專利名稱：胞內分泌脂肪酶型全細胞催化劑及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種具有脂肪酶活性的全細胞催化劑及其制備方法。
背景技術：
在生物柴油的生產中，脂肪酶作為催化劑的規(guī)?；a的最大障礙是脂肪酶的生產成本高，難于實現(xiàn)大規(guī)模工業(yè)化生產和應用。產生脂肪酶的生物全細胞作為催化劑(簡稱全細胞催化劑)，既將產脂肪酶的微生物菌株進行發(fā)酵培養(yǎng)后，收集菌體經過簡單處理后代替脂肪酶，參加合成單脂肪酸甲酯的反應。全細胞催化劑省去了脂肪酶的分離、提取、純化和固定化等復雜工序，是克服目前脂肪酶生產、應用成本高的有效途徑之一。
關于產脂肪酶的生物全細胞催化劑的報道很少，而且處于研究階段。目前在國外僅見來自日本科學家的報道。第一個報道是Matsumoto等利用細胞內大量表達米根霉脂肪酶的釀酒酵母，采用凍融或風干等處理后參加反應，但酵母細胞不能回收再利用。第2個報道是將米根霉細胞固定在聚氨酯泡沫顆粒中，用戊二醛交聯(lián)處理后參加反應，可以反復使用6次。最近Matsumoto等又用胞外分泌脂肪酶的酵母進行了試驗。他們構建了一個新的酵母細胞表面，作為FS蛋白或FL蛋白的細胞壁錨定區(qū)，酵母表達的重組脂肪酶蛋白能與FS或FL蛋白融合，融合蛋白分布在新構建的細胞表面。用這種細胞作為全細胞催化劑取得成功，但也無重復使用的報道。國內僅見清華大學的曾靜等用霉菌干燥和冷凍后直接參加反應實踐，但未見重復使用的報道。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的在于提供一種制作工序簡單、成本低、可反復使用的胞內分泌脂肪酶型全細胞催化劑及其制備方法。
為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術方案是胞內分泌脂肪酶型全細胞催化劑，其特征在于它主要由酵母菌體、硅藻土、海藻酸鈉、二氯化鈣和pH值為7.7的Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液原料制備而成，各原料所占總重量的百分比為酵母菌體0.7-1.2、 硅藻土2.1-3.6、海藻酸鈉2.0-2.3、 二氯化鈣0.5-0.8、pH值為7.7的Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液 92.1-94.7；其中酵母菌體與硅藻土的重量比＝1∶3，各原料所占總重量百分比之和為100。
各原料所占總重量的最佳百分比為酵母菌體1.0、 硅藻土3.0、海藻酸鈉2.0、 二氯化鈣0.56、pH值為7.7的Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液 93.44。
上述胞內分泌脂肪酶型全細胞催化劑的制備方法，其特征在于它包括如下步驟1).原料的選取按各原料所占總重量的百分比為酵母菌體0.7-1.2、硅藻土2.1-3.6、海藻酸鈉2.0-2.3、二氯化鈣0.5-0.8、pH值為7.7的Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液92.1-94.7，其中酵母菌體與硅藻土的重量比＝1∶3，各原料所占總重量百分比之和為100，選取酵母菌體、硅藻土、海藻酸鈉、二氯化鈣和pH值為7.7的Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液原料，備用；2).酵母菌體用pH值為7.7的Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液洗滌兩次，pH值為7.7的Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液的重量用量為酵母菌體的兩倍，冷凍干燥；3).菌體的第一次固定化冷凍干燥所得的菌體加入硅藻土(第一次固定化載體，按酵母菌體與硅藻土的重量比＝1∶3加入硅藻土)，在容器中打散菌體并與硅藻土混勻；加入酵母菌體重量兩倍的pH值為7.7的Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液，在25℃條件下攪拌1小時后，離心收集固體，將所收集到的固體用丙酮洗滌2次，使載體顆粒分散，再次冷凍干燥，得第一次固定化全細胞；4).菌體的第二次固定化將海藻酸鈉(第2次固定化載體)配成水溶液A，另用剩余的pH值為7.7的Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液配制第一次固定化的全細胞成14.5-15.5％的溶液B，合并兩溶液，充分攪拌，最終的海藻酸鈉濃度為2％，得混合溶液；用注射器將該混合溶液逐滴加入到0.05mol/L無菌的Ca2Cl溶液中，固化1小時后取出，離心收集固體，用蒸餾水洗2次，以除去固定顆?；砻娑嘤嗟腃a2Cl，真空干燥即得產品。成型的細胞內分泌型酵母全細胞為顆粒狀，顆粒直徑約為1mm。
