專利名稱：采用益生菌治療內(nèi)毒素血癥及相關(guān)疾病的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及預(yù)防和治療內(nèi)毒素血癥及相關(guān)疾病的方法，具體地，本發(fā)明涉及用益生菌預(yù)防和治療內(nèi)毒素血癥及相關(guān)疾病的方法；本發(fā)明也涉及用于評價益生菌對內(nèi)毒素血癥及相關(guān)疾病的預(yù)防和治療效果的方法。
背景本說明書通篇有關(guān)現(xiàn)有技術(shù)的討論決不應(yīng)看作是承認(rèn)該現(xiàn)有技術(shù)是普遍已知的或是本領(lǐng)域常識的一個部分。
內(nèi)毒素是脂多糖，是位于革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞壁上具有熱穩(wěn)定性的大分子(分子量200,000至1,000,000)。
革蘭氏陰性菌——尤其是大腸桿菌及其他物種在腸道中的寄居可以造成少量內(nèi)毒素進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng)。改變寄居特征或者粘膜完整性的多種病理情況，會顯著地提高細(xì)菌的轉(zhuǎn)移，造成高水平的循環(huán)內(nèi)毒素，即內(nèi)毒素血癥。
由于內(nèi)毒素會造成組織損傷，因此，內(nèi)毒素血癥又與多種疾病狀態(tài)相關(guān)聯(lián)。實例包括從急性病癥，如“內(nèi)毒素休克”到更加微妙的慢性組織損傷，例如肝細(xì)胞壞死/(炎癥)(肝炎)，特別是在同時存在已知與肝臟疾病有關(guān)的因素(如酒精和肝臟毒性病毒)的情況下。
近來，造成肝細(xì)胞損傷的共同途徑被聚焦在循環(huán)T淋巴細(xì)胞上。傳統(tǒng)上接受的引起肝細(xì)胞損傷的媒介是甲、乙、丙型肝炎以及自身免疫性肝炎(和推測的另外一些病毒感染，如EB病毒(EBV)，巨細(xì)胞病毒(CMV))?，F(xiàn)在看來T淋巴細(xì)胞也與酒精性慢性肝臟疾病有關(guān)。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，酒精可促進(jìn)T淋巴細(xì)胞分泌腫瘤壞死因子(TNF)。在存在T細(xì)胞刺激物(特別是內(nèi)毒素)時，這種“連擊”模式確保了肝細(xì)胞中高的TNF濃度，從而導(dǎo)致細(xì)胞死亡、肝炎以及，如果肝臟系統(tǒng)被打亂，則將導(dǎo)致肝硬化。
已經(jīng)證明大腸桿菌可以提高酒精性肝炎患者的內(nèi)毒素水平，當(dāng)患者服用抗生素時，患者的內(nèi)毒素水平會下降。
盡管(口服)抗生素能夠減少內(nèi)毒素的水平，但尤其是從長期的角度出發(fā)，這不是一種理想的達(dá)到此目的的方法。另外一些被考慮用于治療的策略包括3-脫氧-D-甘露-2-辛酮糖酸合成抑制劑，多粘菌素B(一種多聚陽離子分子，可以結(jié)合內(nèi)毒素)、血漿除去法、單克隆和多克隆免疫治療以及用內(nèi)毒素拮抗劑治療(J Hurley(1995)在Clin.Microbiol.Rev.8268-292中的綜述)。這些策略每一個都有有利和不利之處，但至今仍沒有簡單且有效的內(nèi)毒素血癥治療方法。
本發(fā)明的一個目的是克服或者改進(jìn)現(xiàn)有技術(shù)中的至少一個缺點，或者提供有用的可選擇方案。
第一方面，本發(fā)明提供預(yù)防和/或治療內(nèi)毒素血癥的方法，包括給需要治療的哺乳動物施用有效量的益生菌。
