專利名稱：乳酸脫氫酶同工酶檢測試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)用檢測試劑技術(shù)領(lǐng)域，是一種用于檢測乳酸脫氫酶同工酶的試劑盒。
背景技術(shù)：
臨床上，對心血管系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、消化系統(tǒng)等某些疾病的診治中，常需對乳酸脫氫酶同工酶進行電泳檢測，根據(jù)不同區(qū)帶酶的活力變化，反映可能患有的相關(guān)疾病。目前所使用的乳酸脫氫酶同工酶檢測試劑盒均從國外進口，如法國SIBER公司、美國HELENA公司的產(chǎn)品。試劑盒內(nèi)包括瓊脂糖凝膠板、底物與顯色劑、顯色液。瓊脂糖凝膠板將血清中乳酸脫氫酶同工酶電泳分離呈不同電泳區(qū)帶；底物與顯色劑為粉劑，溶于顯色液后鋪于凝膠板上，酶與底物發(fā)生反應(yīng)，其產(chǎn)物又與顯色劑作用產(chǎn)生顏色，從電泳區(qū)帶顯色的深淺來判斷酶的活力。它們的不足之處在于1、正常人或一般病人的血清可分離出五條電泳區(qū)帶，對于瀕臨死亡的肝病患者，應(yīng)該出現(xiàn)第六條區(qū)帶，但上述試劑盒的瓊脂糖凝膠板在電泳時僅能將血清中的乳酸脫氫酶同工酶分離成五條區(qū)帶，不能把第六條區(qū)帶，即提示肝臟代償?shù)臑l亡標(biāo)記物顯示出來，而這第六條區(qū)帶對肝病患者是十分重要的。況且區(qū)帶之間有“橋”樣陰影，條帶不夠清晰。2、顯色劑不理想SIBER公司試劑盒采用重氮染料固藍B作為顯色劑，其對乳酸脫氫酶的酶反應(yīng)有一定抑制作用，且在緩沖液中易產(chǎn)生沉淀，以致呈色較淺，顯色靈敏度差；HELENA公司采用熒光染料，檢測時必須用熒光掃描儀，熒光掃描儀不僅價格昂貴，而且1500-3000V的高壓電易使瓊脂糖凝膠板被擊穿，也使儀器的使用壽命縮短。3、進口試劑盒均需與大型專用儀器配套使用，檢測成本較高，操作步驟比較煩瑣。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種價格低廉、操作簡便，能使電泳區(qū)帶分離清晰、完全，檢測靈敏度高的乳酸脫氫酶同工酶檢測試劑盒。
本發(fā)明試劑盒包括瓊脂糖凝膠板、底物和顯色粉劑及顯色液。
1、瓊脂糖凝膠板按如下配比制備巴比妥1.2-1.5mg巴比妥鈉6.0-6.5mg乙二胺四乙酸二鈉0.98-1.1mg瓊脂糖80.0-140.0mg蒸餾水8-10ml按上述量加熱溶解后澆注成一塊7×10×0.1(cm)3的凝膠板。也可根據(jù)需要按上述配比制成其他規(guī)格大小的凝膠板。密封后備用。
2、底物與顯色粉劑按如下配比混合乳酸鹽0.3-0.38mg氧化型輔酶I 0.072-0.08mg蔗糖0.15-0.2mg吩嗪二甲酯硫酸鹽0.003-0.004mg加合混勻成粉劑裝入小瓶。也可根據(jù)需要按此配比混合后分裝備用。
3、顯色緩沖液按如下配比制備氯化亞硝基四氮唑藍0.04-0.07mg蒸餾水2.5-4.0ml相加溶解后裝入小瓶，也可根據(jù)需要按上述配比制成顯色緩沖液后分裝備用。
本發(fā)明采用氫電子轉(zhuǎn)移原理進行顯色，反應(yīng)過程如下
2、3、甲_為藍色，電泳區(qū)帶顏色的深淺與乳酸脫氫酶同工酶的酶活力成正比，即顏色越深表示酶活力越高，說明患者的組織損傷越嚴(yán)重。第一條區(qū)帶若有異常升高，則提示可能患有心肌梗死；第三、四條區(qū)帶若有異常升高，則提示可能有呼吸系統(tǒng)器官的惡變；第五條區(qū)帶若有異常升高，則提示肝臟可能受損；如果出現(xiàn)第六條區(qū)帶的異常升高，則提示肝臟已不能代償，其為瀕亡標(biāo)記物。
