本發(fā)明屬于蘋果苗木栽培
技術(shù)領(lǐng)域：
，尤其涉及一種蘋果砧木b9快速繁殖的方法。
背景技術(shù)：
：原蘇聯(lián)米丘林大學budagovsky教授用m9與redstandard雜交育成的抗寒性矮化砧木。b9在原蘇聯(lián)和波蘭作為主要耐寒中間砧而采用，也是世界上普遍反映抗旱性較好的砧木之一。b9作為矮化砧，嫁接品種后為喬砧樹的45％左右，略顯大小腳，中間砧愈合良好。目前，我國的蘋果生產(chǎn)模式由傳統(tǒng)低效郁閉果園模式逐步的轉(zhuǎn)變?yōu)楝F(xiàn)代化矮砧密植集約高效生產(chǎn)栽培模式、并由世界蘋果生產(chǎn)大國逐步的轉(zhuǎn)變?yōu)樘O果產(chǎn)業(yè)強國。蘋果苗木是蘋果生產(chǎn)栽培的基礎(chǔ)，苗木的質(zhì)量直接影響著蘋果樹體的生長、開花、結(jié)果以及抗逆性、抗病能力和壽命。苗木受到病毒的侵染之后，樹體正常的細胞增殖受到破壞，嚴重會影響果樹的生長勢、果實品質(zhì)和產(chǎn)量等正常生理機制，成為中國蘋果產(chǎn)業(yè)發(fā)展的隱患。今后一段時期是我國蘋果大規(guī)模更新?lián)Q代的關(guān)鍵時期，如何從苗木方面提供支持和保障便成為一個值得高度重視的問題。目前，我國矮化蘋果苗木市場供不應(yīng)求，限制苗木產(chǎn)業(yè)發(fā)展的關(guān)鍵在于，一方面缺乏適應(yīng)性廣優(yōu)良矮化砧木，另一方面對現(xiàn)有矮化砧木繁育技術(shù)尚未取得突破。綜上所述，現(xiàn)有技術(shù)存在的問題是：目前我國矮化蘋果苗木存在缺乏適應(yīng)性廣優(yōu)良矮化砧木，對現(xiàn)有矮化砧木繁育技術(shù)尚未取得突破。綜上所述，現(xiàn)有技術(shù)存在的問題是：(1)砧木外植體褐化較嚴重，影響成活率。(2)繼代培養(yǎng)激素濃度配比不適合導(dǎo)致玻璃化苗比例過高。(3)煉苗移栽的基質(zhì)配比不恰當，導(dǎo)致透氣性不良及苗子后期養(yǎng)分不足生長不良。技術(shù)實現(xiàn)要素：針對現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，本發(fā)明提供了一種蘋果砧木b9快速繁殖的方法。本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的，一種蘋果砧木b9快速繁殖的方法，所述蘋果砧木b9快速繁殖的方法采用培養(yǎng)基為ms+6-ba0.6mg/l+iba0.1mg/l+pvp600mg/l的培養(yǎng)基初代培養(yǎng)、采用ms+6-ba0.8mg/l+iba0.1mg/l處理的繼代培養(yǎng)、采用生根培養(yǎng)基1/2ms+iba1.4mg/l+褪黑素0.01mg/l的生根培養(yǎng)；然后3/5田間土加上部2/5蛭石的煉苗移栽實現(xiàn)蘋果砧木快速的繁殖。進一步，所述蘋果砧木b9快速繁殖的方法包括以下步驟：步驟一，以蘋果砧木b9為材料，選擇生長健壯無病蟲害的母樹，于3月份取1年生枝條，放置26℃的溫室內(nèi)進行水培，水培為每升水含有5g蔗糖，每隔5d換一次水并剪掉舊剪口，當水培的一年生枝條上的芽抽生為1.5-2.0cm時，剪取嫩芽，去除展開葉片，在自來水下沖洗；步驟二，用超聲波清洗機清洗3min，再用無菌水沖洗3-5次，將處理好的嫩芽接種到ms+6-ba0.6mg/l+iba0.1mg/l，含有聚乙烯毗咯烷酮600mg/l的初代培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)；步驟三，將獲得的無菌外植體接種到ms+6-ba0.8mg/l+iba0.1mg/l，光照2000lux的培養(yǎng)基中進行繼代培養(yǎng)，b9的最優(yōu)培養(yǎng)處理為m4處理；步驟四，選擇繼代培養(yǎng)獲得的生長健壯，高度大于2.0cm的植株，生長時間為25天的芽子，接種于1/2ms+iba1.4mg/l+褪黑素0.03mg/l生根培養(yǎng)基中進行生根培養(yǎng)；步驟五，當組培苗根長度達到2cm后，移到室外遮陰煉苗10-12天，然后將培養(yǎng)容器瓶口打開，自然光下進行開瓶煉苗2-4天后，將生根苗從培養(yǎng)基中取出，放入濃度為0.1％多菌靈溶液中浸泡5min，并把根部多余的培養(yǎng)基清洗干凈，最后用清水沖洗2-3次，然后3/5田間土加上部2/5蛭石移栽到的營養(yǎng)缽中。