所述哺乳動物可以有出現(xiàn)內(nèi)毒素血癥的危險，或者可以已經(jīng)患有內(nèi)毒素血癥，此哺乳動物可以患有急性病癥，例如危急病癥或者急性肝炎，或者可以患有慢性病癥，例如慢性肝疾病。
對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說，顯而易見，本發(fā)明的方法和/或應(yīng)用可以用于循環(huán)系統(tǒng)中出現(xiàn)內(nèi)毒素的任何疾病。
第二方面，本發(fā)明提供治療酒精誘導(dǎo)的肝病的方法，此方法是給需要治療的哺乳動物施用治療上有效量的益生菌。
第三方面，本發(fā)明提供治療炎癥性腸病的方法，包括給需要治療的哺乳動物施用治療上有效量的益生菌。
第四方面，本發(fā)明提供益生菌在制備用于預(yù)防和/或治療哺乳動物內(nèi)毒素血癥的藥物中的用途。
第五方面，本發(fā)明提供益生菌在制備用于治療酒精誘導(dǎo)的肝病的藥物中的用途。
第六方面，本發(fā)明提供益生菌在制備用于治療炎癥性腸病的藥物中的用途。
所述哺乳動物優(yōu)選是人，但是，本領(lǐng)域技術(shù)人員將明了，其他哺乳動物也在考慮之中。
本領(lǐng)域技術(shù)人員可以確定適宜的益生菌，其包括如乳酸細(xì)菌，如乳桿菌屬(Lactobacillus)。優(yōu)選地，所述益生菌是嗜酸乳桿菌(Lactobacillusacidophilus)或者發(fā)酵乳桿菌(Lactobacillus fermentum)。最優(yōu)選所述益生菌是嗜酸乳桿菌菌株(VRI-001)或者發(fā)酵乳桿菌菌株(VRI-002)，兩種菌種都可以從澳大利亞悉尼西南威爾士大學(xué)微生物和免疫學(xué)培養(yǎng)物保藏學(xué)院(University of New South Wales，School of Microbiology andImmunology Culture Collection，Sydney，Australia)獲得。
優(yōu)選通過口服途徑施用益生菌或者藥物，但也可以考慮其他給藥途徑，例如通過栓劑或者利用插管通過胃部途徑給藥。
優(yōu)選益生菌或者藥物采取片劑或膠囊形式，但益生菌或者藥物也可以采取食物組合物的形式，如奶制品或豆制品。
優(yōu)選片劑或者膠囊中包含108至1012CFU益生菌。
第七方面，本發(fā)明提供評價益生菌在預(yù)防和/或治療哺乳動物內(nèi)毒素血癥方面的效果的方法，包括(a)給哺乳動物施用內(nèi)毒素和/或內(nèi)毒素誘導(dǎo)劑，和/或在哺乳動物上造成內(nèi)毒素引起的損傷；(b)給哺乳動物施用益生菌；和(c)確定益生菌對內(nèi)毒素血癥的效果。
第八方面，本發(fā)明提供評價益生菌在預(yù)防和/或治療哺乳動物酒精誘導(dǎo)的肝病方面的效果的方法，包括(a)給哺乳動物施用酒精；(b)給哺乳動物施用益生菌；和(c)確定益生菌對動物肝臟疾病的效果。
第九方面，本發(fā)明提供了評價益生菌在預(yù)防和/或治療哺乳動物炎癥性腸病方面的效果的方法，包括(a)施用導(dǎo)致腸道炎癥的藥劑；(b)給哺乳動物施用益生菌；和(c)確定益生菌對腸道疾病的效果。
本領(lǐng)域技術(shù)人員明了，方法中步驟(a)和(b)可以同時或相繼進(jìn)行，當(dāng)相繼進(jìn)行時，待評價的效果的性質(zhì)將決定步驟(a)應(yīng)該在步驟(b)之前還是之后進(jìn)行。
所述哺乳動物可以是包括人在內(nèi)的任何哺乳動物。哺乳動物也可以是例如實驗動物，例如大鼠。
