專利名稱：一種保護(hù)動(dòng)物細(xì)胞活性的離心分離方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種保持動(dòng)物細(xì)胞活性的離心法，屬于細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。
細(xì)胞生物學(xué)發(fā)展至今，大量國(guó)內(nèi)外相關(guān)生物技術(shù)書籍和參考相關(guān)學(xué)術(shù)期刊，“活性細(xì)胞分離沉淀方法”使用最多的常規(guī)方法是離心轉(zhuǎn)速3000-6000轉(zhuǎn)/分鐘，離心10-15分鐘，棄上清，沉淀物即為細(xì)胞。采用此方法分離的細(xì)胞，經(jīng)細(xì)胞活性檢測(cè)(染色法)，結(jié)果顯示每操作離心一次，細(xì)胞活性損失10-20％。細(xì)胞活性的損失，極不利益生物學(xué)研究實(shí)驗(yàn)，按一些研究實(shí)驗(yàn)要求，對(duì)活性細(xì)胞懸液需要分離二次、三次……時(shí)，細(xì)胞活性將受到嚴(yán)重?fù)p壞，甚至完全喪失活性，導(dǎo)致生物學(xué)實(shí)驗(yàn)不能順利進(jìn)行。多年來(lái)，在生物細(xì)胞學(xué)實(shí)際操作中，經(jīng)常為了減少或避免因離心造成的細(xì)胞活性損傷，在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案時(shí)刻意地減少細(xì)胞離心的操作次數(shù)，使用這樣的設(shè)計(jì)，難免會(huì)影響到研究實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性與可靠性。
活性細(xì)胞離心沉淀法是細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中最常用而最重要的方法之一，如何在實(shí)踐中摸索出一種好的方法，是細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)人員十分關(guān)注的問題。
發(fā)明技術(shù)內(nèi)容針對(duì)上述問題，為了保護(hù)或減少活性細(xì)胞離心時(shí)對(duì)其活性的影響。本發(fā)明對(duì)活性細(xì)胞分離沉淀的常規(guī)方法進(jìn)行了技術(shù)改進(jìn)，調(diào)整了離心轉(zhuǎn)速和離心時(shí)間，離心轉(zhuǎn)速800-1000轉(zhuǎn)/分，離心3-5分鐘，棄上清，沉淀物即為細(xì)胞。采用改進(jìn)后離心法，經(jīng)一次離心的細(xì)胞，細(xì)胞活性檢測(cè)(染色法)結(jié)果顯示，細(xì)胞活性為98-100％，較好地保護(hù)了細(xì)胞的活性。采用此技術(shù)連續(xù)3-5次的離心，細(xì)胞活性檢測(cè)結(jié)果顯示活性不低于90％，對(duì)細(xì)胞活性的保護(hù)，極有利于生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行。本發(fā)明的原理是降低了離心轉(zhuǎn)速和離心時(shí)間，使細(xì)胞間壓強(qiáng)減小，同時(shí)也減小細(xì)胞間的機(jī)械擠壓力，細(xì)胞損傷減少(否則反之)，從而實(shí)現(xiàn)保護(hù)和減少細(xì)胞損傷的作用。
將離心后的細(xì)胞分別進(jìn)行細(xì)胞活性(染色法)檢測(cè)，結(jié)果顯示BHK-21細(xì)胞活性94％；FK-81細(xì)胞活性92％。
比較例1
10％小牛血清RPMI-1640培養(yǎng)液10毫升、2管，分別加入活性地鼠腎傳代細(xì)胞(BHK-21)、貓腎細(xì)胞(FK-81)分別配制細(xì)胞濃度為1×109/cm3的細(xì)胞懸液→4000轉(zhuǎn)/分，10分鐘→棄上清→加入10毫升培養(yǎng)液，吹打沉淀物，混勻→4000轉(zhuǎn)/分，5分鐘……連續(xù)4次。
將離心后的細(xì)胞分別進(jìn)行細(xì)胞活性(染色法)檢測(cè)，結(jié)果顯示BHK-21細(xì)胞活性52％，F(xiàn)K-81細(xì)胞活性45％。
實(shí)施例2取10％小牛血清RPMI-1640培養(yǎng)液10毫升/管、2管，分別加入活性人鼻咽癌組織細(xì)胞(Hep-2)、豬腎細(xì)胞(IBRS)，分別配制細(xì)胞濃度為1×107/cm3的細(xì)胞懸液→1000轉(zhuǎn)/分，3分鐘→棄上清→加入10毫升培養(yǎng)液，吹打沉淀物，混勻→1000轉(zhuǎn)/分，3分鐘→棄上清→加入1毫升培養(yǎng)液。
將離心后的細(xì)胞分別進(jìn)行細(xì)胞活性(染色法)檢測(cè)，結(jié)果顯示Hep-2細(xì)胞活性98％，IBRS細(xì)胞活性97％。
比較例2取10％小牛血清RPMI-1640培養(yǎng)液10毫升/管、2管，分別加入活性人鼻咽癌組織細(xì)胞(Hep-2)、豬腎細(xì)胞(IBRS)，分別配制細(xì)胞濃度為1×107/cm3的細(xì)胞懸液→5000轉(zhuǎn)/分，10分鐘→棄上清→加入10毫升培養(yǎng)液，吹打沉淀物，混勻→5000轉(zhuǎn)/分，10分鐘→棄上清→加入1毫升培養(yǎng)液。
將離心后的細(xì)胞分別進(jìn)行細(xì)胞活性(染色法)檢測(cè)，結(jié)果顯示Hep-2細(xì)胞活性79％，IBRS細(xì)胞活性77％。
權(quán)利要求
1.一種保護(hù)動(dòng)物細(xì)胞活性的離心分離方法，即將活性細(xì)胞懸液離心分離，棄上清，沉淀物即為細(xì)胞，其特征在于離心轉(zhuǎn)速800-1000轉(zhuǎn)/分，離心時(shí)間3-5分鐘。
全文摘要
本發(fā)明對(duì)活性細(xì)胞分離沉淀的常規(guī)方法進(jìn)行了技術(shù)改進(jìn)，調(diào)整了離心轉(zhuǎn)速和離心時(shí)間，離心轉(zhuǎn)速800－1000轉(zhuǎn)/分，離心3－5分鐘，棄上清，沉淀物即為細(xì)胞。采用改進(jìn)后離心法，經(jīng)一次離心的細(xì)胞，細(xì)胞活性檢測(cè)(染色法)結(jié)果顯示，細(xì)胞活性為98－100％，較好地保護(hù)了細(xì)胞的活性。采用此技術(shù)連續(xù)3－5次的離心，細(xì)胞活性檢測(cè)結(jié)果顯示活性不低于90％，對(duì)細(xì)胞活性的保護(hù)，極有利于生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行。
文檔編號(hào)C12N5/06GK1415746SQ0214470
公開日2003年5月7日 申請(qǐng)日期2002年12月6日 優(yōu)先權(quán)日2002年12月6日
發(fā)明者李天憲, 范兆軍, 陳繩亮, 熊克娟, 張忠 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院武漢病毒研究所