專(zhuān)利名稱(chēng)：診斷幽門(mén)螺旋菌的方法及實(shí)施該方法的診斷試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種診斷幽門(mén)螺旋菌的方法，它是通過(guò)口服給藥施以規(guī)定量的C13標(biāo)記的脲，并在規(guī)定時(shí)間點(diǎn)抽取血樣分析C13含量來(lái)實(shí)現(xiàn)的。
至今通常和最常用的診斷幽門(mén)螺旋菌的方法是C13-脲呼吸試驗(yàn)。該方法在EP-A-O 253927中已作詳細(xì)敘述。但該試驗(yàn)的缺點(diǎn)是不能用于三歲以下兒童和呼吸困難的病人如氣喘病人。
萊克斯.莫爾頓-巴萊特等人(Rex Moulton-Barrett et al.，)在美國(guó)胃腸病學(xué)雜志，第88卷，1993，第369至374頁(yè)上發(fā)表的一種方法是口服C13標(biāo)記的脲后，測(cè)定在血清中的C13標(biāo)記的重碳酸鹽的方法。該試驗(yàn)要按C13標(biāo)記的脲5毫克/公斤向病人給藥，在其15、30、60、90、120和180分鐘后各抽取3毫升血樣，再檢測(cè)。該方法有人繼續(xù)進(jìn)行了研究，如Mark J.Kim等人在胃腸病學(xué)(Gastroenterology)1997，11331-37，W.D.Chey等人在美國(guó)胃腸病學(xué)雜志，第94卷，1999，第1522-1524頁(yè)，AlanF.Cuttler等人在美國(guó)胃腸病學(xué)雜志，第94卷，1999，第959頁(yè)-961頁(yè)上發(fā)表了文章，該試驗(yàn)并在代謝溶液公司(Firma Metabolic Solutions Inc.，Nashua NH)具體實(shí)施。該試驗(yàn)在未確定起始值的情況下，在服用油膩的試驗(yàn)餐″Ensure″之后，施以125毫克的C13-脲，在30分鐘后檢測(cè)3毫升的血液的C13含量。但該試驗(yàn)一方面因?yàn)闇?zhǔn)確度和精密度差，另一方面因?yàn)镃13-脲所需量?jī)r(jià)格極高和較對(duì)多的血液量，因此由經(jīng)濟(jì)原因未獲成功，雖然呼吸試驗(yàn)有其缺點(diǎn)，還是最常用的方法。
本發(fā)明的目的是提供一種診斷幽門(mén)螺旋菌的方法，該方法用盡可能少的C13-脲和盡可能少的血液量來(lái)檢測(cè)C13含量，它能較簡(jiǎn)單、較便宜、較準(zhǔn)確和較快地診斷幽門(mén)螺旋菌的感染。
本發(fā)明的目的如下解決，空腹病人在試驗(yàn)前，抽取0.1-0.6ml來(lái)自手指或耳垂的毛細(xì)管血或是靜脈血；給病人服用在水溶液中的精確量的10至50毫克的C13-脲，其pH值為2至4，在服用后精確的10至15分鐘，再抽取毛細(xì)管血或靜脈血，并用同位素質(zhì)譜儀檢測(cè)血樣中的C13含量，以及從C13值的升高判斷幽門(mén)螺旋菌是否存在。
本發(fā)明僅用0.6毫升毛細(xì)管血液和50毫克C13-脲已明顯優(yōu)于至今所用的方法，尤其是通過(guò)測(cè)定起始值，極大地提高了本發(fā)明方法的準(zhǔn)確度，本發(fā)明的方法僅在10至15分鐘后就抽取第二次血樣，對(duì)于病人來(lái)說(shuō)明顯縮短了就診時(shí)間。特別對(duì)老年病人有時(shí)較難以獲取毛細(xì)管血樣，在這種情況下，本發(fā)明方法可用相應(yīng)較少量的靜脈血來(lái)進(jìn)行。
本發(fā)明的方法不需要油膩的試驗(yàn)餐是有決定性意義的。此外，以pH值為2至4的經(jīng)標(biāo)記的脲水溶液給藥。該標(biāo)記的脲水溶液可用不揮發(fā)的藥理學(xué)上可接受的有機(jī)酸調(diào)整pH值為2至4，也可將一小袋固體的藥理學(xué)上可接受的有機(jī)酸加入到新制備的標(biāo)記脲溶液中。特別是已證明檸檬酸是合適的。原則上其他有機(jī)酸如抗壞血酸也可調(diào)整所希望的pH值。還可用橙汁，葡萄柚汁或酸的蘋(píng)果汁來(lái)達(dá)到該低的pH值。