所述的酵母菌體的制備1).菌種和培養(yǎng)基的選取(1)菌種通過稀釋平板法將油廠廢油置入分離用培養(yǎng)基中進行分離培養(yǎng)，分離用培養(yǎng)基為馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基，得產生胞內分泌型脂肪酶的酵母(Candidalipolytica解脂假絲酵母)(分離方法見《農業(yè)微生物實驗技術》第69-72頁，中國農業(yè)出版社，1996年5月，第1版)；其中馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基為將200g馬鈴薯切成小塊并熬成汁，將馬鈴薯汁與20g蔗糖溶于1L水中，并加入20g瓊脂，121℃高溫滅菌15min，得馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基；(2)發(fā)酵用培養(yǎng)基大豆油29.0g/L，蔗糖1.0g/L，蛋白胨70.0g/L，NaNO31.0g/L，KH2PO41.0g/L，MgSO4·7H2O 0.5g/L，121℃滅菌20分鐘；2).發(fā)酵培養(yǎng)無菌容器中裝入占體積1/3的發(fā)酵用培養(yǎng)基，接種產生胞內分泌型脂肪酶的酵母菌種；置28℃，150r/min，培養(yǎng)72小時，得發(fā)酵后的液體；3).收集菌體將發(fā)酵后的液體4700r/min離心10分鐘，收集菌體，得酵母菌體。
本發(fā)明采用2種不同性質的載體和二次固定法將酵母菌體固定后，成功代替脂肪酶作為生物柴油生產用催化劑，并且可以多次反復使用。其制備方法簡單，成品易回收，便于多次使用，降低了生產成本。
本發(fā)明的有益效果是1.制作簡單本發(fā)明制作工序簡單，不需要復雜設備；將供試菌株進行發(fā)酵培養(yǎng)后，收集菌體進行干燥、固定和凍融既成，截留在細胞內的脂肪酶相當于被固定。
2.降低成本以全細胞生物催化劑的形式利用脂肪酶，既省去了脂肪酶的分離提取、純化和固定等工序，也避免在此過程中的酶損失，也節(jié)省了大量設備投資、運行費用，在工業(yè)化生產中具有更高的成本效率。
3.技術先進細胞內分泌脂肪酶的酵母全細胞代替脂肪酶用于轉酯催化劑，雖然已經有成功報道，但未見有酵母全細胞的固定化制作技術和多次使用的報道；本發(fā)明采用大分子載體和2次固定法，固定后的酵母細胞容易收集而且具有脂肪酶活性。
4.多次使用采用2次固定法制作的酵母全細胞催化劑使用后的回收率比其它方法的回收率高10％；在油脂-甲醇反應系統(tǒng)中至少使用6次活性無明顯下降。
具體實施例方式
為了更好地理解本發(fā)明，下面結合實施例進一步闡明本發(fā)明的內容，但本發(fā)明的內容不僅僅局限于下面的實施例。
實施例1胞內分泌脂肪酶型全細胞催化劑的制備方法，它包括如下步驟1).菌種和培養(yǎng)基的選取(1)菌種通過稀釋平板法將油廠廢油置入分離用培養(yǎng)基中進行分離培養(yǎng)，分離用培養(yǎng)基為馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基，得產生胞內分泌型脂肪酶的酵母(Candidalipolytica解脂假絲酵母)(分離方法見《農業(yè)微生物實驗技術》第69-72頁，中國農業(yè)出版社，1996年5月，第1版)；其中馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基為將200g馬鈴薯切成小塊并熬成汁，將馬鈴薯汁與20g蔗糖溶于1L水中，并加入20g瓊脂，121℃高溫滅菌15min，得馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基；(2)發(fā)酵用培養(yǎng)基大豆油29.0g/L，蔗糖1.0g/L，蛋白胨70.0g/L，NaNO31.0g/L，KH2PO41.0g/L，MgSO4·7H2O 0.5g/L，121℃滅菌20分鐘；2).發(fā)酵培養(yǎng)無菌容器中裝入占體積1/3的發(fā)酵用培養(yǎng)基，接種產生胞內分泌型脂肪酶的酵母菌種；置28℃，150r/min，培養(yǎng)72小時，得發(fā)酵后的液體；3).