使用本發(fā)明試劑盒時，將被檢血清點樣于瓊脂糖凝膠板，按常規(guī)進行電泳，電泳完畢，將底物和顯色劑溶于顯色液后速將其鋪于凝膠板上，各電泳區(qū)帶的乳酸脫氫酶同工酶即與底物發(fā)生反應(yīng)，進而使乳酸脫氫酶各區(qū)帶顯色。
具體實施例方式實施例1制備本發(fā)明試劑盒1、制備瓊脂糖凝膠板取巴比妥1.02mg，巴比妥鈉6.0mg，乙二胺四乙酸二鈉0.98mg，溶于10ml蒸餾水，再加瓊脂糖80mg，加熱溶解后傾入7cm×10cm×0.1cm的硅膠模子，冷卻后即成瓊脂糖凝膠板，密封包裝后備用；2、底物與顯色粉劑取乳酸鋰0.3mg、氧化型輔酶I 0.072mg、蔗糖0.15mg、吩嗪二甲酯硫酸鹽0.003mg、混勻后裝入小瓶備用；3、顯色液取氯化亞硝基四氮唑藍0.04mg，溶于2.5ml蒸餾水，裝入小瓶備用。
將上述制備的瓊脂糖凝膠板一塊、底物與顯色粉劑一瓶、顯色液一瓶裝入盒內(nèi)，即成本發(fā)明試劑盒。此試劑盒可同時檢測10份血清標(biāo)本。
實施例2用本發(fā)明試劑盒檢測乳酸脫氫酶同工酶取血清標(biāo)本10份，按常規(guī)點樣于瓊脂糖凝膠板，置普通電泳槽電泳，電壓150V，電泳16分鐘；將底物與顯色粉劑溶于顯色液后均勻鋪于凝膠板上，置37℃水浴箱孵育20分鐘，凝膠板上可見清晰的電泳區(qū)帶，置可見光掃描儀于波長570nm處掃描，得出各區(qū)帶酶的活力測定結(jié)果，從而作出診治判斷。
本發(fā)明的優(yōu)點1、本發(fā)明試劑盒不必借助特殊的儀器進行檢測，操作簡便，降低了成本；2、瓊脂糖凝膠板分離的電泳區(qū)帶清晰，區(qū)帶間不形成橋狀陰影，對于肝臟嚴(yán)重受損、失去代償功能的患者，可分離出第六條電泳區(qū)帶。
3、顯色清晰，穩(wěn)定，檢測靈敏度高。
權(quán)利要求
1.一種乳酸脫氫酶同工酶檢測試劑盒，包括瓊脂糖凝膠板、底物和顯色粉劑、顯色液，其特征在于瓊脂糖凝膠板的配比如下巴比妥1.2-1.5mg巴比妥鈉6.0-6.5mg乙二胺四乙酸二鈉0.98-1.1mg瓊脂糖80-140mg蒸餾水8-10ml
2.按權(quán)利要求1所述的乳酸脫氫酶同工酶檢測試劑盒，其特征在于所說的底物和顯色粉劑配比為乳酸鹽0.30-0.38mg氧化型輔酶I 0.072-0.08mg蔗糖0.15-0.2mg吩嗪二甲酯硫酸鹽0.003-0.04mg所說的顯色液配比為氯化亞硝基四氮唑藍0.04-0.07mg蒸餾水2.5-4.0ml
3.按權(quán)利要求2所述的乳酸脫氫酶同工酶檢測試劑盒，其特征在于所說的乳酸鹽為乳酸鋰。
4.權(quán)利要求1、2、3所述乳酸脫氫酶同工酶檢測試劑盒用于檢測乳酸脫氫酶同工酶的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及醫(yī)用檢測試劑技術(shù)領(lǐng)域，是一種用于檢測血清中乳酸脫氫酶同工酶的試劑盒。本試劑盒包括瓊脂糖凝膠板、底物和顯色粉劑、顯色液。瓊脂糖凝膠板能清晰地分離出五條電泳區(qū)帶，對于肝臟嚴(yán)重受損、失去代償功能的患者，可清晰地分離出六條電泳區(qū)帶。本發(fā)明采用氫離子轉(zhuǎn)移原理進行顯色，酶與底物反應(yīng)產(chǎn)生還原型輔酶I和H
文檔編號C12Q1/32GK1431315SQ03114790
公開日2003年7月23日 申請日期2003年1月9日 優(yōu)先權(quán)日2003年1月9日
發(fā)明者宓慶梅 申請人:中國人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)