專(zhuān)利名稱(chēng)：一種微生物不對(duì)稱(chēng)拆分制備(r)－扁桃酸的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
一種微生物不對(duì)稱(chēng)拆分制備(R)-扁桃酸的方法，屬于生物法拆分外消旋化合物技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
外消旋扁桃酸(又稱(chēng)為α-羥基苯乙酸，英文名Mandelic acid)，是由(R)-扁桃酸和(S)-扁桃酸兩個(gè)對(duì)映體構(gòu)成，其中(R)-扁桃酸是一種重要的手性中間體，被廣泛應(yīng)用于多種藥物的合成，如被用于合成青霉素和頭孢菌素等抗生素、減肥藥物、抗腫瘤藥物、治療抑郁癥藥物和農(nóng)藥等；并可作為手性試劑，用于拆分其它手性化合物。
手性化合物在人們生活中具有重要作用，由于兩個(gè)對(duì)映體在藥理、毒理及功能作用等各方面均有所不同，因此，制備光學(xué)純的手性模塊化合物在醫(yī)藥、農(nóng)業(yè)、材料和環(huán)保等領(lǐng)域都具有廣泛的價(jià)值。
扁桃酸的化學(xué)結(jié)構(gòu)為 傳統(tǒng)的化學(xué)工業(yè)拆分法，主要是利用旋光性胺類(lèi)化合物，如α-甲基芐胺、(-)-麻黃堿和辛可寧等，通過(guò)非對(duì)映(立體)異構(gòu)鹽形成法，得到單一對(duì)映體，由于反應(yīng)中所添加的手性拆分劑價(jià)格昂貴且均具有毒性，會(huì)對(duì)環(huán)境造成危害，因此利用生物法轉(zhuǎn)化光學(xué)純扁桃酸就成為研究的熱點(diǎn)。
目前，國(guó)際上拆分外消旋化合物常見(jiàn)方法主要包括色譜法、化學(xué)法和生物法等。
其中，制備手性色譜柱進(jìn)行拆分法，被分離樣品可變范圍窄，需昂貴的手性添加劑，因此僅限于檢測(cè)及實(shí)驗(yàn)室制備；化學(xué)法收率低、光學(xué)純度低、生產(chǎn)工序繁雜、能耗大、環(huán)境污染嚴(yán)重、毒性大、成本高；利用生物法轉(zhuǎn)化制備光學(xué)純的手性化合物具有反應(yīng)條件溫和，產(chǎn)物單一，立體選擇性、區(qū)域選擇性和化學(xué)選擇性較高，并能完成一些化學(xué)合成難以進(jìn)行的反應(yīng)等優(yōu)點(diǎn)。合成光學(xué)活性物質(zhì)的生物轉(zhuǎn)化反應(yīng)大致可分為兩類(lèi)一類(lèi)是把外消旋體拆分為兩個(gè)具有光學(xué)活性的對(duì)映體；另一類(lèi)是從非手性或潛手性的前體出發(fā)，通過(guò)催化反應(yīng)得到不對(duì)稱(chēng)的光學(xué)活性產(chǎn)物。
90年代起國(guó)際上對(duì)微生物及酶拆分手性化合物進(jìn)行大量的研究。酶由L-氨基酸構(gòu)成，其活性中心構(gòu)成了一個(gè)不對(duì)稱(chēng)環(huán)境，有利于對(duì)消旋體的識(shí)別，是一種高度手性的催化劑。其催化效率高，有較強(qiáng)的專(zhuān)一性。酶促拆分消旋體是比較理想的選擇。利用完整細(xì)胞對(duì)外消旋化合物進(jìn)行轉(zhuǎn)化，可以獲得光學(xué)純對(duì)映體，在非水相及有機(jī)—水雙相反應(yīng)體系中，也可酶促轉(zhuǎn)化制備光學(xué)純化合物。
目前國(guó)際上已報(bào)道的制備(R)-扁桃酸的生物方法主要有Yadav等利用脂肪酶在非水相中不對(duì)稱(chēng)水解扁桃酸甲酯制備(R)-扁桃酸，但水解率達(dá)到19％時(shí)，光學(xué)純度僅為78％。
Kaul等利用腈水解酶不對(duì)稱(chēng)水解扁桃腈制備(R)-扁桃酸，但產(chǎn)率最高只能達(dá)到50％，且產(chǎn)物與底物較難分離。
0da等以1，2-苯乙二醇為底物，通過(guò)不對(duì)稱(chēng)氧化β-羥基而得到(R)-扁桃酸，但得率僅為40％，且副產(chǎn)物較多，且較難分離。