收集菌體將發(fā)酵后的液體4700r/min離心10分鐘，收集菌體，得酵母菌體；4).原料的選取各原料所占總重量的百分比為酵母菌體1.0、硅藻土3.0、海藻酸鈉2.0、二氯化鈣0.56、pH值為7.7的Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液93.44選取酵母菌體、硅藻土、海藻酸鈉、二氯化鈣、pH值為7.7的Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液原料，備用；5).酵母菌體用pH值為7.7的Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液洗滌兩次，pH值為7.7的Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液的重量用量為酵母菌體的兩倍，冷凍干燥；6).菌體的第一次固定化冷凍干燥所得的菌體加入硅藻土(第一次固定化載體，按酵母菌體與硅藻土的重量比＝1∶3加入硅藻土)，在容器中打散菌體并與硅藻土混勻；加入酵母菌體重量兩倍的pH值為7.7的Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液，在25℃條件下攪拌1小時后，離心收集固體，將所收集到的固體用丙酮洗滌2次，使載體顆粒分散，再次冷凍干燥，得第一次固定化全細胞；7).菌體的第二次固定化將海藻酸鈉(第二次固定化載體)配成水溶液A，另用剩余的pH值為7.7的Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液配制第一次固定化的全細胞成15％的溶液B，合并兩溶液，充分攪拌，最終的海藻酸鈉濃度為2％，得混合溶液；用注射器將該混合溶液逐滴加入到0.05mol/L無菌的Ca2Cl溶液中，固化1小時后取出，離心收集固體，用蒸餾水洗2次，以除去固定顆?；砻娑嘤嗟腃a2Cl，真空干燥即得產品。成型的細胞內分泌型酵母全細胞為顆粒狀，顆粒直徑約為1mm。
實施例2胞內分泌脂肪酶型全細胞催化劑的制備方法，它包括如下步驟1).菌種和培養(yǎng)基的選取(1)菌種通過稀釋平板法將油廠廢油置入分離用培養(yǎng)基中進行分離培養(yǎng)，分離用培養(yǎng)基為馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基，得產生胞內分泌型脂肪酶的酵母(Candidalipolytica解脂假絲酵母)(分離方法見《農業(yè)微生物實驗技術》第69-72頁，中國農業(yè)出版社，1996年5月，第1版)；其中馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基為將200g馬鈴薯切成小塊并熬成汁，將馬鈴薯汁與20g蔗糖溶于1L水中，并加入20g瓊脂，121℃高溫滅菌15min，得馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基；(2)發(fā)酵用培養(yǎng)基大豆油29.0g/L，蔗糖1.0g/L，蛋白胨70.0g/L，NaNO31.0g/L，KH2PO41.0g/L，MgSO4·7H2O 0.5g/L，121℃滅菌20分鐘；2).發(fā)酵培養(yǎng)無菌容器中裝入占體積1/3的發(fā)酵用培養(yǎng)基，接種產生胞內分泌型脂肪酶的酵母菌種；置28℃，150r/min，培養(yǎng)72小時，得發(fā)酵后的液體；3).收集菌體將發(fā)酵后的液體4700r/min離心10分鐘，收集菌體，得酵母菌體；4).原料的選取各原料所占總重量的百分比為酵母菌體0.7、硅藻土2.1、海藻酸鈉2.0、二氯化鈣0.5、pH值為7.7的Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液94.7選取酵母菌體、硅藻土、海藻酸鈉、二氯化鈣、pH值為7.7的Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液原料，備用；5).酵母菌體用pH值為7.7的Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液洗滌兩次，pH值為7.7的Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液的重量用量為酵母菌體的兩倍，冷凍干燥；6).