專利名稱：：用于活性成分的保護性水膠體的制作方法用于活性成分的保護性水膠體本發(fā)明涉及(經(jīng)修飾的)水稻胚乳蛋白用作為活性成分的新穎保護性水膠體的用途，所述活性成分尤其是脂溶性活性成分和/或著色劑。此外，本發(fā)明涉及下述組合物及其生產(chǎn)方法，所述組合物包含(經(jīng)修飾的)水稻胚乳蛋白和至少一種活性成分，本發(fā)明還涉及(經(jīng)修飾的)水稻胚乳蛋白本身及其生產(chǎn)方法。本發(fā)明還涉及此類組合物用于對食品、飲料、動物飼料、個人護理組合物和藥物組合物進行富集、強化和/或著色的用途，以及涉及分別含有此類(經(jīng)修飾的)水稻胚乳蛋白和此類組合物的食品、飲料、動物飼料、個人護理組合物和藥物組合物?；钚猿煞郑绕涫侵苄曰钚猿煞只蛑珓?，通常不原樣添加至食品、飲料、動物飼料、個人護理組合物和藥物組合物中，而是以在水性保護性膠體中活性成分的制劑形式添加，這是為了增強化學(xué)穩(wěn)定性、(水)溶解度、自由流動性和受控釋放等性質(zhì)。已知的水性保護性膠體是，例如，不同來源(禽、牛、豬、魚)的明膠和淀粉。由于宗教方面或過敏反應(yīng)方面的原因，動物來源的水性保護性膠體通常是人們不想要的，而對無玉米(corn)和無麥麩(gluten)產(chǎn)品感興趣的消費者不喜歡基于淀粉的水性保護性膠體，因此，人們?nèi)孕枰娲缘乃员Ｗo性膠體。水稻胚乳蛋白被認(rèn)為是營養(yǎng)性的、低變應(yīng)原性(hypoallergenic)的，因此其是用于活性成分制劑的保護性水膠體的合適的替代性來源。但是，水稻胚乳蛋白在中性pH時的高度不溶性和較差的功能性限制了其作為功能性成分在食品和藥物產(chǎn)品中的工業(yè)應(yīng)用。本發(fā)明克服了這些局限，將(經(jīng)修飾的)水稻胚乳蛋白作為活性成分(尤其是脂溶性活性成分和/或著色劑)制劑的保護性水膠體并入。水稻蛋白較之其它谷物(包括玉米和小麥)而言，在營養(yǎng)品質(zhì)方面的排名很高，因此被認(rèn)為在作為食品成分的用途方面極具潛力。谷物顆粒蛋白富含必要氨基酸一一半胱氨酸和甲硫氨酸。賴氨酸是谷物蛋白中主要的局限氨基酸，但是水稻卻比其它谷物蛋白(小麥2.3，玉米2.5g/16gN)含有更多的賴氨酸(3.8g/16gN)(見下文引用的參考文獻4)。雖然水稻通常被認(rèn)為是常見谷粒(小麥10.6%，玉米9.8%,大麥11.0%，小米11.5%)中蛋白質(zhì)含量最低的(7.3%)，但是水稻蛋白的凈蛋白利用(73.8%)卻是谷物谷粒中最高的(小麥53.0%，玉米58.0%,大麥62.0%，小米56.0%)。較之其它谷物蛋白，對水稻蛋白的分離是困難的，并且因此耗費成本。占主要地位的水稻蛋白一一谷蛋白是疏水性的，并通過二硫鍵交聯(lián)。提取的蛋白本質(zhì)上高度不可溶，蛋白分離中使用的條件還會進一步降低它們的溶解度，由此它們在作為功能性成分方面的應(yīng)用是有所局限的?？赏ㄟ^堿提接著在蛋白等電點pH下的沉淀，來從米粉中獲得高蛋白的水稻產(chǎn)品。通常用淀粉水解酶，例如仏淀粉酶、葡糖淀粉酶和支鏈淀粉酶，通過溶解和除去淀粉來分離米粉中的蛋白。除了淀粉水解酶之外，還已經(jīng)用纖維素酶和半纖維素酶來進一步增加水稻蛋白濃縮物中的蛋白含量。但是，關(guān)于合適的提取方法和此類分離物功能性的信息很有限。使用經(jīng)批準(zhǔn)的食品級酶和化學(xué)物質(zhì)進行的高效提取方法對于商業(yè)生產(chǎn)和應(yīng)用水稻蛋白來說是必要的。該需要由本發(fā)明的包含水稻胚乳蛋白和活性成分的組合物來滿足。技術(shù)背景信息1.Fiocchi，A.;Travaini,M.;D'Auria,E.;Banderali,G.;Bernardo,L.;Riva，E.Tolerancetoaricehydrolysateformulainchildrenallergictocow'smilkandsoy.ClinExpAllergy2003,33(11),1576-80.2.Eggum,B.O.;Cabrera,M.I.Z.;Juliano,B.O.ProteinandlysinedigestibilityandproteinqualityofcookedFilipinoricedietsandmilledriceingrowingrats.PlantFoodsH亂Nutr.1992，43(2),163-1703.Bean,M.M.;Nishita，K.D.Ricefloursforbaking.InJulianoB.O.,editor.Ricechem-istryandtechnology,2nded.St.Paul:AmerAssoc,ofCerealChemists.1985,pp539-556.4.Juliano,B.O.Rice:chemistryandtechnology.St.Paul,Minn.:AmericanAssociationofCerealChemists.1985.5.Anderson,A.;Hettiarachchy,N.S.;Yu,Z.Y.Physicochemicalpropertiesofpronasetreatedriceglutelin.JournaloftheAmericanOilChemists'Society2000,78(1),1-6.6.Yu，Z.Y.;Hettiarachchy,N.S.;Rath,N.Extraction,denaturationandhydrophobicpropertiesofriceflourproteins.J.FoodSci.2001,66(2)，229-232.7.Padhye,V.W.;Salunke，D.K.Extractionandcharacterizationofriceproteins.Cerealchem.1979，106(3),389-393.8.Tecson,E.M.S.;Esmama，B.V.;Lontok,L.P.;Juliano,B.O.Studiesontheextractionandcompositionofriceendospermglutelinandprolamin.CerealChem.1971,168-181.9.Wen,T.N.;Luthe，D.S.Biochemicalcharacterizationofriceglutelin.PlantPhysiol.1985,78，172-177.10.Morita,T.;Kiriyama,S.Massproductionmethodforriceproteinisolateandnutritionalevaluation.J.FoodSci.1993,58(6),1939-1406.11.Griffm,V.K.;Brooks,J.R.Productionandsizedistributionofricemoltodextrinhy-drolyzedfrommilledriceflourusingheatstablealpha-amylase.J.FoodSci.1989,54，190-193.12.Shih，F(xiàn).F.;Daigle,K.Useofenzymesfortheseparationofproteinfromriceflour.CerealChem.1997,74(4),437-441.13.Shih,F.F.;Champagne,E.T.;Daigle,K.;Zarins,Z.Useofenzymesintheprocessingofproteinproductsfromricebranandriceflour.Nahrung1999，43,14-18.14.Shih，F(xiàn).F.;Daigle,K.W.Preparationandcharacterizationofriceproteinisolates.JournaloftheAmericanOilChemists'Society2000,77，885-889.15.Tang，S.;Hettiarachchy,N.S.;Eswaranandam，S.;Crandall，P.Proteinextractionfromheat-stabilizeddefattedricebran:II.Theroleofamylase,celluclast,andviscozyme..J.FoodSci.2003,68(2),471-470.16.AACC.Method46-08.ApprovedMethodsoftheAmericanAssociationofCerealchemists,8thed.,vol2.AACC，St.Paul,畫.1990，P1-2.17.Laemmli,U.K.CleavageofstructuralproteinsduringtheassemblyoftheheadofthebacteriophageT4.Nature1970,227，680-686.18.Hayakawa,S.;Nakai，S.Relationshipsofhydrophobicityandnetchargetothesolubilityofmilkandsoyproteins.J.FoodSci.1985,50,486-491.19.Bera,M.B.;Mukherjee,R.K.Solubility,emulsifying,andfoamingpropertiesofricebranproteinconcentrates.J.FoodSci.1989，54(1)，142-145.20.Pearce,K.N.;Kinsella,J.E.Emulsifyingpropertiesofproteins:evaluationofaturbidi-metrictechnique.J.Agric.FoodChem.1978,26,716-722.21.SAS.2002.JMPUser'sGuide,Version5.SASInstituteInc.Cary,NC.22.Kolar,C.W.;Richert，S.H.;Decker,C.D.;Steinke,F.H.;Vander,R.J.Isolatedsoyprotein.InNewProteinFoods;Altschul,AM.,Wilcke,HL.,Eds.;AcademicPress:NewYork,1985;Vol.5.23.Biliaderis,C.G.Differentialscanningcalorimetryinfoodresearch:Areview.FoodChem.1983,10,239-265.24.Damodarn，S.Protein-stabilizedfoamsandemulsions.J.FoodSci.2005，70(3),54-66.發(fā)明詳述本發(fā)明的組合物本發(fā)明的組合物可以是固體組合物，即穩(wěn)定的水溶性或水可分散性粉末，或者它們可以是液體組合物，即上述粉末的水性膠體溶液或水包油分散體系。可通過下文所述的方法或通過類似手段，來制備經(jīng)穩(wěn)定的水包油分散體系，其可以是水包油乳液或者可以是懸浮的(即，固體)顆粒和乳化的(即，液體)液滴的混合物。更具體地，本發(fā)明涉及粉末形式的穩(wěn)定組合物，其包含處于(經(jīng)修飾的)水稻胚乳蛋白基質(zhì)中的一種或多種(脂溶性)活性成分和/或一種或多種著色劑。優(yōu)選地，(經(jīng)修飾的)水稻胚乳蛋白的量為1至70重量％，更優(yōu)選地，5至50重量％，進一步更優(yōu)選地，10至40重量％，最優(yōu)選地，10至20重量％(其中20重量％是最優(yōu)選的量)，和/或，(脂溶性)活性成分和/或著色劑的量是0.1至90重量％，優(yōu)選地，1至80重量％，更優(yōu)選地，1至20重量％，上述量都基于組合物總重。如果存在額外佐劑和/或賦形劑，例如生育酚和/或棕櫚酸抗壞血酸酯，它們以基于組合物總重而言0.01至50重量％的量存在，優(yōu)選地，0.1至30重量％的量，更優(yōu)選地，0.5至10重量％的量。(經(jīng)修飾的)水稻胚乳蛋白在本發(fā)明的一些優(yōu)選實施方式中，水稻胚乳蛋白是經(jīng)修飾的水稻胚乳蛋白，其生產(chǎn)方法如下文所述(見，第13頁第26行至第18頁第23行和實施例1-7)。