遞送的酒精的濃度、數(shù)量以及方式取決于各種因素，如所監(jiān)測的效果、哺乳動物的類型、益生菌的種類和配制等等。本領(lǐng)域技術(shù)人員將能夠容易地確定這些參數(shù)。例如，可以在一個適宜的時間段內(nèi)，以遞增濃度給哺乳動物施用酒精。例如，酒精的量可以從如5％到40％，并可以通過飲用水施用。例如，可以給哺乳動物施用酒精數(shù)月，例如2個月。
作為選擇方案，為了誘發(fā)炎癥性腸疾病，可以將酒精遞送至哺乳動物結(jié)腸，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以容易地確定酒精的適宜濃度和數(shù)量，例如可以是45％的乙醇。
優(yōu)選地，所評價的益生菌是乳酸細(xì)菌，如乳桿菌。
更加優(yōu)選地，益生菌是嗜酸乳桿菌或者發(fā)酵乳桿菌，最優(yōu)選是嗜酸乳桿菌VRI-001菌株或者發(fā)酵乳桿菌VR1-002菌株。
兩種菌株都可以從澳大利亞悉尼西南威爾士大學(xué)微生物及免疫學(xué)院培養(yǎng)物保藏學(xué)院獲得。
優(yōu)選地，益生菌通過口服途徑給藥，但是預(yù)計也可以采用其他的給藥途徑，例如栓劑或者插管法胃部給藥。優(yōu)選地，益生菌是片劑、膠囊或者袋裝藥形式，但也可以是食物組合物的形式，如奶制品或豆制品。
優(yōu)選地，片劑或者膠囊中包含有108至1012CFU的益生菌。
當(dāng)所述哺乳動物是大鼠時，可以每隔兩天施用約5×1010CFU益生菌。優(yōu)選地，益生菌存在于磷酸緩沖鹽溶液(PBS)中。益生菌可以通過如胃內(nèi)喂食方式給藥。
益生菌的效果可以用任何適宜的方法來確定。一個方法是測量直接和/或間接指示循環(huán)內(nèi)毒素水平的參數(shù)。例如，可以采用鱟變形細(xì)胞溶解物試驗(LAL)測定內(nèi)毒素水平，從而確定益生菌的效果。
例如，可以通過測量指示損傷水平的參數(shù)來確定益生菌的效果，例如測量與肝臟損傷正相關(guān)的血漿丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)。
優(yōu)選內(nèi)毒素誘導(dǎo)劑是酒精。優(yōu)選酒精誘導(dǎo)肝臟疾病。
本發(fā)明的說明書中，術(shù)語“預(yù)防和/或治療內(nèi)毒素血癥”包括，但不限于，預(yù)防和/或治療內(nèi)毒素水平增加和/或內(nèi)毒素血癥造成的病癥/并發(fā)癥。
圖2顯示給大鼠喂食乙醇28天后，用鱟變形細(xì)胞溶解物試驗(LAL)測定的血液內(nèi)毒素水平。
圖3顯示在患有酒精誘導(dǎo)的結(jié)腸炎癥的小鼠中益生菌對血液內(nèi)毒素水平的控制。
圖4顯示，酒精攻擊后，在喂食益生菌的小鼠中，結(jié)腸內(nèi)腸道細(xì)菌的寄居減少與缺少血液內(nèi)毒素有關(guān)。
發(fā)明詳述下面僅通過舉例方式，參考附圖來描述本發(fā)明的優(yōu)選實施方案。
實施例1已經(jīng)有文獻(xiàn)描述了酒精誘導(dǎo)的肝損傷的大鼠模型(Cao Qi，Batey R，Pang G，Clancg R，1998，酒精中毒臨床和實驗研究(AlcoholismClinical and Experimental Reserch)22723-729)。采用這個模型，令人驚訝地發(fā)現(xiàn)施用益生菌可以減少肝臟損傷。
8-10周齡、體重約250克的雌性Wistar大鼠(n＝10-14)被單獨飼養(yǎng)在鐵絲網(wǎng)籠中，控制環(huán)境溫度并給予12小時光照黑暗周期，大鼠在整個研究過程中可以隨意進(jìn)食鼠糧和飲水。根據(jù)澳大利亞紐卡斯?fàn)柎髮W(xué)(University of Newcastle)動物研究倫理委員會所制定的規(guī)定開展本研究工作。
