本發(fā)明涉及了不依賴于基因操作的增強(qiáng)植物特性的方法。

背景技術(shù)：

自古以來(lái)，人類采用品種改良的方法培育出具有優(yōu)異性質(zhì)的植物。以往的品種改良方法，為了達(dá)到使植物具有某些特性常要花費(fèi)很長(zhǎng)的時(shí)間，后來(lái)因?yàn)槭来龠M(jìn)技術(shù)的登場(chǎng)，縮短固著特性所需時(shí)間成為可能。但是即使采用世代促進(jìn)技術(shù)，仍然存在使植物固著某些特性需要數(shù)年時(shí)間的問(wèn)題。為此，目前正在開(kāi)發(fā)不需要固著步驟的花藥培養(yǎng)等生物技術(shù)。

還有，轉(zhuǎn)基因技術(shù)作為培育具有優(yōu)異特性的植物的方法被熟知。通過(guò)轉(zhuǎn)基因技術(shù)，可以培育出除草劑耐性農(nóng)作物、抗害蟲性農(nóng)作物、抗病性農(nóng)作物、高保存性農(nóng)作物等。

另外還提出了通過(guò)實(shí)施特定的處理誘導(dǎo)突變，從而增強(qiáng)植物特性的方法。例如，專利文獻(xiàn)1公開(kāi)了通過(guò)γ射線輻射和染色體加倍處理步驟，使植物具有耐寒性特性的品種改良方法。

還有，在不改變基因序列的情況下，調(diào)控植物特性的方法。例如，專利文獻(xiàn)2公開(kāi)了在植物營(yíng)養(yǎng)成長(zhǎng)期對(duì)植物培育環(huán)境給予鹽脅迫、寡照脅迫、強(qiáng)光脅迫、干旱脅迫、高濕度脅迫、高溫脅迫、低溫脅迫、營(yíng)養(yǎng)脅迫、重金屬脅迫、病害脅迫、缺氧脅迫、臭氧脅迫、co2脅迫、強(qiáng)風(fēng)脅迫等脅迫處理，從而調(diào)控植物次世代開(kāi)花時(shí)期的方法。

日本的大部分地區(qū)處于溫帶，北海道、東北地區(qū)等處于亞寒帶(冷帶)，所以目前日本對(duì)于栽培在亞熱帶～熱帶地區(qū)中的、不適合在日本的氣候下栽培的農(nóng)作物主要依靠輸入。

如上所述，在亞熱帶～熱帶地區(qū)中栽培的農(nóng)作物，大部分不適合在溫帶～寒帶環(huán)境中栽培，所以需要輸入這些農(nóng)作物。但是，這些農(nóng)作物為了大規(guī)模栽培，使用大量的農(nóng)藥，或?yàn)榱溯斎胗袝r(shí)進(jìn)行熏蒸等化學(xué)處理，所以很多輸入的農(nóng)作物對(duì)人體有害。另一方面，沒(méi)有進(jìn)行處理的農(nóng)作物，價(jià)格高，大多數(shù)情況下不能輕松購(gòu)買。

基于這種情況，需要開(kāi)發(fā)使亞熱帶～熱帶地區(qū)栽培的農(nóng)作物，能夠在溫度低的溫帶～寒帶地區(qū)培育的技術(shù)。

另外，根據(jù)植物種類不同，從播種至收獲需要數(shù)年時(shí)間的較多，所以栽培這類植物種，有投資回收等需要解決的問(wèn)題。因此，需要開(kāi)發(fā)促進(jìn)植物生長(zhǎng)速度的技術(shù)。

如上所述，增強(qiáng)植物的生長(zhǎng)速度以及耐寒性的技術(shù)有待于開(kāi)發(fā)。作為解決方案，品種改良方法存在達(dá)到目的所要時(shí)間過(guò)長(zhǎng)的問(wèn)題、花藥培養(yǎng)技術(shù)存在植物種間的栽培難易程度不同的問(wèn)題、轉(zhuǎn)基因技術(shù)有基因源的污染問(wèn)題、突變誘導(dǎo)方法有達(dá)到目的的不確定性高等問(wèn)題。

目前還沒(méi)有在不改變基因序列的情況下，增強(qiáng)植物的生長(zhǎng)速度和環(huán)境適應(yīng)特性的技術(shù)。

參考文獻(xiàn)：

專利文獻(xiàn)1：特開(kāi)2006-25632號(hào)公報(bào)