一種尤其優(yōu)選的水稻蛋白是通過下述步驟獲得的堿提，(酶促修飾，尤其是用Alkalase進行)，離心和超濾。如果由此獲得的經(jīng)修飾的水稻胚乳蛋白需要被進一步使用，那么還可以對其加以干燥。但是，本發(fā)明并不僅限于使用這樣生產(chǎn)的經(jīng)修飾的水稻胚乳蛋白。進一步更優(yōu)選的是具有^220的乳化能力的(經(jīng)修飾的)水稻胚乳蛋白，優(yōu)選地，^350，更優(yōu)選地，>500，進一步更優(yōu)選地，500至1000。此外，在本發(fā)明的一些優(yōu)選實施方式中，所用的(經(jīng)修飾的)水稻胚乳蛋白具有>0.2的乳化活性，優(yōu)選地，20.45，更優(yōu)選地，>0.5，進一步更優(yōu)選地，0.5至1.0。對乳化能力的測定如實施例8所述，對乳化活性的測定如實施例9所述。本發(fā)明還涉及這些(經(jīng)修飾的)水稻胚乳蛋白本身。在本發(fā)明的進一步優(yōu)選的組合物中，(經(jīng)修飾的)水稻胚乳蛋白與選自還原糖、糖蛋白或糖肽構(gòu)成的組的至少一種化合物交聯(lián)。活性成分一般而言，活性成分是具有藥理學(xué)作用的那些成分或者對人或動物體提供健康益處的那些。優(yōu)選地，活性成分是脂溶性活性成分和/或著色劑。脂溶性活性成分和/或著色劑優(yōu)選選自胡蘿卜素和結(jié)構(gòu)相關(guān)的多烯化合物、脂溶性維生素、輔酶QIO、多不飽和脂肪酸(例如二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA))及其酯(例如，乙酯或甘油三酸酯(含有相同或不同的脂肪酸))、富含多不飽和脂肪酸的甘油單/二/三酸酯、脂溶性UV-A濾光劑、UV-B濾光劑以及其生理學(xué)可接受衍生物(例如其酯，尤其是與Cwo碳酸的)以及它們的任何混合物。最優(yōu)選的脂溶性維生素是維生素A或維生素E。胡蘿卜素和結(jié)構(gòu)相關(guān)的多烯化合物的優(yōu)選例子是類胡蘿卜素，例如，a-胡蘿卜素、/3-胡蘿卜素、8，-阿樸-/5-胡蘿卜醛(carotenal)、8，-阿樸-/3-胡蘿卜素酸酯(例如乙酯)、斑蝥黃(canthaxanthin)、蝦青素、番茄紅素、葉黃素、玉米黃質(zhì)、藏花酸、a-玉米胡蘿卜素(zeacarotene)、0-玉米胡蘿卜素及它們的生理學(xué)可接受的衍生物，例如它們的酯，尤其是與Cw。碳酸的，以及它們的任何混合物。最優(yōu)選的類胡蘿卜素是^-胡蘿卜素。術(shù)語"^-胡蘿卜素"包括全順式和全反式異構(gòu)體以及所有可能的混合順反異構(gòu)體。這同樣應(yīng)用于其它類胡蘿卜素。術(shù)語"玉米黃質(zhì)"包括天然的尺i-玉米黃質(zhì)以及S,S-玉米黃質(zhì)、內(nèi)消旋玉米黃質(zhì)以及它們的任何混合物。這同樣適用于葉黃素。(脂溶性)活性成分可以是天然來源的，即，從植物中分離/提取的，純化和/或濃縮的，以及通過化學(xué)和/或微生物(發(fā)酵)途徑合成的那些。其它組分除了活性成分和(經(jīng)修飾的)水稻胚乳蛋白之外，優(yōu)選地，本發(fā)明的組合物還可含有至少一種水溶性抗氧化劑和/或脂溶性抗氧化劑。水溶性抗氧化劑可以例如是抗壞血酸或其鹽，優(yōu)選地，抗壞血酸鈉，水溶性多酚，例如羥基酪醇(hydroxytyrosol)和橄欖多酚配醣體(oleuropeinaglycon);表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)或迷迭香或橄欖的提取物。脂溶性抗氧化劑可以例如是生育酚，例如dl-a-生育酚(g卩，合成生育酚)、d-a-生育酚(即，天然生育酚)、^-生育酚或7-生育酚或它們中兩種或多種的混合物；丁基化羥基甲苯(BHT);丁基化羥基茴香醚(BHA);乙氧喹啉、沒食子酸丙酯、叔丁基羥基喹啉；或6-乙氧基-1,2-二羥基-2，2,4-三甲基喹啉(EMQ)或脂肪酸的抗壞血酸酯，優(yōu)選是棕櫚酸抗壞血酸酯或硬脂酸抗壞血酸酯。本發(fā)明的組合物還可含有選自脂肪酸的甘油單/二酸酯、脂肪酸的多甘油酯、卵磷脂；N-?；被峒捌溲苌铩⒕哂雄蛳┗腘-?；募捌潲}；烷基或烯基醚或硫酸酯及其衍生物和鹽；聚氧乙烯化烷基或烯基脂肪醚或酯；聚氧乙烯化垸基或烯基羧酸及其鹽；N-烷基或N-烯基甜菜堿；烷基三甲基銨或烯基三甲基銨及其鹽；多醇烷基或烯基醚或酯；及其混合物構(gòu)成的組的共乳化劑(co-emulgator)。多醇烷基或烯基醚或酯的優(yōu)選例子是被至少20個單元的乙撐氧聚氧乙烯化的山梨聚糖烷基或烯基酯，例如，山梨聚糖棕櫚酸酯20EO或聚山梨糖40(Seppic公司以商品名Montanox40DF銷售)、山梨聚糖月桂酸酯20EO或聚山梨糖20(ICI公司以商品名Tween20銷售)和山梨聚糖單硬脂酸酯。根據(jù)本發(fā)明的制劑還可被壓為片劑，其中可以加入選自單糖、二糖、寡糖和多糖、甘油和甘油三酸酯構(gòu)成的組的一種或多種賦形劑和/或佐劑。可存在于本發(fā)明組合物中的單糖和二糖的優(yōu)選例子是蔗糖、轉(zhuǎn)化糖、木糖、葡萄糖、果糖、乳糖、麥芽糖、甘蔗糖(saccharose)和糖醇。寡糖和多糖的優(yōu)選例子是淀粉、改性淀粉和淀粉水解產(chǎn)物。淀粉水解產(chǎn)物的優(yōu)選例子是糊精和麥芽糊精(尤其是具有5至65范圍內(nèi)的葡糖當(dāng)量(DE)的那些)和葡萄糖漿(尤其是具有20至95范圍內(nèi)的DE的那些)。術(shù)語"葡萄當(dāng)量"(DE)指水解程度，其是還原糖的量的量度，被計算為基于干重的D-葡萄糖；該標(biāo)度基于DE接近于0的天然淀粉和DE為100的葡萄糖。合適地，甘油三酸酯是植物油或脂肪，優(yōu)選地，玉米油、葵花籽油、大豆油、紅花油、油菜籽油、花生油、棕櫚油、棕櫚仁油、棉籽油、橄欖油或椰油。固體組合物可以額外含有抗結(jié)塊劑(例如硅酸或磷酸三鈣等)以及至多為10重量％，通常是2-5重量％的水。組合物的生產(chǎn)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明的一個目的還是生產(chǎn)本發(fā)明組合物的工藝，所述工藝包括下述步驟I)制備(經(jīng)修飾的)水稻胚乳蛋白的水性溶液或膠體溶液，II)可選地，向步驟I)中制備的溶液中至少加入水溶性賦形劑和/或佐劑，III)制備至少有活性成分(優(yōu)選地，至少有脂溶性活性成分和/或著色劑)以及可選地至少有脂溶性佐劑和/或賦形劑的溶液或分散體系，IV)將步驟I)至III)中制備的溶液互相混合起來，V)均質(zhì)由此得到的混合物，VI)可選地，加入交聯(lián)劑用于交聯(lián)(經(jīng)修飾的)水稻胚乳蛋白，Via)可選地，對進行步驟VI)之后得到的混合物進行酶促處理或熱處理，以交聯(lián)(經(jīng)修飾的)水稻胚乳蛋白，VII)可選地，將步驟V)和/或VI)中獲得的分散體系轉(zhuǎn)化為粉末，vin)可選地，干燥步驟vn)中獲得的粉末，IX)可選地，對干燥粉末進行熱處理或酶促處理，以交聯(lián)(經(jīng)修飾的)水稻胚乳蛋白，同時滿足下述條件在進行步驟VI)的情況下，僅進行步驟Via)或步驟IX)之一，而非兩者都進行。歩驟I該步驟通過將水加入(經(jīng)修飾的)水稻胚乳蛋白或者反過來操作來簡單地進行，可選地，在攪拌下進行?；蛘撸梢酝ㄟ^超聲波處理來進行均質(zhì)。優(yōu)選地，使用具有上文所述的優(yōu)選級(preferences)的(經(jīng)修飾的)水稻胚乳蛋白。步驟II可加入水溶性賦形劑和/或佐劑，例如單糖、二糖、寡糖和多糖、甘油和水溶性抗氧化劑。它們的例子在上文中給出。步驟III活性成分是上文描述過的。(脂溶性)活性成分和/或著色劑以及可選地脂溶性賦形劑和佐劑原樣使用，或者溶解或懸浮于甘油三酸酯和/或(有機)溶劑中使用。合適的有機溶劑是卣代脂肪族碳?xì)浠衔?、脂肪族醚、脂肪族碳酸酯和環(huán)狀碳酸酯、脂肪族酯和環(huán)狀酯(內(nèi)酯)、脂肪族酮和環(huán)狀酮、脂肪族醇及其混合物。鹵代脂肪族碳?xì)浠衔锏睦邮菃嘻u代或多鹵代的、線性或帶支鏈或環(huán)狀的Cl至C15的鏈烴。尤其優(yōu)選的例子是單氯代或多氯代或單溴代或多溴代的、線性或帶支鏈或環(huán)狀的Cl至C15的鏈烴。更優(yōu)選的是單氯代或多氯代的、線性或帶支鏈或環(huán)狀的Cl至C15的鏈烴。最優(yōu)選的是二氯甲烷和氯仿。脂肪族酯和環(huán)狀酯(內(nèi)酯)的例子是乙酸乙酯、乙酸異丙酯和乙酸正丁酯以及7-丁內(nèi)酯。脂肪族酮和環(huán)狀酮的例子是丙酮、二乙基甲酮和異丁基甲基甲酮；以及環(huán)戊酮和異佛樂酮。環(huán)狀碳酸酯的例子尤其是碳酸亞乙酯和碳酸亞丙酯及其混合物。脂肪族醚的例子是二烷基醚，其中烷基部分具有1至4個碳原子。一個優(yōu)選例子是二甲基醚。脂肪族醇的例子是乙醇、異丙醇、丙醇和丁醇。此外，任何油(甘油三酸酯)、橙油、檸檬油精(limonen)等和水可用作為溶劑。可加入的脂溶性賦形劑和/或佐劑是，例如，玉米油、脂肪酸的甘油單/二酸酯、多甘油脂肪酸酯以及中鏈甘油三酸酯("MCT")。步驟IV在本發(fā)明的一種備選工藝中，不進行步驟III)，而是直接向步驟I)或II)的溶液中加入活性成分和可選的脂溶性賦形劑和/或佐劑。步驟V為進行均質(zhì)，可以應(yīng)用傳統(tǒng)技術(shù)，例如高壓均質(zhì)、高剪切力乳化(轉(zhuǎn)子-定子系統(tǒng))、微粉化、濕碾磨、微通道乳化、膜乳化或超聲波處理。用于制備含有(脂溶性)活性成分和/或著色劑(對食品、飲料、動物飼料、化妝品和藥物組合物的富集、強化和/或著色)的組合物的其它技術(shù)公開于EP-A0937412(尤其是、、、至段)、EP-A1008380(尤其是、、、、、至段)和US6,093,348(尤其是第2欄第24行至第3欄第32行；第3欄第48-65行；第4欄第53行至第6欄第60行)中，這些文獻的內(nèi)容都通過引用并入本文。步驟VI交聯(lián)劑優(yōu)選選自還原糖、糖蛋白和糖肽構(gòu)成的組。因此，(經(jīng)修飾的)水稻胚乳蛋白和糖蛋白/糖肽的糖或糖部分之間形成分子間交聯(lián)。交聯(lián)劑的優(yōu)選例子是還原糖，例如葡萄糖、果糖、甘蔗糖和木糖。步驟Via交聯(lián)可以通過對額外含有上文所述交聯(lián)劑的混合物進行熱處理，使得糖與蛋白在Maillard型的反應(yīng)中交聯(lián)來實現(xiàn)，S卩，通過熱處理，優(yōu)選在大約30至大約160。C的溫度下進行，更優(yōu)選地，大約70至大約100。C的溫度，最優(yōu)選地，大約80至大約90。C的溫度。用交聯(lián)劑交聯(lián)(經(jīng)修飾的)水稻胚乳蛋白還可通過用交聯(lián)酶(?；D(zhuǎn)移酶，EC2.3，例如，轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶，EC2.3.2.13，蛋白質(zhì)-谷氨酰胺7-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶)的處理來實現(xiàn)，即通過酶促處理，其方便地進行于大約0至大約70°C的溫度下，優(yōu)選地，大約20至大約40°C的溫度下。優(yōu)選地，根據(jù)步驟Via)的酶促處理是用交聯(lián)酶，特別是轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶進行的處理。酶促交聯(lián)導(dǎo)致產(chǎn)生穩(wěn)定的含蛋白多糖網(wǎng)絡(luò)，在用轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶的情況下，這是通過e-Cy-谷氨酰)-賴氨酸異肽鍵的形成來實現(xiàn)的。對于酶促交聯(lián)來說，使用糖蛋白或糖肽是優(yōu)選的。