Yamazaki等利用苯乙酮酸脫氫酶催化不對(duì)稱(chēng)還原，但反應(yīng)需在體系中加入輔酶(NADH)。

發(fā)明內(nèi)容
(1)要解決的技術(shù)問(wèn)題本發(fā)明的目的是提供一種微生物不對(duì)稱(chēng)拆分制備(R)-扁桃酸的方法，提高產(chǎn)品(R)-扁桃酸的光學(xué)純度和產(chǎn)率。
(2)技術(shù)方案本發(fā)明首先從微生物出發(fā)，篩選能夠高效轉(zhuǎn)化外消旋扁桃酸的菌種。在此基礎(chǔ)上，對(duì)該菌種的培養(yǎng)條件和不對(duì)稱(chēng)拆分轉(zhuǎn)化的反應(yīng)條件進(jìn)行優(yōu)化，以及轉(zhuǎn)化方式和添加誘導(dǎo)劑的作用。
設(shè)計(jì)該轉(zhuǎn)化方法的途徑如下 主要試劑外消旋扁桃酸購(gòu)于國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司(R)-扁桃酸，(S)-扁桃酸，(R，S)-扁桃酸 購(gòu)于美國(guó)Fluka公司(R)-扁桃酸和(S)-扁桃酸分析方法的確定(R)-扁桃酸、(S)-扁桃酸、(R，S)-扁桃酸標(biāo)樣在Chiralcel OD-H柱上通過(guò)手性固定相高效液相色譜(CSPHPLC)進(jìn)行分析，(S)-扁桃酸的保留時(shí)間為15.9min，(R)-扁桃酸的保留時(shí)間為19.6min。所用高效液相色譜儀為HP1100，紫外檢測(cè)器，手性柱Chiralcel OD-H(250×4.6mm)購(gòu)于日本Daicel Chemical Ind.，Ltd.
確定具體色譜條件為手性柱Chiralcel OD-H柱(4.6×250mm)，流動(dòng)相體積比為正己烷∶異丙醇∶三氟乙酸＝90∶10∶0.1，流速為0.5mL/min，柱溫18℃，柱壓常壓；檢測(cè)波長(zhǎng)UV 225nm，進(jìn)樣量5μl。
產(chǎn)物(R)-扁桃酸的光學(xué)純度通過(guò)對(duì)映體過(guò)量值(％e.e.)來(lái)評(píng)價(jià)對(duì)映體過(guò)量值(％e.e.)＝[(SS-SR)/(SS+SR)]×100％(R)-扁桃酸得率(％)＝(SR/S0)×100％式中SS為反應(yīng)后(S)-對(duì)映體的峰面積，SR為反應(yīng)后(R)-對(duì)映體的峰面積，S0為反應(yīng)前(S)-和(R)-對(duì)映體的峰面積之和。
一、微生物的確定經(jīng)過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)室保藏的包括細(xì)菌、酵母和霉菌等大量微生物進(jìn)行篩選，從所得轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的光學(xué)純度和產(chǎn)率兩個(gè)方面考慮，選定一株菌種為催化轉(zhuǎn)化反應(yīng)用的出發(fā)菌株黃色短桿菌(Brevibacterium flavum)AS 1.818，產(chǎn)物(R)-扁桃酸，光學(xué)純度為90～100％e.e.，產(chǎn)率35～50％。
二、菌株的培養(yǎng)和產(chǎn)酶條件優(yōu)化培養(yǎng)基成分優(yōu)化分別考察了碳源、氮源、磷源對(duì)轉(zhuǎn)化及菌體量的影響，并經(jīng)過(guò)正交實(shí)驗(yàn)最終確定出發(fā)菌株黃色短桿菌B.flavum AS 1.818培養(yǎng)基組成為(g/100ml)葡萄糖0.25～1.0，肉膏0.5～2.0，蛋白胨0.5～2.0，酵母膏0.1～0.5，(NH4)2HPO40.5～1.0，KH2PO40.25～0.5，MgSO4·7H2O 0.025～0.1，NaCl 0.001～0.005，ZnSO4·7H2O0.001～0.005，F(xiàn)eSO4·7H2O 0.001～0.005，CuSO4·5H2O 0.0001～0.0005，MnSO4·4H2O 0.0001～0.0005。