專利文獻(xiàn)2：特開(kāi)2016-182094號(hào)公報(bào)

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

鑒于上述現(xiàn)有技術(shù)中存在的問(wèn)題，本發(fā)明的目的在于提供一種在不進(jìn)行轉(zhuǎn)基因操作的情況下，增強(qiáng)植物特性的新技術(shù)。

本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

一種增強(qiáng)植物特性的方法，包括：將植物組織凍結(jié)的凍結(jié)步驟；將凍結(jié)的植物組織解凍的解凍步驟；從解凍的植物組織中培育出植物的生長(zhǎng)發(fā)育步驟。

根據(jù)本發(fā)明的特性增強(qiáng)方法，尤其能夠增強(qiáng)植物的生長(zhǎng)特性和/或耐寒性。

在本發(fā)明優(yōu)選的技術(shù)方案中，在所述的凍結(jié)步驟中，凍結(jié)時(shí)的最低溫度為-20℃以下。凍結(jié)時(shí)的溫度設(shè)定為-20℃以下，有利于增強(qiáng)植物的特性。

在本發(fā)明優(yōu)選的技術(shù)方案中，在所述凍結(jié)步驟中，以小于0.5℃/日的速度來(lái)降溫，進(jìn)行所述植物組織的凍結(jié)。如此緩慢降低溫度，可以提高凍結(jié)步驟后的植物組織的生存率，進(jìn)而提高本發(fā)明方法的效率。

在本發(fā)明優(yōu)選的技術(shù)方案中，所述凍結(jié)步驟的期間為180天以上。通過(guò)180天以上的凍結(jié)時(shí)間進(jìn)行凍結(jié)，可以提高植物特性的增強(qiáng)效果。

在本發(fā)明優(yōu)選的技術(shù)方案中，在所述凍結(jié)步驟中，將植物組織浸泡在糖類水溶液中的狀態(tài)下進(jìn)行凍結(jié)。通過(guò)該步驟，可提高凍結(jié)步驟后的植物組織的生存率，進(jìn)而提高本發(fā)明方法的效率。

在本發(fā)明優(yōu)選的技術(shù)方案中，所述的糖類為海藻糖。采用海藻糖浸泡植物組織，可進(jìn)一步提高凍結(jié)步驟后的植物組織的生存率。

本發(fā)明還提供采用上述的方法得到的特性增強(qiáng)的植物、由該特性增強(qiáng)的植物得到的作為嫁接用接穗的植物組織以及將該植物組織作為接穗嫁接得到的植物、及由這些植物得到的能夠培育出與該植物獨(dú)立的植物個(gè)體的除了種子以外的植物組織。

本發(fā)明還提供檢索植物特性增強(qiáng)基因的方法，該方法包括：采用本發(fā)明所述的方法對(duì)植物進(jìn)行處理的步驟；鑒定在所述經(jīng)過(guò)處理的植物中相對(duì)于未經(jīng)過(guò)處理的植物呈現(xiàn)高表達(dá)量的rna的步驟。

本發(fā)明還提供一種植物特性增強(qiáng)因子的篩選方法，該方法包括如下步驟：采用本發(fā)明所述的方法進(jìn)行處理的植物中，相對(duì)于沒(méi)有進(jìn)行處理的植物呈現(xiàn)高的表達(dá)量的rna作為指標(biāo)；在用被測(cè)物質(zhì)處理的所述植物中，所述rna的表達(dá)量高于未處理該被測(cè)物質(zhì)的植物中的該rna的表達(dá)量時(shí)，將該被測(cè)物質(zhì)作為植物特性增強(qiáng)因子來(lái)篩選。

根據(jù)本發(fā)明，能夠簡(jiǎn)便篩選出植物特性增強(qiáng)因子。

本發(fā)明的效果：

根據(jù)本發(fā)明，在沒(méi)有采用所要時(shí)間為數(shù)年的品種改良方法以及轉(zhuǎn)基因技術(shù)的情況下，能夠獲得特性增強(qiáng)的植物。尤其根據(jù)本發(fā)明，能夠增強(qiáng)植物的生長(zhǎng)特性和/或耐寒性。

