專利名稱:常見灘涂貝類聚合雜交的育種方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種貝類遺傳育種技術(shù)，具體的說是一種常見灘涂貝類聚合雜交的育種方法。
背景技術(shù)：
常見灘涂貝類大多為分布較廣的養(yǎng)殖品種，具有養(yǎng)殖周期短、投資少、收益大的特點(diǎn)。目前，灘涂貝類在養(yǎng)殖中存在種質(zhì)資源基礎(chǔ)狀況不清、品質(zhì)下降、抗逆性差、個(gè)體小型化、單位產(chǎn)量降低等不良現(xiàn)象。而且養(yǎng)殖對象均為野生型，幾乎沒有人工培育的高產(chǎn)、抗逆優(yōu)良品種。對灘涂貝類進(jìn)行遺傳改良，培育出生長速度快，抗逆性強(qiáng)的新品種是解決這些問題的重要途徑(閆喜武，2005)。
選擇育種是新品種培育的有效方法，雜交則是培育新品種的重要方法，已經(jīng)在動(dòng)植物的育種中取得廣泛的成功。聚合雜交是指通過一系列雜交將若干個(gè)親本品種的優(yōu)良基因聚合在一起，分為最大重組原理的組合雜交和超親重組原理的聚合雜交。目前，聚合雜交主要應(yīng)用在植物育種上。
申請公開號(hào)為CN101103708的中國專利公開了蝦夷扇貝三元雜交的育種方法，此發(fā)明采用的3個(gè)地理群體的蝦夷扇貝進(jìn)行雜交，得到了三元雜交個(gè)體。然而，采用該方法進(jìn)行貝類育種的子代具有雜合度較低，使用的雜交周期較長的缺陷。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明旨在通過不同地理群體灘涂貝類最大重組原理的聚合雜交，在較短的雜交周期內(nèi)得到具有高度雜合度的雜交個(gè)體，淘汰致死基因，使得優(yōu)良基因得到表達(dá)。最終達(dá)到解決當(dāng)前灘涂貝類種質(zhì)抗逆性差，生長速度慢等問題。
本發(fā)明的技術(shù)方案是采集> 4個(gè)不同地理群體中的灘涂貝類親本；對不同地理群體貝類親本進(jìn)行生態(tài)促熟開展兩兩地理群體間的二元正反群體雜交；三段法養(yǎng)成二元正反雜交組合的子一代；二元雜交子一代的聚合雜交，得到聚合雜交子一代；在此基礎(chǔ)上， 重復(fù)以上步驟，直到聚合子代累加了所有地理群體的優(yōu)良基因?yàn)橹埂?br>本發(fā)明的工藝過程包括以下步驟
第一步、采集> 4個(gè)不同地理群體中的貝類作為親本；
第二步、對不同地理群體的貝類親本進(jìn)行生態(tài)促熟；
第三步、兩兩群體的二元正反雜交待親本成熟后，對親本進(jìn)行性別鑒定，鑒別后； 通過陰干、流水刺激，親本可以同步產(chǎn)卵、排精；然后按照兩兩群體組合進(jìn)行雜交，得到若干個(gè)正反交組合的子一代；
第四步、三段法養(yǎng)成二元正反雜交子一代按照三段法進(jìn)行正反交子一代的養(yǎng)成， 直至雜交子一代性腺同步成熟；
第五步、二元雜交子一代的聚合雜交同第三、四步，開展二元雜交子一代的聚合雜交，得到聚合雜交子一代；若貝類的地理群體數(shù)量>4個(gè)，需要重復(fù)以上步驟，進(jìn)行二次或多次聚合雜交，直到聚合子代累加了所有地理群體的優(yōu)良基因?yàn)橹埂?br>所述的對不同地理群貝類親本進(jìn)行生態(tài)促熟的步驟可以采用以下方法將采集的親本放置于生態(tài)蝦池或自然海區(qū)中，采用底播養(yǎng)殖的方法進(jìn)行生態(tài)促熟，直至不同地理群貝類親本性腺同步成熟。
所述親本鑒定按以下方式進(jìn)行，可以得到更高的鑒別率所述親本鑒定的步驟為采用直徑為0. 6mm的電鉆，根據(jù)要鑒定貝的種類，確定貝類親本的性腺位置，在貝類親本的殼上鉆孔直至深入至性腺部位，將微型注射器消毒，用消毒過的微型注射器取出精或卵，在顯微鏡下采用水滴法，加入少許海水，進(jìn)行性別鑒定；卵在海水中發(fā)散，在顯微鏡下為圓形或梨形；精子在海水中為煙霧狀，顯微鏡下為蝌蚪狀。