使得糖和蛋白在Maillard型反應(yīng)中交聯(lián)的熱處理和酶促交聯(lián)這兩種技術(shù)都可用于將親脂性部分并入，并且可以在干燥形式的組合物(步驟IX)或水性溶液或懸浮液(步驟Via)中進行。酶促交聯(lián)優(yōu)選在水性溶液或懸浮液中進行。步驟VII由此獲得的分散體系(其是水包油分散體系)可在除去有機溶劑(如果存在的話)之后被轉(zhuǎn)化為固體組合物，例如干粉，這通過使用任何傳統(tǒng)技術(shù)來進行，例如，噴霧干燥，噴霧干燥與流床制粒(后者通常作為流式噴霧干燥或FSD已知)的組合或者通過粉末捕捉技術(shù)(噴霧的乳液液滴由此被捕捉于吸收劑，例如淀粉、硅酸鈣和二氧化硅的床中并隨后被干燥)來實現(xiàn)。噴霧干燥可在大約100至大約250°C的進口溫度(優(yōu)選地，大約150。C至大約200°C，更優(yōu)選地，大約160至大約190。C)和/或大約45至大約160。C的出口溫度(產(chǎn)物溫度)(優(yōu)選地，大約55至大約110°C，更優(yōu)選地，大約65至大約95。C)下進行。步驟VIII對步驟VII中獲得的粉末的干燥優(yōu)選在S100。C的溫度下進行，優(yōu)選地，20至100°C的溫度下，更優(yōu)選地，60至70。C的溫度下。如果干燥在真空下進行，那么溫度會更低。步驟IX通過熱處理進行的交聯(lián)按照上文中針對步驟Via所述的來進行。這同樣應(yīng)用于酶促處理，但是酶促處理優(yōu)選在溶液/懸浮液中進行。(經(jīng)修飾的)水稻胚乳蛋白的生產(chǎn)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明還涉及從經(jīng)碾磨水稻來生產(chǎn)(經(jīng)修飾的)水稻胚乳蛋白的工藝，其中，在碾磨之前除去稻麩，所述工藝包括下述步驟a)至e)，并且滿足下述條件步驟b)、c)和d)至少要進行一個。a)制備經(jīng)碾磨水稻的水性溶液或懸浮液，其中，在碾磨之前除去稻麩，其中，溶液或懸浮液優(yōu)選具有基于水性溶液或懸浮液總重而言0.1至30重量％的干物質(zhì)含量，優(yōu)選地，10至15重量％;b)可選地，移出經(jīng)碾磨水稻的非蛋白部分或蛋白部分，以獲得水稻胚乳蛋白，其中在碾磨之前除去稻麩；c)可選地，修飾經(jīng)碾磨水稻的蛋白部分，以獲得經(jīng)修飾的水稻胚乳蛋白，其中在碾磨之前除去稻麩；d)可選地，分離(經(jīng)修飾的)水稻胚乳蛋白；e)可選地，將(經(jīng)修飾的)水稻胚乳蛋白轉(zhuǎn)化為固體形式。在本發(fā)明的上下文中，"水稻胚乳蛋白"尤其表示通過進行步驟a)和b);或步驟a)禾nd);或步驟a)、b)禾卩e);或步驟a)、b)和d);或步驟a)、d)禾Qe);或步驟a)、b)、d)禾卩e)獲得的產(chǎn)物。優(yōu)選地的是進行步驟a)和b)(和d)和/或e))的實施方式，尤其優(yōu)選的是進行步驟a)、b)和d)(和e))的實施方式。在本發(fā)明的上下文中，"經(jīng)修飾的水稻胚乳蛋白"尤其表示進行步驟c)獲得的產(chǎn)物，S卩，通過進行步驟a)和c);或步驟a)、b)和c);或步驟a)、c)和d);或步驟a)、c)和e);或步驟a)、b)、c)和d);或步驟a)、c)、d)禾卩e);或步驟a)、b)、c)禾Qe)或步驟a)、b)、c)、d)和e)獲得的產(chǎn)物。經(jīng)修飾的水稻胚乳蛋白(及其優(yōu)選級)較水稻胚乳蛋白更優(yōu)選。最優(yōu)選的是通過進行步驟a)、b)、c)和d)(和e))獲得的產(chǎn)物。步驟a)經(jīng)碾磨的水稻(其中在碾磨之前除去稻麩)也被表示成"米粉"(riceflour)。該步驟通過向米粉中加入水或者反過來操作簡單地進行，可選地，通過劇烈攪拌(用機械攪拌器)來進行，直到米粉完全分散，或者通過用均質(zhì)機對米粉懸浮液進行均質(zhì)(例如，室溫下5分鐘)來進行。步驟b)移出非蛋白部分優(yōu)選地，步驟b)可這樣來實現(xiàn)用非蛋白降解酶處理米粉，例如，用Termamyl⑧的0.5%水性懸浮液在90°C處理2小時以及然后用纖維素酶的0.1%水性懸浮液在50°C處理30分鐘——沒有任何pH調(diào)節(jié)(pH6-7)，滅活酶，從米粉的蛋白部分分離并移出非蛋白部分。非蛋白降解酶的優(yōu)選例子是淀粉降解酶，例如，a-淀粉酶和纖維素酶(即，纖維素降解酶)及其混合物。a-淀粉酶的優(yōu)選例子是Termamyl120，L型，其可從NovoNordiskBiochem,NorthAmerica,Inc.,USA商業(yè)獲得。其它優(yōu)選的酶是LiquzymeSupra(可從NovoNordiskBiochem,NorthAmerica,Inc.,USA商乂k獲H)、AmylaseS"Amano"35G(可/人AmanoPharmaceuticalCo.Ltd.,Nagoya,Japan商業(yè)獲得)、MultifectCellulase(可從GenencorInternational,Inc.,USA商業(yè)獲得)禾QCellulaseT"Amano"4(可從AmanoPharmaceuticalCo.Ltd.,Nagoya,Japan商業(yè)獲得)。如果用無機酸(例如氫氯酸)或有機酸(例如檸檬酸)或堿時，可通過對溶液或懸浮液加以中和來終止酶反應(yīng)，或者通過加熱使酶變性來終止酶反應(yīng)。可通過將溶液加熱至80°C至95°C的溫度10-15分鐘來實現(xiàn)變性，優(yōu)選地，80至85°C的溫度(尤其是在3.5至4.5的低pH下)。之后溶液可被冷卻至50。C?？赏ㄟ^離心(5000gl5分鐘)(由此使得非蛋白部分在水相中)，接著用去離子水洗來實現(xiàn)對非蛋白部分的分離。水稻胚乳蛋白留在沉淀團中。移出蛋白部分或者，在離心或過濾之前可以進行所謂的"堿提"或所謂的"鹽提"。"堿提"表示首先用堿溶液(例如，NaOH水溶液)將米粉溶液或懸浮液的pH調(diào)節(jié)至7至12的值，優(yōu)選地，8至10的值，更優(yōu)選地，大約9的值，這在40至60。C進行3小時。當(dāng)?shù)鞍桩a(chǎn)率比蛋白功能性更重要的情況下，將pH優(yōu)選調(diào)節(jié)至8至12，更優(yōu)選9至12，進一步更優(yōu)選10至12可能是有利的。優(yōu)選地，此類堿具有大約0.1至5M之間的濃度，優(yōu)選地，大約0.5至大約2M。堿可以是無機堿。無機堿的例子是堿(土)金屬氫氧化物，例如氫氧化鈉(優(yōu)選的)、氫氧化鉀和氫氧化鈣。"鹽提"與"堿提"類似，但是除堿之外，還使用鹽，例如氯化鈉。在本發(fā)明的一種優(yōu)選實施方式中，使用0.08M氯化鈉水溶液(用NaOH調(diào)節(jié)至pHll)作為提取溶劑。在兩種情況(堿提或鹽提)下，蛋白部分都被轉(zhuǎn)移至水相。然后可通過離心或過濾將蛋白部分與非蛋白部分分離。步驟c)可通過用(商業(yè)可獲得的)食品級堿性、中性和/或酸性蛋白酶處理米粉(的蛋白部分)，來實現(xiàn)對米粉的修飾。實施例中給出了針對一些蛋白酶的酶規(guī)格和最優(yōu)條件。蛋白酶可來自細(xì)菌或真菌，以及來自水果，或者可以是動物來源的。堿性蛋白酶的例子是商業(yè)可獲得的Alkalase(NovoNordiskBiochem，F(xiàn)ranklinton,NC,USA)、AlkalineProtease(EnzymeDevelopmentCorporation,NewYork,NY,USA)、Protex6L(GenencorBacterialAlkalineProtease,GenencorInternational,Inc.,Rochester,NY,USA)禾口GenencorProtease899(GenencorInternational,Inc.，Rochester,NY,USA)。中性蛋白酶的例子是商業(yè)可獲得的Bromelain(EnzymeDevelopmentCorporation,NewYork,NY，USA)、Liquipanol(EnzymeDevelopmentCorporation,NewYork,NY,USA)和細(xì)菌中性蛋白酶(GenencorInternational,Inc.,Rochester,NY，USA)。中性蛋白酶的另一例子是商業(yè)可獲得的、DSMFoodBeverages,Delft,Netherlands的Collupilin,其是從Carica木瓜(一種植物)生產(chǎn)的，即，水果來源的酶。酸性蛋白酶的例子是Pepsin(胃蛋白酶，Sigma,USA)禾卩AcidProtease(AmanoPharma-ceuticalCo.Ltd.,Nagoya,Japan)。在本發(fā)明的工藝的一種優(yōu)選實施方式中，隨后通過兩種不同的堿性蛋白酶，在7至10的pH范圍下，40至60。C的溫度下，對米粉的蛋白部分進行10至80分鐘的處理。優(yōu)選地，這兩種蛋白酶之一是絲氨酸特異性蛋白酶，例如，Alkalase、Protex6L⑧或AlkalineProtease,另一種是半胱氨酸特異性蛋白酶，例如，Liquipanol或Bromelain。該步驟還可改變?yōu)椴灰淮渭尤朊?，而是分部分加入它?隨后或同時)。步驟C)還可以在步驟d)之后進行，E卩，先分離水稻胚乳蛋白，然后再對其加以修飾。步驟d)優(yōu)選地，通過離心和/或過濾來進行步驟d)，優(yōu)選地，通過超濾來進行。超濾可以在之前不進行離心的情況下進行。酶失活后，可對水解產(chǎn)物進行低速離心(1000gl0分鐘)，以分離不可溶蛋白和雜質(zhì)。然后可將蛋白水解產(chǎn)物的可溶級分濾經(jīng)Whatman#.4濾紙，并對濾液順序進行超濾(UF)和滲濾(DF)，這用分子量分離點(MWCO)>5kDa的膜來進行，優(yōu)選地，用分子量分離點S30kDa的膜來進行，更優(yōu)選，用分子量分離點^50kDa的膜來進行，最優(yōu)選地，用分子量分離點為50至750kDa的膜來進行。超濾和滲濾可在室溫下，20至25psi的進口壓力和10psi的出口壓力下進行。然后可將溶液超濾至濃縮因子為5。超濾后，可立刻用兩倍體積的去離子水對滯留物進行兩次滲濾。在超濾和滲濾期間，溶液pH可保持為pH8.0至9.0之間，以使得蛋白保持為可溶狀態(tài)。步驟e)可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何干燥方法來實現(xiàn)向固體形式(例如干粉)的轉(zhuǎn)化。優(yōu)選的是噴霧干燥或冷凍干燥。噴霧干燥優(yōu)選在大約200。C至大約210°C的進口溫度和大約70°C至大約75°C的出口溫度下進行。冷凍干燥優(yōu)選在大約-20。C至大約-50。C的溫度下進行10至48小時。本發(fā)明還有一個目的是可通過上文所述的任何工藝獲得的(經(jīng)修飾的)水稻胚乳蛋白。工業(yè)應(yīng)用本發(fā)明涉及上文所述的組合物用于對食品、飲料、動物飼料、個人護理組合物和藥物組合物進行富集、強化和/或著色的用途，以及涉及含有上文所述的組合物的食品、飲料、動物飼料、個人護理組合物和藥物組合物本身。本發(fā)明還涉及含有上文所述的(經(jīng)修飾的)水稻胚乳蛋白的食品、飲料、動物飼料、個人護理組合物和藥物組合物，以及涉及此類(經(jīng)修飾的)水稻胚乳蛋白(優(yōu)選地，例如上文所述的)作為活性成分(尤其是脂溶性活性成分和/或著色劑)的保護性水膠體的用途。在本發(fā)明的上下文中，動物(包括人)除人之外還包括，尤其是農(nóng)場動物，例如綿羊、奶牛、馬、禽類(肉雞和蛋的色素沉著)、蝦和魚(尤其是鮭魚和虹鱒魚)以及寵物，例如貓、狗、鳥(例如，火烈鳥)和魚。其中可使用本發(fā)明的組合物(尤其是作為著色劑或功能性成分)的飲料可以是碳酸飲料(例如調(diào)味蘇打水、軟飲或礦物飲料)以及非碳酸飲料(例如，調(diào)味水、果汁、水果賓治)以及這些飲料的濃縮形式。它們可以基于天然水果或蔬菜汁，或者基于人工香料。