附圖說(shuō)明

圖1為進(jìn)行凍結(jié)、解凍處理的木瓜和未處理的木瓜發(fā)芽30天后的照片。

圖2為進(jìn)行凍結(jié)、解凍處理的木瓜和未處理的木瓜發(fā)芽45天后的照片。

圖3為進(jìn)行凍結(jié)、解凍處理的木瓜和未處理的木瓜發(fā)芽60天后的照片。

圖4為進(jìn)行凍結(jié)、解凍處理的木瓜和未處理的木瓜發(fā)芽3個(gè)月后的照片。

圖5為進(jìn)行凍結(jié)、解凍處理的木瓜和未處理的木瓜收獲期的照片。

圖6為在凍結(jié)、解凍處理的菠蘿和未處理的菠蘿的栽培過(guò)程中，隨栽培時(shí)間觀察到的照片；最下面的照片為發(fā)芽一年后的菠蘿。

圖7為通過(guò)凍結(jié)、解凍處理栽培的香蕉的照片。

圖8為通過(guò)凍結(jié)、解凍處理栽培的咖啡樹的照片。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明的特性增強(qiáng)方法，對(duì)于適用范圍不予特別限定，可適用于所有的植物種。例如，可適用于屬于番木瓜科(caricaceae)、鳳梨科(brome-liaceae)、芭蕉科(musaceae)、葫蘆科(cucurbitaceae)、桃金娘科(myrtaceae)、酢漿草科(oxalidaceae)、桑科(moraceae)、錦葵科(malvaceae)、茜草科(rubiaceae)、樟科(lauraceae)、西番蓮科(passifloraceae)、無(wú)患子科(sapindaceae)、金絲桃科(clusiaceae)、柿樹科(ebenaceae)、蕓香科(rutaceae)、番荔枝科(annonaceae)、棕櫚科(arecaceae)、仙人掌科(cactaceae)、薔薇科(rosaceae)的植物等。

具體的，可適用于屬于番木瓜屬(carica)、鳳梨屬(ananas)、芭蕉屬(musa)、羅漢果屬(siraitia)、番石榴屬(psidium)、陽(yáng)桃屬(averrhoa)、榕屬(ficus)、可可屬(theobroma)、咖啡屬(coffea)、樟屬(cinnamomum)、西番蓮屬(passiflora)、荔枝屬(litchi)、藤黃屬(garcinia)、柿樹屬(diospyros)、香肉果屬(casimiroa)、番荔枝屬(annona)、椰棗屬(phoenix)、量天尺屬(hylocereus)、櫻屬(cerasus)的植物等。

本發(fā)明的特性增強(qiáng)方法，包括將植物組織凍結(jié)的凍結(jié)步驟。

用于所述凍結(jié)步驟的植物組織，優(yōu)選為由植物獲得的能夠培育出與該植物獨(dú)立的植物個(gè)體的植物組織。

植物具有全能性，所以無(wú)論植物的哪一部分都可以為“由植物獲得的能夠培育出與該植物獨(dú)立的植物個(gè)體的植物組織”，可以為植物的種子、根、芽、莖、花瓣等，優(yōu)選為種子、根以及芽。

上述的用于凍結(jié)步驟的植物組織，可以直接凍結(jié)，也可以切除一部分以切片的形式凍結(jié)。

在凍結(jié)步驟中，將植物組織浸泡在液體的狀態(tài)下凍結(jié)為好。浸泡植物組織的液體可以使用dmso(二甲基亞砜)、甘油、乙二醇、糖類等的水溶液制備而成的抗凍害劑。所述液體優(yōu)選為糖類水溶液，更優(yōu)選為海藻糖水溶液。

在凍結(jié)步驟中，凍結(jié)時(shí)的最低溫度的上限優(yōu)選為-20℃以下，更優(yōu)選為-30℃以下，更優(yōu)先為-40℃以下，更優(yōu)選為-50℃以下，最優(yōu)先為-55℃以下為好。

進(jìn)一步，凍結(jié)時(shí)的最低溫度的下限優(yōu)選為-200℃以上，更優(yōu)選為-150℃以上，更優(yōu)先為-100℃以上，更優(yōu)選為-80℃以上，更優(yōu)選為-70℃以上，最優(yōu)選為-65℃以上。

