷酸鹽化合物在酶作用下的 中性范圍內(nèi)是穩(wěn)定的，可用于常規(guī)樣品的自動(dòng)化分析。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是提出一種利用酶循環(huán)擴(kuò)增法(Enzymatic Recycling Method)、酶比色法(Enzymatic Colorimetric Method)及酶聯(lián)法 (Couple Reaction)技術(shù)，計(jì)量通過(guò)酶聯(lián)反應(yīng)生成吲嗒胺色原(Indamine dye) 或醌亞胺色原(Quioneimine dye)所導(dǎo)致在400—700nm波長(zhǎng)處吸光度的上 升，得以測(cè)定無(wú)機(jī)磷濃度的方法，同時(shí)，本發(fā)明還將給出用以實(shí)現(xiàn)該方法的 無(wú)機(jī)磷診斷/測(cè)定試劑盒，采用該試劑不僅可以在可見(jiàn)光分析儀或半、全自動(dòng) 生化分析儀上進(jìn)行無(wú)機(jī)磷濃度測(cè)定，而且測(cè)定速度快、靈敏度大、準(zhǔn)確度高， 因而可以得到切實(shí)的推廣應(yīng)用。
本發(fā)明無(wú)機(jī)磷濃度測(cè)定方法原理如下-磷酸根+谷氨酰胺+腺苷二磷酸谷氨酰胺合成酶氨離子
+谷氨酸+腺苷三磷酸 氨離子+丙酮酸+還原型輔酶丙氨酸脫氫酶L-丙氨酸+
水+輔酶
丙氨酸+水+氧甘氨酸氧化酶氨離子+丙酮酸+
過(guò)氧化氫過(guò)氧化氫+還原型色原體組合過(guò)氧化物酶吲嗒胺色原或
醌亞胺色原+水
這種方法應(yīng)用谷氨酰胺合成酶(glutaminesynthetase ; EC6.3丄2)酶(偶) 聯(lián)丙氨酸脫氫酶(alanine dehydrogenase ; EC 1.4.1.1)、甘氨酸氧化酶 (glycine oxidase ; EC 1.4.3.19)及過(guò)氧化物酶(peroxidase ; EC 1.11.1.7)
酶促反應(yīng)速率比色法。谷氨酰胺合成酶作為作用酶，功能為將無(wú)機(jī)磷(磷酸 根)酶解產(chǎn)生氨離子。丙氨酸脫氫酶的酶促作用使氨離子變成丙氨酸。甘氨 酸氧化酶作為循環(huán)酶將丙氨酸再次變回氨離子，使谷氨酰胺合成酶酶解無(wú)機(jī) 磷產(chǎn)生的氨離子不斷地被重復(fù)循環(huán)利用。同時(shí)甘氨酸氧化酶的作用也循環(huán)不 斷地生成過(guò)氧化氫。過(guò)氧化物酶(peroxidase ; EC 1.11丄7)作為顯色酶， 通過(guò)和過(guò)氧化氫的作用，使無(wú)色的還原型色原體組合氧化成有色的染料，從 而可以通過(guò)可見(jiàn)光分析儀器，在400—700nm (根據(jù)還原型色原體組合的不 同而定)波長(zhǎng)處測(cè)定染料一吲嗒胺色原(Indamine dye)或醌亞胺色原 (Quioneiminedye) —含量高低的光吸收大小速度，得出無(wú)機(jī)磷濃度大小測(cè) 定結(jié)果。
實(shí)驗(yàn)表明，從測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性和配制成本的經(jīng)濟(jì)性兩方面綜合考慮， 如下成分關(guān)系的本發(fā)明無(wú)機(jī)磷診斷/測(cè)定試劑盒較為理想
緩沖液 100mmol/L 穩(wěn)定劑 500 mmol/L
還原型輔酶 0.25 mmol/L
谷氨酰胺 10 mmol/L
腺苷二磷酸 20 mmol/丙酮酸
20 mmol/L
谷氨酰胺合成酶
10000U/L
丙氨酸脫氫酶
12000U/L
甘氨酸氧化酶
12000U/L
過(guò)氧化物酶
30000 U/L
還原型色原體組合
-20 mmol/L
所述還原型色原體組合(Chromogen)可以是下列28個(gè)組合中的任何一個(gè)配
3-甲基-2-苯噻唑酮腙
石碳酸
