專利名稱：一種葛仙米藻種的制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及微型藻類，更具體涉及葛仙米藻種的制備方法。
背景技術：
念珠藻是屬于藍藻門Cyanophyta藍藻綱Cyanophyceae段殖藻目Hormogonales念珠藻科Nostocaceae的一類分布地域廣、生態(tài)環(huán)境復雜、形態(tài)結構多樣的藻類類群，其植物體膠狀或革狀，成熟植物體有球形、葉狀、絲狀、泡狀等多種形狀，中空或實心，營漂浮或著生生長。其原植體由許多直徑數(shù)微米的纖細藻絲集結成群體，群體形狀因“種”而異，如發(fā)菜(Nostoc flageliformeKütz.)、地木耳(Nostoc commune)、葛仙米(Nostoc sphaeroides)在新鮮狀態(tài)下分別呈頭發(fā)狀、扁平耳狀或小球狀，干燥后程度不等地有所縮變，均具有豐富的營養(yǎng)價值，在《本草綱目》、《本草綱目拾遺》、《陜西中草藥》、《梧州府志》、《全國中草藥匯編》等醫(yī)書中已有記載。念珠藻不僅在自然界普遍發(fā)生，而且自古以來都是我國民間的傳統(tǒng)食物；其中葛仙米，學名擬球狀念珠藻，具有食療、保健、滋補等功效，營養(yǎng)價值高，是典型的高蛋白、低脂肪、低熱值的綠色保健食品；同時又具有藥性，常食用能清熱解毒，涼血明目，促進新陳代謝；葛仙米的天然生產(chǎn)狀況已經(jīng)衰落，需求和生產(chǎn)產(chǎn)量的矛盾不可回避。隨著人類活動的加劇、旅游業(yè)的發(fā)展、以及過度的采集給生態(tài)和環(huán)境造成的破壞，使得自然資源日趨萎縮，葛仙米的現(xiàn)天然年產(chǎn)量不足一噸，由于其生長地逐漸縮小，產(chǎn)量在日趨減少。葛仙米在國內(nèi)外市場很受歡迎，而現(xiàn)有的產(chǎn)量遠遠滿足不了需求，有必要人工養(yǎng)殖葛仙米，以提高其產(chǎn)量，滿足人們物質(zhì)生活水平提高的需求。
中國專利文獻一種培養(yǎng)葛仙米的方法，申請?zhí)?9120005.5。該發(fā)明是一種培養(yǎng)葛仙米的方法，具體藻種制備中采用的方法是用氨芐青霉素除菌，然后純培養(yǎng)并誘導藻殖段，最后對藻殖段進行培養(yǎng)，獲得藻種。該方法操作復雜，需抗生素進行無菌純化，藻種制備周期長，形成藻絲的數(shù)量相對較少，難以適應大規(guī)模培養(yǎng)藻種的需要。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種葛仙米藻種的制備方法，該方法通過選取藻種、清洗殺菌、勻漿、接種培養(yǎng)，得到大量的葛仙米藻種，本發(fā)明操作簡單，效率高，周期短，適合葛仙米規(guī)大規(guī)模培養(yǎng)藻種的需要。
為了達到上述目的，本發(fā)明采用如下技術方案一種葛仙米藻種的制備方法按下列步驟順序進行1、將葛仙米球形群體用水洗凈，置于70％-95％乙醇溶液浸泡10-40秒，去雜藻，然后在無菌水或培養(yǎng)液中清洗1-3次；2、將葛仙米球形群體放入勻漿器中，加入葛仙米球形群體重量0.1-1.0倍的培養(yǎng)液，勻漿，成絲狀藻漿；3、培養(yǎng)液的配方為磷酸氫二鉀20-60mg/L、硫酸鎂40-80mg/L、氯化鈣20-40mg/L、檸檬酸4-8mg/L、檸檬酸鐵銨5-9mg/L、乙二胺四乙酸二鈉鹽1-2mg/L、碳酸鈉5-30mg/L、微量元素0.5-3ml/L、余者為水；其中微量元素為每1000毫升含硼酸1.5-3g、氯化錳1-2g、硫酸鋅0.1-0.25g、鎳酸鈉0.2-0.4g、硫酸銅0.02-0.1g、硝酸鈷0.03-0.05g、余者為水；在培養(yǎng)液中加入其重量0.8-1.5％的瓊脂，在滅菌鍋滅菌10-20分鐘，成固體培養(yǎng)基；