在凍結(jié)步驟中，不要急速降溫至凍結(jié)最低溫度，而緩慢降低溫度為好。降溫速度是凍結(jié)后生存率的重要因素，因此控制降溫速度尤其重要。降溫速度優(yōu)選為0.8℃/日以下，更優(yōu)選為0.6℃/日以下，更優(yōu)選為0.5℃/日以下，更優(yōu)選為0.3℃/日以下，更優(yōu)選為0.2℃/日以下，最優(yōu)選為0.1℃/日以下。

為了緩慢降低溫度，在凍結(jié)步驟中可以采用程序降溫儀。

凍結(jié)步驟的期間的下限優(yōu)選100天以上，更優(yōu)選120天以上，更優(yōu)選150天以上，更優(yōu)選160天以上，最優(yōu)選180天以上。

其中，所述“凍結(jié)步驟的期間”是指開(kāi)始降低植物組織溫度的時(shí)間點(diǎn)到開(kāi)始解凍步驟為止的期間。

對(duì)于解凍步驟中的解凍方法不給予特別限定?？梢詫鼋Y(jié)狀態(tài)的植物組織放置在室溫中，使其自然解凍，也可以將凍結(jié)狀態(tài)的植物組織用流水沖洗，使其解凍。

本發(fā)明的特性增強(qiáng)方法，包括采用上述方法從解凍的植物組織培育出植物的生長(zhǎng)發(fā)育步驟。

在凍結(jié)步驟和解凍步驟中使用的植物組織為植物的種子時(shí)，將該種子用常規(guī)的方法播種，然后使其發(fā)育成植物個(gè)體。

凍結(jié)步驟以及解凍步驟中使用的植物組織為種子以外的植物部位時(shí)，可以將該植物部位直接轉(zhuǎn)移至土壤或培養(yǎng)基中使其發(fā)芽，也可以將該植物部位切成小塊，按照常規(guī)方法進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，經(jīng)過(guò)愈傷組織誘導(dǎo)、不定胚誘導(dǎo)、不定芽誘導(dǎo)等方式發(fā)育成植物個(gè)體。

經(jīng)過(guò)上述的凍結(jié)步驟、解凍步驟以及生長(zhǎng)發(fā)育步驟培育成的植物，其特性被增強(qiáng)。

具體的，根據(jù)本發(fā)明的特性增強(qiáng)方法，能夠顯著增強(qiáng)植物的生長(zhǎng)速度以及耐寒性。

即，即使只能在熱帶～亞熱帶地區(qū)中栽培可能的植物，采用本發(fā)明的特性增強(qiáng)方法處理后，也可以在溫帶～寒帶地區(qū)中栽培。

以霉菌香蕉枯萎病菌(fusariumoxysporumf.sp.cubense)為病原體的香蕉傳染病-新巴拿馬病，對(duì)馬來(lái)西亞、菲律賓、臺(tái)灣以及非洲等多國(guó)的香蕉栽培帶來(lái)了損失，而近年其損害擴(kuò)大到中國(guó)、印尼、澳大利亞、約旦、莫桑比克、中美洲等多國(guó)。

該霉菌主要在亞熱帶～熱帶地區(qū)傳播而對(duì)該地區(qū)帶來(lái)?yè)p害，而對(duì)于溫帶～寒帶地區(qū)，因?yàn)闇囟炔贿m合于該霉菌的生長(zhǎng)，病害不會(huì)擴(kuò)大到這些地區(qū)。

因此，通過(guò)本發(fā)明的特性增強(qiáng)方法增強(qiáng)香蕉的耐寒性，然后栽培在溫帶～寒帶地區(qū)，可以避免新巴拿馬病的威脅，穩(wěn)定提供香蕉。

另外，根據(jù)本發(fā)明的特性增強(qiáng)方法，可以增強(qiáng)植物的耐暑性、高地適應(yīng)特性以及低地適應(yīng)特性等環(huán)境適應(yīng)性。即，通過(guò)本發(fā)明的特性增強(qiáng)方法，即只能在溫帶～寒帶地區(qū)栽培的植物，也能夠在熱帶～亞熱帶地區(qū)中栽培，或在高地栽培的植物，能夠在在低地栽培，其相反也成為可能。