菌體的第一次固定化冷凍干燥所得的菌體加入硅藻土(第一次固定化載體，按酵母菌體與硅藻土的重量比＝1∶3加入硅藻土)，在容器中打散菌體并與硅藻土混勻；加入酵母菌體重量兩倍的pH值為7.7的Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液，在25℃條件下攪拌1小時后，離心收集固體，將所收集到的固體用丙酮洗滌2次，使載體顆粒分散，再次冷凍干燥，得第一次固定化全細胞；7).菌體的第二次固定化將海藻酸鈉(第二次固定化載體)配成水溶液A，另用剩余的pH值為7.7的Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液配制第一次固定化的全細胞成15％的溶液B，合并兩溶液，充分攪拌，最終的海藻酸鈉濃度為2％，得混合溶液；用注射器將該混合溶液逐滴加入到0.05mol/L無菌的Ca2Cl溶液中，固化1小時后取出，離心收集固體，用蒸餾水洗2次，以除去固定顆?；砻娑嘤嗟腃a2Cl，真空干燥即得產品。成型的細胞內分泌型酵母全細胞為顆粒狀，顆粒直徑約為1mm。
實施例3胞內分泌脂肪酶型全細胞催化劑的制備方法，它包括如下步驟1).菌種和培養(yǎng)基的選取(1)菌種通過稀釋平板法將油廠廢油置入分離用培養(yǎng)基中進行分離培養(yǎng)，分離用培養(yǎng)基為馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基，得產生胞內分泌型脂肪酶的酵母(Candidalipolytica解脂假絲酵母)(分離方法見《農業(yè)微生物實驗技術》第69-72頁，中國農業(yè)出版社，1996年5月，第1版)；其中馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基為將200g馬鈴薯切成小塊并熬成汁，將馬鈴薯汁與20g蔗糖溶于1L水中，并加入20g瓊脂，121℃高溫滅菌15min，得馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基；(2)發(fā)酵用培養(yǎng)基大豆油29.0g/L，蔗糖1.0g/L，蛋白胨70.0g/L，NaNO31.0g/L，KH2PO41.0g/L，MgSO4·7H2O 0.5g/L，121℃滅菌20分鐘；2).發(fā)酵培養(yǎng)無菌容器中裝入占體積1/3的發(fā)酵用培養(yǎng)基，接種產生胞內分泌型脂肪酶的酵母菌種；置28℃，150r/min，培養(yǎng)72小時，得發(fā)酵后的液體；3).收集菌體將發(fā)酵后的液體4700r/min離心10分鐘，收集菌體，得酵母菌體；4).原料的選取各原料所占總重量的百分比為酵母菌體1.2、硅藻土3.6、海藻酸鈉2.3、二氯化鈣0.8、pH值為7.7的Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液92.1選取酵母菌體、硅藻土、海藻酸鈉、二氯化鈣、pH值為7.7的Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液原料，備用；5).酵母菌體用pH值為7.7的Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液洗滌兩次，pH值為7.7的Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液的重量用量為酵母菌體的兩倍，冷凍干燥；6).菌體的第一次固定化冷凍干燥所得的菌體加入硅藻土(第一次固定化載體，按酵母菌體與硅藻土的重量比＝1∶3加入硅藻土)，在容器中打散菌體并與硅藻土混勻；加入酵母菌體重量兩倍的pH值為7.7的Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液，在25℃條件下攪拌1小時后，離心收集固體，將所收集到的固體用丙酮洗滌2次，使載體顆粒分散，再次冷凍干燥，得第一次固定化全細胞；7).菌體的第二次固定化將海藻酸鈉(第二次固定化載體)配成水溶液A，另用剩余的pH值為7.7的Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液配制第一次固定化的全細胞成15％的溶液B，合并兩溶液，充分攪拌，最終的海藻酸鈉濃度為2％，得混合溶液；用注射器將該混合溶液逐滴加入到0.05mol/L無菌的Ca2Cl溶液中，固化1小時后取出，離心收集固體，用蒸餾水洗2次，以除去固定顆?；砻娑嘤嗟腃a2Cl，真空干燥即得產品。成型的細胞內分泌型酵母全細胞為顆粒狀，顆粒直徑約為1mm。