從5％(體積/體積，V/V)的乙醇開始，4周內(nèi)不斷增加喂食大鼠的蒸餾水中乙醇的濃度，當(dāng)蒸餾水中的乙醇濃度達(dá)到40％(V/V)時，再保持這個濃度4周時間。后4周中，還以胃內(nèi)飼喂途徑給每只大鼠口服嗜酸乳桿菌(每只大鼠5×1010CFU，每兩天一次)，所用細(xì)菌在磷酸緩沖鹽溶液(PBS0.01M磷酸緩沖液，0.020M氯化鉀和0.120M氯化鈉、pH7.4)。所用的嗜酸乳桿菌菌種是可從澳大利亞西南威爾士大學(xué)微生物及免疫學(xué)培養(yǎng)物保藏學(xué)院獲得的VRI-001。
對照大鼠(n＝8)除了僅僅給予PBS(沒有乳桿菌)外，采用上述相同的方式處理。
8周結(jié)束時采用標(biāo)準(zhǔn)光量法在雙色分析儀(澳大利亞紐卡斯?fàn)柤s翰亨特醫(yī)院生化部(Department of Biochemistry，John Hunter Hospital，Newcastle，Australia))上測定血漿中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)水平(n＝8)。血漿ALT水平與肝損傷正相關(guān)，其中血漿中ALT水平的測量是一個公認(rèn)的可用于評估肝臟損傷的標(biāo)準(zhǔn)方法學(xué)。
結(jié)果顯示在附

圖1中，其表明，喂食嗜酸乳桿菌的大鼠比不接受益生菌的大鼠有顯著少的ALT(P＜0.03)。因此，給予嗜酸乳桿菌能夠減少肝損傷。酒精誘導(dǎo)的肝損傷模型可以用作一般性的肝損傷模型，特別是，此模型與諸如病毒性肝炎等疾病不僅在肝損傷方面且在細(xì)胞反應(yīng)方面都具有共同性。因此，所獲結(jié)果可以用于指示給患有這些疾病的患者施用益生菌的效果。
實施例2酒精誘導(dǎo)的肝損傷大鼠模型也可以用作內(nèi)毒素血癥的一般模型，因為在這些大鼠的循環(huán)系統(tǒng)中有高水平的內(nèi)毒素。
乳酸細(xì)菌是革蘭氏陽性菌，其短暫地寄居在胃腸道內(nèi)。令人驚訝地發(fā)現(xiàn)，在上述動物模型中，補充乳酸細(xì)菌——嗜酸乳桿菌可減少循環(huán)的內(nèi)毒素水平。
在(給予40％酒精的第一天之后)第0、14、28天對實施例1所描述的大鼠進(jìn)行尾部取血，采用鱟變形細(xì)胞溶解物試驗(LAL)測定血漿中的內(nèi)毒素水平(見J.C.Hurley(1995)內(nèi)毒素血癥檢測方法和臨床相關(guān)性，Clin.Microbiol.Rev.8268-292中的討論)，LAL由美國馬薩諸塞州伍茲赫爾的卡普克德公司(Cape Code Inc.，Woods Hole，MA，USA)提供。如圖2所示，與喂食鹽水的大鼠相比，第14和28天在喂食嗜酸乳桿菌的大鼠中檢測到的內(nèi)毒素水平較低。
不拘泥于理論，由此可以推測，嗜酸乳桿菌能夠調(diào)節(jié)內(nèi)毒素的轉(zhuǎn)移。
實施例3為了證明降低內(nèi)毒素水平的能力并不僅僅局限在上述酒精誘導(dǎo)的肝損傷大鼠模型中，用益生發(fā)酵乳桿菌預(yù)先處理酒精誘導(dǎo)的炎癥性腸病小鼠模型，以確定益生菌對此條件下誘導(dǎo)的內(nèi)毒素的影響。
益生菌對循環(huán)內(nèi)毒素的影響給雌性BALB/c小鼠(5只8周齡小鼠為1組)連續(xù)喂食1×109個發(fā)酵乳桿菌(VRI-002菌株，從澳大利亞悉尼西南威爾士大學(xué)微生物和免疫學(xué)培養(yǎng)物保藏學(xué)院獲得)三天，然后采用細(xì)管通過直腸向小鼠結(jié)腸部位施用45％乙醇溶液進(jìn)行攻擊。對照小鼠喂食PBS。