還有，根據(jù)本發(fā)明的特性增強(qiáng)方法，也可以增強(qiáng)植物的豐產(chǎn)性、抗病害蟲性和抗腐根性能等。

本發(fā)明的特性增強(qiáng)方法也可以包括篩選方法。

即，作為植物組織使用種子時(shí)，取數(shù)個(gè)種子進(jìn)行凍結(jié)步驟、解凍步驟、生長(zhǎng)發(fā)育步驟，并對(duì)經(jīng)處理后的每一個(gè)種子進(jìn)行發(fā)芽以及栽培，再?gòu)闹泻Y選出具有優(yōu)異特性的植株。

還有，作為植物組織使用種子以外的植物部位時(shí)，進(jìn)行凍結(jié)步驟、解凍步驟以及生長(zhǎng)發(fā)育步驟后，從生長(zhǎng)發(fā)育的多個(gè)芽、愈傷組織、不定胚以及不定芽中培育出植物個(gè)體，再?gòu)倪@些植物個(gè)體中篩選出具有優(yōu)異特性的植株。

由適用本發(fā)明的特性增強(qiáng)方法的植物中，以有性生殖以外的方法來(lái)得到的次世代植物的增強(qiáng)的特性是可以遺傳的。因此，若通過(guò)本發(fā)明的特性增強(qiáng)方法能夠獲得特性增強(qiáng)的植物，那么從該植物得到的且能夠培育出與該植物獨(dú)立的植物個(gè)體的種子以外的植物組織(子株)中培育得到的次世代以后的植株也具有該增強(qiáng)的特性。

還有，實(shí)施本發(fā)明的特性增強(qiáng)方法的植物，作為嫁接用接穂時(shí)，也能夠使植株具有增強(qiáng)的特性。

采用本發(fā)明的特性增強(qiáng)方法中所述的方法處理的植物，其植物細(xì)胞內(nèi)的rna表達(dá)量相對(duì)于未處理的植物顯著增加。可以認(rèn)為rna表達(dá)量的顯著增加是特性增強(qiáng)的主要原因。即，采用本發(fā)明的特性增強(qiáng)方法時(shí)，可以認(rèn)為在植物細(xì)胞內(nèi)表達(dá)量增加的rna的編碼基因是該植物特性的增強(qiáng)基因。

因此，通過(guò)分析和鑒定實(shí)施本發(fā)明的特性增強(qiáng)方法后在植物細(xì)胞內(nèi)表達(dá)量增加的rna，可以進(jìn)行植物特性的增強(qiáng)基因的探索。

即，本發(fā)明還提供植物特性的增強(qiáng)基因的檢索方法，該探索方法包括：采用本發(fā)明所述的特性增強(qiáng)方法對(duì)植物進(jìn)行處理的步驟；以及鑒定相對(duì)于未經(jīng)過(guò)處理的植物，在所述經(jīng)過(guò)處理的植物中呈現(xiàn)高表達(dá)量的rna的步驟。

對(duì)于上述檢索方法中所述的鑒定rna的步驟，可以采用常規(guī)方法進(jìn)行。例如，利用基因芯片、rna測(cè)序等轉(zhuǎn)錄組分析方法來(lái)鑒定采用本發(fā)明特性增強(qiáng)方法處理的植物中呈現(xiàn)高表達(dá)量的rna。

如上所述，實(shí)施本發(fā)明特性增強(qiáng)方法的植物中表達(dá)量增加的rna為特性增強(qiáng)的主要原因，從而將該rna作為指標(biāo)時(shí)，能夠篩選出植物的特性增強(qiáng)因子。

即，本發(fā)明還提供特性增強(qiáng)因子的篩選方法，該方法具體為：在用被測(cè)物質(zhì)處理的所述植物中，所述rna的表達(dá)量高于未處理該被測(cè)物質(zhì)的植物中的該rna的表達(dá)量時(shí)，將該被測(cè)物質(zhì)作為植物特性增強(qiáng)因子來(lái)篩選。

rna的表達(dá)量作為植物的特性增強(qiáng)的主要原因，該rna的表達(dá)量可以用nouthern印跡法、實(shí)時(shí)定量熒光pcr等常規(guī)方法來(lái)確認(rèn)得到。

實(shí)施例1木瓜的特性增強(qiáng)