實施例4胞內分泌脂肪酶型全細胞催化劑的制備方法，它包括如下步驟1).原料的選取各原料所占總重量的百分比為酵母菌體1.0、硅藻土3.0、海藻酸鈉2.0、二氯化鈣0.56、pH值為7.7的Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液93.44選取酵母菌體、硅藻土、海藻酸鈉、二氯化鈣、pH值為7.7的Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液原料，備用；酵母菌體采用現(xiàn)有的酵母菌體；2).酵母菌體用pH值為7.7的Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液洗滌兩次，pH值為7.7的Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液的重量用量為酵母菌體的兩倍，冷凍干燥；3).菌體的第一次固定化冷凍干燥所得的菌體加入硅藻土(第一次固定化載體，按酵母菌體與硅藻土的重量比＝1∶3加入硅藻土)，在容器中打散菌體并與硅藻土混勻；加入酵母菌體重量兩倍的pH值為7.7的Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液，在25℃條件下攪拌1小時后，離心收集固體，將所收集到的固體用丙酮洗滌2次，使載體顆粒分散，再次冷凍干燥，得第一次固定化全細胞；4).菌體的第二次固定化將海藻酸鈉(第二次固定化載體)配成水溶液A，另用剩余的pH值為7.7的Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液配制第一次固定化的全細胞成14.5-15.5％的溶液B，合并兩溶液，充分攪拌，最終的海藻酸鈉濃度為2％，得混合溶液；用注射器將該混合溶液逐滴加入到0.05mol/L無菌的Ca2Cl溶液中，固化1小時后取出，離心收集固體，用蒸餾水洗2次，以除去固定顆?；砻娑嘤嗟腃a2Cl，真空干燥即得產品。成型的細胞內分泌型酵母全細胞為顆粒狀，顆粒直徑約為1mm。
實施例5胞內分泌脂肪酶型全細胞催化劑的制備方法，它包括如下步驟1).原料的選取各原料所占總重量的百分比為酵母菌體0.7、硅藻土2.1、海藻酸鈉2.0、二氯化鈣0.8、pH值為7.7的Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液94.4選取酵母菌體、硅藻土、海藻酸鈉、二氯化鈣、pH值為7.7的Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液原料，備用；酵母菌體采用現(xiàn)有的酵母菌體；酵母菌體采用現(xiàn)有的酵母菌體；2).酵母菌體用pH值為7.7的Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液洗滌兩次，pH值為7.7的Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液的重量用量為酵母菌體的兩倍，冷凍干燥；3).菌體的第一次固定化冷凍干燥所得的菌體加入硅藻土(第一次固定化載體，按酵母菌體與硅藻土的重量比＝1∶3加入硅藻土)，在容器中打散菌體并與硅藻土混勻；加入酵母菌體重量兩倍的pH值為7.7的Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液，在25℃條件下攪拌1小時后，離心收集固體，將所收集到的固體用丙酮洗滌2次，使載體顆粒分散，再次冷凍干燥，得第一次固定化全細胞；4).菌體的第二次固定化將海藻酸鈉(第二次固定化載體)配成水溶液A，另用剩余的pH值為7.7的Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液配制第一次固定化的全細胞成14.5-15.5％的溶液B，合并兩溶液，充分攪拌，最終的海藻酸鈉濃度為2％，得混合溶液；用注射器將該混合溶液逐滴加入到0.05mol/L無菌的Ca2Cl溶液中，固化1小時后取出，離心收集固體，用蒸餾水洗2次，以除去固定顆?；砻娑嘤嗟腃a2Cl，真空干燥即得產品。成型的細胞內分泌型酵母全細胞為顆粒狀，顆粒直徑約為1mm。
權利要求
1.胞內分泌脂肪酶型全細胞催化劑，其特征在于它主要由酵母菌體、硅藻土、海藻酸鈉、二氯化鈣和pH值為7.7的Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液原料制備而成，各原料所占總重量的百分比為酵母菌體 0.7-1.2、硅藻土2.1-3.6、海藻酸鈉 2.0-2.3、二氯化鈣 0.5-0.8、pH值為7.7的Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液 92.1-94.7；其中酵母菌體與硅藻土的重量比＝1∶3，各原料所占總重量百分比之和為100。