進一步，所述步驟一中在自來水下沖洗6-8h，用75％酒精處理30s，升汞處理7min。進一步，所述步驟二中每升培養(yǎng)基附加30g蔗糖，7g瓊脂，然后放置在光照16h/d、光照2000lux，26℃條件下進行培養(yǎng)。進一步，所述步驟三中b9的最優(yōu)培養(yǎng)處理為m4處理，每升附加30g蔗糖，7g瓊脂。進一步，所述步驟四中進行生根培養(yǎng)，每升加30g蔗糖，7g瓊脂。進一步，所述步驟五中移栽苗的管理方式為移栽后將生根苗在遮陰網(wǎng)下進行管理，第一周采用濃度為0.1％多菌靈溶液進行噴灌，第二周每天用清水噴灌一次，保持基質(zhì)濕潤透氣待生根苗抽生出新芽之后即可移出遮陰網(wǎng)。本發(fā)明的另一目的在于提供一種由所述蘋果砧木b9快速繁殖的方法繁殖的蘋果砧木。本發(fā)明的優(yōu)點及積極效果為：通過采用培養(yǎng)基為ms+6-ba0.6mg/l+iba0.1mg/l+pvp600mg/l的培養(yǎng)基初代培養(yǎng)、采用ms+6-ba0.8mg/l+iba0.1mg/l處理的繼代培養(yǎng)、采用生根培養(yǎng)基1/2ms+iba1.4mg/l+褪黑素0.01mg/l的生根培養(yǎng)、然后3/5田間土加上部2/5蛭石的煉苗移栽實現(xiàn)了蘋果砧木快速的繁殖，不僅保證了較高的成活率，而且也保留了砧木的優(yōu)良特性，為蘋果產(chǎn)業(yè)的發(fā)展和進一步擴大提供了便捷的方法和途徑；為我國蘋果苗木的栽培提供一種快速繁殖的方法，以加快我國蘋果大規(guī)模更新?lián)Q代。本發(fā)明建立蘋果砧木b9快速繁殖的方法，對于生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)矮化無病毒苗木，具有重要意義，市場前景廣闊。病毒病是制約蘋果可持續(xù)發(fā)展的重要因素，栽培無毒苗木是目前生產(chǎn)上防止病毒病害的有效方法，培育無毒苗是栽培無毒苗的前提條件。建立的一種蘋果砧木b9快速繁殖的方法能夠提供大量組培苗，做為脫毒材料，最終獲得無毒苗，對生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)矮化無病毒苗木具有重要意義。附圖說明圖1是本發(fā)明實施例提供的蘋果砧木b9快速繁殖的方法流程圖。具體實施方式為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點更加清楚明白，以下結(jié)合實施例，對本發(fā)明進行進一步詳細說明。應(yīng)當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。下面結(jié)合附圖對本發(fā)明的應(yīng)用原理作詳細的描述。如圖1所示，本發(fā)明實施例提供的蘋果砧木b9快速繁殖的方法包括以下步驟：s101：以蘋果砧木b9為材料，選擇生長健壯無病蟲害的母樹，于3月份取1年生枝條，放置26℃的溫室內(nèi)進行水培，水培為每升水含有5g蔗糖，每隔5d換一次水并剪掉舊剪口，當水培的一年生枝條上的芽抽生為1.5-2.0cm時，剪取嫩芽，去除展開葉片，在自來水下沖洗6-8h，用75％酒精處理30s，升汞處理7min；s102：用超聲波清洗機清洗3min，再用無菌水沖洗3-5次，將處理好的嫩芽接種到ms+6-ba0.6mg/l+iba0.1mg/l，含有聚乙烯毗咯烷酮(pvp)600mg/l的初代培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，每升培養(yǎng)基附加30