一種大型石斑魚手術(shù)植入式雄性化方法
【專利摘要】一種大型石斑魚手術(shù)植入式雄性化方法，屬于水產(chǎn)育種技術(shù)領(lǐng)域。先制作激素藥條，再植入魚體。相對于藥餌式雄性化技術(shù)，藥條植入方式的雄性化率高，可達(dá)100％，不會(huì)出現(xiàn)復(fù)雌現(xiàn)象，藥餌式適用于小型石斑魚種類；相對于槍式植入式，手術(shù)植入式的藥劑量易于控制，一次植入終生有效，無需強(qiáng)化補(bǔ)充植入，手術(shù)簡單可靠，損傷小。方法簡單，易于控制，不受污染，制作好的藥條可長時(shí)間存放。藥條植埋后，當(dāng)季雄性化率達(dá)100％；手術(shù)感染率和死亡率為0。雄性化后性成熟的親魚在繁殖階段體表出現(xiàn)交配色，有交配行為出現(xiàn)；擠壓腹部生殖孔可排出精液，顯微鏡鏡檢下精子運(yùn)動(dòng)活躍；雌魚產(chǎn)卵時(shí)雄性化的雄魚所產(chǎn)精液可使卵子完成受精過程，并正常發(fā)育。
【專利說明】
一種大型石斑魚手術(shù)植入式雄性化方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明屬于水產(chǎn)育種技術(shù)領(lǐng)域，涉及魚的雄性化方法，尤其是涉及一種大型石斑魚手術(shù)植入式雄性化方法。
【背景技術(shù)】
[0002]石斑魚是海水魚類中經(jīng)濟(jì)價(jià)值最高的種類。在全世界100多種石斑魚中，按其成體規(guī)格，可以分成大型和小型二類。小型石斑魚就是我們常見的赤點(diǎn)石斑魚(紅斑)和青石斑魚(土斑)這樣的小型個(gè)體的石斑魚，其外部特征是，個(gè)體小，已知最大個(gè)體一般在l-2kg以下；生長慢，從魚種開始人工養(yǎng)殖二周年最大個(gè)體體重一般不超過lkg。大型石斑魚的種類很多，常見經(jīng)濟(jì)種類有斜帶石斑魚、云紋石斑魚、褐石斑魚、龍膽石斑魚等，個(gè)體都較大，已知最大個(gè)體一般可以達(dá)到幾十甚至數(shù)百kg;生長快，從魚種開始養(yǎng)殖一般一年可以達(dá)到Ikg甚至更大。由于石斑魚人工繁殖及規(guī)?；斯び绲某晒?，其養(yǎng)殖近年來增長很快。這種增長主要依靠大型石斑魚養(yǎng)殖量的增長。但是石斑魚是雌雄同體雌性先熟的種類，小型石斑魚很容易實(shí)現(xiàn)雄性化且群體中可以出現(xiàn)較多數(shù)量的雄性個(gè)體，而大型石斑魚雄性個(gè)體不易獲得。所有大型石斑魚種類，生長期至少需要7齡才可能出現(xiàn)雄性個(gè)體;在一個(gè)局域性小群體中，只能有一個(gè)雄性個(gè)體存在。缺少雄性親魚，是大型石斑魚工人繁殖的主要制約因素。本項(xiàng)技術(shù)，采用手術(shù)植入激素藥條的方式，使雌性個(gè)體實(shí)現(xiàn)雄性化，為大型石斑魚的人工繁殖和育苗生產(chǎn)提供雄性親魚。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的是提供方法簡便、雄性化率可達(dá)100%、不會(huì)出現(xiàn)復(fù)雌現(xiàn)象的一種大型石斑魚手術(shù)植入式雄性化方法。
[0004]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案:
[0005]—種大型石斑魚手術(shù)植入式雄性化方法，包括以下步驟:
[0006]I)激素藥條的制作:準(zhǔn)備3個(gè)燒杯，在第一燒杯中用移液管先后加入蒸餾水和明膠顆粒，第二燒杯中用移液管先后加入蒸餾水和阿拉伯膠顆粒，第一燒杯和第二燒杯均加熱攪拌至溶解均勻，從而分別制成明膠溶液和阿拉伯膠溶液;再取第三燒杯，加入激素粉劑和植物油，在明膠溶液和阿拉伯膠溶液冷卻至接近常溫時(shí)，用移液管取明膠水溶液和阿拉伯膠水溶液加入第三燒杯中，攪拌均勻成糊狀藥劑，然后將藥劑移入玻璃成型盤中，將藥劑鋪平，使藥劑在成型盤中成為平板狀;然后用手術(shù)刀片將成型盤中尚未完全固化的平板狀藥劑間隔橫切制成藥條，在藥條完全固化后即可裝入試劑瓶中密閉冷藏待用，所有制作過程在無菌操作箱中進(jìn)行；
[0007]2)植入魚體:在繁殖季節(jié)前6個(gè)月左右，選擇需要雄性化的健康大型石斑魚成體，移入池邊便于操作的小網(wǎng)箱中進(jìn)行手術(shù)，手術(shù)前將石斑魚麻醉，用魚夾將魚夾緊，置于手術(shù)臺(tái)上，露出魚背部;然后用手術(shù)刀片在石斑魚背肌上切開I個(gè)刀口，再用通條的針頭端從該刀口與魚體縱軸成30°?45°夾角插入背肌，然后取出通條，將藥條從刀口處沿通條插入的通道插入背肌中，用通條的鈍性端將藥條頂入通道深部，手術(shù)前后石斑魚體的手術(shù)刀口區(qū)域需用抗生素針劑清洗。
[0008]步驟I)中，所述第一燒杯中，蒸餾水與明膠顆粒的比例，按質(zhì)量比可為9:(0.8?
1.2)，優(yōu)選9:1;所述第二燒杯中，蒸餾水與阿拉伯膠顆粒的比例，按質(zhì)量比可為9: (0.8?1.2)，優(yōu)選9: I;所述第三燒杯中，激素粉劑與植物油的比例，按質(zhì)量比可為1:(0.003?0.007)，優(yōu)選 1:0.005。
[0009]步驟I)中，所述激素粉劑可采用17a-Methy I testosterone，純度彡97%的產(chǎn)品。
[0010]步驟I)中，所述平板狀藥劑的切制方法最好為:按0.2cm的間隔橫切9刀，所制藥劑切成10條2cm長、橫切面為0.2cmX 0.2cm的藥條。
[0011 ] 步驟2)中，所述刀口可為0.3?0.6cm寬度的刀口，最好為0.5cm寬度的刀口。
[0012]步驟2)中，所述藥條植入量與魚體重量相關(guān)，魚體體重小于5kg可植入半根藥條，魚體體重5?1kg可植入I根藥條，所述藥條為2cm長、橫切面為0.2cm X 0.2cm的藥條。
[0013]步驟2)中，所述抗生素針劑可為慶大霉素針劑。
[0014]與現(xiàn)有技術(shù)比較，本發(fā)明的有益效果如下:
[0015]本發(fā)明提供一種簡便、可靠、有效的利用人工配制的激素藥條手術(shù)植入大型石斑魚成體背肌內(nèi)使其實(shí)現(xiàn)雄性化的技術(shù)方法，旨在為大型石斑魚人工繁殖和育苗生產(chǎn)提供雄性親魚。相對于藥餌式雄性化技術(shù)，藥條植入方式的雄性化率高，可以達(dá)到100%，不會(huì)出現(xiàn)復(fù)雌現(xiàn)象，藥餌式適用于小型石斑魚種類;相對于槍式植入式，手術(shù)植入式的藥劑量易于控制，一次植入終生有效，無需強(qiáng)化補(bǔ)充植入，手術(shù)簡單可靠，損傷小;藥條制作方法簡單，易于控制，不受污染，制作好的藥條可以長時(shí)間存放。
[0016]本發(fā)明經(jīng)斜帶石斑魚、云紋石斑魚、褐石斑魚、龍膽石斑魚等大型石斑魚上的數(shù)十例試驗(yàn)，結(jié)果表明:藥條植埋后，當(dāng)季雄性化率達(dá)到100 手術(shù)感染率和死亡率為O。經(jīng)手術(shù)5?8年的觀察，尚未發(fā)現(xiàn)復(fù)雌現(xiàn)象。雄性化后性成熟的親魚在繁殖階段體表出現(xiàn)交配色，有交配行為出現(xiàn);擠壓腹部生殖孔可以排出精液，顯微鏡鏡檢下精子運(yùn)動(dòng)活躍;雌魚產(chǎn)卵時(shí)雄性化的雄魚所產(chǎn)精液可使卵子完成受精過程，并正常發(fā)育。
【具體實(shí)施方式】