4、將絲狀藻漿接種于固體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)條件為18-33℃，光照強度為10-200μE·m-2·s-1，培養(yǎng)8-20天；5、然后再接種在培養(yǎng)液中，培養(yǎng)條件條件為18-33℃，光照強度為10-200μE·m-2·s-1，經(jīng)10-15天培養(yǎng)，藻絲便可形成微球體即成藻種；6、制備大規(guī)格藻種時，將原培養(yǎng)液去掉，更換成新鮮的培養(yǎng)液，在光照強度為10-400μE·m-2·s-1中，通氣培養(yǎng)。
一種葛仙米藻種的制備方法按下列步驟順序進行1、將葛仙米球形群體用水洗凈，置于70％-95％乙醇溶液浸泡10-40秒，去雜藻，然后在無菌水或培養(yǎng)液中清洗1-3次；2、將葛仙米球形群體放入勻漿器中，加入葛仙米球形群體重量0.1-1.0倍的培養(yǎng)液，勻漿，成絲狀藻漿；3、培養(yǎng)液的配方為磷酸氫二鉀20-60mg/L、硫酸鎂40-80mg/L、氯化鈣20-40mg/L、檸檬酸4-8mg/L、檸檬酸鐵銨5-9mg/L、乙二胺四乙酸二鈉鹽1-2mg/L、碳酸鈉5-30mg/L、微量元素0.5-3ml/L、余者為水；其中微量元素為每1000毫升含硼酸1.5-3g、氯化錳1-2g、硫酸鋅0.1-0.25g、鎳酸鈉0.2-0.4g、硫酸銅0.02-0.1g、硝酸鈷0.03-0.05g、余者為水；
4、將接種在培養(yǎng)液中，培養(yǎng)條件條件為18-33℃，光照強度為10-200μE·m-2·s-1，經(jīng)15-25天培養(yǎng)，藻絲便可形成微球體即成藻種；5、制備大規(guī)格藻種時，將原培養(yǎng)液去掉，更換成新鮮的培養(yǎng)液，在光照強度為10-400μE·m-2·s-1中，通氣培養(yǎng)。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術相比具有以下優(yōu)點(1)操作過程簡單，(2)不需要抗生素進行無菌純化，(3)藻種制備周期短，(4)種藻群體全部轉化為藻絲，因此形成的藻種數(shù)量多，適合大規(guī)模藻種制備的需要。
具體實施例方式一種葛仙米藻種的制備方法按下列步驟順序進行1、采集種藻種藻的獲得有兩種方式，(1)野生葛仙米群體，(2)人工培養(yǎng)的葛仙米群體；對于野生的葛仙米，如果采集時間距制種時間在2天以上，可先將其晾干，長期保存，在制種之前用培養(yǎng)液充分浸泡使其復水成球狀；對于人工培養(yǎng)的葛仙米群體，可在制種前采集，采集時最好處于葛仙米群體生長的對數(shù)期，選用表面光澤好、顏色墨黑、生長速度快、群體韌性好的藻體。
2、將葛仙米球形群體用水洗凈，置于70％-95％乙醇溶液浸泡10-40秒，去雜藻，然后在無菌水或培養(yǎng)液中清洗1-3次。
3、將葛仙米球形群體放入勻漿器中，加入葛仙米球形群體重量0.1-1.0倍的培養(yǎng)液，勻漿，成絲狀藻漿。
4、培養(yǎng)液的配方為磷酸氫二鉀20-60mg/L、硫酸鎂40-80mg/L、氯化鈣20-40mg/L、檸檬酸4-8mg/L、檸檬酸鐵銨5-9mg/L、乙二胺四乙酸二鈉鹽1-2mg/L、碳酸鈉5-30mg/L、
微量元素0.5-3ml/L、余者為水；其中微量元素為每1000毫升含硼酸1.5-3g、氯化錳1-2g、硫酸鋅0.1-0.25g、鎳酸鈉0.2-0.4g、硫酸銅0.02-0.1g、硝酸鈷0.03-0.05g、余者為水；在培養(yǎng)液中加入其重量0.8-1.5％的瓊脂，在滅菌鍋滅菌10-20分鐘，成固體培養(yǎng)基。
5、將絲狀藻漿接種于固體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)條件為18-33℃，光照強度為10-200μE·m-2·s-1，培養(yǎng)8-20天。
6、然后再接種在培養(yǎng)液中，培養(yǎng)條件條件為18-33℃，光照強度為10-200μE·m-2·s-1，經(jīng)10-15天培養(yǎng)，藻絲便可形成微球體即成藻種。