3-甲基-2-苯噻唑酮腙
N-乙基一N- (3-硫丙基)-m-噻卩定胺
3-甲基-2-苯噻唑酮腙 N，N-雙乙基-m-甲苯胺
3-甲基-2-苯噻唑酮腙 2，4-雙氯石碳酸
3-甲基-2-苯噻唑酮腙 2，4，6-仨溴-3-羥基-苯磺酸
3-甲基-2-苯噻唑酮腙 3,5-雙氯石碳酸磺酸
3-甲基-2-苯噻唑酮腙 3，5-雙氯-2-羥基-苯磺酸
3-甲基-2-苯噻唑酮腙
N-乙基-N- (2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺鈉鹽
3-甲基-2-苯噻唑酮腙
仨溴羥基苯甲酸
3-甲基-2-苯噻唑酮腙
雙甲基苯胺
對(duì)組合:3-甲基-2-苯噻唑酮腙
N-乙基-N- (2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺
3-甲基-2-苯噻唑酮腙
2,2，-AZINO-雙(3-乙基苯噻唑-6-磺酸)
3- 甲基-2-苯噻唑酮腙
4- 羥基-3-甲氧基苯甲酸
3-甲基-2-苯噻唑酮腙
3- 甲基-乙基-羥基苯胺
4- 氨基抗砒
石碳酸
4-氨基抗砒
N-乙基^N. (3-硫丙基)-m-噻啶胺
4-氨基抗砒 N，N-雙乙基-m-甲苯胺
4-氨基抗砒 2，4-雙氯石碳酸
4-氨基抗砒
2,4,6-仨溴-3-羥基-苯磺酸
4-氨基抗砒 3,5-雙氯石碳酸磺酸
4-氨基抗砒
3,5-雙氯-2-羥基-苯磺酸 4-氨基抗砒
N-乙基-N- (2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺鈉鹽
4-氨基抗砒
仨溴羥基苯甲酸
4-氨基抗砒 雙甲基苯胺
4-氨基抗砒
N-乙基-N- (2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺4-氨基抗砒
2,2，-AZINO-雙(3-乙基苯噻唑-6-磺酸) 4-氨基抗砒
4-羥基-3-甲氧基苯甲酸 4-氨基抗砒
3-甲基-乙基-羥基苯胺。 本發(fā)明的無(wú)機(jī)磷診斷/測(cè)定試劑盒可以是單劑，包括
緩沖液、穩(wěn)定劑、還原型輔酶、谷氨酰胺、腺苷二磷酸、丙酮酸、谷氨酰胺
合成酶、丙氨酸脫氫酶、甘氨酸氧化酶、過(guò)氧化物酶、還原型色原體組合。
試劑盒可以是干粉狀態(tài)，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，
直接使用。
也可以將上述單劑試劑配成如下雙劑試劑 試劑1
緩沖液、穩(wěn)定劑、還原型色原體組合、還原型輔酶、谷氨酰胺、腺苷 二磷酸、丙酮酸。 試劑2
緩沖液、穩(wěn)定劑、還原型色原體組合、谷氨酰胺合成酶、丙氨酸脫氫 酶、甘氨酸氧化酶、過(guò)氧化物酶。 過(guò)氧化物酶、還原型色原體組合、還原型輔酶、谷氨酰胺、腺苷二磷酸、 丙酮酸、谷氨酰胺合成酶、丙氨酸脫氫酶、甘氨酸氧化酶在試劑1或試劑2 中的位置可以不限。試劑盒可以是干粉狀態(tài)，在使用前加水溶解后使用；也 可以配制成液體試劑，直接使用。
也可以將上述單劑試劑配成如下三劑試劑 試劑l緩沖液、穩(wěn)定劑、還原型色原體組合、還原型輔酶、谷氨酰胺、腺苷 二磷酸、丙酮酸。
試劑2
緩沖液、穩(wěn)定劑、還原型色原體組合、丙氨酸脫氫酶、甘氨酸氧化酶、 過(guò)氧化物酶。 試劑3
緩沖液、穩(wěn)定劑、過(guò)氧化物酶、谷氨酰胺合成酶。 過(guò)氧化物酶、還原型色原體組合、還原型輔酶、谷氨酰胺、腺苷二磷酸、 丙酮酸、谷氨酰胺合成酶、丙氨酸脫氫酶、甘氨酸氧化酶在試劑1、試劑2 或試劑3中的位置可以不限。試劑盒可以是干粉狀態(tài)，在使用前加水溶解后 使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合實(shí)施例子對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明。 實(shí)施例一
本實(shí)施例的無(wú)機(jī)磷診斷/測(cè)定試劑為單試劑，包括