g蔗糖，7g瓊脂，然后放置在光照16h/d、光照2000lux，26℃條件下進行培養(yǎng)；s103：將獲得的無菌外植體接種到ms+6-ba0.8mg/l+iba0.1mg/l，光照2000lux的培養(yǎng)基中進行繼代培養(yǎng)，b9的最優(yōu)培養(yǎng)處理為m4處理，即每升附加30g蔗糖，7g瓊脂；s104：選擇繼代培養(yǎng)獲得的生長健壯，高度大于2.0cm的植株，生長時間為25天的芽子，接種于1/2ms+iba1.4mg/l+褪黑素0.03mg/l生根培養(yǎng)基中進行生根培養(yǎng)，每升加30g蔗糖，7g瓊脂；s105：當組培苗根長度達到2cm后，移到室外遮陰煉苗10-12天，然后將培養(yǎng)容器瓶口打開，自然光下進行開瓶煉苗2-4天后，將生根苗從培養(yǎng)基中取出，放入濃度為0.1％多菌靈溶液中浸泡5min，并把根部多余的培養(yǎng)基清洗干凈，最后用清水沖洗2-3次，然后3/5田間土加上部2/5蛭石移栽到的營養(yǎng)缽中。在步驟s105中，移栽苗的管理方式為移栽后將生根苗在遮陰網(wǎng)下進行管理，第一周采用濃度為0.1％多菌靈溶液進行噴灌，第二周每天用清水噴灌一次，保持基質(zhì)濕潤透氣待生根苗抽生出新芽之后即可移出遮陰網(wǎng)。本發(fā)明實施例提供的蘋果砧木b9快速繁殖的方法具體包括以下步驟：步驟一，初代培養(yǎng)蘋果砧木b9為材料，選擇生長健壯無病蟲害的母樹，于3月份取1年生枝條，放置26℃的溫室內(nèi)進行水培(每升水含有5g蔗糖)，每隔5d換一次水并剪掉舊剪口，當水培的一年生枝條上的芽抽生為1.5-2.0cm時，剪取嫩芽，去除展開葉片，在自來水下沖洗6-8h，用75％酒精處理8s，0.1％升汞處理7min，進行消毒處理后，用超聲波清洗機清洗3min，再用無菌水沖洗3-5次，將處理好的嫩芽接種到到ms+6-ba0.6mg/l+iba0.1mg/l+不同濃度處理(0、0.3、0.6、0.7、1.0g/l)的聚乙烯毗咯烷酮(pvp)的培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，每升培養(yǎng)基附加30g蔗糖，8g瓊脂，每個三角瓶接個3芽，每處理15瓶，然后放置在光照16h/d、光照2000lux，26℃條件下進行培養(yǎng)，14d后分別調(diào)查污染率、褐化率、成活率，得出的b9初代培養(yǎng)是最適宜的培養(yǎng)基為ms+6-ba0.6mg/l+iba0.1mg/l+pvp600mg/l(蔗糖30g/l，瓊脂7g/l)；步驟二，繼代培養(yǎng)將獲得的無菌外植體接種到含有不同6-ba、瓊脂、激素、光照的ms培養(yǎng)基中進行繼代培養(yǎng)，每升附加30g蔗糖，8g瓊脂，每瓶3株，每個處理10瓶，重復(fù)3次，b9的最優(yōu)培養(yǎng)處理為m4處理，即ms+6-ba0.8mg/l+iba0.1mg/l(瓊脂7g/l，光照2000lux)；步驟三，生根培養(yǎng)選擇繼代培養(yǎng)獲得的生長健壯，高度大于1.5cm的植株，生長時間為25天的芽子，接種于1/2ms+不同濃度iba處理(0、0.6、0.8、1.2、1.4mg/l)的生根培養(yǎng)中進行生根培養(yǎng)，每瓶接種3個，每個處理10瓶，重復(fù)3次，得到b9最適宜的生根培養(yǎng)基為1/2ms+iba1.4mg/l+褪黑素0.03mg/l(蔗糖30g/l，瓊脂7g/l)；步驟四，煉苗移栽當組培苗根長度達到2cm后，移到室外遮陰煉苗10-12天左右，然后將培養(yǎng)容器瓶口打開，自然光下進行開瓶煉苗2-4天后，將生根苗從培養(yǎng)基中取出，放入濃度為0.1％多菌靈溶液中浸泡5min，并把根部多余的培養(yǎng)基清洗干凈，最后用清水沖洗2-3次，然后移栽到容量相同的不同基質(zhì)處理(蛭石、珍珠巖、田間土、3/5田間土加上部2/5蛭石、3/5田間土+2/5珍珠巖)的營養(yǎng)缽中，移栽苗的管理方式為將生根苗在遮陰網(wǎng)下進行管理，第一周采用濃度為0.1％多菌靈溶液進行噴灌，第二周每天用水噴灌一次，保持基質(zhì)濕潤透氣。