2.根據(jù)權利要求1所述的胞內分泌脂肪酶型全細胞催化劑，其特征在于各原料所占總重量的百分比為酵母菌體 1.0、硅藻土3.0、海藻酸鈉 2.0、二氯化鈣 0.56、pH值為7.7的Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液93.44。
3.如權利要求1所述的胞內分泌脂肪酶型全細胞催化劑的制備方法，其特征在于它包括如下步驟1).原料的選取按各原料所占總重量的百分比為酵母菌體0.7-1.2、硅藻土2.1-3.6、海藻酸鈉2.0-2.3、二氯化鈣0.5-0.8、pH值為7.7的Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液92.1-94.7，其中酵母菌體與硅藻土的重量比＝1∶3，各原料所占總重量百分比之和為100，選取酵母菌體、硅藻土、海藻酸鈉、二氯化鈣和pH值為7.7的Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液原料，備用；2).酵母菌體用pH值為7.7的Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液洗滌兩次，pH值為7.7的Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液的重量用量為酵母菌體的兩倍，冷凍干燥；3).菌體的第一次固定化冷凍干燥所得的菌體加入硅藻土，在容器中打散菌體并與硅藻土混勻；加入酵母菌體重量兩倍的pH值為7.7的Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液，在25℃條件下攪拌1小時后，離心收集固體，將所收集到的固體用丙酮洗滌2次，使載體顆粒分散，再次冷凍干燥，得第一次固定化全細胞；4).菌體的第二次固定化將海藻酸鈉配成水溶液A，另用剩余的pH值為7.7的Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液配制第一次固定化的全細胞成溶液B，合并兩溶液，充分攪拌，最終的海藻酸鈉濃度為2％，得混合溶液；用注射器將該混合溶液逐滴加入到0.05mol/L無菌的Ca2Cl溶液中，固化1小時后取出，離心收集固體，用蒸餾水洗2次，以除去固定顆?；砻娑嘤嗟腃a2Cl，真空干燥即得產品。
4.根據(jù)權利要求3所述的胞內分泌脂肪酶型全細胞催化劑的制備方法，其特征在于所述的酵母菌體的制備1).菌種和培養(yǎng)基的選取(1)菌種通過稀釋平板法將油廠廢油置入分離用培養(yǎng)基中進行分離培養(yǎng)，分離用培養(yǎng)基為馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基，得產生胞內分泌型脂肪酶的酵母——Candida lipolytica解脂假絲酵母；其中馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基為將200g馬鈴薯切成小塊并熬成汁，將馬鈴薯汁與20g蔗糖溶于1L水中，并加入20g瓊脂，121℃高溫滅菌15min，得馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基；(2)發(fā)酵用培養(yǎng)基大豆油29.0g/L，蔗糖1.0g/L，蛋白胨70.0g/L，NaNO31.0g/L，KH2PO41.0g/L，MgSO4·7H2O 0.5g/L，121℃滅菌20分鐘；2).發(fā)酵培養(yǎng)無菌容器中裝入占體積1/3的發(fā)酵用培養(yǎng)基，接種產生胞內分泌型脂肪酶的酵母菌種；置28℃，150r/min，培養(yǎng)72小時，得發(fā)酵后的液體；3).收集菌體將發(fā)酵后的液體4700r/min離心10分鐘，收集菌體，得酵母菌體。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種具有脂肪酶活性的全細胞催化劑及其制備方法。胞內分泌脂肪酶型全細胞催化劑，其特征在于它主要由酵母菌體、硅藻土、海藻酸鈉、二氯化鈣和pH值為7.7的Na
文檔編號C12N11/00GK1944629SQ20061012485
公開日2007年4月11日 申請日期2006年10月26日 優(yōu)先權日2006年10月26日
發(fā)明者江木蘭, 胡小加, 晏立英, 張銀波 申請人:中國農業(yè)科學院油料作物研究所