培養(yǎng)條件優(yōu)化分別考察了起始pH、裝液量、溫度、培養(yǎng)時(shí)間對(duì)轉(zhuǎn)化及菌體量的影響。
最終確定了出發(fā)菌株B.flavum AS 1.818培養(yǎng)條件為起始pH6.0～8.0，裝液量體積分?jǐn)?shù)為5％～30％，培養(yǎng)溫度25～35℃，搖瓶轉(zhuǎn)速100～300rpm，培養(yǎng)時(shí)間24～72小時(shí)。
優(yōu)化后，B.flavum AS 1.818轉(zhuǎn)化產(chǎn)物(R)-扁桃酸的光學(xué)純度為94～100％e.e.。
三、全細(xì)胞催化轉(zhuǎn)化反應(yīng)體系及反應(yīng)條件的優(yōu)化菌種的培養(yǎng)及轉(zhuǎn)化用細(xì)胞的制備B.flavum AS 1.818接種在裝液量體積分?jǐn)?shù)為5～30％的250ml搖瓶中于25～35℃、100～300rpm振蕩培養(yǎng)24～72小時(shí)。培養(yǎng)結(jié)束后，將發(fā)酵液中的菌體離心并用生理鹽水洗滌兩次，將收集的細(xì)胞保藏在4℃冰箱中用于拆分反應(yīng)。
微生物細(xì)胞的催化轉(zhuǎn)化反應(yīng)催化轉(zhuǎn)化反應(yīng)在0.2mol/L的磷酸鉀緩沖溶液中進(jìn)行，菌體細(xì)胞溶于其中，細(xì)胞的重量/體積濃度為5％～20％，底物外消旋扁桃酸的重量/體積濃度為0.5％～5％，反應(yīng)體系pH值6.0～8.0，反應(yīng)溫度25～40℃，100～300rpm振蕩反應(yīng)，反應(yīng)時(shí)間24～72小時(shí)。
通過(guò)對(duì)轉(zhuǎn)化過(guò)程的考察發(fā)現(xiàn)，B.flavum AS 1.818優(yōu)先將(S)-扁桃酸降解，而(R)-扁桃酸基本保持不變，直至(S)-扁桃酸降解完全后，(R)-扁桃酸含量才開(kāi)始下降，轉(zhuǎn)化后期并無(wú)明顯的副產(chǎn)物積累。因此，反應(yīng)后(R)-扁桃酸產(chǎn)率不大于50％。
考察了不同轉(zhuǎn)化方式的轉(zhuǎn)化結(jié)果在培養(yǎng)6～24小時(shí)的發(fā)酵液中，直接加入外消旋扁桃酸0.5～2g/100mL，調(diào)節(jié)pH6.0～8.0，繼續(xù)培養(yǎng)24～120小時(shí)，轉(zhuǎn)化產(chǎn)物(R)-扁桃酸的光學(xué)純度為90～100％e.e.，收率40～50％。
或以0.5～2g/100mL的外消旋扁桃酸代替葡萄糖作為唯一碳源，其它培養(yǎng)基成分不變，培養(yǎng)24～144小時(shí)，轉(zhuǎn)化產(chǎn)物(R)-扁桃酸的光學(xué)純度為90～100％e.e.，收率40～50％。
考察了在培養(yǎng)基中添加結(jié)構(gòu)類(lèi)似物對(duì)轉(zhuǎn)化的影響在培養(yǎng)基添加0.05～1g/100mL的扁桃酸結(jié)構(gòu)類(lèi)似物，如扁桃酸、乳酸、檸檬酸、蘋(píng)果酸、酒石酸、乙醇酸、苯乙酮酸等等，發(fā)現(xiàn)添加這些誘導(dǎo)物后得到的菌體轉(zhuǎn)化效率顯著提高，最終轉(zhuǎn)化產(chǎn)物(R)-扁桃酸的光學(xué)純度為90～100％e.e.，收率40～50％。
考察了在轉(zhuǎn)化體系中添加金屬離子對(duì)轉(zhuǎn)化的影響添加0.5～5mmol/L的各種金屬離子，發(fā)現(xiàn)Mg，Mn，F(xiàn)e，Ca，Cu等離子的存在有助于提高轉(zhuǎn)化效率，而其它離子作用不明顯或有抑制作用，最終轉(zhuǎn)化產(chǎn)物(R)-扁桃酸的光學(xué)純度為90～100％e.e.，收率40～50％。
生物材料樣品的來(lái)源所用菌種黃色短桿菌B.flavum AS 1.818來(lái)源于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(CGMCC)。