其還包括酒精飲料和速溶飲料粉。此外，還包括含糖飲料、無糖飲料(無卡路里，有人工增甜劑)。此外，從天然來源獲得的或合成的奶制品也在其中可使用本發(fā)明的組合物(尤其是作為著色劑或功能性成分)的食物產(chǎn)品的范圍內(nèi)。此類制品的典型例子是奶飲料、冰淇淋、奶酪、酸奶等。奶替代制品，例如豆奶飲料和豆腐制品也包括于此應(yīng)用的范圍內(nèi)。本發(fā)明還包括含有作為著色劑或功能性成分的本發(fā)明的組合物的糖，例如甜食制品、糖果、口香糖、甜點，例如冰淇淋、果凍、布丁、速溶布丁粉等。本發(fā)明還包括含有作為著色劑或功能性成分的本發(fā)明的組合物的谷類、零食、曲奇餅干、通心粉、湯和醬料、蛋黃醬、沙拉醬等。此外，用于奶和谷類的水果制品也包括在內(nèi)。通過本發(fā)明的組合物加入到食物產(chǎn)品中的(脂溶性)活性成分和/或著色劑的終濃度可以是0.1至500ppm，特別地，1至50ppm，這基于食品組合物的總重，并且取決于將被著色或強化的特定食物產(chǎn)品以及想要著色或強化的程度。本發(fā)明的食品組合物優(yōu)選這樣獲得將本發(fā)明組合物形式的(脂溶性)活性成分和/或著色劑加入到食物產(chǎn)品中。為對食品或藥物產(chǎn)品進行著色或強化，可按照本身己知用于應(yīng)用本發(fā)明的水可分散性固體組合物的方法，來使用本發(fā)明的這種組合物。通常，根據(jù)特定的應(yīng)用，組合物可作為水性貯液、干粉混合物或與其他合適的食品成分的預(yù)摻合物加入?；旌峡梢岳缡褂酶煞蹞胶蠙C、低剪切力混合機、高壓均質(zhì)機或高剪切力混合機來進行，這取決于最終應(yīng)用的配方。顯而易見，此類技術(shù)是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。其中組合物用作為著色劑的藥物組合物，例如，片劑或膠囊，也在本發(fā)明的范圍內(nèi)。對片劑的著色可這樣進行向片劑包衣混合物中單獨加入液體或固體著色劑組合物形式的本發(fā)明組合物，或者將著色組合物加入片劑包衣混合物的一種組分中。著色硬殼膠囊或軟殼膠囊可通過將著色劑組合物并入膠囊物質(zhì)的水溶液來進行。其中組合物用作為活性成分的藥物組合物，例如，片劑(例如，可咀嚼片劑、泡騰片或膜衣片)或膠囊(例如硬殼膠囊)也在本發(fā)明的范圍內(nèi)。典型地，本發(fā)明的組合物作為粉末加入到壓片混合物中，或者以本身己知用于生產(chǎn)膠囊的手段填裝進膠囊。其中組合物用作為用于色素沉著的著色劑或用作為活性成分的動物飼料產(chǎn)品(例如，用于蛋黃、肉禽、肉雞或水生動物(尤其是蝦、鮭魚、虹鱒魚))，例如，營養(yǎng)成分的預(yù)混合料、復(fù)合飼料、奶代替品、液體膳食或飼料制劑，也在本發(fā)明的范圍內(nèi)。其中組合物被用作為著色劑或用作為活性成分的個人護理組合物化妝品、清潔用品和皮膚產(chǎn)品，即，皮膚和頭發(fā)護理產(chǎn)品，例如，霜、化妝水、浴液、唇膏、香波、護發(fā)素、噴霧或凝膠，也在本發(fā)明的范圍內(nèi)。本發(fā)明被下述實施例進一步闡述。實施例使用了下述縮寫UF=超濾DF=滲濾DH=水解程度01水=去離子水MWCO=分子量分離點SDS=十二烷基磺酸鈉米粉從RicelandFoods(Stuttgart,AR)獲得。在對蛋白的分離中使用下述食品級酶(1)Termamyl-熱穩(wěn)定的a淀粉酶，NovoNordiskBiochem,NorthAmerica,Inc,USA，(3)MultifectCellulase—真菌纖維素酶，2,000IU/g，GenencorInternational,Inc.,USA。使用具有下述規(guī)格的食品級蛋白酶(表la和lb)。表la-酶規(guī)格I<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>表lb-酶規(guī)格II<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>概括對通過堿、鹽和酶促方法分離水稻胚乳蛋白，以及針對它們的可提取性和物理化學(xué)性質(zhì)以及功能性質(zhì)對其加以評估的過程進行優(yōu)化，來進行實驗。目的是優(yōu)化提取工藝，以及評估提取物的物理化學(xué)性質(zhì)，以鑒定出針對改進的水稻蛋白功能性的最優(yōu)提取方法。通過化學(xué)和酶促方法來制備水稻蛋白分離物。進行初步試驗，以優(yōu)化蛋白提取條件，爭取最大的產(chǎn)率和蛋白含量。圖1中給出了水稻蛋白分離物制劑RPA的化學(xué)和酶促方法的流程例子，圖2針對通過在90°C用TermamyM)處理接著用纖維素酶處理獲得的水稻蛋白分離物制劑RPET。通過過濾分離(經(jīng)修飾的)水稻胚乳蛋白用裝備有1英寸直徑中空管聚砜膜濾筒的Romicon超濾系統(tǒng)(Kochmembranesystems,USA)來進行超濾實驗。將(經(jīng)修飾的)水稻胚乳蛋白濾經(jīng)Whatman#.4濾紙，用標(biāo)稱分子量分離點(MWCO)為50、30、10和5kDa的膜濾筒對濾出液進行順序超濾。在每種MWCO濾筒中，以5的濃縮因子對溶液加以超濾。在超濾之后，立刻用兩倍體積的去離子水對滯留物進行兩次滲濾。合并第一次(50kDa)超濾(UF)和滲濾(DF)的滲濾液，對其進行下一次MWCO(30kDa)UF和DF。對來自每種MWCO濾筒的滯留物進行冷凍干燥，針對DH、溶解度和乳化性質(zhì)加以評估。(A)蛋白提取實施例l:通過堿提("化學(xué)提取")來分離水稻胚乳蛋白實施例1-1:(REP1-1)在室溫下，設(shè)置為6的摻合機(VirtishearTempest,TheVirtisCo.,Gardiner,N.Y.,U.S.A.)中，用4L去離子水(1:8，w/v)對500克米粉進行5分鐘的均質(zhì)。用1NNaOH將漿體調(diào)節(jié)至pH11.0，在40°C對懸浮液進行3小時的攪拌。通過離心(5,000g，20分鐘)分離溶液中的溶解蛋白。重復(fù)一次該流程，以從殘余物中提取出更多。合并的第一次和第二次提取的上清液中的蛋白在pH4.5被等電點沉淀出來，在4。C放置2小時。通過在10,000g離心20分鐘來回收沉淀，用去離子水(1:4，w/v,pH4.5)洗兩次，調(diào)節(jié)至pH7.0，冷凍干燥，并貯存于5。C。另一實施例1-2:(REP1-2)用40L去離子水(1:8，w/v)對5Kg米粉進行均質(zhì)，用3NNaOH將漿體的pH調(diào)節(jié)至pH11，在40。C對懸浮液進行3小時的攪拌。通過離心(5,000g，15分鐘)分離溶液中的溶解蛋白。重復(fù)一次該流程，以從殘余物中提取出更多。合并的第一次和第二次提取的上清液中的蛋白在pH4.5被等電點沉淀出來，在4°C放置2小時。通過在5000g離心20分鐘來回收沉淀，用去離子水(1:4，w/v，pH4.5)洗兩次，調(diào)節(jié)至pH7.0，并貯存于5。C。另一實施例1-3:(REP1-3)在均質(zhì)機(VirtishearTempest,TheVirtisCo"Gardiner,N.Y.，U.S.A.)中，用8L去離子水(1:8，w/v)對1kg米粉進行5分鐘的均質(zhì)。用1NNaOH將漿體的pH調(diào)節(jié)至pH11，在40°C對懸浮液進行3小時的攪拌。通過離心(2000g，15分鐘)分離溶液中的溶解蛋白。重復(fù)該流程，以從殘余物中提取出額外的蛋白。合并的第一次和第二次提取的上清液中的蛋白在pH4.5被等電點沉淀出來，在4°C放置1小時。通過在5000g離心20分鐘來回收沉淀，用去離子水(1:4，w/v，pH4.5)洗兩次，調(diào)節(jié)至pH7.0，冷凍干燥(RPa)，并貯存于5。C(圖1)。實施例l-4(REP1-4):通過鹽提來分離水稻胚乳蛋白對水稻蛋白(RPs)的鹽提類似于上述堿提方法(見REP1-3)，但是用0.08M氯化鈉(用NaOH調(diào)節(jié)至pHll)的合并溶液作為提取溶劑。實施例2:通過酶促降解非蛋白部分("酶促提取")來分離水稻胚乳蛋旦實施例2-l:(REP2-1)將500克米粉分散于3L蒸餾水(1:6，w/v)中。在40。C對米粉-水進行15分鐘攪拌，以形成漿體。用0.5%ce-淀粉酶來處理漿體，將溫度逐漸升高至90。C，在90°C溫育2小時。通過在20°C以5,000xg離心15分鐘來除去溶解的淀粉。將殘余物再次與1.5L去離子水混合，用0.1%纖維素酶處理，在50°C溫育30分鐘。在90°C，通過將pH降低至3.5來使酶失活。通過在5000xg離心15分鐘來除去溶解的淀粉和纖維素級分。用溫暖的去離子水對沉淀的蛋白洗兩次，以除去可溶的糖和殘余的酶，調(diào)節(jié)至pH7.0，冷凍干燥，并貯存于5。C。另一實施例2-2:(REP2-2)用30L去離子水來均質(zhì)5Kg米粉，在60°C進行15分鐘攪拌。用0.2%Termamyl來處理漿體，將溫度逐漸升高至90°C，在該溫度溫育2小時。通過用粗紗布(cheesecloth)過濾來除去溶解的淀粉。將沉淀再次與15L去離子水混合，與0.1%果膠酶在50。C溫育30分鐘，再加入另外的0.1%的Termamyl酶。將溫度逐漸升高至90°C，在該溫度溫育30分鐘。在90°C，通過將pH降低至5.0來使酶失活。通過用粗紗布過濾來除去溶解的細(xì)胞壁組分和殘余淀粉。用溫暖的去離子水對沉淀的蛋白洗兩次，以除去殘余的可溶的糖和酶，調(diào)節(jié)至pH7.0，并貯存于5。C。另一實施例2-3:(REP2-3)用6L去離子水來均質(zhì)1Kg米粉，在60°C進行15分鐘攪拌。用0.5%Termamyl來處理漿體，將溫度逐漸升高至90°C，在該溫度溫育2小時。通過用離心(5000g，15分鐘)來除去溶解的淀粉。將沉淀再次與3L去離子水混合，與0.1%纖維素酶在50QC溫育30分鐘。在90°C，通過將pH降低至4.5來使酶失活。通過離心來除去溶解的纖維素級分。用溫暖的去離子水對沉淀的蛋白洗兩次，以除去可溶的糖和殘余的酶，調(diào)節(jié)至pH7.0，冷凍干燥(RPet)，并貯存于5。C(圖2)。另一實施例2-4:(REP2-4)淀粉酶S(RPEA)與Termamyl方法(見REP2-3)基本相同，除了用淀粉酶S代替Termamyl。淀粉酶S在70°C具有最優(yōu)活性，這提供了較之Termamyl方法(工作于90°C)來說更溫和的提取條件。按照ApprovedMethodsoftheAmericanAssociationofCerealChemists,她Ed"Vol.2,AACC,St.Paul,MN,1990,p1-2;Method46-08公開的內(nèi)容，來測定蛋白分離物的水分、蛋白、淀粉、纖維、脂肪和灰分含量。(B)蛋白修飾實施例3:通過蛋白酶來修飾堿提的水稻胚乳蛋白(REP3-1至3-8)對制備REP3-1至REP3-5的詳細(xì)描述對經(jīng)堿提的水稻胚乳蛋白分離物REP1-1進行蛋白酶處理。將蛋白與去離子水(1:12.5，w/v)混合，均質(zhì)，調(diào)節(jié)至每種酶的最優(yōu)pH，在50°C攪拌10分鐘。在每種酶的最優(yōu)條件下，用食品級的蛋白酶對分散體系加以處理。針對每種酶的最優(yōu)條件示于表2。用商購食品級蛋白酶(Bromelain(REP3-1)、Protex6L(REP3-2)、Pepsin(胃蛋白酶，REP3-3)、Alkalase(REP3-4)和Liquipanol(REP3-5))來改進溶解度和功能性質(zhì)。已通過OPA方法(Nielsenetal,JournalofFoodScience2001,66(5)，642-646)對得到的水解產(chǎn)物的水解程度進行了優(yōu)化，使得功能性質(zhì)最大化。通過每種酶的特定失活條件在需要的DH下終止酶促反應(yīng)。水解產(chǎn)物被噴霧干燥，并貯存于5。C。<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>圖4顯示了用Alkalase、Liquipanol或Pepsin處理的水稻胚乳蛋白的水解情形，其作為水解時間的函數(shù)。