所述不同地理群體貝類以下標(biāo)準(zhǔn)采集時(shí)，育種效果更佳(1)2齡健康無損的個(gè)體作為親本；( 要求其親本有足夠大的地理差異和遺傳差異。
所述的三段法養(yǎng)成二元正反雜交子一代具體為將二元正反雜交子一代采集的親本放置于生態(tài)蝦池或自然海區(qū)中，采用底播養(yǎng)殖的方法進(jìn)行生態(tài)促熟。
三段法，即在室內(nèi)進(jìn)行貝類苗種繁育，繁育得到的稚貝在蝦池內(nèi)(海上)進(jìn)行中間育成，中間育成得到的幼貝在蝦池(海上)進(jìn)行養(yǎng)成。
本發(fā)明對親本采用生態(tài)促熟法，克服了不同地理群體間的地理隔離、性成熟和繁殖的生理差異，促使性腺同步發(fā)育精卵同步排放。與現(xiàn)有養(yǎng)殖的灘涂貝類品種相比，聚合了 >4個(gè)地理群體的優(yōu)良基因，其雜合度大大提高，并最大程度上縮短了貝類的雜交周期。使得聚合雜交個(gè)體表現(xiàn)出生長快、抗逆性強(qiáng)的特點(diǎn)。本方法采用的是群體雜交方式，避免了單體雜交基因型相對單一的弊端，豐富了雜交個(gè)體的基因組成。由于是多次正反雜交，所以能夠更加充分的利用親本效應(yīng)，從中得到的最有效的雜交組合；且雜交個(gè)體的生長、存活遠(yuǎn)大于親本，表現(xiàn)出超親本效應(yīng)，由于聚合雜交個(gè)體累加了各地理群體貝類的優(yōu)良基因，其生長速度提高30-60%，存活率提高80-120%。這為貝類雜交新品種的開發(fā)奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。
具體實(shí)施方式
下面以菲律賓蛤仔為實(shí)施例，進(jìn)一步說明本發(fā)明，但不構(gòu)成對本發(fā)明的限制。
實(shí)施例1
第一步、采集不同地理群體菲律賓蛤仔親本于2005年，選擇2齡健康無損的個(gè)體作為親本，其親本分別來自于中國南方莆田、中國北方大連、韓國釜山、日本東京。
第二步、不同地理群體蛤仔親本的生態(tài)促熟將采集的親本放置于莊河海洋村的蝦池中進(jìn)行生態(tài)促熟，經(jīng)過6-12個(gè)月的底播養(yǎng)殖，于2006年秋季性腺同步成熟。
第三步、中國南北方、韓日群體的二元正反雜交采用直徑為0. 6mm的電鉆進(jìn)行親本性別鑒定，鑒別后；通過陰干8h、流水Ih的刺激，親本可以同步產(chǎn)卵排精；然后按照中國南方早X中國北方中國北方早X中國南方韓國早X日本d，日本早X韓國3開展群體間的正反雜交，每個(gè)雜交組合用親本200個(gè)，得到中國南北方正反交子一代和韓日正反交子一代。
第四步、三段法養(yǎng)成二元正反雜交子一代按照三段法在生態(tài)蝦池中進(jìn)行北方正反交子一代和韓日正反交子一代的養(yǎng)成，養(yǎng)成周期> 1年。于第2007年的秋季，雜交子一代性腺同步成熟。[0025]第五步、二元雜交子一代的聚合雜交同第三步，開展中國南北方早X韓日d，中國南北方早X日韓d，中國北南方早X韓日d，中國北南方早X日韓d群體間的雜交，得到中國南北方日韓、中國南北方日韓、中國北南方韓日、中國北南方日韓的聚合雜交的菲律賓蛤仔。
通過聚合雜交得到的菲律賓蛤仔，其生長速度提高了 40-60%、存活率提高了 90-120% ο
實(shí)施例2
第一步、采集不同地理群體菲律賓蛤仔親本于2005年，選擇2齡健康無損的個(gè)體作為親本，其親本分別來自于中國南方莆田、中國北方大連、韓國釜山、日本東京。
第二步、不同地理群體蛤仔親本的生態(tài)促熟將采集的親本放置于莊河海洋村的灘涂中進(jìn)行生態(tài)促熟，經(jīng)過6-12個(gè)月的底播養(yǎng)殖，于2006年秋季性腺同步成熟。