測(cè)定血樣中的C13含量時(shí)可例如加入非揮發(fā)性的強(qiáng)酸例如磷酸，以使血樣中的二氧化碳以氣態(tài)去除。然后用同位素質(zhì)譜儀(IRMS)測(cè)量。
還可從血樣中得到血清，用適合的過(guò)濾器去除血清樣品中的高分子成份，剩余的液體先進(jìn)行元素分析，然后用同位素質(zhì)譜儀測(cè)量C13含量。
通過(guò)對(duì)比試驗(yàn)證實(shí)，用呼吸試驗(yàn)證明幽門(mén)螺旋菌感染時(shí)，C13要超過(guò)起始值的千分之4，而本發(fā)明的方法C13含量差千分之2.0就能證明螺旋菌感染，這就說(shuō)明了不但所需的昂貴的C13-脲特別少，而且第二次抽取血樣的時(shí)間點(diǎn)從30分鐘降到10分鐘，對(duì)于病人和醫(yī)生也很有意義的。此外最多取0.6毫升的毛細(xì)管血或靜脈血比代謝溶液公司的試驗(yàn)要抽取3毫升血來(lái)說(shuō)，顯著地簡(jiǎn)單和舒適。因?yàn)闇y(cè)量了病人的起始值，而且不需要用由于病人的不同飽餐而產(chǎn)生很大波動(dòng)的平均值，因此與該公司的試驗(yàn)比較，明顯的高準(zhǔn)確度和精確度是有決定性意義的。
實(shí)施本發(fā)明方法的診斷試劑盒，優(yōu)選由pH值為2至4并其中精確地含有10至50毫克C13-脲的酸性水溶液、病人使用說(shuō)明、容納血樣的兩個(gè)樣品容器和必要的抽血裝置組成。關(guān)鍵是診斷試劑盒中含有精確稱(chēng)量的C13-脲。在不同的診斷試劑盒中其量是不同的，例如對(duì)兒童，C13-脲用量可為10至50毫克。兩次抽血之間的時(shí)間間隔也應(yīng)嚴(yán)格遵守診斷試劑盒的規(guī)定，但對(duì)于不同的診斷試劑盒規(guī)定為10至15分鐘。
本發(fā)明的另一優(yōu)選實(shí)施例包括精確含10至50毫克的容器和一小袋固體的藥理學(xué)上可接受的有機(jī)酸如檸檬酸，而不是制備好的C13-脲酸溶液。溶于200毫升水中的2克檸檬酸或200毫升橙汁，葡萄柚汁或酸的蘋(píng)果汁通常適于溶解30至50毫克C13-脲。特別是用于兒童時(shí)，C13-脲的量還可降到10毫克。
血樣優(yōu)先盛放在市場(chǎng)上普通容納血樣的容器中，例如商品名Vakutainer。該容器最好已含有需要量的濃磷酸，使得從血樣直接釋放出二氧化碳。原則上也可以事后將非揮發(fā)性的強(qiáng)酸添加到盛血樣的樣品容器中。
然后用同位素質(zhì)譜儀直接從氣相測(cè)量C13含量。10分鐘后，C13含量增加千分之2表明螺旋菌已感染。
還可以將血樣沉積較短時(shí)間后吸出血清。通過(guò)超細(xì)過(guò)濾將血清樣品中的大分子，特別是脂類(lèi)去除掉。剩下的液體首先經(jīng)燃燒做元素分析以及釋放出的二氧化碳再經(jīng)同位素質(zhì)譜儀監(jiān)測(cè)以求C13/C12的同位素比。該試驗(yàn)方法中當(dāng)C13含量升高千分之1至1.5時(shí)已能證實(shí)螺旋菌感染。
本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)方法達(dá)到的較高靈敏度和準(zhǔn)確度事后是由標(biāo)記脲的C13含量較少被其它碳源稀釋而表明的。在呼吸試驗(yàn)中該稀釋效應(yīng)為最大，經(jīng)超細(xì)過(guò)濾除掉了大分子檢測(cè)血清樣品，其稀釋效應(yīng)最小。此外，本發(fā)明方法還從血樣中用非揮發(fā)性強(qiáng)酸釋放出二氧化碳以及在氣相中進(jìn)行測(cè)量，特別有利于完成本發(fā)明的任務(wù)。