圖7顯示了通過用Pepsin、Liquipanol和Alcalase處理產(chǎn)生的水稻蛋白和水解產(chǎn)物的分子量情形，這是通過SDSPAGE凝膠電泳測定的道l-標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)記；道2-水稻蛋白(對照)；道3-Pepsin2.2%DH;道4-Pepsin6.5%DH;道5-Liquipanol3.9%DH;道6-Liquipanol10.5%DH;道7-Alcalase7.7%DH;道8-Alcalase14.7%DH。圖8顯示了經(jīng)Alcalase處理的水稻蛋白水解產(chǎn)物的分子量情形，這是通過SDSPAGE凝膠電泳測定的道l-標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)記；道2-水稻蛋白(對照)；道3—Alcalase5.2%DH;道4-Alcalase7.7。/oDH;道5-Alcalase11.2%DH;道6-Alcalase13.5%DH;道7-Alcalase14.7%DH。關(guān)于制備REP3-6、3-7和3-8的詳細(xì)描述用REP1-2來制備REP3-6、REP3-7和REP3-8，而非實施例REP3-1、REP3-2、REP3-3、REP3-4和REP3-5中采用的REP1-1。REP3-6用DI水(8%w/v)來均質(zhì)堿提的水稻蛋白分離物REP1-2，調(diào)節(jié)至pH8.0。用1%Alcalase在50。C對蛋白溶液進行3.5分鐘的處理。在70。C于pH5.0處理15分鐘以使酶失活。對蛋白水解產(chǎn)物(REP3-6)進行噴霧干燥，并貯存于5。C。REP3-7用DI水(8%w/v)來均質(zhì)堿提的水稻蛋白分離物REP1-2，調(diào)節(jié)至pH8.0。用1%Alcalase在50。C對蛋白溶液進行7.5分鐘的處理。在70。C于pH5.0處理15分鐘以使酶失活。對蛋白水解產(chǎn)物(REP3-7)進行噴霧干燥，并貯存于5。C。REP3-8用DI水(8%w/v)來均質(zhì)經(jīng)堿提的水稻蛋白分離物REP1-2，調(diào)節(jié)至pH8.0。用1%Alcalase在50。C對蛋白溶液進行11分鐘的處理。在70°C于pH6.0處理15分鐘以使酶失活。對蛋白水解產(chǎn)物(REP3-8)進行噴霧干燥，并貯存于5。C。實施例4:通過兩種類型的蛋白酶來修飾經(jīng)堿提的水稻胚乳蛋白(REP4)對經(jīng)堿提的水稻胚乳蛋白分離物(REP1)進行絲氨酸蛋白酶和半胱氨酸蛋白酶的組合處理。將蛋白與去離子水(1:12.5，w/v)混合，均質(zhì)，調(diào)節(jié)至pH9.0，在60。C攪拌IO分鐘。用食品級的Alkalase2.4L(0.5%)對分散體系加以處理，在60。C溫育15分鐘。然后向反應(yīng)混合物中加入Liquipanol(0.5%)，在50°C溫育15分鐘。通過在80°C保持10分鐘來終止酶促反應(yīng)，對經(jīng)修飾的水稻胚乳蛋白進行噴霧干燥，并貯存于5。C。實施例5:通過蛋白酶修飾經(jīng)堿提的水稻胚乳蛋白，隨后對所述經(jīng)修飾的水稻胚乳蛋白進行超濾和滲濾(REP5)通過絲氨酸蛋白酶和半胱氨酸蛋白酶的組合處理，對經(jīng)堿提的水稻胚乳蛋白分離物(REP1)進行延伸水解。將蛋白與去離子水(1:12.5，w/v)混合，均質(zhì)，調(diào)節(jié)至pH9.0，在60°C攪拌10分鐘。用食品級的Alkalase2.4L(0.5%)對分散體系加以處理，在60。C溫育60分鐘。然后向反應(yīng)混合物中加入Liquipanol(0.5%),在50°C溫育60分鐘。通過在80。C保持10分鐘來終止酶促反應(yīng)。將由此得到的經(jīng)修飾的水稻胚乳蛋白濾經(jīng)Whatman#.5濾紙。用裝備于Romicon超濾系統(tǒng)(Kochmembranesystems,USA)(容量為2-10L)中的MWCO為50kDa的中空纖維聚砜膜濾筒，對濾出液進行超濾。以10的濃縮因子對溶液加以超濾。在超濾之后，立刻用兩倍體積的去離子水對殘余物進行兩次滲濾。對得到的殘余物進行噴霧干燥。實施例6:通過酶促降解非蛋白部分來分離水稻胚乳蛋白，通過用蛋白酶處理來修飾所述水稻胚乳蛋白，隨后對所述經(jīng)修飾的水稻胚乳蛋白進行超濾和滲濾(REP6-1至REP6-5)REP6-1通過絲氨酸蛋白酶和半胱氨酸蛋白酶的組合處理，對實施例2中獲得的經(jīng)酶促提取的水稻胚乳蛋白分離物(REP2-1)進行延伸水解。將蛋白與去離子水(1:12.5，w/v)混合，均質(zhì)，調(diào)節(jié)至pH9.0，在60°C攪拌10分鐘。用食品級的Alkalase2.4L(0.5%)對分散體系加以處理，在60°C溫育60分鐘。然后向反應(yīng)混合物中加入Liquipanol(0.5%)，在50°C溫育90分鐘。通過在80。C保持10分鐘來終止酶促反應(yīng)。對水解產(chǎn)物進行低速離心(1000g，10分鐘)，以分離不可溶蛋白和雜質(zhì)。將經(jīng)修飾的水稻胚乳蛋白的可溶部分濾經(jīng)Whatman#.4濾紙，并對其進行MWCO為50kDa的超濾。以IO的濃縮因子對溶液加以超濾。在超濾之后，立刻用兩倍體積的去離子水對滯留物進行兩次滲濾。在酶促水解、離心和超濾期間，(經(jīng)修飾的)水稻胚乳蛋白的pH被保持于8.0，以使得蛋白保持可溶。對得到的滯留物進行噴霧干燥(REP6-1)。制備REP6-2的詳細(xì)描述對實施例2中獲得的經(jīng)酶促提取的水稻胚乳蛋白分離物(REP2-2)進行Alcalase處理。將蛋白與DI水(4%)混合，均質(zhì)，調(diào)節(jié)至pH9.0，在50。C攪拌IO分鐘。用Alkalase2.4L(1%)對分散體系加以處理，混合物在50°C溫育8分鐘。通過于pH5.0在70°C保持15分鐘來終止酶促反應(yīng)。對水解產(chǎn)物進行低速離心(1000rpm，1分鐘)，以除去不可溶蛋白和雜質(zhì)。用10kDa的MWCO膜對水解產(chǎn)物的可溶部分進行超濾。以5的濃縮因子對溶液加以超濾。對得到的滯留物(〉10kDa)進行冷凍干燥，并貯存于5。C(REP6-2)。制備REP6-3的詳細(xì)描述對實施例2中獲得的經(jīng)酶促提取的水稻胚乳蛋白分離物(REP2-2)進行Alcalase處理。將蛋白分離物與DI水(4%)混合，均質(zhì)，調(diào)節(jié)至pH9.0，在50°C攪拌10分鐘。用Alkalase2.4L(1%)對分散體系加以處理，混合物在50。C溫育12分鐘。通過于pH5.0在70。C保持15分鐘來終止酶促反應(yīng)。對水解產(chǎn)物進行低速離心(1000rpm，1分鐘)，以除去不可溶蛋白和雜質(zhì)。用10kDa的MWCO膜對水解產(chǎn)物的可溶部分進行超濾。以5的濃縮因子對溶液加以超濾。對得到的滯留物(〉10kDa)進行冷凍干燥，并貯存于5。C(REP6-3)。制備REP6-4的詳細(xì)描述對實施例2中獲得的經(jīng)酶促提取的水稻胚乳蛋白分離物(REP2-2)進行Alcalase處理。將蛋白分離物與DI水(4%)混合，加入偏亞硫酸氫鈉(20mg/g蛋白)，均質(zhì)，調(diào)節(jié)至pH9.0，在50°C攪拌10分鐘。用Alkalase2.4L(1%)對分散體系加以處理，混合物在50°C溫育8分鐘。通過于pH5.0在70。C保持15分鐘來終止酶促反應(yīng)。對水解產(chǎn)物進行低速離心(1000rpm，1分鐘)，以除去不可溶蛋白和雜質(zhì)。用10kDa的MWCO膜對水解產(chǎn)物的可溶部分進行超濾。以5的濃縮因子對溶液加以超濾。對得到的滯留物(>10kDa)進行冷凍干燥，并貯存于5°C(REP6-4)。制備REP6-5的詳細(xì)描述對實施例2中獲得的經(jīng)酶促提取的水稻胚乳蛋白分離物(REP2-2)進行Alcalase處理。將蛋白分離物與DI水(4%)混合，加入偏亞硫酸氫鈉(10mg/g蛋白)，均質(zhì)，調(diào)節(jié)至pH9.0，在50°C攪拌10分鐘。用Alkalase2.4L(1%)對分散體系加以處理，混合物在50。C溫育30分鐘。通過于pH5.0在70°C保持15分鐘來終止酶促反應(yīng)。對水解產(chǎn)物進行低速離心(1000rpm，1分鐘)，以除去不可溶蛋白和雜質(zhì)。用10kDa的MWCO膜對水解產(chǎn)物的可溶部分進行超濾。以5的濃縮因子對溶液加以超濾。對得到的滯留物(>10kDa)進行冷凍干燥，并貯存于5°C(REP6-5)。(C)Pepsin輔助的水稻蛋白提取，之后進行超濾實施例7:通過酸性蛋白酶來修飾水稻胚乳蛋白，隨后對所述經(jīng)修飾的水稻胚乳蛋白進行超濾(REP7)在摻合機中，于室溫下用3L去離子水(1:6，w/v)對500克米粉進行均質(zhì)5分鐘。用3NHC1將漿體調(diào)節(jié)至pH2.4，在37°C對懸浮液進行30分鐘的攪拌。用0.44%Pepsin處理漿體，在37°C溫育130分鐘。通過離心(5,000g，20分鐘)來分離溶液中溶解的經(jīng)修飾的水稻胚乳蛋白。將殘余的米粉與500ml去離子水混合，通過離心分離可溶部分，以從殘余物中提取出更多。第一次和第二次提取的上清液被合并，按照實施例5所述，用MWCO為50kDa的膜，對合并的上清液中的蛋白進行超濾。UF和DF的組合有效排除了小蛋白片段和其它雜質(zhì)。(D)分析方法實施例8:測定乳化能力按照Gbogourietal，JournalofFoodScience2004,Vol.69,Nr.8，615的方法，基于油滴定，來測定(經(jīng)修飾的)水稻胚乳蛋白的乳化能力。在去離子水中制備(經(jīng)修飾的)水稻胚乳蛋白的分散體系(0.1%w/w，50mL，pH7.0)。用設(shè)定為1的均質(zhì)機(VirtishearTempest,TheVirtisCo"Gardiner,N.Y.，U.S.A.)來均質(zhì)蛋白溶液。使用蠕動泵，以17g/分鐘的流速向蛋白溶液中加入玉米油。通過電導(dǎo)率儀連續(xù)記錄乳液的電導(dǎo)率，將其用作為測定乳化轉(zhuǎn)化點(inversionpoint)的參數(shù)。用加至轉(zhuǎn)化點的油的量來計算乳化能力。乳化能力被表示為乳化的油減去空白后相對于樣品中蛋白的量的比?？瞻资窃?0mL去離子水中相轉(zhuǎn)化之前加入的油的量?；蛘?，按照Vuillemard和他人的方法，基于油滴定，來測定蛋白水解產(chǎn)物REP3-6、3-7、3-8、6-2、6-3、6-4、6-5的乳化能力。在蒸餾水中制備蛋白的分散體系(0.5%w/w，40mL，pH7.0)。用設(shè)定為6的均質(zhì)機(VirtishearTempest,TheVirtisCo"Gardiner,N.Y.,U.S.A.)來均質(zhì)蛋白溶液。使用泵，以12g/分鐘的流速向蛋白溶液中加入玉米油。通過電導(dǎo)率儀連續(xù)記錄乳液的電導(dǎo)率，將其用作為測定乳化轉(zhuǎn)化點的參數(shù)。用加至轉(zhuǎn)化點的油的量來計算乳化能力。乳化能力被表示為乳化的油減去空白后相對于樣品中蛋白的量的比?？瞻资窃?0mL蒸餾水中相轉(zhuǎn)化之前加入的油的實施例9:測定乳化活性通過PearceandKinsella,JournalofAgricFoodChem.1978,26:716-722的濁度方法來測定乳化活性。用設(shè)定為6的超聲儀(VirtishearTempest,TheVirtisCo"Gardiner,N.Y.,U.S.A.)，對6mL0.1X的(經(jīng)修飾的)水稻胚乳蛋白(處于10mM磷酸鹽緩沖液中，pH7.0)溶液與2mL玉米油的混合物進行1分鐘的均質(zhì)。均質(zhì)后0和IO分鐘時，將50微升混合物轉(zhuǎn)入5mL0.1%(w/v)的SDS水溶液中。