本發(fā)明涉及一種靈芝的栽培方法，特別是一種三萜酸類化合物含量高的靈芝的栽培方法。
背景技術(shù)：
靈芝為多孔菌科真菌赤芝或紫芝的干燥子實(shí)體。靈芝是一種珍貴的藥用真菌，屬于擔(dān)子菌綱多孔菌科靈芝屬，在我國(guó)有兩千多年的藥用史。靈芝首載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，歷代醫(yī)家都認(rèn)為靈芝能治療多種疾病，是滋補(bǔ)強(qiáng)壯扶正固本的珍貴藥物。靈芝多糖是靈芝中最有效的成分之一，存在于靈芝的子實(shí)體、孢子粉和菌絲體中，具有抑制腫瘤、增強(qiáng)機(jī)體對(duì)自由基清除的能力，故能減少自由基對(duì)機(jī)體的損傷、有延緩衰老之功效，還可以提高免疫力、抗炎癥、降血脂、降血糖等作用。
隨著靈芝的保健功效被人們廣泛的認(rèn)識(shí)和接受，野生靈芝已遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足人們的需求。培養(yǎng)基是靈芝賴以生存的條件，不同的培養(yǎng)原料和配方可對(duì)靈芝的菌絲生長(zhǎng)、產(chǎn)量和活性成分等產(chǎn)生重要的影響?，F(xiàn)有技術(shù)中靈芝用的培養(yǎng)基中常以棉籽殼、木屑等為原料，這些原料常占總量的50％-80％，是主要原料，麩皮等原料所占比例較少，通常在10％-20％，但是這些原料本身營(yíng)養(yǎng)成分少，不利于產(chǎn)出靈芝的品質(zhì)保證。特別是不能保證靈芝中三萜酸類化合物的含量，使得最終得到的靈芝中三萜酸類化合物含量低。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的，是提供一種靈芝的栽培方法。所述方法栽培得到的靈芝品質(zhì)好，靈芝中的有效成分三萜酸類化合物含量高。
本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的。
一種靈芝的栽培方法，包括：a.栽培種的制作，b.出芝管理。
前述的栽培方法，具體包括以下步驟：
(1)選取菌蓋肥大、已成熟的靈芝，將菌蓋剪下，用70-80％的乙醇進(jìn)行表面滅菌，得滅菌后的菌體；
(2)將滅菌后的菌體切成1-2立方厘米的小塊，出去表面的菌肉，放入裝有培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，在室溫下培養(yǎng)6-10h后，得組織塊；
(3)將組織塊用紙包好麻煩給保溫箱中，并使溫度保持在25-30℃之間，待形成菌落后，出去雜菌，轉(zhuǎn)入裝有基質(zhì)的試管中培養(yǎng)20-30天，培養(yǎng)溫度為26℃～28℃，得靈芝栽培種；
(4)按行距為80-90cm，株距為30-50cm，進(jìn)行靈芝栽培，栽培時(shí)間為4月下旬至10月中旬，栽培后，控制22-30℃之間，濕度為85-90％，待菌蓋顏色由淺黃邊城紅褐色，菌蓋周圍白色的生長(zhǎng)圈消失，菌管內(nèi)散有孢子粉時(shí)，進(jìn)行采收，即可。
前述的靈芝的栽培方法，所述步驟(2)中，所述培養(yǎng)基按重量份計(jì)算，主要由葡萄糖10-30份、酵母膏1-5份、土豆泥150-250份、蛋白胨1-5份、瓊脂15-35份、維生素e1-10份、維生素b11-10份、山楂25-35份、麥芽1-10份、丹參5-15份、黃芪20-30份、豆粕45-55份、枇杷枝20-40份、玉米芯20-40份、酒糟10-20份、石膏10-30份、茶渣25-45份、桑樹條35-45份、食鹽5-15份和水900-1100份制成。