三(羧甲基)氨基甲烷一鹽酸緩沖液 100mmol/L. 穩(wěn)定劑 500 mmol/L
還原型輔酶 0.25 mmol/L
谷氨酰胺 10mmol/L 腺苷二磷酸 20 mmol/L
丙酮酸 20 mmol/L
谷氮酰胺合成酶 10000 U/L丙氨酸脫氫酶 12000 U/L甘氨酸氧化酶 12000 U/L過(guò)氧化物酶 30000 U/L4-氨基抗砒 2 mmol/L石碳酸 10mmol/L 試劑全部溶解配好后，分裝入瓶，進(jìn)行冷凍干燥，制成干粉試劑；使用 前，加入純凈水，復(fù)溶后使用。在全自動(dòng)生化分析儀上設(shè)定溫度37'C，反應(yīng)時(shí)間10分鐘，測(cè)試主波 長(zhǎng)505nm,測(cè)試副波長(zhǎng)600nm，被測(cè)無(wú)機(jī)磷樣品與試劑的體積比例為1/25， 反應(yīng)方向?yàn)檎磻?yīng)(上升反應(yīng))，檢測(cè)方法為速率法，延遲時(shí)間大約1分鐘 左右，檢測(cè)時(shí)間3分鐘左右。加入樣品和試劑后，使之混合并發(fā)生反應(yīng)，最終將反應(yīng)物置于生化分析 儀下，檢測(cè)主波長(zhǎng)505nm吸光度上升的速度，從而測(cè)算出無(wú)機(jī)磷的濃度大小。 實(shí)施例二本實(shí)施例的無(wú)機(jī)磷診斷/測(cè)定試劑為雙試劑，包括 試劑l三(羧甲基)氮基甲烷一鹽酸緩沖液 穩(wěn)定劑 還原型輔酶 谷氨酰胺 腺苷二磷酸 丙酮酸幽mmol/L 50 mmol/L0.25 mmol/L 10 mmol/L 20 mmol/L 20 mmol/L2,4，6-仨溴-3-羥基-苯磺酸0.2 mmol/L試劑2三(羧甲基)氨基甲烷一鹽酸緩沖液 穩(wěn)定劑谷氨酰胺合成酶甘氨酸氧化酶 過(guò)氧化物酶100 mmol/L 500 mmol/L10000 U/L12000U/L12000U/L30000 U/L4-氨基抗砒 0.6 mmol/L試劑全部溶解配好后，分裝入瓶，制成液體雙試劑，可以直接使用。 在全自動(dòng)生化分析儀上設(shè)定溫度37'C，反應(yīng)時(shí)間IO分鐘，測(cè)試主波長(zhǎng)546nm，測(cè)試副波長(zhǎng)600nm,被測(cè)無(wú)機(jī)磷樣品與試劑的體積比例為1/20，反應(yīng)方向?yàn)檎磻?yīng)(上升反應(yīng))，檢測(cè)方法為速率法，延遲時(shí)間大約1分鐘左右，檢測(cè)時(shí)間3分鐘左右。加入樣品和試劑后，使之混合并發(fā)生反應(yīng)，最終將反應(yīng)物置于生化分析儀下，檢測(cè)主波長(zhǎng)546nm吸光度上升的速度，從而測(cè)算出無(wú)機(jī)磷的濃度大小。實(shí)施例三本實(shí)施例的無(wú)機(jī)磷診斷/測(cè)定試劑為三試劑，包括試劑1三(羧甲基)氨基甲垸一鹽酸緩沖液 .穩(wěn)定劑 還原型輔酶100mmol/L 50 mmol/L 0.25 mmol/L谷氨酰胺腺苷二磷酸丙酮酸.甲基-2-苯噻唑酮崩宗10 mmol/L 20 mmol/L 20 mmol/L 0.6 mmol/L試劑2三(羧甲基)氨基甲烷一鹽酸緩沖液 穩(wěn)定劑試劑3甘氨酸氧化酶過(guò)氧化物酶雙甲基苯胺三(羧甲基)氨基甲垸一鹽酸緩沖液 穩(wěn)定劑簡(jiǎn)mmol/L 500 mmol/L12000U/L12000 U/L30000 U/L 2 mmol/L100 mmol/L500 mmol/L谷氨酰胺合成酶 10000 U/L試劑全部溶解配好后，分裝入瓶，制成液體三試劑，可以直接使用。在全自動(dòng)生化分析儀上設(shè)定溫度37i:，反應(yīng)時(shí)間io分鐘，測(cè)試主波長(zhǎng)578nm，測(cè)試副波長(zhǎng)660nm，被測(cè)無(wú)機(jī)磷樣品與試劑的體積比例為1/30，反 應(yīng)方向?yàn)檎磻?yīng)(上升反應(yīng))，檢測(cè)方法為速率法，延遲時(shí)間大約1分鐘左 右，檢測(cè)時(shí)間3分鐘左右。