用分光光度i十(ShimadzuModelUV-1601,Kyoto,Japan)，測定500nm處溶液的吸光度。均質(zhì)后時間為O時的吸光度就是(經(jīng)修飾的)水稻胚乳蛋白的乳化能力。圖9顯示了用Alkalase、Liquipanol禾nPepsin處理過的水稻蛋白水解產(chǎn)物的乳化性質(zhì)，其表示為水解程度的函數(shù)。實施例10:測定水解程度通過Nielsen和他人(Nielsen,P.M.,Petersen,D.&Dambmann,C，2001.Improvedmethodfordeterminingfoodproteindegreeofhydrolysis.JournalofFoodScience,66(5),642-646)的方法來測定DH。按照下文所述來制備鄰苯二甲醛(OPA)試劑將7.620g十水合四硼酸二鈉(Na2B407.10H2O)和200mg十二垸基磺酸鈉(SDS)溶解于150mL去離子水中，然后與160mgOPA(預(yù)先溶解于4mL乙醇中的97%OPA)禾P176mg99%的二硫蘇糖醇(DTT)混合。用去離子水將終溶液定容至200mL。將0.1g經(jīng)冷凍干燥的蛋白樣品溶解于10mL去離子水中。為測量吸光度，向10mL管中加入3mLOPA，然后加入400^tL樣品溶液、絲氨酸標(biāo)準(zhǔn)物(10mg/100mL)和去離子水，針對每種樣品、標(biāo)準(zhǔn)物和空白分別加四只管。這之后混合5秒，放置精確的2分鐘。用分光光度計(ShimadzuModelUV-1601,Kyoto,Japan)在340nm處讀取吸光度。DH按照下文所述來計算DH=h/h.&*100%;其中，h是水解的鍵的數(shù)量，h總是每個蛋白當(dāng)量肽鍵的總數(shù)；h=(絲氨酸-NH2-i3)/Q!當(dāng)量/g蛋白)；其中，h是水解的鍵的數(shù)量，h,g是每個蛋白當(dāng)量肽鍵的總數(shù)；對于谷類蛋白而言，a是1.00，/3是0.4Q，h總是8.0。絲氨酸-NH2=[(A340樣品-A340空白)/(A340標(biāo)*-A340加)]*0.9516meqv/L*0.01*100/(X*P);其中，絲氨酸-NH2=meqv絲氨酸NH2/g蛋白；X二g樣品；？=樣品中的蛋白％;0.01是以升(L)表示的樣品體積。實施例ll:測定蛋白溶解度和總?cè)芙舛韧ㄟ^BeraandMukherjee(Bera，M.B.，Mukherjee，R.K.1989.Solubility,emulsifying,andfoamingpropertiesofricebranproteinconcentrates.JFoodSci54(l):142-145)的方法來測定蛋白溶解度，但有一些改動。將200mg蛋白樣品分散于10mL去離子水中，通過1NHC1或1NNaOH將pH調(diào)節(jié)至7.0。對分散體系進行30分鐘的連續(xù)攪拌，在5000rpm離心15分鐘。(型號J2-21，Beckman,Fullerton，Calif.,U.S.A.)。回收上清液，通過自動Kjeldahl方法(AACC19卯)來測定上清液中的蛋白含量。通過下式來計算蛋白溶解度百分比上清液的蛋白含量蛋白溶解度(％)二-xlOO200mg蛋白分離物中的蛋白蛋白溶解度被計算為上清液中的蛋白與最初樣品中總蛋白的百分比。通過烘烤干燥方法來測定總?cè)芙舛?，其被表示為上清液中總可溶部分與蛋白分離物總重的百分比。上清液中的可溶部分總?cè)芙舛?％)二-x100200mg蛋白分離物圖6顯示了用Alkalase、Liquipanol和Pepsin處理過的水稻胚乳蛋白水解產(chǎn)物的溶解度，其表示為水解程度的函數(shù)。實施例12:測定分子量按照Laemmli,U.K.CleavageofstructuralproteinsduringtheassemblyoftheheadofthebacteriophageT4.Nature1970,227,680-686的方法，通過SDS-PAGE來測定蛋白的大致分子量。在SDS-Tris-甘氨酸不連續(xù)緩沖體系中，在凝膠平板上(4%成層膠、12%分離膠)進行SDS-PAGE。在非還原樣品緩沖液(62.5mMTris-HClpH6.8，2%SDS，10%甘油和0.05%溴酚藍(lán))中制備蛋白溶液(6-10/xg蛋白/i"L)。取20微升溶液上樣到凝膠上。電泳在200V的恒定電壓下進行大約40分鐘。通過乙酸/乙醇/水溶液(10:40:50，v:v:v)中0.1%的考馬斯亮藍(lán)來對凝膠染色，并在沒有考馬斯亮藍(lán)的同樣的溶劑中褪色。通過Bio-Rad寬范圍分子量標(biāo)準(zhǔn)物(6.5至200kDa的范圍內(nèi))來測定大致的分子量。通過使用圖像分析軟件，windowsMac&Dos,AdvancedAmericanBiotechnology&BiomedicalInstrumentsInc，CA，USA，來測定條帶的分子量和密度。實施例13:測定表面疏水性通過HayakawaandNakai，Relationshipsofhydrophobicityandnetchargetothesolubilityofilkandsoyproteins,J.FoodSci.1985,50,486-491概括的方法，通過疏水性熒光探針l-苯胺基-8-萘磺酸鹽(ANS)，來測定蛋白分離物的表面疏水性。在0.01M磷酸鹽緩沖液(pH7)中制備四毫升蛋白溶液，其濃度范圍是從0,008至0,025%w/v。向每種蛋白溶液中加入IO微升8mMANS(處于0.01M磷酸鹽緩沖液(pH7)中)，用熒光分光光度計(ShimadzuModelRF-1501，Kyoto,Japan)，以390nm的激發(fā)和470nm的發(fā)射來測量這些溶液的熒光強度。表面疏水性被表示為熒光強度相對于蛋白濃度的斜率，這通過線性回歸來計算。圖5顯示了用Alkalase、Liquipanol和Pepsin處理過的水稻胚乳蛋白水解產(chǎn)物的表面疏水性，其表示為水解程度的函數(shù)。實施例14:測定粘度通過裝備有MVDIN測量桿(半徑二19.36mm，高度=58.08mm)的轉(zhuǎn)動式流變儀(HaakeVT550,Germany)，在室溫(26°C)測定蛋白分離物的粘度。將蛋白分離物與去離子水混合，以形成10%的漿體，在分析前令漿體放置60分鐘以平衡。將樣品(30ml)上樣進圓柱形杯(半徑=21.0mm)，使用計算機控制的程序，對其應(yīng)用3分鐘從0變化至4001/s的剪切率。通過RheowinProDatamanagerversion2.84(HaakeMessTech,Germany)來分析數(shù)據(jù)。實施例15:測定熱性質(zhì)使用裝備有熱分析軟件(Version4.00，Pyris-l-DSC,Perkin-ElmerCorp.,Norwalk,Conn.，U.S.A.)的Pyris-1型差異掃描量熱儀(Perkins-ElmerCorp.Norwalk，Conn.，U.S.A.)，來測定熱性質(zhì)。將200毫克蛋白分散于適量水中，形成蛋白含量為20%的漿體。對漿體進行良好混合，在分析前放置60分鐘，以平衡。將漿體(大約50/zL)精確稱重進不銹鋼盤(大體積膠囊)，密封，在溫度以10。C/分鐘的速率從25升至140。C期間進行掃描?？毡P被用作為對照。使用數(shù)據(jù)加工軟件，從溫譜圖來計算峰值溫度和焓。使用實施例9的流程，通過Pearce和Kinsella的濁度方法，來測定乳化活性和穩(wěn)定性。時間0時的吸光度被表示為水稻胚乳蛋白的乳化活性，按照下文所述來計算乳化穩(wěn)定性(ES):乳化穩(wěn)定性=ToxAt/AT，其中，AT是At時間間隔(10分鐘)期間最初吸光度(To)的混濁度(吸光度)降低。所有實驗都重復(fù)三次進行。用JMP5.1軟件(SASInst)SAS，2002,JMPUser'sGuide,Version5.SASInstituteInc.,Cary，NC來分析數(shù)據(jù)的方差和多種平均值。通過TukeyHSD流程，以5%的顯著性水平(P<0.05)，來確定平均值間差異的顯著性。(E)結(jié)果在下表3a中，給出了分別通過實施例9和8所述的方法測量得到的、根據(jù)實施例1至7獲得的(經(jīng)修飾的)水稻配如蛋白(REP1-1至REP7)的乳化活性和能力。對于REP3而言，給出了8個值，因為該實施例進行了8次，每次用下述酶中的另一禾中Bromelain、Protex6L、Pepsin、Alkalase或Liquipanol(見REP3-1至REP3-8)，對于REP6而言，給出了5個值，因為該實施例進行了5次(見REP6-1至REP6-5)，每次應(yīng)用不同的工藝條件，如實施例6詳細(xì)描述的。表3a:根據(jù)實施例1-7的(經(jīng)修飾的)水稻胚乳蛋白REP1-1至REP7的<table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table>7在下表3b和3c中，給出了分別通過實施例IO和11所述的方法測量的、根據(jù)實施例3和6獲得的經(jīng)修飾的水稻胚乳蛋白REP3和6的蛋白溶解度和總?cè)芙舛纫约八獬潭?。?b:根據(jù)實施例3和6獲得的經(jīng)修飾的水稻胚乳蛋白REP3和6的蛋白溶解度和總?cè)芙舛?lt;table>tableseeoriginaldocumentpage40</column></row><table>表3c:根據(jù)實施例3和6獲得的經(jīng)修飾的水稻胚乳蛋白REP3和6的水解程度<table>tableseeoriginaldocumentpage40</column></row><table>申DH-酶促水解(在離心和超濾之前)最終產(chǎn)物的^DH(酶促水解，在離心和超濾之后)圖1和2中分別示除了化學(xué)和酶促提取流程的總覽。相對于米粉中的總蛋白而言，堿和鹽方法分別以67.9和60.3%的產(chǎn)率提取出了87.2和89.4%蛋白含量的蛋白分離物。在堿和鹽方法中，pH對于蛋白提取有著強烈的影響。直到pH12，仍可發(fā)現(xiàn)pH和可提取性的正相關(guān)。但是，高pH可能導(dǎo)致不想要的蛋白質(zhì)修飾，并且增加對與蛋白共沉淀的非蛋白組分的提取，降低分離物品質(zhì)。但是，pH10或以下對于水稻蛋白提取來說是較差的溶劑。因此，pHll被確定為最優(yōu)的提取pH(考慮蛋白產(chǎn)率的話)。在考慮蛋白功能性一一例如蛋白的乳化性質(zhì)——的時候，較低的pH(優(yōu)選地，pH8至10)可能是人們感興趣的。此外，在pH11進行蛋白提取并結(jié)合3分鐘均質(zhì)或超聲波處理的預(yù)處理提高了蛋白的可提取性。這些預(yù)處理可能使得疏水相互作用的蛋白-蛋白或蛋白-多糖相互作用分開，從而有助于蛋白提取。在酶促提取中，熱穩(wěn)定的a淀粉酶、Termamyl，接著的纖維素酶處理以89.2%的產(chǎn)率分離出了85.8%的蛋白含量。Termamyl酶的最優(yōu)活性在90°C發(fā)生。為了避免Termamyl處理期間90°C時大量蛋白變性，用另一種非熱穩(wěn)定的淀粉酶(淀粉酶S)對流程進行了改動，其最優(yōu)活性是在70。C時出現(xiàn)。淀粉酶S組合纖維素酶處理以90.5%的產(chǎn)率分離出了81.7%的蛋白，如下表所示<table>tableseeoriginaldocumentpage41</column></row><table>值是三次重復(fù)測定的平均值，并且基于干重。表4示出了水稻蛋白、清蛋白、球蛋白、谷蛋白和醇溶谷蛋白的組成。米粉含有7.8%的蛋白，總蛋白中有4.1。X的清蛋白、11.8%的球蛋白、77.4%的谷蛋白和2.1%的醇溶谷蛋白。堿提和鹽提具有相似的蛋白分布，只除了球蛋白；鹽提的蛋白(6.2%)比堿提的蛋白(3.1%)含有更高的球蛋白。鑒于水稻中的主要蛋白是谷蛋白，堿提和鹽提的蛋白都比酶提的蛋白(80.2%)含有更高百分比的谷蛋白，分別是87.9和86.7。