前述的靈芝的栽培方法，所述培養(yǎng)基按重量份計(jì)算，主要由葡萄糖15-25份、酵母膏1.5-2.5份、土豆泥180-220份、蛋白胨1.5-2.5份、瓊脂20-24份、維生素e3-7份、維生素b13-7份、山楂28-32份、麥芽2-8份、丹參8-12份、黃芪22-28份、豆粕48-52份、枇杷枝25-35份、玉米芯25-35份、酒糟12-18份、石膏15-25份、茶渣30-40份、桑樹條38-42份、食鹽8-12份和水950-1050份制成。
前述的靈芝的栽培方法，所述培養(yǎng)基按重量份計(jì)算，主要由葡萄糖20份、酵母膏2份、土豆泥200份、蛋白胨1-2份、瓊脂22份、維生素e5份、維生素b15份、山楂30份、麥芽5份、丹參10份、黃芪25份、豆粕50份、枇杷枝30份、玉米芯30份、酒糟15份、石膏20份、茶渣35份、桑樹條40份、食鹽10份和水1000份制成。
前述的靈芝的栽培方法，所述培養(yǎng)基這樣制作：土豆泥、山楂、丹參、黃芪、枇杷枝、桑樹條、茶渣和玉米芯，切碎，加配方量40-60％的水煮沸20-30分鐘，濾渣棄去，濾液加入剩余量水,繼續(xù)加熱至50-60度后，依次加入葡萄糖、酵母膏、土豆泥、蛋白胨、瓊脂，邊加邊攪拌，加完后，繼續(xù)加熱30-50min，加入維生素e和維生素b1，攪拌均勻后，分裝，硅膠塞密封，包好，120-122度下滅菌20-30分鐘后，冷卻至50-60度，傾斜5-15度放置，30-35℃下烘干24-48h后，取出，保存，即得。
前述的靈芝的栽培方法，所述培養(yǎng)基這樣制作：土豆泥、山楂、丹參、黃芪、枇杷枝、桑樹條、茶渣和玉米芯，切碎，加配方量50％的水煮沸25分鐘，濾渣棄去，濾液加入剩余量水,繼續(xù)加熱至50-60度后，依次加入葡萄糖、酵母膏、土豆泥、蛋白胨、瓊脂，邊加邊攪拌，加完后，繼續(xù)加熱40min，加入維生素e和維生素b1，攪拌均勻后，分裝，硅膠塞密封，包好，120-122度下滅菌25分鐘后，冷卻至50-60度，傾斜5-15度放置，30-35℃下烘干35h后，取出，保存，即得。
前述的靈芝的栽培方法，所述步驟(3)中，所述基質(zhì)主要由按重量份計(jì)算紅糖1-10份、薏仁粉30-40份、稻谷殼50-60份、小麥10-20份、小米10-20份和中藥渣30-40份混勻，即得。
前述的靈芝的栽培方法，所述基質(zhì)主要由按重量份計(jì)算紅糖5份、薏仁粉35份、稻谷殼55份、小麥15份、小米15份和中藥渣35份混勻，即得。
前述的靈芝的栽培方法，所述中藥渣主要由按重量份計(jì)算的鴨跖草30-40份、地骨皮30-40份和知母20-30份按下述方法制備：取鴨跖草、地骨皮和知母，加8-10倍量水，煎煮1.5-2.5h后，過(guò)濾，收集濾液，取濾渣，干燥后，粉碎成粗顆粒，即得。
申請(qǐng)人對(duì)靈芝的栽培方法進(jìn)行了大量的研究，部分如下：
實(shí)驗(yàn)例.三萜酸類化合物含量測(cè)定
1測(cè)定項(xiàng)目：
1.1靈芝1：按實(shí)施例1進(jìn)行栽培，采收得到靈芝1。
1.2靈芝2：栽培方法同實(shí)施例1，但培養(yǎng)基中不含山楂、麥芽、丹參、黃芪、豆粕、枇杷枝。
2儀器和試劑
紫外可見分光光度計(jì)：北京普析；sb2200超聲波清洗器：shanghaibranson公司；4001n型電子天平：上海民橋精密科技儀器有限公司；95％乙醇、無(wú)水乙醇、香草醛、高氯酸、冰醋酸均為國(guó)產(chǎn)分析純；熊果酸對(duì)照品：蕪湖甙爾塔醫(yī)藥科技有限公～delta(甙爾塔)天然有機(jī)化合物信息中心。
3方法與分析
