來限制本發(fā)明的范圍。
[0033]實(shí)施例1
[0034]本實(shí)施例涉及一種利用橡膠草葉片再生植物的方法，其具體步驟如下:
[0035]I)取幼嫩的橡膠草葉片，用自來水將表面清洗干凈，將清洗干凈的葉片轉(zhuǎn)移至超凈工作臺內(nèi)并置于無菌的培養(yǎng)瓶中，加入70%酒精進(jìn)行表面消毒lmin，然后用無菌水洗2-3遍，之后換至一個無菌的培養(yǎng)瓶中，加入15 %的雙氧水消毒7min，然后用無菌水沖洗5-6遍，清洗完畢后將葉片置于放有濾紙的平皿里將表面的水吸干，備用；
[0036]2)將葉片切成大約l_2cm2大小的外植體接種到愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基中(參看圖1)，培養(yǎng)溫度為23±2°C，光照光強(qiáng)為2000-2500Lux，每天光照12小時。所述的愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基為:MS+2.0mg/L 6-BA+0.5mg/L IAA,并添加蔗糖 30g/L，瓊脂 7g/L，pH 調(diào)整至 6.0-7.0，121±2°C，蒸氣壓力103.4kPa滅菌15分鐘。外植體接入愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基后15天開始啟動，第25-30天的時候誘導(dǎo)出的愈傷組織已經(jīng)在材料與培養(yǎng)基接觸的外圍長滿了厚實(shí)的一圈，呈淡黃綠色，結(jié)構(gòu)酥松(參看圖2);
[0037]3)將愈傷組織轉(zhuǎn)接到愈傷組織繼代培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代，繼代培養(yǎng)溫度為23 ± 2 °C，光照光強(qiáng)為2000-2500Lux，每天光照12小時。所述的愈傷組織繼代培養(yǎng)基為:MS+1.5mg/L 6-BA+0.3mg/L IAA,并添加蔗糖 30g/L，瓊脂 7g/L，pH 調(diào)整至 6.0-7.0，121±2°C，蒸氣壓力103.4kPa滅菌15分鐘。
[0038]4)愈傷組織增殖至所需數(shù)量時，將愈傷組織轉(zhuǎn)接至不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上進(jìn)行不定芽誘導(dǎo)，培養(yǎng)溫度為23±2°C，光照光強(qiáng)為2500-3000LUX，每天光照16小時。所述的不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為:MS+1.0mg/L 6-BA,并添加蔗糖20g/L，瓊脂7g/L，pH調(diào)整至6.0-7.0，121±2°C，蒸氣壓力103.4kPa滅菌15分鐘。
[0039]5)不定芽長至3-5cm時，一般需要15_20天(參看圖3)，將不定芽切下并轉(zhuǎn)接至生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根，培養(yǎng)溫度為23±2°C，光照光強(qiáng)為2500-3000Lux，每天光照16小時。所述的生根培養(yǎng)基為:l/2MS+0.4mg/L IAA，并添加蔗糖15g/L，瓊脂7g/L，pH調(diào)整至6.0-7.0，121±2°C，蒸氣壓力 103.4kPa 滅菌 15 分鐘。
[0040]6)不定芽轉(zhuǎn)接生根培養(yǎng)基后20-25天，根可長至8-10cm(參看圖4)，這時將生根后的苗連同培養(yǎng)瓶從培養(yǎng)箱中移至室溫?zé)捗?天，然后將苗從培養(yǎng)基中取出，洗凈根部培養(yǎng)基，移栽至穴盤中，基質(zhì)為泥炭土:蛭石=4:1，穴盤上方用帶薄膜的罩子覆蓋并保持80%空氣濕度和25±2°C的溫度條件，兩周后去除罩子，逐步進(jìn)行正常水肥管理。
[0041]根據(jù)以上方法，從離體葉片誘導(dǎo)愈傷組織的誘導(dǎo)率為96.3% (成功誘導(dǎo)出愈傷的葉片數(shù)占接種葉片總數(shù)的比例)，不定芽的誘導(dǎo)率為97.2% (能夠分化出不定芽的愈傷數(shù)占轉(zhuǎn)接愈傷總數(shù)的比例)，誘導(dǎo)生根的效率超過99% (能夠成功誘導(dǎo)出根的不定芽數(shù)占轉(zhuǎn)接不定芽總數(shù)的比例)，可以使植株在短時間內(nèi)得到大量地增殖。
[0042]實(shí)施例2
[0043]本實(shí)施例涉及一種利用橡膠草葉片再生植株的方法，其具體步驟如下:
[0044]I)取幼嫩的橡膠草葉片，用自來水將表面清洗干凈，將清洗干凈的葉片轉(zhuǎn)移至超凈工作臺內(nèi)并置于無菌的培養(yǎng)瓶中，加入70%酒精進(jìn)行表面消毒lmin，然后用無菌水洗2-3遍，之后換至一個無菌的培養(yǎng)瓶中，加入15 %的雙氧水消毒7min，然后用無菌水沖洗5-6遍，清洗完畢后將葉片置于放有濾紙的平皿里將表面的水吸干，備用。