加入樣品和試劑后，使之混合并發(fā)生反應(yīng)，最終將反應(yīng)物置于生化分析 儀下，檢測(cè)主波長(zhǎng)578nm吸光度上升的速度，從而測(cè)算出無(wú)機(jī)磷的濃度大小。申請(qǐng)人經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，采用以上發(fā)明內(nèi)容中記載的其他各種還原型色原 體組合均能達(dá)到本發(fā)明的目的，鑒于測(cè)定步驟等情況與以上實(shí)施例類同，不 另一一例舉?？傊?，實(shí)驗(yàn)證明，采用本發(fā)明的測(cè)定方法完全可以通過(guò)可見(jiàn)光分析儀器 得出所需的測(cè)定結(jié)果，并且靈敏度高、精確度好，不受內(nèi)外源物質(zhì)量污染。
權(quán)利要求
1.一種酶循環(huán)擴(kuò)增法、酶比色法及酶聯(lián)法技術(shù)的無(wú)機(jī)磷濃度測(cè)定方法，其方法原理如下磷酸根+谷氨酰胺+腺苷二磷酸谷氨酰胺合成酶氨離子 +谷氨酸+腺苷三磷酸氨離子+丙酮酸+還原型輔酶丙氨酸脫氫酶L-丙氨酸+ 水+輔酶丙氨酸+水+氧甘氨酸氧化酶氨離子+丙酮酸+過(guò)氧化氫過(guò)氧化氫+還原型色原體組合過(guò)氧化物酶吲嗒胺色原或醌亞胺色原+水將最終反應(yīng)物置于可見(jiàn)光分析儀下，檢測(cè)400-700nm處直接反映吲嗒胺色原或醌亞胺色原含量高低的光吸收速度，得出無(wú)機(jī)磷濃度大小測(cè)定結(jié)果。
2. —種無(wú)機(jī)磷診斷/測(cè)定試劑盒，主要成分包括緩沖液 20——500 mmol/L穩(wěn)定劑還原型輔酶谷氨酰胺腺苷二磷酸丙氨酸脫氫酶 1000——80000 U/L甘氨酸氧化酶 1000——80000 U/L過(guò)氧化物酶 500——80000 U/L還原型色原體組合 0.1——20 mmol/L其特征在于試劑盒可以是干粉狀態(tài)，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述無(wú)機(jī)磷診斷/測(cè)定試劑盒，其特征在于 由緩沖液、穩(wěn)定劑、還原型輔酶、谷氨酰胺、腺苷二磷酸、丙酮酸、谷氨 酰胺合成酶、丙氨酸脫氫酶、甘氨酸氧化酶、過(guò)氧化物酶、還原型色原體 組合組成單劑試劑。4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述無(wú)機(jī)磷診斷/測(cè)定試劑盒，其特征在于 由緩沖液、穩(wěn)定劑、還原型輔酶、谷氨酰胺、腺苷二磷酸、丙酮酸、谷氨 酰胺合成酶、丙氨酸脫氫酶、甘氨酸氧化酶、過(guò)氧化物酶、還原型色原體 組合組成雙劑試劑；試劑l，由緩沖液、穩(wěn)定劑、還原型輔酶、谷氨酰胺、 腺苷二磷酸、丙酮酸、還原型色原體組合組成；試劑2，由緩沖液、穩(wěn)定 齊U、谷氨酰胺合成酶、丙氨酸脫氫酶、甘氨酸氧化酶、過(guò)氧化物酶、還原 型色原體組合組成。過(guò)氧化物酶、還原型色原體組合、還原型輔酶、谷氨 酰胺、腺苷二磷酸、丙酮酸、谷氨酰胺合成酶、丙氨酸脫氫酶、甘氨酸氧 化酶在試劑1或試劑2中的位置可以不限。5. 根據(jù)權(quán)利要求2所述無(wú)機(jī)磷診斷/測(cè)定試劑盒，其特征在于由緩沖液、穩(wěn)定劑、還原型輔酶、谷氨酰胺、腺苷二磷酸、丙酮酸、谷 氨酰胺合成酶、丙氨酸脫氫酶、甘氨酸氧化酶、過(guò)氧化物酶、還原型色原體組合組成多劑試劑；試劑l，由緩沖液、穩(wěn)定劑、還原型輔酶、谷氨 酰胺、腺苷二磷酸、丙酮酸、還原型色原體組合組成；試劑2，由緩沖液、 穩(wěn)定劑、丙氨酸脫氫酶、甘氨酸氧化酶、過(guò)氧化物酶、還原型色原體組 合組成；試劑3，由緩沖液、穩(wěn)定劑、谷氨酰胺合成酶組成。過(guò)氧化物酶、 還原型色原體組合、還原型輔酶、谷氨酰胺、腺苷二磷酸、丙酮酸、谷 氨酰胺合成酶、丙氨酸脫氫酶、甘氨酸氧化酶在試劑l、試劑2或試劑3 中的位置可以不限。