[0017]以下實(shí)施例將對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。
[0018]一種大型石斑魚手術(shù)植入式雄性化方法，包括以下步驟:
[0019]I)激素藥條的制作:取二個(gè)10ml燒杯，用移液管分別加入18ml蒸餾水，一個(gè)燒杯加入2g明膠顆粒，另一個(gè)燒杯加入2g阿拉伯膠顆粒，分別用酒精燈加熱使其溶解，加熱時(shí)用玻璃棒輕輕攪拌使其受熱溶解均勻，制成10%的明膠溶液和10%的阿拉伯膠溶液;再取另一個(gè)50ml燒杯，加入1g激素粉劑(17a-Me thy I testosterone，純度^ 97 %，美國進(jìn)口)和一滴植物油，在明膠和阿拉伯膠冷卻至接近常溫時(shí)，用移液管取2.5ml 10%明膠水溶液和2.5ml阿拉伯膠水溶液加入已放置激素的燒杯中，用玻璃棒攪拌使其均勻成糊狀，然后將藥團(tuán)移入體積為2cm(長)X2cm(寬)X0.2cm(厚)的玻璃制成型盤中；將藥劑鋪平，使其在成型盤中成為2cm(長)X2cm(寬)X0.2cm(厚)的平板狀;一個(gè)小時(shí)后，移去固化盤邊框，用手術(shù)刀片將成型盤中尚未完全固化的平板狀藥劑按0.2cm的間隔橫切9刀，所制藥劑即成10條2cm長、橫切面為0.2cm X 0.2cm的藥條。在藥條完全固化后即可裝入50ml試劑瓶中密閉放入冰箱待用。以上所有制作過程需在無菌操作箱中進(jìn)行。
[0020]2)植入魚體:在繁殖季節(jié)前6個(gè)月左右，選擇需要雄性化的健康大型石斑魚成體，移入池邊便于操作的小網(wǎng)箱中。手術(shù)前先用丁香酚將魚麻醉，用魚夾將魚夾緊，置于手術(shù)臺(tái)上，露出魚背部；用手術(shù)刀片在背肌上切開一個(gè)0.5cm的刀口，再用通條(長10cm，直徑0.3cm，不銹鋼制，一端尖銳，一端平鈍)的針頭端從刀口與魚體縱軸成30°?45°夾角插入背肌，插入的深度一般為5cm;取出通條，用鑷子夾藥條從刀口處沿通條插入的通道插入背肌中，用通條的鈍性端將藥條頂入通道深部。藥條用量與魚體重量相關(guān)，魚體體重小于5kg僅需植入半根(Icm長)藥條;魚體體重5?1kg需植入I根(長2cm)藥條。手術(shù)前后魚體的手術(shù)刀口區(qū)域需用慶大霉素針劑清洗。
[0021]本發(fā)明的理論依據(jù)是:Kallmann, Kosswig電等人通過實(shí)驗(yàn)證實(shí)了常染色體上性別決定基因的存在，Yamarmoto提出了多基因模型(Polygenic model)，以解釋魚類性別決定現(xiàn)象。此模型認(rèn)為雄性因子(M)和雌性因子(F)的主要部分分別存在于Y和X染色體上，同時(shí)，常染色體上亦分布有它們的同義因子?；蛐蜑锳AXX的個(gè)體是遺傳的雌魚，其性因了是EF>ΣΜ，所以誘導(dǎo)物(雌性決定素)比雄性誘導(dǎo)物(雄性決定素)產(chǎn)生得多，因而能使未分化性腺誘導(dǎo)為卵巢。反之，AAXY個(gè)體產(chǎn)生更多的雄性誘導(dǎo)物(雄性決定素)而使未分化性腺誘導(dǎo)為精巢?？墒怯眠m量的雌(雄)性誘導(dǎo)物質(zhì)投喂ΑΑΧΥ(ΑΑΧΧ)幼魚，就能誘導(dǎo)未分化性腺，使之成為卵(精)巢。1969年，日本學(xué)者Yamamoto和Kajishima首次對魚類的性別決定機(jī)制進(jìn)行了系統(tǒng)的闡述，總結(jié)了魚類的性腺類型、雌雄同體現(xiàn)象、性別決定的遺傳學(xué)基礎(chǔ)以及性類固醇激素對性分化的影響，提出類固醇激素是白然的“性誘導(dǎo)劑”，雌激素是“雌性誘導(dǎo)劑”，而雄激素是“雄性誘導(dǎo)劑。