3.1對(duì)照品溶液的制備
準(zhǔn)確稱取105℃干燥至恒重的熊果酸對(duì)照品1.00mg，置于100ml容量瓶中，加無(wú)水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。得質(zhì)量濃度為100g/ml的對(duì)照品溶液。
3.2供試品溶液1的制備
取靈芝1，將粉碎，于50℃干燥，稱取約1.00g置于150ml磨口錐型瓶中，加入25ml的95％乙醇，超聲提取20min，抽濾，濾渣再用25ml95％乙醇超聲提取20min，合并濾液置于100ml容量瓶中，用無(wú)水乙醇定容至刻度，搖勻，制得供試品溶液1。
3.3供試品溶液2的制備
取靈芝2，將粉碎，于50℃干燥，稱取約1.00g置于150ml磨口錐型瓶中，加入25ml的95％乙醇，超聲提取20min，抽濾，濾渣再用25ml95％乙醇超聲提取20min，合并濾液置于100ml容量瓶中，用無(wú)水乙醇定容至刻度，搖勻，制得供試品溶液2。
3.4測(cè)定波長(zhǎng)的確定
經(jīng)紫外掃描，熊果酸在548nm波長(zhǎng)處有最大吸收，空白無(wú)干擾。故確定波長(zhǎng)為548nm。
3.5標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
準(zhǔn)確吸取熊果酸對(duì)照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml分別置于5個(gè)已編號(hào)的5ml容量瓶中，沸水浴揮去無(wú)水乙醇，冷卻，各加入5％香草醛冰乙酸溶液0.2ml、高氯酸0.8ml，隨行空白，將容量瓶放人60～70℃水浴中加熱15min，冷卻至室溫，用冰醋酸定容到刻度，搖勻。在548nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度值，以熊果含量為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其回歸方程為y＝0.0291+0.0066x，r2＝0.9995，結(jié)果表明，熊果酸在(20-100ug范圍內(nèi)，熊果酸含量與其吸光度值呈良好的線性關(guān)系。
3.6穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)
分別準(zhǔn)確吸取供試品溶液1和供試品溶液2各0.4ml，置于5ml容量瓶中，按“3.5”項(xiàng)方法操作，每間隔10min測(cè)其吸光度值，結(jié)果表明：在顯色20-60min內(nèi)，供試品溶液1和供試品溶液2穩(wěn)定性比較好。
3.7精密度實(shí)驗(yàn)
分別吸取同一份供試品溶液1和供試品溶液2各0.4ml，共5份，按3.5”項(xiàng)方法測(cè)定吸光度值，rsd＝1.33％和rsd＝1.28。表明該方法精密度好。
3.8重復(fù)性實(shí)驗(yàn)
準(zhǔn)確稱取同一批靈芝1和靈芝2各5份，按“3.2”和“3.3”項(xiàng)方法制得5份供試品溶液1和5份供試品溶液2，分別吸取供試品溶液1和供試品溶液2，0.4ml，按“3.5”項(xiàng)方法測(cè)定吸光度值，rsd＝1.50％和1.53％。表明本方法重復(fù)性好。
3.9含量測(cè)定
分別準(zhǔn)確稱取靈芝1和靈芝2，各平行分成5份，按上述方法制得5份供試品溶液1和5份供試品溶液2，分別吸取供試品溶液1和供試品溶液2各0.4ml，按上述方法測(cè)定吸光度值并計(jì)算其總?cè)扑岷俊＝Y(jié)果取平均值，結(jié)果如表1所示。