或者將步驟5和6合并為將絲狀藻漿直接接種在培養(yǎng)液中，培養(yǎng)條件條件為18-33℃，光照強度為10-200μE·m-2·s-1，經(jīng)15-25天培養(yǎng)，藻絲便可形成微球體即成藻種。
7、制備大規(guī)格藻種時，將原培養(yǎng)液去掉，更換成新鮮的培養(yǎng)液，在光照強度為10-400μE·m-2·s-1中，通氣培養(yǎng)。
權利要求
1.一種葛仙米藻種的制備方法，其特征在于，該方法按下列步驟順序進行(1)、將葛仙米球形群體用水洗凈，置于70％-95％乙醇溶液浸泡10-40秒，去雜藻，然后在無菌水或培養(yǎng)液中清洗1-3次；(2)、將葛仙米球形群體放入勻漿器中，加入葛仙米球形群體重量0.1-1.0倍的培養(yǎng)液，勻漿，成絲狀藻漿；(3)、培養(yǎng)液的配方為磷酸氫二鉀20-60mg/L、硫酸鎂40-80mg/L、氯化鈣20-40mg/L、檸檬酸4-8mg/L、檸檬酸鐵銨5-9mg/L、乙二胺四乙酸二鈉鹽1-2mg/L、碳酸鈉5-30mg/L、微量元素0.5-3ml/L、余者為水；其中微量元素為每1000毫升含硼酸1.5-3g、氯化錳1-2g、硫酸鋅0.1-0.25g、鎳酸鈉0.2-0.4g、硫酸銅0.02-0.1g、硝酸鈷0.03-0.05g、余者為水；在培養(yǎng)液中加入其重量0.8-1.5％的瓊脂，在滅菌鍋滅菌10-20分鐘，成固體培養(yǎng)基；(4)、將絲狀藻漿接種于固體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)條件為18-33℃，光照強度為10-200μE·m-2·s-1，培養(yǎng)8-20天；(5)、然后再接種在培養(yǎng)液中，培養(yǎng)條件條件為18-33℃，光照強度為10-200μE·m-2·s-1，經(jīng)10-15天培養(yǎng)，藻絲便可形成微球體即成藻種；(6)、制備大規(guī)格藻種時，將原培養(yǎng)液去掉，更換成新鮮的培養(yǎng)液，在光照強度為10-400μE·m-2·s-1中，通氣培養(yǎng)。
2.根據(jù)權利要求1所述的一種葛仙米藻種的制備方法，其特征在于，該方法按下列步驟順序進行(1)、將葛仙米球形群體用水洗凈，置于70％-95％乙醇溶液浸泡10-40秒，去雜藻，然后在無菌水或培養(yǎng)液中清洗1-3次；(2)、將葛仙米球形群體放入勻漿器中，加入葛仙米球形群體重量0.1-1.0倍的培養(yǎng)液，勻漿，成絲狀藻漿；(3)、培養(yǎng)液的配方為磷酸氫二鉀20-60mg/L、硫酸鎂40-80mg/L、氯化鈣20-40mg/L、檸檬酸4-8mg/L、檸檬酸鐵銨5-9mg/L、乙二胺四乙酸二鈉鹽1-2mg/L、碳酸鈉5-30mg/L、微量元素0.5-3ml/L、余者為水；其中微量元素為每1000毫升含硼酸1.5-3g、氯化錳1-2g、硫酸鋅0.1-0.25g、鎳酸鈉0.2-0.4g、硫酸銅0.02-0.1g、硝酸鈷0.03-0.05g、余者為水；(4)、將接種在培養(yǎng)液中，培養(yǎng)條件條件為18-33℃，光照強度為10-200μE·m-2·s-1，經(jīng)15-25天培養(yǎng)，藻絲便可形成微球體即成藻種；(5)、制備大規(guī)格藻種時，將原培養(yǎng)液去掉，更換成新鮮的培養(yǎng)液，在光照強度為10-400μE·m-2·s-1中，通氣培養(yǎng)。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種葛仙米藻種的制備方法，該方法通過選取藻種、清洗殺菌、勻漿、接種培養(yǎng)，得到大量的葛仙米藻種。本發(fā)明與現(xiàn)有技術相比具有以下優(yōu)點操作簡單、不需要抗生素進行無菌純化、藻種制備周期短、效率高、因此形成的藻種數(shù)量多，適合大規(guī)模藻種制備的需要。
文檔編號C12N1/12GK1544611SQ200310111369
公開日2004年11月10日 申請日期2003年11月11日 優(yōu)先權日2003年11月11日
發(fā)明者鄧中洋, 胡征宇, 胡強 申請人:中國科學院水生生物研究所