(3)有益效果本發(fā)明通過(guò)篩選得到一株轉(zhuǎn)化效果較好的菌株黃色短桿菌(Brevibacteriumflavum)AS 1.818。
用該菌株進(jìn)行不對(duì)稱(chēng)轉(zhuǎn)化外消旋扁桃酸得到產(chǎn)物(R)-扁桃酸，光學(xué)純度均為90％e.e.以上。
經(jīng)培養(yǎng)基組成和培養(yǎng)條件優(yōu)化后，所用菌株不對(duì)稱(chēng)轉(zhuǎn)化外消旋扁桃酸，產(chǎn)物(R)-扁桃酸光學(xué)純度有所提高，確定了優(yōu)化的培養(yǎng)基組成和培養(yǎng)條件。
確定了該菌全細(xì)胞不對(duì)稱(chēng)轉(zhuǎn)化外消旋扁桃酸的反應(yīng)體系及反應(yīng)條件。
研究了該菌轉(zhuǎn)化過(guò)程、轉(zhuǎn)化方式、在培養(yǎng)基中添加誘導(dǎo)物和轉(zhuǎn)化體系中添加金屬離子的因素對(duì)轉(zhuǎn)化的影響，確定了外在因素的作用。
這些工作有助于了解外消旋化合物拆分的生物多樣性，對(duì)于今后拆分專(zhuān)用酶源的開(kāi)發(fā)和拆分方法的研究具有較為重要的意義。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1菌株的培養(yǎng)培養(yǎng)基組成為每100ml培養(yǎng)液所含組分以g計(jì)葡萄糖0.25～1.0，肉膏0.5～2.0，蛋白胨0.5～2.0，酵母膏0.1～0.5，(Nh4)2HPO40.5～1.0，KH2PO40.25～0.5，MgSO4·7H2O 0.025～0.1，NaCl 0.001～0.005，ZnSO4·7H2O0.001～0.005，F(xiàn)eSO4·7H2O 0.001～0.005，CuSO4·5H2O 0.0001～0.0005，MnSO4·4H2O 0.0001～0.0005。
培養(yǎng)條件為起始pH6.0～8.0，裝液量20％，培養(yǎng)溫度30℃，搖瓶轉(zhuǎn)速100～300rpm，培養(yǎng)時(shí)間48小時(shí)。
實(shí)施例2全細(xì)胞的制備B.flavum AS 1.818接種在裝液量為20％的250ml搖瓶中于30℃、100～300rpm振蕩培養(yǎng)48小時(shí)；培養(yǎng)結(jié)束后將發(fā)酵液中的菌體離心并用生理鹽水洗滌兩次，將收集的細(xì)胞保藏在4℃冰箱中用于拆分反應(yīng)。
實(shí)施例3微生物法不對(duì)稱(chēng)拆分制備(R)-扁桃酸在含10mg外消旋扁桃酸的0.2mol/L、pH7.0的2mL磷酸鉀緩沖液中，加入0.1g(即重量體積比5％)B.flavumAS 1.818菌體細(xì)胞，25℃，150轉(zhuǎn)/分，轉(zhuǎn)化72h，離心轉(zhuǎn)化液，收集上清，用3mol/L鹽酸調(diào)節(jié)pH至1.0，再用2.5倍體積的乙酸乙酯萃取，分離出的乙酸乙酯層用無(wú)水硫酸鈉除水，低溫真空干燥，將殘余固體用正己烷和異丙醇的混合液(體積比為9∶1)溶解，產(chǎn)物(R)-扁桃酸光學(xué)純度90.83％e.e，產(chǎn)率38.63％。
實(shí)施例4稱(chēng)取0.2g(10％)黃色短桿菌B.flavum AS 1.818菌體細(xì)胞，置于含20mg外消旋扁桃酸的0.2mol/L、pH7.5的2mL磷酸鉀緩沖液中，35℃，150轉(zhuǎn)/分，轉(zhuǎn)化36h，離心轉(zhuǎn)化液，收集上清，用3mol/L鹽酸調(diào)節(jié)pH至1.0，再用2.5倍體積的乙酸乙酯萃取，分離出的乙酸乙酯層用無(wú)水硫酸鈉除水，低溫真空干燥，將殘余固體用正己烷和異丙醇的混合液(體積比為9∶1)溶解，產(chǎn)物(R)-扁桃酸光學(xué)純度95.11％e.e，產(chǎn)率48.7％。
