專利名稱：干細(xì)胞分泌因子及其制備方法與應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種干細(xì)胞分泌因子及其制備方法和在化妝品、保健品以及再生醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
干細(xì)胞分泌因子取自人胚胎干細(xì)胞以及多種胚胎組織分離純化獲得的成體干細(xì)胞(包括造血干細(xì)胞、神經(jīng)干細(xì)胞、肝臟干細(xì)胞、皮膚干細(xì)胞、肌肉干細(xì)胞等等)，經(jīng)數(shù)十代至上百代的培養(yǎng)傳代而建成不同的干細(xì)胞系，或經(jīng)基因修飾(包括Hoxb-4、端粒酶活性亞單位等)而建立的干細(xì)胞來源的永生細(xì)胞系，在干細(xì)胞增殖分化過程中會(huì)分泌出多種生長因子、蛋白質(zhì)、活性多肽、微量元素等促進(jìn)細(xì)胞生長、活化、再生等的物質(zhì)。
干細(xì)胞分泌因子中含有各種生理作用極強(qiáng)的生長因子，其作用備受矚目。生長因子是指“細(xì)胞分裂活化因子”，能夠促進(jìn)細(xì)胞增殖、分化，防止細(xì)胞衰老。結(jié)果，新陳代謝旺盛，老舊細(xì)胞不斷被新細(xì)胞替換，同時(shí)使細(xì)胞活化。將此類干細(xì)胞分泌因子應(yīng)用于化妝品、保健品及再生醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的研究未見報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是1、提供一種促進(jìn)細(xì)胞增殖分化、抗衰老的物質(zhì)干細(xì)胞分泌因子；2、提供干細(xì)胞分泌因子的制備方法；3、提供干細(xì)胞分泌因子的用途。
本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的
干細(xì)胞米源的永生細(xì)胞系或經(jīng)數(shù)十代至上百代的培養(yǎng)傳代而建成的成體干細(xì)胞系，在干細(xì)胞增殖分化過程中分泌了大量的干細(xì)胞分泌因子，這是—種包含了生長因子、蛋白質(zhì)、活性多肽、微量元素等多種促進(jìn)細(xì)胞生長、活化與再生的物質(zhì)。經(jīng)過包括分離、純化等現(xiàn)代生物技術(shù)的精密加工制成的精制干細(xì)胞分泌因子，能夠促進(jìn)細(xì)胞增殖、分化，防止細(xì)胞衰老。
將干細(xì)胞分泌因子以10～100μg/ml的比例加入到化妝品中可增強(qiáng)皮膚細(xì)胞的活力，對健康的皮膚具有抗衰老，增強(qiáng)皮膚彈性的功能，對損傷的皮膚能自動(dòng)地進(jìn)行護(hù)理、調(diào)養(yǎng)與修復(fù)，使皮膚變得更柔嫩、更富有彈性；同時(shí)由于干細(xì)胞分泌因子含有多種細(xì)胞因子，能夠促進(jìn)細(xì)胞的新陳代謝，是一種新的維持干/祖細(xì)胞增殖與分化的細(xì)胞因子來源。因而精制的干細(xì)胞分泌因子能夠促進(jìn)細(xì)胞的新陳代謝、增強(qiáng)機(jī)體免疫力以及抵抗細(xì)胞的衰老，在化妝品、保健品以及再生醫(yī)學(xué)中具有極佳的應(yīng)用前景，并將產(chǎn)生巨大的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1、成體干細(xì)胞系的建立首先分離從多種胚胎組織來源的成體干細(xì)胞，經(jīng)純化后在體外無血清條件下傳代20～40代培養(yǎng)，建立包括造血干細(xì)胞、神經(jīng)干細(xì)胞、肝臟干細(xì)胞、皮膚干細(xì)胞、肌肉干細(xì)胞等成體干細(xì)胞系。或采用基因修飾手段，將Hoxb-4基因、端粒酶活性亞單位等轉(zhuǎn)入成體干細(xì)胞，建立干細(xì)胞來源的永生細(xì)胞系。
細(xì)胞要求生長狀態(tài)良好，每3～4天傳代一次，無細(xì)菌、支原體等污染；傳代細(xì)胞需經(jīng)細(xì)胞遺傳學(xué)、克隆形成實(shí)驗(yàn)、裸鼠致瘤實(shí)驗(yàn)等的檢測，證實(shí)其為正常生長狀態(tài)的細(xì)胞。
實(shí)施例2、干細(xì)胞分泌因子的獲得與純化在成體干細(xì)胞系或干細(xì)胞來源的永生細(xì)胞系培養(yǎng)過程中，干細(xì)胞的增殖、分化過程會(huì)分泌出許多生長因子、蛋白質(zhì)、活性多肽、微量元素等等促進(jìn)細(xì)胞生長、活化、再生的物質(zhì)，通過分離、純化等分子生物學(xué)手段，可獲得精制的干細(xì)胞分泌因子。
干細(xì)胞分泌因子主要包括肝細(xì)胞生長因子(HGF)、神經(jīng)生長因子(NGF)、表皮生長因子(EGF)、纖維母細(xì)胞生長因子(FGF)、胰島素樣成長因子(IGF)、造血干細(xì)胞剌激物質(zhì)等。此外，干細(xì)胞分泌因子中還含有提高免疫力的因子，如各種集落刺激因子(CSFs)、多種白介素(IL-1、2、3、4、11、等)。
實(shí)施例3、干細(xì)胞分泌因子生物活性測定將人干細(xì)胞分泌因子注射劑按120μg/孔/天加入小鼠骨髓細(xì)胞中37℃培養(yǎng)，第2天計(jì)細(xì)胞數(shù)，并鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化，與對照組相比給干細(xì)胞分泌因子組能夠促進(jìn)細(xì)胞的貼壁并刺激小鼠骨髓細(xì)胞的增殖。