于14天后統(tǒng)計煉苗移栽成活率，得出用的3/5田間土加上部2/5蛭石煉苗移栽成活率最好。通過以下的實驗和數(shù)據(jù)對本發(fā)明的應(yīng)用效果作詳細的說明1、參考表1不同濃度pvp處理對外植體生長的影響；表1不同濃度pvp處理對外植體生長的影響注同列數(shù)相同字母表示差異不顯著(p>0.05)，不同字母表示差異顯著(p<0.05)。數(shù)據(jù)為mean±se(平均值±標準誤)；下同。2、不同6-ba濃度處理對b9繼代培養(yǎng)的影響：表2不同6-ba濃度對b9繼代培養(yǎng)的影響3、不同iba濃度處理b9生根的影響表3不同工濃度處理生根的影響4不同煉苗基質(zhì)對生根苗生長的影響：表4不同栽培基質(zhì)處理對移栽苗生長的影響基質(zhì)處理b9移栽成活率蛭石76.50±5.20a珍珠巖67.50±6.30c田間土68.50±3.42b3/5田間土+2/5蛭石82.00±4.33a3/5田間土+2/5珍珠巖71.00±3.45bc5、蘋果砧木b9增殖培養(yǎng)基的篩選將b9組培苗接種在含有不同6-ba濃度激素的培養(yǎng)基(蔗糖濃度30g/l，瓊脂濃度7g/l，ph5.8)中，觀察不同濃度激素下的擴繁系數(shù)，玻璃化程度及生長情況，每個處理30瓶，每瓶3株。6、瓊脂濃度對b9組培苗玻璃化的影響：觀察方法②的試驗結(jié)果，根據(jù)組培苗的擴繁系數(shù)等綜合表現(xiàn)，選出相對較好的繼代培養(yǎng)基作為對照，研究瓊脂濃度對組培苗玻璃化的影響。將b9的組培苗接種含有不同的瓊脂濃度(5.0、6.0、7.0g/l)，觀察不同濃度瓊脂下組培苗的分化系數(shù)、玻璃化程度及生長情況，每個處理30瓶，每瓶3株。7、iba對b9組培苗玻璃化的影響：觀察方法③的試驗結(jié)果，根據(jù)組培苗的擴繁系數(shù)等綜合表現(xiàn)，選出相對合適的繼代培養(yǎng)基，并以此作對照，研究6-ba與不同濃度iba配比對玻璃化程度的影響。觀察組培苗的分化系數(shù)、玻璃化程度及生長情況，每個處理30瓶，每瓶3株。8、結(jié)果與分析：8.1蘋果砧木b9增殖培養(yǎng)基的篩選：如表5所示，m5處理培養(yǎng)基即ms+6-ba0.8mg/l+iba0.1mg/l中b9組培苗擴繁系數(shù)最高為3.65，玻璃化率為34％。各個處理的玻璃化程度直接無顯著差異，但都比較高。以擴繁系數(shù)為指標來篩選，則m5處理培養(yǎng)基是較好的增殖培養(yǎng)基。表5增殖培養(yǎng)基篩選結(jié)果統(tǒng)計8.2瓊脂濃度對b9組培苗玻璃化的影響如表6所示，以處理培養(yǎng)基m5為對照得出，提高瓊脂濃度對組培苗玻璃化有一定的抑制作用，并一定程度上提高了擴繁系數(shù)，但是差異無顯著性差異。綜合考慮，m5處理培養(yǎng)基要優(yōu)于其它處理，其擴繁系數(shù)為3.68，玻璃化率為34％。表6瓊脂濃度對mac9組培苗的影響m793.720.3138.3iba對b9組培苗玻璃化的影響以m12處理培養(yǎng)基為對照，研究不同iba濃度對b9組培苗玻璃化的影響，如表7所示，提過iba濃度可以對擴繁系數(shù)有較大影響，處理m7、m9、m10與對照有顯著差異，并且提高iba濃度能夠明顯的降低玻璃化程度，但玻璃化程度仍比較高，綜合考慮m7為較優(yōu)培養(yǎng)基。表7iba對組培苗玻璃化的影響編號6-ba(mg/l)iba(mg/l)擴繁系數(shù)玻璃化程度m70.80.13.650.34m90.80.33.530.301m100.80.53.530.235m110.80.73.610.231m120.80.93.80.229以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)所作的任何修改、等同替換和改進等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。當前第1頁12