攻擊后兩天，殺死小鼠并且用上面描述過的LAL試驗分析血漿中內(nèi)毒素的水平。
如圖3所示，在未接受處理的小鼠(正常)或者施用酒精前喂食發(fā)酵乳桿菌的小鼠的血液中都沒有檢測到內(nèi)毒素，而用酒精處理且喂食PBS的小鼠有顯著高的內(nèi)毒素水平。結(jié)果指出，在這個乙醇誘導(dǎo)的炎癥性腸病小鼠模型中，在誘導(dǎo)炎癥性腸病之前施用益生菌可以阻止通常會伴隨該疾病出現(xiàn)的內(nèi)毒素水平升高。
實施例4腸道菌群平衡和內(nèi)毒素血癥的關(guān)系為調(diào)查血液內(nèi)毒素的增加或減少與存在的腸道菌群的量是否有關(guān)，測定糞便中大腸菌(coliform bacteria)和腸細(xì)菌(enteric bacteria)的寄居水平。將實施例3所用小鼠的糞便懸浮在PBS中，將10倍逐級稀釋物分別接種在含McConkey CM7瓊脂培養(yǎng)基的培養(yǎng)板上，2-3天后，統(tǒng)計菌落數(shù)，結(jié)果表示為log10菌落形成單位(CFU)/克糞便。如圖4所示，盡管在喂食發(fā)酵乳桿菌的組中大腸菌增加(1log)，但觀察到結(jié)腸中腸細(xì)菌有6-7log減少，這與血液中檢測不到內(nèi)毒素是相關(guān)的。
不拘泥于理論，這些數(shù)據(jù)顯示通過抑制脅迫后腸道中革蘭氏陰性腸細(xì)菌的生長，益生菌能夠控制血液中的內(nèi)毒素水平。
盡管本發(fā)明已經(jīng)通過具體的實施例加以描述，但本領(lǐng)域技術(shù)人員將明了，本發(fā)明可以以許多其他形式具體體現(xiàn)。
權(quán)利要求
1.預(yù)防和/或治療內(nèi)毒素血癥的方法，包括給需要此治療的哺乳動物施用有效量的益生菌。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中哺乳動物患有肝臟疾病。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的方法，其中肝臟疾病是肝炎。
4.根據(jù)權(quán)利要求2的方法，其中肝臟疾病是酒精誘導(dǎo)的肝臟疾病。
5.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中哺乳動物患有炎癥性腸病。
6.治療酒精誘導(dǎo)的肝臟疾病的方法，包括給需要此治療的哺乳動物施用治療上有效量的益生菌。
7.治療炎癥性腸病的方法，包括給需要此治療的哺乳動物施用治療上有效量的益生菌。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-7之任一項的方法，其中哺乳動物是人。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-8之任一項的方法，其中益生菌是乳桿菌。
10.根據(jù)權(quán)利要求9的方法，其中乳桿菌是嗜酸乳桿菌。
11.根據(jù)權(quán)利要求10的方法，其中嗜酸乳桿菌是VRI-001菌株。
12.根據(jù)權(quán)利要求9的方法，其中乳桿菌是發(fā)酵乳桿菌。
13.根據(jù)權(quán)利要求12的方法，其中發(fā)酵乳桿菌是VRI-002菌株。
14.根據(jù)權(quán)利要求1-13之任一項的方法，其中益生菌通過口服、通過栓劑或利用插管法通過胃部途徑給藥。
15.根據(jù)權(quán)利要求14的方法，其中益生菌是片劑或者膠囊形式。
16.根據(jù)權(quán)利要求15的方法，其中片劑或者膠囊包含108至1012CFU的益生菌。
17.根據(jù)權(quán)利要求14的方法，其中益生菌采取食物組合物的形式。