實(shí)施例5稱(chēng)取0.4g(20％)黃色短桿菌B.flavum AS 1.818菌體細(xì)胞，置于含100mg外消旋扁桃酸的0.2mol/L、pH7.0的2mL磷酸鉀緩沖液中，40℃，150轉(zhuǎn)/分，轉(zhuǎn)化48h，離心轉(zhuǎn)化液，收集上清，用3mol/L鹽酸調(diào)節(jié)pH至1.0，再用2.5倍體積的乙酸乙酯萃取，分離出的乙酸乙酯層用無(wú)水硫酸鈉除水，低溫真空干燥，將殘余固體用正己烷和異丙醇的混合液(體積比為9∶1)溶解，產(chǎn)物(R)-扁桃酸光學(xué)純度96.57％e.e，產(chǎn)率40.61％。
實(shí)施例6接種黃色短桿菌B.flavum AS 1.818至以0.5％外消旋扁桃酸為唯一碳源的培養(yǎng)基中(除不加葡萄糖外，如實(shí)施例1)，裝液量20％，250mL三角瓶，30℃，150轉(zhuǎn)/分培養(yǎng)96小時(shí)后，取樣離心，收集上清，用3mol/L鹽酸調(diào)節(jié)pH至1.0，再用2.5倍體積的乙酸乙酯萃取，分離出的乙酸乙酯層用無(wú)水硫酸鈉除水，低溫真空干燥，將殘余固體用正己烷和異丙醇的混合液(體積比為9∶1)溶解，產(chǎn)物(R)-扁桃酸光學(xué)純度91.71％e.e，產(chǎn)率44.56％。
實(shí)施例7在如實(shí)施例1的培養(yǎng)條件下，黃色短桿菌B.flavum AS 1.818接種培養(yǎng)24小時(shí)后，往發(fā)酵液中添加0.5％(W/V)外消旋扁桃酸，調(diào)節(jié)pH不變，繼續(xù)培養(yǎng)60小時(shí)，取樣離心，收集上清，用3mol/L鹽酸調(diào)節(jié)pH至1.0，再用2.5倍體積的乙酸乙酯萃取，分離出的乙酸乙酯層用無(wú)水硫酸鈉除水，低溫真空干燥，將殘余固體用正己烷和異丙醇的混合液(體積比為9∶1)溶解，產(chǎn)物(R)-扁桃酸光學(xué)純度94.51％e.e，產(chǎn)率42.72％。
實(shí)施例8在如實(shí)施例1的培養(yǎng)基中加入0.3g/100mL乙醇酸，按實(shí)施例2制備菌體細(xì)胞，按實(shí)施例4轉(zhuǎn)化，產(chǎn)物(R)-扁桃酸光學(xué)純度96.16％e.e，產(chǎn)率48.56％。
除乙醇酸外，還可以用說(shuō)明書(shū)例舉的其他誘導(dǎo)劑進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)，具有相似結(jié)果。
實(shí)施例9稱(chēng)取0.2g(10％)黃色短桿菌B.flavum AS 1.818菌體細(xì)胞，置于含10mg外消旋扁桃酸的0.2mol/L、pH7.5的2mL磷酸鉀緩沖液中，并加入2mmol/LCuCl2，30℃，150轉(zhuǎn)/分，轉(zhuǎn)化6h，與同樣條件下不加金屬離子的對(duì)照相比，轉(zhuǎn)化活力提高了60％。
除銅離子外，還可以用說(shuō)明書(shū)例舉的其他具有促進(jìn)作用的金屬離子來(lái)提高轉(zhuǎn)化活力，具有相似結(jié)果。
權(quán)利要求
1.一種微生物不對(duì)稱(chēng)拆分制備光學(xué)純(R)-扁桃酸的方法，其特征是出發(fā)菌株采用黃色短桿菌(Brevibacterium flavum)AS 1.818，經(jīng)過(guò)菌株的培養(yǎng)，全細(xì)胞的制備，以外消旋扁桃酸為底物，進(jìn)行微生物細(xì)胞的催化轉(zhuǎn)化反應(yīng)催化轉(zhuǎn)化反應(yīng)在0.2mol/L的磷酸鉀緩沖溶液中進(jìn)行，菌體細(xì)胞溶于其中，細(xì)胞的重量/體積濃度為5％～20％，底物外消旋扁桃酸的重量/體積濃度為0.5％～5％，反應(yīng)體系pH值6.0～8.0，反應(yīng)溫度25～40℃，100～300rpm振蕩反應(yīng)，反應(yīng)時(shí)間24～72小時(shí)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是菌株的培養(yǎng)培養(yǎng)基組成為每100ml培養(yǎng)液所含組分以g計(jì)葡萄糖0.25～1.0，肉膏0.5～2.0，蛋白胨0.5～2.0，酵母膏0.1～0.5，(NH4)2HPO40.5～1.0，KH2PO40.25～0.5，MgSO4·7H2O 