一種花椒生物防治抗病促生的方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物防治肥的制備領域，具體涉及一種花椒生物防治抗病促生的方 法。
【背景技術】
[0002] 花椒（ZanthoxylumbungeanumMaxim.)別名檄、大椒、秦椒、蜀椒、川椒或山椒，為 蕓香科、花椒屬落葉灌木或小喬木，可孤植又可作防護刺籬。其果皮可作為調(diào)味料，并可提 取芳香油，又可入藥，種子可食用，也可加工制作肥皂?；ń房沙鞣N肉類的腥氣，促進唾液 分泌，增加食欲，使血管擴張，從而起到降血壓作用，一般人群均能食用，孕婦，陰虛火旺者 忌食?；ń饭麑嵆蕡A形，綠豆大小，其外皮是一種常用香料。果實成熟時紅色或紫紅色果皮 叫椒紅，種子叫椒目，都是中藥材，家庭常用調(diào)味品，花椒植株耐旱、喜陽光，各地多栽種，分 布于山西、陜西、四川、山東、河北、河南等省。
[0003] 由疫霉菌（Phytophthoraspp.)引起的花椒疫霉?。ㄒ喾Q黑胚?。┦且环N重要枝 干病害，冬生疫霉（Phytophthorahibernalis)是主要病原菌之一。植物病理真菌主要存 在于土壤中，在植物生長中感染植物，引起植物病害、造成生產(chǎn)損失。因此，要從生物防治的 角度消除植物真菌病害，殺滅或抑制土壤中的病理真菌至關重要，而使用具有生物防治功 效的生物肥是實現(xiàn)這一目的的有效途徑。在各種生物肥中，長久以來我國應用的都是無芽 孢菌類。但是無芽孢菌抗逆性低，對于干燥高溫的抵抗能力差，所以當制成液體或者吸附劑 時穩(wěn)定性不高。生物肥發(fā)展的新趨勢應是大力發(fā)展抗逆性高、能夠長期穩(wěn)定生存的芽孢桿 菌。特別是芽孢桿菌能夠產(chǎn)生多種抗真菌物質(zhì)，對植物病原菌有顯著抑制作用，并且對人畜 無害，也不會污染環(huán)境，將在防治植物真菌病害中起重要作用。
[0004] 芽孢桿菌形態(tài)上呈直或者近直的桿狀，好氧或者兼性厭氧，革蘭氏陽性，在特定環(huán) 境條件下能產(chǎn)生抗逆性內(nèi)生孢子。芽孢桿菌在植物中廣泛定殖，被認為是公認的食品級安 全微生物（generallyregardedassafety,GRAS)?？莶菅勘U菌是一種典型的芽孢桿菌， 產(chǎn)生抗菌蛋白、多肽類物質(zhì)、脂類物質(zhì)及beta葡聚糖酶等抗菌物質(zhì)，特別是beta葡聚糖酶 等水解酶類與其抗植物病理真菌能力有密切關系，因為真菌細胞壁的組成是葡聚糖。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明提供了一種花椒生物防治抗病促生的方法，通過將產(chǎn)beta葡聚糖酶的枯 草芽孢桿菌（CICC10339)融入花椒天然菌群中，制成能夠通過生物防治途徑有效抑制殺 滅花椒病理真菌的生物肥。
[0006] -種花椒生物防治抗病促生的方法，包括以下步驟：
[0007] 1)將枯草芽孢桿菌（CICC10339)進行培養(yǎng)，制成密度IO9~10ltlCfuAiL的高密度 菌懸液；
[0008] 2)將花椒健康枝條剪成小段進行堆肥，堆肥過程中噴施步驟1)中的高密度菌懸 液，堆肥結束后進行發(fā)酵，經(jīng)發(fā)酵后得到能有效抑制殺滅花椒病理真菌的生物肥，將該生物 肥用在花椒生物防治抗病促生上。
[0009] 本發(fā)明中，將花椒健康枝條剪成小節(jié)堆肥，使所制備生物肥中的菌群即為健康花 椒植株本身天然菌群，此菌群與花椒植株協(xié)同進化生長，形成了互益共生體系，對病害真菌 有一定生物防治作用。進一步地，將能夠產(chǎn)beta葡聚糖酶的枯草芽孢桿菌（CICC10339)加 入堆肥中，顯著加強對花椒病害真菌的生物防治作用?？莶菅挎邨U菌（CICC10339)由于產(chǎn) beta葡聚糖酶，對花椒植株纖維有良好分解作用，為堆肥發(fā)酵過程所必須，故能夠充分融入 到堆肥菌群中穩(wěn)定持久地增殖。如同乳酸菌對于動物的益生作用，抑制殺滅植物病理真菌 的微生物可以稱之為植物益生菌。本發(fā)明所制備生物肥中，枯草芽孢桿菌（CICC10339)即 是花椒益生菌，對花椒病理真菌有顯著生物防治作用。
[0010] 步驟1)中，枯草芽孢桿菌（CICC10339)采用現(xiàn)有技術，來自中國工業(yè)微生物菌 種保藏管理中心（CICC)，地址：北京市朝陽區(qū)酒仙橋中路24號院6號樓；保藏日期為2007 年，菌種保持編號為10339。枯草芽孢桿菌（CICC10339)可以向中國工業(yè)微生物菌種保藏 管理中心購買。
[0011] 將枯草芽孢桿菌（CICC10339)進行培養(yǎng)，包括：枯草芽孢桿菌（CICC10339)的出 發(fā)密度為1〇6~1〇7個/1^，接種至液體培養(yǎng)基中接種量為1%~5 (%，331：~391：振蕩培養(yǎng) 20~28h，至菌液密度為IO9~10ltlCfuAiL的高密度菌懸液。