6. 根據(jù)權(quán)利要求2所述無(wú)機(jī)磷診斷/測(cè)定試劑盒，其特征在于還包括穩(wěn)定 齊U 1~4000 mmol/L或0.1%-100%體積比。所述穩(wěn)定劑為硫酸銨(Ammonia Sulfate)、甘油(Glycerol)、丙二醇(Propylene Glycol)、乙 二醇(Ethylene glycol)及防腐劑中的至少一種。7. 根據(jù)權(quán)利要求2所述無(wú)機(jī)磷診斷/測(cè)定試劑盒，其特征在于所述還原型色原體組合可以是下列28個(gè)組合中的任一個(gè)配對(duì)組合3-甲基-2-苯噻唑酮腙石碳酸3-甲基-2-苯噻唑酮腙N-乙基""N- (3-硫丙基)-m-噻啶胺3-甲基-2-苯噻唑酮腙 N，N-雙乙基-m-甲苯胺3-甲基-2-苯噻唑酮腙 2，4-雙氯石碳酸3-甲基-2-苯噻唑酮腙 2,4,6-仨溴-3-羥基-苯磺酸3-甲基-2-苯噻唑酮腙 3,5-雙氯石碳酸磺酸3-甲基-2-苯噻唑酮腙1. 3,5-雙氯-2-羥基-苯磺酸 3-甲基-2-苯噻唑酮腙N-乙基-N- (2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺鈉鹽3-甲基-2-苯噻唑酮腙仨溴羥基苯甲酸3-甲基-2-苯噻唑酮腙 雙甲基苯胺3-甲基-2-苯噻唑酮腙N-乙基-N- (2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺3-甲基-2-苯噻唑酮腙2,2，-AZINO-雙(3-乙基苯噻唑-6-磺酸)3- 甲基-2-苯噻唑酮腙4- 羥基-3-甲氧基苯甲酸3-甲基-2-苯噻唑酮腙3- 甲基-乙基-羥基苯胺4- 氨基抗砒 石碳酸4-氨基抗砒1^乙基~~1^- (3-硫丙基)-m-噻啶胺4-氨基抗砒 N,N-雙乙基-m-甲苯胺4-氨基抗砒2.4- 雙氯石碳酸4-氨基抗砒2,4，6-仨溴-3-羥基-苯磺酸4-氨基抗砒 3，5-雙氯石碳酸磺酸4-氨基抗砒3.5- 雙氯-2-羥基-苯磺酸 4-氨基抗砒1.N-乙基-N- (2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺鈉鹽 4-氨基抗砒仨溴羥基苯甲酸4-氨基抗砒雙甲基苯胺4-氨基抗砒N-乙基-N- (2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺 4-氨基抗砒2，2，-AZINO-雙(3-乙基苯噻唑-6-磺酸) 4-氨基抗砒4-羥基-3-甲氧基苯甲酸4-氨基抗砒 3-甲基-乙基-羥基苯胺
全文摘要
本發(fā)明涉及一種利用酶循環(huán)擴(kuò)增法、酶比色法及酶聯(lián)法技術(shù)的無(wú)機(jī)磷診斷/測(cè)定試劑盒，同時(shí)本發(fā)明還涉及測(cè)定無(wú)機(jī)磷濃度的方法原理、試劑的組成及成分，屬于醫(yī)學(xué)/食品/環(huán)境檢驗(yàn)測(cè)定技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明的試劑盒主要成分包括緩沖液、還原型輔酶、谷氨酰胺、腺苷二磷酸、丙酮酸、谷氨酰胺合成酶、丙氨酸脫氫酶、甘氨酸氧化酶、過(guò)氧化物酶、還原型色原體組合及穩(wěn)定劑；通過(guò)一系列的酶促反應(yīng)，最終將無(wú)色的還原型色原體組合氧化成有色的染料，從而可以通過(guò)可見(jiàn)光分析儀器，在400-700nm波長(zhǎng)處，測(cè)定染料含量的高低，進(jìn)而直接反映出無(wú)機(jī)磷濃度的大小。
文檔編號(hào)C12Q1/00GK101324619SQ200710023379
公開(kāi)日2008年12月17日 申請(qǐng)日期2007年6月13日 優(yōu)先權(quán)日2007年6月13日
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