第三步、中國南北方、韓日群體的二元正反雜交采用直徑為0. 6mm的電鉆進(jìn)行親本性別鑒定，鑒別后；通過陰干8h、流水Ih的刺激，親本可以同步產(chǎn)卵排精；然后按照中國南方早X中國北方3，中國北方早X中國南方韓國早X日本d，日本早X韓國3開展群體間的正反雜交，每個(gè)雜交組合用親本240個(gè)，得到中國南北方正反交子一代和韓日正反交子一代。
第四步、三段法養(yǎng)成二元正反雜交子一代按照三段法在生態(tài)蝦池中進(jìn)行北方正反交子一代和韓日正反交子一代的養(yǎng)成，養(yǎng)成周期> 1年。于第2007年的秋季，雜交子一代性腺同步成熟。
第五步、二元雜交子一代的聚合雜交同第三步，開展中國南北方早X韓日d，中國南北方早X日韓d，中國北南方早X韓日d，中國北南方早X日韓3群體間的雜交，得到中國南北方日韓、中國南北方日韓、中國北南方韓日、中國北南方日韓的聚合雜交的菲律賓蛤仔。
通過聚合雜交得到的菲律賓蛤仔，其生長速度提高了 30-40%、存活率提高了 80-90%。
實(shí)施例3
第一步、采集不同地理群體菲律賓蛤仔親本于2005年，選擇2齡健康無損的個(gè)體作為親本，其親本分別來自于中國南方莆田、中國北方大連、韓國釜山、日本東京。
第二步、不同地理群體蛤仔親本的生態(tài)促熟將采集的親本放置于莊河海洋村的蝦池中進(jìn)行生態(tài)促熟，經(jīng)過6-12個(gè)月的底播養(yǎng)殖，于2006年秋季性腺同步成熟。
第三步、中國南北方、韓日群體的二元正反雜交通過陰干他、流水Ih的刺激，親本可以同步產(chǎn)卵排精；在產(chǎn)卵排精的過程中，可以分辨出雌雄，將雌雄個(gè)體分別抓取出來； 然后按照中國南方早X中國北方d，中國北方早X中國南方韓國早X日本d，日本早X 韓國3開展群體間的正反雜交，每個(gè)雜交組合用親本60個(gè)，得到中國南北方正反交子一代和韓日正反交子一代。
第四步、三段法養(yǎng)成二元正反雜交子一代按照三段法在生態(tài)蝦池中進(jìn)行北方正反交子一代和韓日正反交子一代的養(yǎng)成，養(yǎng)成周期> 1年。于第2007年的秋季，雜交子一代性腺同步成熟。
第五步、二元雜交子一代的聚合雜交同第三步，開展中國南北方早X韓日召，中國南北方早X日韓^中國北南方早X韓日^中國北南方早X日韓召群體間的雜交，得到中國南北方日韓、中國南北方日韓、中國北南方韓日、中國北南方日韓的聚合雜交的菲律賓蛤仔。
通過聚合雜交得到的菲律賓蛤仔，其生長速度提高了 30-50%、存活率提高了 80-100%。
實(shí)施例4
第一步、采集不同地理群體菲律賓蛤仔親本于2005年，選擇2齡健康無損的個(gè)體作為親本，其親本分別來自于中國南方莆田、中國北方大連、韓國釜山、日本東京。
第二步、不同地理群體蛤仔親本的生態(tài)促熟將采集的親本放置于莊河海洋村的蝦池中進(jìn)行生態(tài)促熟，經(jīng)過6-12個(gè)月的底播養(yǎng)殖，于2006年秋季性腺同步成熟。
第三步、中國南北方、韓日群體的二元正反雜交采用直徑為0. 6mm的電鉆進(jìn)行親本性別鑒定，鑒別后；通過陰干8h、流水Ih的刺激，親本可以同步產(chǎn)卵排精；然后按照中國南方早X中國北方3，中國北方早X中國南方韓國早X日本日本早X韓國S開展群體間的正反雜交，每個(gè)雜交組合用親本300個(gè)，得到中國南北方正反交子一代和韓日正反交子一代。
第四步、三段法養(yǎng)成二元正反雜交子一代按照三段法在莊河海洋村貝類養(yǎng)殖場的灘涂中進(jìn)行北方正反交子一代和韓日正反交子一代的養(yǎng)成，養(yǎng)成周期> 1年。于第2007 年的秋季，雜交子一代性腺同步成熟。
第五步、二元雜交子一代的聚合雜交同第三步，開展中國南北方早X韓日d，中
國南北方早X日韓3，中國北南方早X韓日d，中國北南方早X日韓d群體間的雜交，得