18.根據(jù)權(quán)利要求17的方法，其中食物是奶制品或者豆制品。
19.益生菌在制備用于預(yù)防和/或治療哺乳動物內(nèi)毒素血癥的藥物中的用途。
20.益生菌在制備用于預(yù)防和/或治療酒精誘導(dǎo)的肝臟疾病的藥物中的用途。
21.益生菌在制備用于預(yù)防和/或治療炎癥性腸病的藥物中的用途。
22.根據(jù)權(quán)利要求19至21中任一項的用途，其中哺乳動物是人。
23.根據(jù)權(quán)利要求19至22中任一項的用途，其中益生菌是乳桿菌。
24.根據(jù)權(quán)利要求23的用途，其中乳桿菌是嗜酸乳桿菌。
25.根據(jù)權(quán)利要求24的用途，其中嗜酸乳桿菌是VRI-001菌株。
26.根據(jù)權(quán)利要求23的方法，其中乳桿菌是發(fā)酵乳桿菌。
27.根據(jù)權(quán)利要求26的方法，其中發(fā)酵乳桿菌是VRI-002菌株。
28.根據(jù)權(quán)利要求19至27中任一項的用途，其中益生菌通過口服或直腸給藥，或者利用插管法通過胃內(nèi)途徑給藥。
29.根據(jù)權(quán)利要求28的用途，其中益生菌是片劑或者膠囊形式。
30.根據(jù)權(quán)利要求29的用途，其中片劑或者膠囊含有108至1012CFU益生菌。
31.根據(jù)權(quán)利要求28的用途，其中益生菌采取食物組合物的形式。
32.根據(jù)權(quán)利要求31的用途，其中食物是奶制品或者豆制品。
33.評價益生菌在預(yù)防和/或治療哺乳動物內(nèi)毒素血癥方面的效果的方法，包括(a)給哺乳動物施用內(nèi)毒素和/或內(nèi)毒素誘導(dǎo)劑，和/或在哺乳動物上造成內(nèi)毒素引起的損傷；(b)給哺乳動物施用益生菌；和(c)確定益生菌對內(nèi)毒素血癥的效果。
34.評價益生菌在預(yù)防和/或治療哺乳動物酒精誘導(dǎo)的肝臟疾病方面的效果的方法，包括(a)給哺乳動物施用酒精；(b)給哺乳動物施用益生菌；和(c)確定益生菌對動物肝臟疾病的效果。
35.評價益生菌在預(yù)防和/或治療哺乳動物炎癥性腸病方面的效果的方法，包括(a)施用造成腸道炎癥的藥劑；(b)給哺乳動物施用益生菌；和(c)確定益生菌對腸道疾病的效果。
36.根據(jù)權(quán)利要求33-36之任一項的方法，其中步驟(a)和(b)同時進(jìn)行。
37.根據(jù)權(quán)利要求33-36之任一項的方法，其中步驟(a)和(b)相繼進(jìn)行，其中步驟(a)可以在步驟(b)之前或之后進(jìn)行。
38.根據(jù)權(quán)利要求33-37之任一項的方法，其中哺乳動物是人。
39.根據(jù)權(quán)利要求33-37之任一項的方法，其中哺乳動物是嚙齒類動物。
40.根據(jù)權(quán)利要求33-39之任一項的方法，其中將酒精在一段適宜的時間內(nèi)以遞增的濃度施用給哺乳動物。
41.根據(jù)權(quán)利要求40的方法，其中酒精在飲用水中的量為5％到40％。
42.根據(jù)權(quán)利要求41的方法，其中在約2個月的時間段內(nèi)給哺乳動物施用酒精。
43.根據(jù)權(quán)利要求33-39之任一項的方法，其中將酒精遞送到哺乳動物的結(jié)腸。
44.根據(jù)權(quán)利要求43的方法，其中酒精的濃度是45％。
45.根據(jù)權(quán)利要求33-43之任一項的方法，其中益生菌是乳桿菌。
46.根據(jù)權(quán)利要求45的方法，其中乳桿菌是嗜酸乳桿菌。
47.根據(jù)權(quán)利要求46的方法，其中嗜酸乳桿菌是VRI-001菌株。