具體實(shí)施本發(fā)明的方法時(shí)，醫(yī)生在施用C13脲前和施藥后10至15分鐘抽取血樣。用血樣容器Vakutainer收集并送到中心實(shí)驗(yàn)室，在實(shí)驗(yàn)室中完成C13含量的測(cè)量。由送回的試驗(yàn)結(jié)果，醫(yī)生作出診斷是否被螺旋菌感染。
同位素質(zhì)譜測(cè)量原則上可用市場(chǎng)上所見(jiàn)的高靈敏度的同位素質(zhì)譜儀，因價(jià)格關(guān)系，只在中心實(shí)驗(yàn)室配備。醫(yī)院不會(huì)投資這類(lèi)儀器。相反，由邏輯學(xué)和費(fèi)用上看，在中心實(shí)驗(yàn)室收集和分析樣品并將分析數(shù)據(jù)回送到送來(lái)的醫(yī)生處或送來(lái)的醫(yī)院現(xiàn)今是沒(méi)有問(wèn)題的。
這也適用于從血清中經(jīng)超細(xì)過(guò)濾去掉高分子成份后的血清中的測(cè)定方法。在其前的經(jīng)燃燒的元素分析在中心實(shí)驗(yàn)室做沒(méi)有問(wèn)題。從毛細(xì)管血或靜脈血獲得血清以及超細(xì)過(guò)濾至少在醫(yī)院里做是無(wú)問(wèn)題地。20微升血清實(shí)際上就足夠用于C13含量的測(cè)定，并已能給出千分之1至1.5 C13升高的所述結(jié)果。
權(quán)利要求
1.一種診斷幽門(mén)螺旋菌的方法，它是通過(guò)口服給藥施以規(guī)定量的C13標(biāo)記的脲，并在規(guī)定時(shí)間點(diǎn)抽取血樣檢測(cè)C13含量來(lái)實(shí)現(xiàn)的，其特征在于，a)空腹病人在試驗(yàn)前，抽取0.1至0.6毫升的來(lái)自手指或耳垂的毛細(xì)管血或是靜脈血，b)給病人服用在水溶液中的精確的10至50毫克的C13-脲，其pH值為2至4，c)在服用后精確的10至15分鐘時(shí)，再抽取毛細(xì)管血或靜脈血,d)用同位素質(zhì)譜儀(IRMS)檢測(cè)血樣中的C13含量，以及從C13值的升高判斷幽門(mén)螺旋菌的存在。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其特征在于，在血樣中加入非揮發(fā)性強(qiáng)酸釋放氣態(tài)的二氧化碳，并測(cè)量氣相中的C13含量。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的方法其特征在于，從血樣中得到血清，用過(guò)濾器去除血清樣品中的高分子成份，剩余的液體先進(jìn)行元素分析，然后用質(zhì)譜儀測(cè)量C13含量。
4.一種實(shí)施權(quán)利要求1至3方法的診斷試劑盒，它由下列組成1)pH為2至4、其中精確地含有10至50毫克C13脲的酸性水溶液或1a)精確含10至50毫克C13脲的脲容器以及1b)小袋固體的、藥理學(xué)上可接受的有機(jī)酸，2)病人使用說(shuō)明書(shū)，3)容納血樣的兩個(gè)樣品容器3a)或含有非揮發(fā)性的強(qiáng)酸，或3b)使能夠添加這種酸，和任選地4)抽血裝置。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的診斷試劑盒其特征在于，有機(jī)酸是檸檬酸。
全文摘要
一種診斷幽門(mén)螺旋菌的方法，它是通過(guò)口服給藥施以規(guī)定量的C
文檔編號(hào)C12Q1/04GK1539082SQ02815527
公開(kāi)日2004年10月20日 申請(qǐng)日期2002年8月2日 優(yōu)先權(quán)日2001年8月9日
發(fā)明者錫特克·艾根, 錫特克 艾根 申請(qǐng)人:錫特克·艾根, 錫特克 艾根