到中國南北方日韓、中國南北方日韓、中國北南方韓日、中國北南方日韓的聚合雜交的菲律賓蛤仔。
通過聚合雜交得到的菲律賓蛤仔，其生長速度提高了 40-50%、存活率提高了 80-110%。
權(quán)利要求
1.一種常見灘涂貝類聚合雜交的育種方法，包括以下步驟 第一步、采集> 4個(gè)不同地理群體中的貝類作為親本； 第二步、對不同地理群體的貝類親本進(jìn)行生態(tài)促熟；第三步、兩兩群體的二元正反雜交待親本成熟后，對親本進(jìn)行性別鑒定，鑒定后；通過陰干、流水刺激，親本可以同步產(chǎn)卵、排精；然后按照兩兩群體組合進(jìn)行雜交，得到若干個(gè)正反交組合的子一代；第四步、三段法養(yǎng)成二元正反雜交子一代按照三段法進(jìn)行正反交子一代的養(yǎng)成，直至雜交子一代性腺同步成熟；第五步、二元雜交子一代的聚合雜交同第三、四步，開展二元雜交子一代的聚合雜交， 得到聚合雜交子一代；若貝類的地理群體數(shù)量> 4個(gè)，需要重復(fù)以上步驟，進(jìn)行二次或多次聚合雜交，直到聚合子代累加了所有地理群體的優(yōu)良基因?yàn)橹梗凰龅膶Σ煌乩砣后w的貝類親本進(jìn)行生態(tài)促熟的步驟具體為將采集的親本放置于生態(tài)蝦池或自然海區(qū)中，采用底播養(yǎng)殖的方法進(jìn)行生態(tài)促熟，直至不同地理群體貝類親本性腺同步成熟；所述的三段法養(yǎng)成二元正反雜交子一代具體為將二元正反雜交子一代采集的親本放置于生態(tài)蝦池或自然海區(qū)中，采用底播養(yǎng)殖的方法進(jìn)行生態(tài)促熟；三段法，即在室內(nèi)進(jìn)行貝類苗種繁育，繁育得到的稚貝在蝦池內(nèi)或海上進(jìn)行中間育成， 中間育成得到的幼貝在蝦池或海上進(jìn)行養(yǎng)成。
2.如權(quán)利要求
1所述的常見灘涂貝類聚合雜交的育種方法，其特征在于所述親本性別鑒定的步驟為采用直徑為0. 6mm的電鉆，根據(jù)要鑒定貝的種類，確定貝類親本的性腺位置，在貝類親本的殼上鉆孔直至深入至性腺部位，將微型注射器消毒，用消毒過的微型注射器取出精或卵，在顯微鏡下采用水滴法，加入少許海水，進(jìn)行性別鑒定；卵在海水中發(fā)散，在顯微鏡下為圓形或梨形；精子在海水中為煙霧狀，顯微鏡下為蝌蚪狀。
3.如權(quán)利要求
1所述的常見灘涂貝類聚合雜交的育種方法，其特征在于所述采集不同地理群體貝類作為親本的標(biāo)準(zhǔn)為(1)、2齡健康無損的個(gè)體作為親本；(2)、要求其親本有足夠大的地理差異和遺傳差異。
專利摘要
常見灘涂貝類聚合雜交的育種方法，采集≥4個(gè)不同地理群體中的灘涂貝類親本；對不同地理群體貝類親本進(jìn)行生態(tài)促熟開展兩兩地理群體間的二元正反群體雜交；三段法養(yǎng)成二元正反雜交組合的子一代；繼而進(jìn)行二元雜交子一代的聚合雜交，得到聚合雜交子一代；在此基礎(chǔ)上，重復(fù)以上步驟，直到聚合子代累加了所有地理群體的優(yōu)良基因?yàn)橹?。本發(fā)明克服了不同地理群體間的地理隔離、性成熟和繁殖的生理差異。與現(xiàn)有養(yǎng)殖的灘涂貝類品種相比，聚合了≥4個(gè)地理群體的優(yōu)良基因，其雜合度大大提高，使得聚合雜交個(gè)體表現(xiàn)出生長快、抗逆性強(qiáng)的特點(diǎn)。
文檔編號(hào)A01K61/00GKCN101361469 B發(fā)布類型授權(quán) 專利申請?zhí)朇N 200810013427
公開日2012年5月23日 申請日期2008年9月25日
發(fā)明者張國范, 張躍環(huán), 楊鳳, 王 琦, 金晶宇, 閆喜武, 霍忠明 申請人:大連水產(chǎn)學(xué)院導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan專利引用 (1), 非專利引用 (3),