48.根據(jù)權(quán)利要求45的方法，其中益生菌是發(fā)酵乳桿菌。
49.根據(jù)權(quán)利要求48的方法，其中發(fā)酵乳桿菌是VRI-002菌株。
50.根據(jù)權(quán)利要求33-49之任一項的方法，其中益生菌通過口服、通過栓劑或者利用插管法通過胃內(nèi)途徑給藥。
51.根據(jù)權(quán)利要求50的方法，其中益生菌是片劑或者膠囊形式。
52.根據(jù)權(quán)利要求51的方法，其中片劑或者膠囊含有108至1012CFU益生菌。
53.根據(jù)權(quán)利要求50的方法，其中益生菌采取食物組合物的形式。
54.根據(jù)權(quán)利要求53的方法，其中食物是奶制品或者豆制品。
55.根據(jù)權(quán)利要求39的方法，其中每兩天一次施用5×1010CFU益生菌。
56.根據(jù)權(quán)利要求55的方法，其中益生菌存在于磷酸緩沖鹽溶液(PBS)中。
57.根據(jù)權(quán)利要求56的方法，其中益生菌通過胃內(nèi)喂食方式給藥。
58.根據(jù)權(quán)利要求33-57之任一項的方法，其中通過測量直接和/或間接指示循環(huán)內(nèi)毒素水平的參數(shù)，確定益生菌對內(nèi)毒素血癥的效果。
59.根據(jù)權(quán)利要求58的方法，其中通過測量內(nèi)毒素水平確定益生菌對內(nèi)毒素血癥的效果。
60.根據(jù)權(quán)利要求34的方法，其中通過測量直接和/或間接指示肝臟損傷的參數(shù)，確定益生菌對肝臟疾病的效果。
61.根據(jù)權(quán)利要求61的方法，其中指示損傷水平的參數(shù)的測量是血漿丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)水平的測量，其中ALT的減少指示益生菌對內(nèi)毒素血癥有積極的效果。
62.根據(jù)權(quán)利要求34的方法，其中通過測量直接和/或間接指示循環(huán)內(nèi)毒素水平的參數(shù)，確定益生菌對肝臟疾病的效果。
63.根據(jù)權(quán)利要求62的方法，其中通過直接測量內(nèi)毒素水平確定益生菌對肝臟疾病的效果。
64.根據(jù)權(quán)利要求63的方法，其中內(nèi)毒素水平是通過鱟變性細(xì)胞溶解物試驗(LAL)測定的。
65.根據(jù)權(quán)利要求35的方法，其中將酒精施用到哺乳動物的直腸中。
66.控制哺乳動物的循環(huán)內(nèi)毒素水平的方法，包括通過施用益生菌抑制革蘭氏陰性腸細(xì)菌的生長。
67.根據(jù)權(quán)利要求66的方法，其中益生菌是嗜酸乳桿菌。
68.根據(jù)權(quán)利要求67的方法，其中嗜酸乳桿菌是VRI-001菌株。
69.根據(jù)權(quán)利要求66的方法，其中益生菌是發(fā)酵乳桿菌。
70.根據(jù)權(quán)利要求69的方法，其中發(fā)酵乳桿菌是VRI-002菌株。
全文摘要
本發(fā)明涉及預(yù)防和治療內(nèi)毒素血癥及相關(guān)疾病的方法，具體地，本發(fā)明涉及用益生菌預(yù)防和治療內(nèi)毒素血癥及相關(guān)疾病的方法；本發(fā)明也涉及用于評價益生菌對內(nèi)毒素血癥及相關(guān)疾病的預(yù)防和治療效果的方法。
文檔編號C12Q1/02GK1446103SQ01813695
公開日2003年10月1日 申請日期2001年7月3日 優(yōu)先權(quán)日2000年7月3日
發(fā)明者G·龐, J·凱德, R·L·克蘭西, R·貝蒂, M·L·鄧克利, P·康威 申請人:普羅本多有限公司