0.025～0.1，NaCl 0.001～0.005，ZnSO4·7H2O 0.001～0.005，F(xiàn)eSO4·7H2O 0.001～0.005，CuSO4·5H2O 0.0001～0.0005，MnSO4·4H2O0.0001～0.0005；培養(yǎng)條件為起始pH6.0～8.0，裝液量體積分?jǐn)?shù)為5％～30％，培養(yǎng)溫度25～35℃，搖瓶轉(zhuǎn)速100～300rpm，培養(yǎng)時(shí)間24～72小時(shí)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征為菌株的培養(yǎng)培養(yǎng)基組成中以0.5～2g/100mL的外消旋扁桃酸為唯一碳源，以代替葡萄糖，培養(yǎng)24～144小時(shí)，直接制備(R)-扁桃酸；或按權(quán)利要求2所述的培養(yǎng)基組成和培養(yǎng)條件進(jìn)行培養(yǎng)6～24小時(shí)后，向發(fā)酵液中添加0.5～2g/100mL的外消旋扁桃酸，繼續(xù)培養(yǎng)24～120小時(shí)，直接制備(R)-扁桃酸。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是菌株的培養(yǎng)，在菌株的培養(yǎng)基中添加0.05～1g/100mL的扁桃酸結(jié)構(gòu)類(lèi)似物扁桃酸、乳酸、檸檬酸、蘋(píng)果酸、酒石酸、乙醇酸或苯乙酮酸來(lái)進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是全細(xì)胞的制備黃色短桿菌(Brevibacterium favum)AS 1.818接種在裝液量體積分?jǐn)?shù)為5％～30％的250ml搖瓶中于25～35℃、100～300rpm振蕩培養(yǎng)24～72小時(shí)；培養(yǎng)結(jié)束后將發(fā)酵液中的菌體離心并用生理鹽水洗滌兩次，將收集的細(xì)胞保藏在4℃冰箱中用于拆分反應(yīng)。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是在轉(zhuǎn)化體系中添加0.5～5mmol/L的Mg，Mn，F(xiàn)e，Ca或Cu金屬離子能提高轉(zhuǎn)化效率。
全文摘要
一種微生物不對(duì)稱(chēng)拆分制備(R)－扁桃酸的方法，屬于生物法拆分外消旋化合物技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明篩選得到黃色短桿菌(Brevibacterium flavum)AS 1.818，利用該菌株經(jīng)過(guò)培養(yǎng)，全細(xì)胞制備，以外消旋扁桃酸為底物進(jìn)行微生物細(xì)胞的催化轉(zhuǎn)化反應(yīng)，不對(duì)稱(chēng)轉(zhuǎn)化外消旋扁桃酸得到產(chǎn)物(R)－扁桃酸，產(chǎn)物的光學(xué)純度達(dá)到90％e.e.以上。本發(fā)明確定了該菌株全細(xì)胞不對(duì)稱(chēng)轉(zhuǎn)化外消旋扁桃酸的反應(yīng)體系和反應(yīng)條件，其產(chǎn)物的光學(xué)純度得到提高；本發(fā)明還有助于了解外消旋化合物拆分的生物多樣性，對(duì)于今后拆分專(zhuān)用酶源的開(kāi)發(fā)和拆分方法的研究具有較為重要的意義。
文檔編號(hào)C12N1/20GK1840671SQ20061003794
公開(kāi)日2006年10月4日 申請(qǐng)日期2006年1月18日 優(yōu)先權(quán)日2006年1月18日
發(fā)明者徐巖, 張輝 申請(qǐng)人:江南大學(xué)