相反，酶提取中，醇溶谷蛋白(2.8%)則高于堿提(0.5%)和鹽提(0.7%)的。表5:化學(xué)提取和酶提取的蛋白分離物中清蛋白、球蛋白、谷蛋白和醇溶谷蛋白含量a蛋白級分組分、/oj總蛋白的％米粉REP1-3:RPa喊REP1-4:RPs鹽REP2-3:RPetTermamylREP2-4:RPeaAmylaseS總蛋白7.9287.2±1.189.4±1.285.8±1.181.7±1.0清蛋白4.132.9±0.12.6±0.21.7±0.11.8±0.1球蛋白11.883.8±0.26.2±0.37.7±0.07.1±0.6谷蛋白77.4387.2±1.186.7±0.980.6±0.781.1±1.05醇溶谷蛋白2.061.5±0.4U土O.l2.8±0.12.9±0.1不可提取的4.33.1±0.62.9±0.16.4±0.65.7±0.4值是三次重復(fù)測定的平均值。四種蛋白分離物的組成示于表6。RPa禾卩RPs具有相似的組成，它們都比酶提取的蛋白，RPET(84.8%)禾BRPEA(81.7%)，有更高的蛋白含量，分別是87.2和89.4%。堿提和鹽提的蛋白中的非蛋白組分(包括淀粉、脂類、纖維、灰分)都比酶提取的蛋白中的要少。表6:水稻蛋白分離物REP1-3、1-4、2-3和2-4的近似組成<table>tableseeoriginaldocumentpage42</column></row><table>a值是三次重復(fù)測定的平均值，并且基于干重。同一列中不同字母的平均值是顯著不同的(P<0.05)。水稻蛋白的電泳情況示于圖3中。通過SDSPAGE凝膠電泳來測定水稻蛋白的分子大小情況。道1-標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)記(6.5-200kDa);道2-RPA;道3-RPS;道4-RPet;道5-RPEA。水稻蛋白具有總共6條條帶，分子大小從7至97kDa。在97kDa(2%)45kDa(3%)、33kDa(72%)、21kDa(7%)、14kDa(6%)禾口7kDa(8%)觀察到了主要條帶。在33kDa的分子大小處觀察到了最主要的條帶，其密度為72%(圖3，道1和2)。這是主要水稻蛋白一一谷蛋白。表7示出了水稻蛋白分離物的熱變性溫度和焓值。表7:水稻蛋白分離物REPl-3、1-4、2-3和2-4以及米粉a的熱性質(zhì)水稻蛋白分離物變性溫度(°C)變性的焓值(Jg—。REP1-3RPA(堿)81.4±Ua1.82±0.14bREP1-4RPS(鹽)78.9±1.8ab1.10±0.09eREP2-3RPET(Termamyl)NdREP2-4RPEA(AmylaseS)79.9±2.1b0.18±0.06d米粉78.8±2.7ab7.31±0.19aa值是三次重復(fù)測定的平均值。同一列中不同字母的平均值是顯著不同的(PO.05)。*nd，不可探測。RPA、RPS、RPet和rpea的變性溫度分別為81.4、78.9、79.9和78.8。C。RPA(1.82J/g)、RPS(1.10J/g)、RPET(不可探測)和RPEA(0.18J/g)的焓值顯著不同，這表明提取方法使得蛋白不同程度的變性，這取決于提取條件。焓變可用于預(yù)測蛋白變性程度。Biliaderis,C.G.,Differentialscanningcalorimetryinfoodresearch:AreviewFoodChem.1983,10,239-265。當(dāng)?shù)鞍撞糠肿冃詴r，烚變減少，當(dāng)?shù)鞍淄耆冃裕瑸優(yōu)?。Yu,Z.Y.，Hettiarachchy,N.S.;Rath,N.，Extraction,denaturationandhydrophobicpropertiesofriceflourproteins,J.FoodSci.2001，66(2)，229-232報道，清蛋白、球蛋白和谷蛋白的焓值分別為2.88、3.14和3.79J/g。在我們的研究中，堿提部分(RPA)具有最高的焓值(1.82J/g)，其顯著低于Yuetal的值(對清蛋白而言，2.88J/g，球蛋白，3.14J/g，以及谷蛋白，3.79J/g)。堿提和鹽提中應(yīng)用的物理處理可使得蛋白一定程度變性。在酶提取的蛋白中，RPET(Termamyl，90°C)沒有顯示出任何可探測到的焓變，這表明蛋白完全變性。表面疏水性和溶解度表8示出了水稻蛋白分離物的表面疏水性、溶解度和粘度。表8:水稻蛋白分離物REP1-3、1-4、2-3和2-4的表面疏水性、溶解度和粘度<table>tableseeoriginaldocumentpage44</column></row><table>值是三次重復(fù)測定的平均值。同一列中不同字母的平均值是顯著不同的(PO.05)。水稻蛋白分離物的疏水性在544至931之間變化。提取方法造成了這些蛋白疏水性的差異。酶提取的蛋白，RPET(931.3)和RPEA(791.6)的疏水性高于堿提和鹽提的蛋白，它們分別是563.8和544.2。這可能是由于蛋白變性造成的，其增加了表面疏水性。熱誘導(dǎo)的酶提取蛋白的解折疊使得表面疏水性增加。水稻蛋白分離物的溶解度在4至10的pH寬范圍內(nèi)都很低(數(shù)據(jù)未示出)。氨基酸組成和疏水相互作用決定了溶解度。Tecsonetal(8)對水稻谷蛋白亞分級分離的研究顯示，水稻谷蛋白的高分子量具有過量的分子內(nèi)和分子間二硫鍵和疏水相互作用，這降低了其溶解度。WenandLuthe(9)也報道，水稻谷蛋白中最豐富的氨基酸是谷氨酸/谷氨酰胺、天冬氨酸/天冬酰胺、精氨酸、甘氨酸和丙氨酸。谷氨酰胺和天冬酰胺側(cè)鏈中的酰胺基團促進了谷蛋白的聚集，降低了蛋白溶解度。相比較而言，酶提取的蛋白較之堿提和鹽提的蛋白具有更低的溶解度，這可能是由于高水平變性、高表面疏水性以及水溶性蛋白(清蛋白)在提取中的損失造成的。水稻蛋白分離物的乳化和泡沫化活性示于表9。表9:水稻蛋白分離物的乳化和泡沬化活性<table>tableseeoriginaldocumentpage45</column></row><table>值是三次重復(fù)測定的平均值。同一列中不同字母的平均值是顯著不同的(PO.05)。堿提和鹽提的蛋白的乳化和泡沬化性質(zhì)都高于酶提取的蛋白。堿提和鹽提的蛋白的乳化活性分別是0.224和0.216，穩(wěn)定性分別是19.6和17.1分鐘，這顯著高于酶提取的蛋白。在泡沫化能力和穩(wěn)定性方面觀察到了相似的情形。蛋白要具有乳化和泡沫化性質(zhì)，則應(yīng)當(dāng)能夠在水相溶解，并且迅速解折疊，在界面形成粘性層。蛋白用以穩(wěn)定乳化和泡沫的分子需求和物理需求是相似的(Damodarn,S.,Protein-stabilizedfoamsandemulsions,J.FoodSci.205,70(3),54-66)。關(guān)于通過不同提取方法獲得的功能性質(zhì)的差異的可能理由可能是由于蛋白分離物的蛋白純度、組成、表面疏水性和溶解度導(dǎo)致的。但這并不意味著申請人被這些理論束縛。首先，兩種酶提取的蛋白的熱性質(zhì)顯示出比RPa和RPs的更高的變性程度。過度變性可能對乳化和泡沫化性質(zhì)有害，這由促進蛋白聚集或者暴露更多數(shù)量的疏水氨基酸導(dǎo)致。表面疏水性數(shù)據(jù)證實了酶提取的蛋白疏水性的增加。過高的表面疏水性對于蛋白的乳化或泡沫化性質(zhì)來說可能是不利的，因為其協(xié)助形成大量的疏水鍵合，降低蛋白溶解度和可彎曲性。第二，極端提取條件，例如高溫或pH可能促進二硫交聯(lián)的形成。已有報道，水稻谷蛋白具有過度的二硫聯(lián)結(jié)。提取的蛋白的極端低的溶解度表明在提取期間熱或pH誘導(dǎo)的蛋白解折疊可能導(dǎo)致蛋白內(nèi)部硫醇基團的暴露。這些暴露的硫醇基團可能易于與相鄰蛋白分子形成二硫聯(lián)結(jié)。新形成的二硫鍵可能會降低分子可彎曲性、溶解度和蛋白的表面活性。蛋白某些片斷的可彎曲性是決定蛋白乳化和泡沫化性質(zhì)的主要性質(zhì)之一。第三，水稻蛋白分離物的組成顯示，堿提和鹽提的蛋白分離物較之酶提取的蛋白而言含有更高含量的蛋白以及更低含量的非蛋白物質(zhì)。在酶提取的蛋白分離物(RPet和RPea)中顯著含量的纖維、灰分、脂類和殘余淀粉可能降低了它們的乳化和泡沫化性質(zhì)。這些非蛋白組分可能與蛋白相互作用，改變了蛋白的凈電荷和疏水性，從而影響到蛋白的功能性。最后，酶提取的蛋白的較低的溶解度對于乳化和泡沫化性質(zhì)有不利影響。蛋白要具有乳化和泡沫化性質(zhì)，則應(yīng)當(dāng)能夠在水相溶解，并且解折疊，在界面形成粘性層。這需要蛋白溶解度和可彎曲性。酶提取的蛋白缺乏這些性質(zhì)，從而使得乳化和泡沫化性質(zhì)較堿提和鹽提的蛋白減小。從這些研究就可以看出，堿和鹽方法分別以67.9和60.3%的產(chǎn)率提取出了87.2禾n89.4%的蛋白。用Termamyl和淀粉酶S進行的酶促方法則分別以89.2和90.5%的產(chǎn)率提取出了84.8禾P81.8%的蛋白。堿提和鹽提的蛋白較之酶提取的蛋白而言具有更高的蛋白含量和更低的非蛋白組分，包括淀粉、纖維和灰分。相比較而言，堿提和鹽提的蛋白有著更好的蛋白組成、更低的疏水性、更高的溶解度以及更低程度的熱變性，這使得其乳化和泡沬化性質(zhì)比酶提取的蛋白更高。因此，堿提和鹽提方法是更為溫和的提取條件，蛋白保留有更好的功能性質(zhì)。水稻蛋白是營養(yǎng)性的、低變應(yīng)原性的，并且對于人類消耗來說是健康的。使用經(jīng)批準(zhǔn)的食品級酶和化學(xué)物質(zhì)進行的高效提取對于水稻蛋白作為功能性成分商業(yè)生產(chǎn)和應(yīng)用來說是必要的。通過堿、鹽和酶促方法分離出了水稻胚乳蛋白，并針對可提取性和物理化學(xué)性質(zhì)對它們加以評估。堿(RPa)和鹽(RPs)方法分別以67.9禾卩60.3%的產(chǎn)率提取出了87.2和89.4%的蛋白。用Termamyl(RPET)和淀粉酶S(RPEA)進行的酶促方法別以89.2禾卩90.5%的產(chǎn)率提取出了84.8禾B81.8%的蛋白。通過差異掃描量熱儀測定的RPA(1.82J/g)、RPS(1.10J/g)、RPET(不可探測)和RPEA(0.18J/g)的焓值表明，蛋白的不同變性水平依賴于提取方法。表面疏水性數(shù)據(jù)支持了這一觀點。堿提和鹽提的蛋白較之酶提取的蛋白具有更高的溶解度和乳化性質(zhì)；因此，堿提和鹽提的蛋白可能具有增強的功能用途以及用于制備定制水稻蛋白分離物的潛在起始材料。用中性、酸性和/或堿性蛋白酶來處理用熱穩(wěn)定性a淀粉酶(Termamyl)分離的水稻胚乳蛋白。通過OPA方法優(yōu)化水解產(chǎn)物的水解程度，以使得溶解度和乳化性質(zhì)最大化。酶失活之后，通過離心(1000g，IO分鐘)分離可溶級分，將可溶的水解產(chǎn)物濾經(jīng)特定分子量切割點(50kDa)的膜。得到的大于50kDa的水解產(chǎn)物被噴霧干燥，針對水解程度、溶解度、乳化能力、活性和穩(wěn)定性對其加以評估。用兩種類型的蛋白酶——半胱氨酸(Liquipanol)和絲氨酸(Alkalase)蛋白酶進行組合處理，接著離心和超濾，顯著提高了溶解度和乳化性質(zhì)。得到的水解產(chǎn)物具有53.5%的溶解度；586.3ml/g的乳化能力，0.604的乳化活性以及24.8分鐘的乳化穩(wěn)定性，這顯著高于未經(jīng)修飾的水稻蛋白分離物(溶解度11.8%，177.6ml/g的乳化能力，0.214的乳化活性以及14.7分鐘的乳化穩(wěn)定性)。用Alkalase和Liquipanol進行組合酶水解，接著進行超濾，提高了水稻胚乳蛋白的溶解度和乳化性質(zhì)。經(jīng)超濾的水稻胚乳蛋白水解產(chǎn)物具有均勻的高純度分子級分，這增強了其溶解度和乳化性質(zhì)。實施例12:生產(chǎn)/3-胡蘿卜素的制劑可以按照下文所述來制備包含水稻胚乳蛋白和/3-胡蘿卜素的制劑。a)制備(基于油的)溶液l:混合7.7g玉米油和1.4gdl-ce-生育酚。