[0012] 進一步優(yōu)選，將枯草芽孢桿菌（CICC10339)進行培養(yǎng)，包括：枯草芽孢桿菌（CICC 10339)的出發(fā)密度為IO6~10 7個/mL，接種至液體培養(yǎng)基中接種量為2%~3%，36°C~ 37°C振蕩培養(yǎng)22~26h，至菌液密度為IO9~10ltlCfuAiL的高密度菌懸液。
[0013] 所述的液體培養(yǎng)基，以IL計，包括以下組分：
[0014]
【主權項】
1. 一種花椒生物防治抗病促生的方法，其特征在于，包括以下步驟： 1) 將枯草芽孢桿菌CICC 10339進行培養(yǎng)，制成密度IO9~10 1(lcfu/mL的高密度菌懸 液； 2) 將花椒健康枝條剪成小段進行堆肥，堆肥過程中噴施步驟1)中的高密度菌懸液，堆 肥結束后進行發(fā)酵，經(jīng)發(fā)酵后得到能有效抑制殺滅花椒病理真菌的生物肥，將該生物肥用 在花椒生物防治抗病促生上。
2. 根據(jù)權利要求1所述的花椒生物防治抗病促生的方法，其特征在于，步驟1)中，將 枯草芽孢桿菌CICC 10339進行培養(yǎng)，包括：枯草芽孢桿菌CICC 10339的出發(fā)密度為IO6~ IO7個/mL，接種至液體培養(yǎng)基中接種量為1%~5%，33°C~39°C振蕩培養(yǎng)20~28h，至菌 液密度為IO 9~10 lclcfu/mL的高密度菌懸液。
3. 根據(jù)權利要求2所述的花椒生物防治抗病促生的方法，其特征在于，步驟1)中，將 枯草芽孢桿菌CICC 10339進行培養(yǎng)，包括：枯草芽孢桿菌CICC 10339的出發(fā)密度為IO6~ IO7個/mL，接種至液體培養(yǎng)基中接種量為2%~3%，36°C~37°C振蕩培養(yǎng)22~26h，至菌 液密度為IO 9~10 lclcfu/mL的高密度菌懸液。
4. 根據(jù)權利要求2或3所述的花椒生物防治抗病促生的方法，其特征在于，所述的液體 培養(yǎng)基，以IL計，包括以下組分： 葡萄糖 11~17g; 牛肉膏 20~30g; 磷酸二氫鉀 1.5~3.5g; 花生餅粉 7~13g; 調(diào)節(jié) pH=6.5~7.5。
5. 根據(jù)權利要求4所述的花椒生物防治抗病促生的方法，其特征在于，所述的液體培 養(yǎng)基，以IL計，包括以下組分： 葡萄糖 Mg; 牛肉膏 25g; 磷酸二氫鉀 2.45g; 花生餅粉 IOg, 調(diào)節(jié) pH=7.0。
6. 根據(jù)權利要求1所述的花椒生物防治抗病促生的方法，其特征在于，步驟2)中，堆肥 過程中噴施步驟1)中的高密度菌懸液，包括：在堆肥內(nèi)部溫度達到30°C~34°C時，噴施步 驟1)中的高密度菌懸液，繼續(xù)堆肥，待堆肥內(nèi)部溫度達到41°C~45°C時堆肥結束。
7. 根據(jù)權利要求6所述的花椒生物防治抗病促生的方法，其特征在于，步驟2)中，堆肥 過程中噴施步驟1)中的高密度菌懸液，包括：在堆肥內(nèi)部溫度達到32°C時，噴施步驟1)中 的高密度菌懸液，繼續(xù)堆肥，待堆肥內(nèi)部溫度達到43°C時堆肥結束。
8. 根據(jù)權利要求1所述的花椒生物防治抗病促生的方法，其特征在于，步驟2)中，堆肥 結束后，將堆肥攪拌攤涼。
9.根據(jù)權利要求1所述的花椒生物防治抗病促生的方法，其特征在于，步驟2)中，所述 的發(fā)酵采用自然狀態(tài)下發(fā)酵。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種花椒生物防治抗病促生的方法，包括：將枯草芽孢桿菌制成密度109～1010cfu/mL的高密度菌懸液；將花椒健康枝條剪成小段進行堆肥，堆肥過程中噴施枯草芽孢桿菌高密度菌懸液，經(jīng)發(fā)酵后得到能有效抑制殺滅花椒病理真菌的生物肥，將該生物肥用在花椒生物防治抗病促生上。本發(fā)明中，產(chǎn)beta葡聚糖酶的枯草芽孢桿菌是對花椒起抗病促生作用的植物益生菌，將其加入堆肥中，顯著加強對花椒疫霉病病原菌的生物防治作用，并有促生效應。堆肥過程處理簡便，無廢水排放，投資少、能耗低、易操作，易于工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)，具有良好的經(jīng)濟效益和廣闊的應用前景。
【IPC分類】A01G13-00, A01P3-00, C05F17-00, A01N63-00
【公開號】CN104642018
【申請?zhí)枴緾N201510058447
【發(fā)明人】胡慧雯, 徐薇薇, 吳淵, 阮暉, 杜巖松, 許麗珍, 吳孔華, 莫建平, 史金昕波, 繆丹, 俞雨, 吳盛彬, 徐騰洋
【申請人】浙江大學
【公開日】2015年5月27日
【申請日】2015年2月4日