迄今為止，至少在15個(gè)科47種魚類進(jìn)行了激素誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)并取得了良好的誘導(dǎo)效果。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種大型石斑魚手術(shù)植入式雄性化方法，其特征在于，包括以下步驟: 1)激素藥條的制作:準(zhǔn)備3個(gè)燒杯，在第一燒杯中用移液管先后加入蒸餾水和明膠顆粒，第二燒杯中用移液管先后加入蒸餾水和阿拉伯膠顆粒，第一燒杯和第二燒杯均加熱攪拌至溶解均勻，從而分別制成明膠溶液和阿拉伯膠溶液;再取第三燒杯，加入激素粉劑和植物油，在明膠溶液和阿拉伯膠溶液冷卻至接近常溫時(shí)，用移液管取明膠水溶液和阿拉伯膠水溶液加入第三燒杯中，攪拌均勻成糊狀藥劑，然后將藥劑移入玻璃成型盤中，將藥劑鋪平，使藥劑在成型盤中成為平板狀;然后用手術(shù)刀片將成型盤中尚未完全固化的平板狀藥劑間隔橫切制成藥條，在藥條完全固化后即可裝入試劑瓶中密閉冷藏待用，所有制作過程在無菌操作箱中進(jìn)行； 2)植入魚體:在繁殖季節(jié)前6個(gè)月左右，選擇需要雄性化的健康大型石斑魚成體，移入池邊便于操作的小網(wǎng)箱中進(jìn)行手術(shù)，手術(shù)前將石斑魚麻醉，用魚夾將魚夾緊，置于手術(shù)臺(tái)上，露出魚背部;然后用手術(shù)刀片在石斑魚背肌上切開I個(gè)刀口，再用通條的針頭端從該刀口與魚體縱軸成30°?45°夾角插入背肌，然后取出通條，將藥條從刀口處沿通條插入的通道插入背肌中，用通條的鈍性端將藥條頂入通道深部，手術(shù)前后石斑魚體的手術(shù)刀口區(qū)域需用抗生素針劑清洗。2.如權(quán)利要求1所述一種大型石斑魚手術(shù)植入式雄性化方法，其特征在于，步驟I)中，所述第一燒杯中，蒸餾水與明膠顆粒的比例，按質(zhì)量比為9: (0.8?1.2);所述第二燒杯中，蒸餾水與阿拉伯膠顆粒的比例，按質(zhì)量比為9: (0.8?1.2);所述第三燒杯中，激素粉劑與植物油的比例，按質(zhì)量比為1:(0.003?0.007)。3.如權(quán)利要求2所述一種大型石斑魚手術(shù)植入式雄性化方法，其特征在于，所述第一燒杯中，蒸餾水與明膠顆粒的比例，按質(zhì)量比為9:1;所述第二燒杯中，蒸餾水與阿拉伯膠顆粒的比例，按質(zhì)量比為9:1;所述第三燒杯中，激素粉劑與植物油的比例，按質(zhì)量比為1: 0.005。4.如權(quán)利要求1所述一種大型石斑魚手術(shù)植入式雄性化方法，其特征在于，步驟I)中，所述激素粉劑采用17a-Methy I testosterone，純度彡97%的產(chǎn)品。5.如權(quán)利要求1所述一種大型石斑魚手術(shù)植入式雄性化方法，其特征在于，步驟I)中，所述平板狀藥劑的切制方法為:按0.2cm的間隔橫切9刀，所制藥劑切成10條2cm長、橫切面為0.2cm X 0.2cm的藥條。6.如權(quán)利要求1所述一種大型石斑魚手術(shù)植入式雄性化方法，其特征在于，步驟2)中，所述刀口為0.3?0.6cm寬度的刀口。7.如權(quán)利要求6所述一種大型石斑魚手術(shù)植入式雄性化方法，其特征在于，所述刀口為0.5cm寬度的刀口。8.如權(quán)利要求1所述一種大型石斑魚手術(shù)植入式雄性化方法，其特征在于，步驟2)中，當(dāng)石斑魚魚體體重小于5kg植入半根藥條，當(dāng)石斑魚魚體體重5?1kg植入I根藥條，所述藥條為2cm長、橫切面為0.2cmX 0.2cm的藥條。
【文檔編號】A61D1/00GK105900864SQ201610227585
【公開日】2016年8月31日
【申請日】2016年4月13日
【發(fā)明人】鐘幼平
【申請人】集美大學(xué)