將16.1g結(jié)晶/3-胡蘿卜素分散于180ml氯仿(三氯甲烷)中，將得到的分散體系加入玉米油和生育酚的混合物中。通過輕揉攪拌以及同時將混合物加熱至大約60。C，獲得溶液。b)制備(水性)溶液2:通過在60。C進行攪拌，將根據(jù)實施例1的35gREP1(REP1-1)重新溶解于250ml水中?；蛘?，可以使用根據(jù)實施例1新鮮制備的REP1-1，即不進行冷凍干燥和貯存的步驟，而是原樣使用得到的REPl-l溶液，令其達到60°C的溫度。此外，加入2.1g棕櫚酸抗壞血酸酯和42.7g蔗糖。用8ml水性lNNaOH將pH調(diào)節(jié)至7.9的值。可以使用REPl-2來代替REP1-1，用于制備水性溶液。c)從溶液1和2制備乳液在劇烈攪拌條件下，于53°C，將溶液1加入溶液2，對分散體系再進行30分鐘的劇烈攪拌。將攪拌的分散體系保持于50至55°C，30分鐘。在50至55。C除去殘余的三氯甲烷。在通過離心除去夾帶的氣泡后，在50至55°C對乳液輕柔攪拌數(shù)分鐘，然后針對內(nèi)相的顆粒大小進行分析。通過激光衍射(MalvernMasersizer)，乳液內(nèi)相的平均顆粒大小(Sauter直徑，D[3,2p被測量為380nm。d)從乳液制備固體制劑可將乳液噴霧進玉米淀粉的預(yù)冷卻流化床?？赏ㄟ^過篩來除去過量的玉米淀粉，可在室溫下于空氣流中對獲得的粉末加以干燥?？赏ㄟ^過篩收集0.16至0.50mm范圍內(nèi)的粉末顆粒級分，并針對水性分散體系中類胡蘿卜素含量、顏色強度和顏色色度，玉米淀粉含量和殘余水含量對其加以分析。表10:計算出的經(jīng)干燥制劑的組成<table>tableseeoriginaldocumentpage49</column></row><table>權(quán)利要求1.一種組合物，其包含水稻胚乳蛋白和活性成分。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中，所述水稻胚乳蛋白是經(jīng)修飾的水稻胚乳蛋白。3.根據(jù)權(quán)利要求l和/或2所述的組合物，其中，所述活性成分是脂溶性活性成分和/或著色劑。4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任意一項所述的組合物，其中，所述脂溶性活性成分是胡蘿卜素或結(jié)構(gòu)相關(guān)的多烯化合物、脂溶性維生素、富含多不飽和脂肪酸的甘油三酸酯、脂溶性UV-A濾光劑、UV-B濾光劑或它們的混合物。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的組合物，其中，所述胡蘿卜素或結(jié)構(gòu)相關(guān)的多烯化合物是類胡蘿卜素，例如，a-胡蘿卜素、/3-胡蘿卜素、8'-阿樸-/3-胡蘿卜醛、8，-阿樸-/3-胡蘿卜素酸酯、斑蝥黃、奸青素、番茄紅素、葉黃素、玉米黃質(zhì)、藏花酸、a-玉米胡蘿卜素、/3-玉米胡蘿卜素或它們的混合物。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的組合物，其中，所述類胡蘿卜素是/3-胡蘿卜素。7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的組合物，其中，所述脂溶性維生素是維生素A或維生素E。8.根據(jù)權(quán)利要求1-7中任意一項所述的組合物，其中，額外存在選自單糖、二糖、寡糖、多糖、甘油、甘油三酸酯、水溶性抗氧化劑和脂溶性抗氧化劑構(gòu)成的組的至少一種化合物。9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的組合物，其中，所述單糖或二糖是蔗糖、轉(zhuǎn)化糖、木糖、葡萄糖、果糖、乳糖、麥芽糖、甘蔗糖和糖醇。10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的組合物，其中，所述寡糖或多糖是淀粉、淀粉水解產(chǎn)物或改性淀粉。11.根據(jù)權(quán)利要求IO所述的組合物，其中，所述淀粉水解產(chǎn)物是糊精、麥芽糊精或葡萄糖漿。12.根據(jù)權(quán)利要求4和/或8所述的組合物，其中，所述甘油三酸酯是植物油或脂肪。13.根據(jù)前述任意一項權(quán)利要求所述的組合物，其中，額外存在選自脂肪酸的甘油單/二酸酯、脂肪酸的多甘油酯、卵磷脂和山梨聚糖單硬脂酸酯構(gòu)成的組的共乳化劑。14.根據(jù)權(quán)利要求1-13中任意一項所述的組合物，其中，所述(經(jīng)修飾的)水稻胚乳蛋白具有^220的乳化能力，優(yōu)選地，^350，更優(yōu)選地，>500。15.根據(jù)權(quán)利要求1-14中任意一項所述的組合物，其中，所述(經(jīng)修飾的)水稻胚乳蛋白具有具有^0.2的乳化活性，優(yōu)選地，>0.45，更優(yōu)選地，^0.5。16.根據(jù)權(quán)利要求1-15中任意一項所述的組合物，其中，所述(經(jīng)修飾的)水稻胚乳蛋白的量為大約1至大約70重量％，和/或所述(脂溶性)活性成分和/或著色劑的量是大約0.1至大約90重量％，上述量基于所述組合物的總重。17.根據(jù)權(quán)利要求1-16中任意一項所述的組合物，其是粉末形式的。18.根據(jù)權(quán)利要求1-17中任意一項所述的組合物，其中，所述(經(jīng)修飾的)水稻胚乳蛋白與選自還原糖、糖蛋白或糖肽構(gòu)成的組的至少一種化合物交聯(lián)。19.生產(chǎn)根據(jù)權(quán)利要求1-18中任意一項所述的組合物的工藝，所述工藝包括下述步驟I)制備(經(jīng)修飾的)水稻胚乳蛋白的水性溶液或膠體溶液，II)可選地，向步驟I)中制備的溶液中至少加入水溶性賦形劑和/或佐劑，III)制備至少有活性成分，優(yōu)選地，至少有脂溶性活性成分和/或著色劑，以及可選地至少有脂溶性佐劑和/或賦形劑的溶液或分散體系，IV)將步驟I)至III)中制備的溶液互相混合起來，V)均質(zhì)由此得到的混合物，VI)可選地，加入交聯(lián)劑用于交聯(lián)所述(經(jīng)修飾的)水稻胚乳蛋白，Via)可選地，對進行步驟VI)之后得到的混合物進行酶促處理或熱處理，以交聯(lián)所述(經(jīng)修飾的)水稻胚乳蛋白，VII)可選地，將步驟V)和/或VI)中獲得的分散體系轉(zhuǎn)化為粉末，VIII)可選地，干燥步驟VII)中獲得的所述粉末，IX)可選地，對(干燥)粉末進行熱處理或酶促處理，以交聯(lián)所述(經(jīng)修飾的)水稻胚乳蛋白，同時滿足下述條件在進行步驟VI)的情況下，僅進行步驟Via)或步驟IX)之一，而非兩者都進行。20.根據(jù)權(quán)利要求19所述的工藝，其中，根據(jù)步驟VIa)或步驟IX)的所述酶促處理是用交聯(lián)酶進行的處理，特別是轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶進行的處理。21.根據(jù)權(quán)利要求19所述的工藝，其中，所述(經(jīng)修飾的)水稻胚乳蛋白是權(quán)利要求14和/或15定義的。22.從經(jīng)碾磨水稻來生產(chǎn)(經(jīng)修飾的)水稻胚乳蛋白的工藝，其中，在碾磨之前除去稻麩，所述工藝包括下述步驟a)至e)，并且滿足下述條件步驟b)、C)和d)至少要進行一個a)制備經(jīng)碾磨水稻的水性溶液或懸浮液，其中，在碾磨之前除去稻麩，其中，所述溶液或懸浮液優(yōu)選具有基于水性溶液或懸浮液總重而言0.1至30重量％的干物質(zhì)含量；b)可選地，移出經(jīng)碾磨水稻的非蛋白部分或蛋白部分，以獲得水稻胚乳蛋白，其中在碾磨之前除去稻麩；c)可選地，修飾經(jīng)碾磨水稻的所述蛋白部分，以獲得經(jīng)修飾的水稻胚乳蛋白，其中在碾磨之前除去稻麩；d)可選地，分離所述(經(jīng)修飾的)水稻胚乳蛋白；e)可選地，將所述(經(jīng)修飾的)水稻胚乳蛋白轉(zhuǎn)化為固體形式。23.根據(jù)權(quán)利要求22所述的工藝，其中，步驟d)通過離心或過濾來進行，優(yōu)選通過超濾進行。24.根據(jù)權(quán)利要求22和/或23所述的工藝，其中，所述過濾通過使用標(biāo)稱分子量分離點>5kDa的膜來進行。25.根據(jù)權(quán)利要求23至24中一項或多項所述的工藝，其中，所述移出經(jīng)碾磨水稻的非蛋白部分(步驟b)通過用非蛋白降解酶處理所述經(jīng)碾磨的水稻、滅活酶、從所述經(jīng)碾磨水稻的蛋白部分分離并移出所述非蛋白部分來實現(xiàn)。26.根據(jù)權(quán)利要求25所述的工藝，其中，所述非蛋白降解酶是淀粉降解酶、纖維素降解酶或其混合物。27.根據(jù)權(quán)利要求25和/或26所述的工藝，其中，對所述非蛋白部分的分離通過離心接著洗掉來實現(xiàn)。28.根據(jù)權(quán)利要求23至27中一項或多項所述的工藝，其中，步驟c)通過用堿性、中性和/或酸性蛋白酶對所述經(jīng)碾磨水稻的蛋白部分加以處理來實現(xiàn)。29.根據(jù)權(quán)利要求28所述的工藝，其中，隨后通過兩種不同的堿性蛋白酶來處理所述經(jīng)碾磨水稻的蛋白部分。30.根據(jù)權(quán)利要求29所述的工藝，其中，這兩種蛋白酶之一是絲氨酸特異性蛋白酶，另一種是半胱氨酸特異性蛋白酶。31.根據(jù)權(quán)利要求23至30中一項或多項所述的工藝，其中，所述移出蛋白部分(步驟b)通過將"經(jīng)碾磨水稻"溶液或懸浮液的pH調(diào)節(jié)至7至12的值來實現(xiàn)。32.根據(jù)權(quán)利要求23至31中一項或多項所述的工藝，其中，步驟e)通過干燥，優(yōu)選地，冷凍干燥或噴霧干燥來實現(xiàn)。33.能夠通過根據(jù)權(quán)利要求23至32中任意一項所述的工藝獲得的(經(jīng)修飾的)水稻胚乳蛋白。34.—種(經(jīng)修飾的)水稻胚乳蛋白，其具有>220的乳化能力，優(yōu)選地，^350，更優(yōu)選地，>500。35.根據(jù)權(quán)利要求34所述的(經(jīng)修飾的)水稻胚乳蛋白，其還具有》0.2的乳化活性，優(yōu)選地，^0.45，更優(yōu)選地，^0.5。36.根據(jù)權(quán)利要求1-18中任意一項所述的組合物用于對食品、飲料、動物詞料、個人護理組合物或藥物組合物進行富集、強化和/或著色的用途。37.含有根據(jù)權(quán)利要求1-18中任意一項所述的組合物的食品、飲料、動物伺料、個人護理組合物和藥物組合物。38.含有根據(jù)權(quán)利要求33-35中任意一項所述的(經(jīng)修飾的)水稻胚乳蛋白的食品、飲料、動物飼料、個人護理組合物和藥物組合物。39.根據(jù)權(quán)利要求33-35中任意一項所述的(經(jīng)修飾的)水稻胚乳蛋白作為活性成分的保護性水膠體的用途，尤其是脂溶性活性成分和/或著色劑的保護性水膠體的用途。全文摘要(經(jīng)修飾的)水稻胚乳蛋白被用作為活性成分的新穎保護性水膠體，所述活性成分尤其是脂溶性活性成分和/或著色劑。本發(fā)明包括組合物及其生產(chǎn)方法，所述組合物包含(經(jīng)修飾的)水稻胚乳蛋白和至少一種活性成分，本發(fā)明還包括(經(jīng)修飾的)水稻胚乳蛋白本身及其生產(chǎn)方法。這些組合物可用于對食品、飲料、動物飼料、個人護理組合物和藥物組合物的富集、強化和/或著色，本發(fā)明還涉及分別含有此類(經(jīng)修飾的)水稻胚乳蛋白和此類組合物的食品、飲料、動物飼料、個人護理組合物和藥物組合物。文檔編號A23J3/30GK101600357SQ200680046283公開日2009年12月9日申請日期2006年12月8日優(yōu)先權(quán)日2005年12月8日發(fā)明者伊蘭克凡·帕拉曼,克利斯汀·舍弗爾,布魯諾·H·勒安伯格,格哈德·瓦格內(nèi),納瓦格納·S·希特拉赫,馬卡斯·貝克申請人:帝斯曼知識產(chǎn)權(quán)資產(chǎn)管理有限公司