[0045]2)將葉片切成大約I?2cm2大小的外植體接種到愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度為23±2°C，光照光強(qiáng)為2000-2500LUX，每天光照12小時。所述的愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基為:MS+1.8mg/L 6-BA+0.4mg/L NAA,并添加蔗糖 25g/L，瓊脂 6g/L，pH 調(diào)整至 6.0-7.0，121±2°C，蒸氣壓力103.4kPa滅菌15分鐘。外植體接入愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基后15天開始啟動，第25-30天的時候誘導(dǎo)出的愈傷組織已經(jīng)在材料與培養(yǎng)基接觸的外圍長滿了厚實(shí)的一圈，呈淡黃綠色，結(jié)構(gòu)酥松。
[0046]3)將愈傷組織轉(zhuǎn)接到愈傷組織繼代培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代，繼代培養(yǎng)溫度為23 ± 2 °C，光照光強(qiáng)為2000-2500Lux，每天光照12小時。所述的愈傷組織繼代培養(yǎng)基為:MS+1.3mg/L 6-BA+0.lmg/L NAA,并添加蔗糖 25g/L，瓊脂 6g/L，pH 調(diào)整至 6.0-7.0，121±2°C，蒸氣壓力103.4kPa滅菌15分鐘。
[0047]4)愈傷組織增殖至所需數(shù)量時，可將愈傷組織轉(zhuǎn)接至不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上進(jìn)行不定芽誘導(dǎo)，培養(yǎng)溫度為23±2°C，光照光強(qiáng)為2500-3000LUX，每天光照16小時。所述的不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為:MS+0.8mg/L 6-BA,并添加蔗糖15g/L，瓊脂5g/L，pH調(diào)整至6.0-7.0，121±2°C，蒸氣壓力103.4kPa滅菌15分鐘。
[0048]5)不定芽長至3_5cm時，一般需要15_20天，將不定芽切下并轉(zhuǎn)接至生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根，培養(yǎng)溫度為23±2°C，光照光強(qiáng)為2500-3000Lux，每天光照16小時。所述的生根培養(yǎng)基為:l/2MS+0.3mg/L NAA，并添加蔗糖10g/L，瓊脂5g/L，pH調(diào)整至6.0-7.0，121±2°C，蒸氣壓力103.4kPa滅菌15分鐘。
[0049]6)不定芽轉(zhuǎn)接生根培養(yǎng)基后20-25天，根可長至8-lOcm，這時將生根后的苗連同培養(yǎng)瓶從培養(yǎng)箱中移至室溫?zé)捗?天，然后將苗從培養(yǎng)基中取出，洗凈根部培養(yǎng)基，移栽至穴盤中，基質(zhì)為泥炭土:蛭石=4:1，穴盤上方用帶薄膜的罩子覆蓋并保持90%的空氣濕度和25±2°C的溫度條件，兩周后去除罩子，逐步進(jìn)行正常水肥管理。
[0050]根據(jù)以上方法，從離體葉片誘導(dǎo)愈傷組織的誘導(dǎo)率為95.8%，不定芽的誘導(dǎo)率為97.6%，誘導(dǎo)生根的效率超過99%，可以使植株在短時間內(nèi)得到大量地增殖。
[0051]實(shí)施例3
[0052]本實(shí)施例涉及一種利用橡膠草葉片再生植株的方法，其具體步驟如下:
[0053]I)取幼嫩的橡膠草葉片，用自來水將表面清洗干凈，將清洗干凈的葉片轉(zhuǎn)移至超凈工作臺內(nèi)并置于無菌的培養(yǎng)瓶中，加入70%酒精進(jìn)行表面消毒lmin，然后用無菌水洗2-3遍，之后換至一個無菌的培養(yǎng)瓶中，加入15 %的雙氧水消毒7min，然后用無菌水沖洗5-6遍，清洗完畢后將葉片置于放有濾紙的平皿里將表面的水吸干，備用；
[0054]2)將葉片切成大約l-2cm2大小的外植體接種到愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度為23±2°C，光照光強(qiáng)為2000-2500LUX，每天光照12小時。所述的愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基為:MS+2.2mg/L 6-BA+0.6mg/L IAA，并添加蔗糖 35g/L，瓊脂 8g/L，pH 調(diào)整至 6.0-7.0，121±2°C，蒸氣壓力103.4kPa滅菌15分鐘。外植體接入愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基后15天開始啟動，第25-30天的時候誘導(dǎo)出的愈傷組織已經(jīng)在材料與培養(yǎng)基接觸的外圍長滿了厚實(shí)的一圈，呈淡黃綠色，結(jié)構(gòu)酥松；
[0055]3)將愈傷組織切轉(zhuǎn)接到愈傷組織繼代培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代，繼代培養(yǎng)溫度為23 ± 2 °C，光照光強(qiáng)為2000-2500Lux，每天光照12小時。所述的愈傷組織繼代培養(yǎng)基為:MS+1.7mg/L 6-BA+0.3mg/L IAA,并添加蔗糖 30g/L，瓊脂 7g/L，pH 調(diào)整至 6.0-7.0，121±2°C，蒸氣壓力103.4kPa滅菌15分鐘。
[0056]4)愈傷組織增殖至所需數(shù)量時，將愈傷組織轉(zhuǎn)接至不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上進(jìn)行不定芽誘導(dǎo)，培養(yǎng)溫度為23±2°C，光照光強(qiáng)為2500-3000LUX，