實(shí)施例4、干細(xì)胞分泌因子在化妝品中的應(yīng)用將干細(xì)胞分泌因子以10～100μg/ml的比例加入到化妝品的配方中，均質(zhì)處理后制成化妝品。含有干細(xì)胞分泌因子的化妝品具有抗衰老，增強(qiáng)皮膚彈性的功能，對損傷的皮膚能自動(dòng)地進(jìn)行護(hù)理、調(diào)養(yǎng)與修復(fù)，使皮膚變得更柔嫩、更富有彈性。
實(shí)施例5、干細(xì)胞分泌因子在保健品中的應(yīng)用將干細(xì)胞分泌因子與部分食品結(jié)合，可制成保健品。含有二者的保健品具有抗衰老、增強(qiáng)機(jī)體免疫力、促進(jìn)損傷或衰老組織再生以及改善組織器官功能的作用。
實(shí)施例6、干細(xì)胞分泌因子在再生醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用將干細(xì)胞分泌因子以10～200μg/ml的比例加入體外干/祖細(xì)胞培養(yǎng)體系中，發(fā)揮其促進(jìn)細(xì)胞增殖與分化的功能。
權(quán)利要求
1.一種干細(xì)胞分泌因子及其制備方法與應(yīng)用，其特征是干細(xì)胞來源的永生細(xì)胞系在干細(xì)胞增殖分化過程中分泌的，包含了生長因子、蛋白質(zhì)、活性多肽、微量元素等多種促進(jìn)細(xì)胞生長、活化、再生等的物質(zhì)，其制備方法為干細(xì)胞來源的永生細(xì)胞系→增殖分化→培養(yǎng)上清→各種分泌物的分離，其用途為制造化妝品、保健品和應(yīng)用于再生醫(yī)學(xué)中。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的干細(xì)胞來源的永生細(xì)胞系，其特征是取自人胚胎干細(xì)胞以及多種胚胎組織分離純化獲得的成體干細(xì)胞，經(jīng)數(shù)十代至上百代的培養(yǎng)傳代或經(jīng)基因修飾而建立的不同的干細(xì)胞系。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的成體干細(xì)胞，其特征是包含了造血干細(xì)胞、神經(jīng)干細(xì)胞、肝臟干細(xì)胞、皮膚干細(xì)胞、肌肉干細(xì)胞等等在內(nèi)的組織干細(xì)胞。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的經(jīng)基因修飾的干細(xì)胞來源的永生細(xì)胞系，其特征是經(jīng)過包括Hoxb-4、端粒酶活性亞單位等在內(nèi)的基因修飾而建立的干細(xì)胞系。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的干細(xì)胞分泌因子的制備方法，其特征是對干細(xì)胞來源的永生細(xì)胞系在增殖分化過程中分泌的各種活性物質(zhì)，應(yīng)用分子生物學(xué)的各種手段將其精密加工而得。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的干細(xì)胞分泌因子的化妝品用途，其特征是干細(xì)胞分泌因子以1∶50～1∶100的比例配入化妝品中，均質(zhì)處理后，制成化妝品。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的干細(xì)胞分泌因子的保健品用途，其特征是制備抗衰老、增強(qiáng)機(jī)體免疫力、促進(jìn)損傷或衰老組織再生以及改善組織器官功能的保健品。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的干細(xì)胞分泌因子的再生醫(yī)學(xué)用途，其特征是應(yīng)用干細(xì)胞分泌因子中促進(jìn)細(xì)胞新陳代謝以及增殖分化的因子，并將其引入到再生醫(yī)學(xué)的應(yīng)用中。
全文摘要
本發(fā)明提供了干細(xì)胞分泌因子及其制備方法和在化妝品、保健品及再生醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用。干細(xì)胞分泌因子，是一種干細(xì)胞來源的永生細(xì)胞系在干細(xì)胞增殖分化過程中所分泌的，包含了生長因子、蛋白質(zhì)、活性多肽、微量元素等多種促進(jìn)細(xì)胞生長、活化、再生等的物質(zhì)，經(jīng)過多步現(xiàn)代生物技術(shù)的精密加工而制成，能夠促進(jìn)細(xì)胞增殖、分化，防止細(xì)胞衰老。精制的干細(xì)胞分泌因子在化妝品、保健品以及再生醫(yī)學(xué)中具有極佳的應(yīng)用前景，并將產(chǎn)生巨大的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益。
文檔編號A23L1/305GK1618981SQ20031011501
公開日2005年5月25日 申請日期2003年11月20日 優(yōu)先權(quán)日2003年11月20日
發(fā)明者裴雪濤, 閆舫, 王冬梅, 陳琳, 王韞芳, 岳 文, 白慈賢 申請人:中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院野戰(zhàn)輸血研究所