表1總?cè)扑岷繙y(cè)定結(jié)果
由表可知，本發(fā)明方法栽培得到的靈芝，最終采收的靈芝中總?cè)扑岬暮枯^高。靈芝品質(zhì)好。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明方法栽培得到的靈芝品質(zhì)好，靈芝中的有效成分三萜酸類化合物含量高。
實(shí)施例1。
培養(yǎng)基原料：葡萄糖20kg、酵母膏2kg、土豆泥200kg、蛋白胨1-2kg、瓊脂22kg、維生素e5kg、維生素b15kg、山楂30kg、麥芽5kg、丹參10kg、黃芪25kg、豆粕50kg、枇杷枝30kg、玉米芯30kg、酒糟15kg、石膏20kg、茶渣35kg、桑樹條40kg、食鹽10kg和水1000kg。
培養(yǎng)基制作方法：土豆泥、山楂、丹參、黃芪、枇杷枝、桑樹條、茶渣和玉米芯，切碎，加配方量50％的水煮沸25分鐘，濾渣棄去，濾液加入剩余量水,繼續(xù)加熱至50-60度后，依次加入葡萄糖、酵母膏、土豆泥、蛋白胨、瓊脂，邊加邊攪拌，加完后，繼續(xù)加熱40min，加入維生素e和維生素b1，攪拌均勻后，分裝，硅膠塞密封，包好，120-122度下滅菌25分鐘后，冷卻至50-60度，傾斜5-15度放置，30-35℃下烘干35h后，取出，保存，即得。
基質(zhì)原料：紅糖5kg、薏仁粉35kg、稻谷殼55kg、小麥15kg、小米15kg和中藥渣35kg。
中藥渣的制備：取鴨跖草35kg、地骨皮35kg和知母25kg，加9倍量水，煎煮2h后，過(guò)濾，收集濾液，取濾渣，干燥后，粉碎成粗顆粒，即得。
基質(zhì)制作方法：取紅糖、薏仁粉、稻谷殼、小麥、小米和中藥渣，混勻，即得。
靈芝的栽培方法：
(1)選取菌蓋肥大、已成熟的靈芝，將菌蓋剪下，用70-80％的乙醇進(jìn)行表面滅菌，得滅菌后的菌體；
(2)將滅菌后的菌體切成1-2立方厘米的小塊，出去表面的菌肉，放入裝有培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，在室溫下培養(yǎng)8h后，得組織塊；
(3)將組織塊用紙包好麻煩給保溫箱中，并使溫度保持在25-30℃之間，待形成菌落后，出去雜菌，轉(zhuǎn)入裝有基質(zhì)的試管中培養(yǎng)25天，培養(yǎng)溫度為26℃～28℃，得靈芝栽培種；
(4)按行距為80-90cm，株距為30-50cm，進(jìn)行靈芝栽培，栽培時(shí)間為4月下旬至10月中旬，栽培后，控制22-30℃之間，濕度為85-90％，待菌蓋顏色由淺黃邊城紅褐色，菌蓋周圍白色的生長(zhǎng)圈消失，菌管內(nèi)散有孢子粉時(shí)，進(jìn)行采收，即可。
實(shí)施例2.
培養(yǎng)基原料：葡萄糖25kg、酵母膏2.5kg、土豆泥220kg、蛋白胨2.5kg、瓊脂24kg、維生素e7kg、維生素b17kg、山楂32kg、麥芽8kg、丹參12kg、黃芪28kg、豆粕52kg、枇杷枝35kg、玉米芯35kg、酒糟18kg、石膏25kg、茶渣40kg、桑樹條42kg、食鹽12kg和水1050kg。
培養(yǎng)基制作方法：土豆泥、山楂、丹參、黃芪、枇杷枝、桑樹條、茶渣和玉米芯，切碎，加配方量60％的水煮沸30分鐘，濾渣棄去，濾液加入剩余量水,繼續(xù)加熱至50-60度后，依次加入葡萄糖、酵母膏、土豆泥、蛋白胨、瓊脂，邊加邊攪拌，加完后，繼續(xù)加熱50min，加入維生素e和維生素b1，攪拌均勻后，分裝，硅膠塞密封，包好，120-122度下滅菌30分鐘后，冷卻至50-60度，傾斜5-15度放置，30-35℃下烘干48h后，取出，保存，即得。
基質(zhì)原料：紅糖10kg、薏仁粉40kg、稻谷殼60kg、小麥20kg、小米20kg和中藥渣40kg。
中藥渣的制備：取鴨跖草40kg、地骨皮40kg和知母30kg，加10倍量水，煎煮2.5h后，過(guò)濾，收集濾液，取濾渣，干燥后，粉碎成粗顆粒，即得。
基質(zhì)制作方法：取紅糖、薏仁粉、稻谷殼、小麥、小米和中藥渣，混勻，即得。
靈芝的栽培方法：
(1)選取菌蓋肥大、已成熟的靈芝，將菌蓋剪下，用70-80％的乙醇進(jìn)行表面滅菌，得滅菌后的菌體；
(2)將滅菌后的菌體切成1-2立方厘米的小塊，出去表面的菌肉，放入裝有培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，在室溫下培養(yǎng)10h后，得組織塊；
(3)將組織塊用紙包好麻煩給保溫箱中，并使溫度保持在25-30℃之間，待形成菌落后，出去雜菌，轉(zhuǎn)入裝有基質(zhì)的試管中培養(yǎng)30天，培養(yǎng)溫度為26℃～28℃，得靈芝栽培種；
(4)按行距為80-90cm，株距為30-50cm，進(jìn)行靈芝栽培，栽培時(shí)間為4月下旬至10月中旬，栽培后，控制22-30℃之間，濕度為85-90％，待菌蓋顏色由淺黃邊城紅褐色，菌蓋周圍白色的生長(zhǎng)圈消失，菌管內(nèi)散有孢子粉時(shí)，進(jìn)行采收，即可。
實(shí)施例3.
培養(yǎng)基原料：葡萄糖15kg、酵母膏1.5kg、土豆泥180kg、蛋白胨1.5kg、瓊脂20kg、維生素e3kg、維生素b13kg、山楂28kg、麥芽2kg、丹參8kg、黃芪22kg、豆粕48kg、枇杷枝25kg、玉米芯25kg、酒糟12kg、石膏15kg、茶渣30kg、桑樹條38kg、食鹽8kg和水950kg。
培養(yǎng)基制作方法：土豆泥、山楂、丹參、黃芪、枇杷枝、桑樹條、茶渣和玉米芯，切碎，加配方量40％的水煮沸20分鐘，濾渣棄去，濾液加入剩余量水,繼續(xù)加熱至50-60度后，依次加入葡萄糖、酵母膏、土豆泥、蛋白胨、瓊脂，邊加邊攪拌，加完后，繼續(xù)加熱30min，加入維生素e和維生素b1，攪拌均勻后，分裝，硅膠塞密封，包好，120-122度下滅菌20分鐘后，冷卻至50-60度，傾斜5-15度放置，30-35℃下烘干24h后，取出，保存，即得。
基質(zhì)原料：紅糖1kg、薏仁粉30kg、稻谷殼50kg、小麥10kg、小米10kg和中藥渣30kg。
中藥渣的制備：取鴨跖草30kg、地骨皮30kg和知母20kg，加8倍量水，煎煮1.5h后，過(guò)濾，收集濾液，取濾渣，干燥后，粉碎成粗顆粒，即得。
基質(zhì)制作方法：取紅糖、薏仁粉、稻谷殼、小麥、小米和中藥渣，混勻，即得。
靈芝的栽培方法：
(1)選取菌蓋肥大、已成熟的靈芝，將菌蓋剪下，用70-80％的乙醇進(jìn)行表面滅菌，得滅菌后的菌體；
(2)將滅菌后的菌體切成1-2立方厘米的小塊，出去表面的菌肉，放入裝有培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，在室溫下培養(yǎng)6h后，得組織塊；
(3)將組織塊用紙包好麻煩給保溫箱中，并使溫度保持在25-30℃之間，待形成菌落后，出去雜菌，轉(zhuǎn)入裝有基質(zhì)的試管中培養(yǎng)20天，培養(yǎng)溫度為26℃～28℃，得靈芝栽培種；
(4)按行距為80-90cm，株距為30-50cm，進(jìn)行靈芝栽培，栽培時(shí)間為4月下旬至10月中旬，栽培后，控制22-30℃之間，濕度為85-90％，待菌蓋顏色由淺黃邊城紅褐色，菌蓋周圍白色的生長(zhǎng)圈消失，菌管內(nèi)散有孢子粉時(shí)，進(jìn)行采收，即可。