將木瓜種子浸泡在海藻糖水溶液中的狀態(tài)下，用程序凍結(jié)儀進(jìn)行靜置凍結(jié)。以0.5℃/日的速度來(lái)緩慢凍結(jié)180天，凍結(jié)時(shí)最低溫度達(dá)到-60℃。

將凍結(jié)的木瓜種子用流水沖洗的方式進(jìn)行解凍，對(duì)解凍的種子進(jìn)行播種、栽培。栽培地為日本的岡山縣或中國(guó)大連市郊區(qū)。

對(duì)于經(jīng)過(guò)凍結(jié)、解凍處理的種子和未經(jīng)處理的種子，隨著其栽培時(shí)間觀察生長(zhǎng)情況，結(jié)果如圖1-5。

如圖1-5所示，相對(duì)于未經(jīng)處理的木瓜，經(jīng)過(guò)上述凍結(jié)解凍處理的木瓜的生長(zhǎng)速度顯著提高。這一結(jié)果顯示，采用本發(fā)明的特性增強(qiáng)方法，能夠增強(qiáng)植物的生長(zhǎng)特性。

木瓜的原產(chǎn)地為由墨西哥南部至西印度諸島，木瓜在熱帶的各國(guó)中栽培，其耐寒性較差。但是，經(jīng)過(guò)本發(fā)明的凍結(jié)、解凍處理的木瓜，即使在處于溫帶的岡山縣栽培時(shí)，也能夠正常生長(zhǎng)，如圖1-5所示。這一結(jié)果顯示，本發(fā)明的特性增強(qiáng)方法可以增強(qiáng)植物的耐寒性。

還有，如圖5所示，經(jīng)過(guò)凍結(jié)解凍處理的木瓜比未經(jīng)處理的木瓜，結(jié)果更多。這一結(jié)果顯示，采用本發(fā)明的特性增強(qiáng)方法，能夠增強(qiáng)植物的豐產(chǎn)性。

在本實(shí)施例中，雖然沒(méi)有使用農(nóng)藥，但在木瓜的栽培過(guò)程中沒(méi)有受到病蟲害的侵害。還有，將與本實(shí)施例相同的方法進(jìn)行凍結(jié)解凍處理的木瓜進(jìn)行大規(guī)模栽培時(shí)，在其栽培過(guò)程中也沒(méi)有受到病蟲害的侵害。這一結(jié)果顯示，本發(fā)明的特性增強(qiáng)方法可以增強(qiáng)植物的抗病蟲害性。

還有，本發(fā)明還確認(rèn)了經(jīng)過(guò)凍結(jié)解凍處理的木瓜具有耐腐根性。這一結(jié)果顯示，采用本發(fā)明的特性增強(qiáng)方法，能夠增強(qiáng)植物的抗腐根性。

栽培地為中國(guó)大連時(shí)也得到在日本岡山縣栽培時(shí)相同的效果。

實(shí)施例2菠蘿的特性增強(qiáng)

將菠蘿種子用與實(shí)施例1相同的方法進(jìn)行凍結(jié)解凍處理，然后播種、栽培。將經(jīng)過(guò)凍結(jié)解凍處理的菠蘿和未經(jīng)處理的菠蘿同時(shí)進(jìn)行播種、栽培，隨著時(shí)間觀察其生長(zhǎng)情況，結(jié)果如圖6-8所示。

如圖6所示，同實(shí)施例1中的木瓜一樣，經(jīng)凍結(jié)解凍處理的菠蘿的成長(zhǎng)特性以及耐寒性也被增強(qiáng)。

實(shí)施例3香蕉的特性增強(qiáng)(1)

將香蕉新株的根切成原片，用實(shí)施例1相同的方法來(lái)進(jìn)行凍結(jié)和解凍。凍結(jié)解凍后，把根切成小塊，將片段化的生長(zhǎng)細(xì)胞塊在培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使其發(fā)芽。生長(zhǎng)成適當(dāng)程度的幼苗轉(zhuǎn)移至土壤后栽培。栽培地點(diǎn)為日本的岡山縣或中國(guó)大連市郊區(qū)。

結(jié)果顯示，種植幼苗后約9個(gè)月，生長(zhǎng)成可以收獲果實(shí)的狀態(tài)(圖7)。一般情況下，種植香蕉幼苗后，生長(zhǎng)成能夠收獲果實(shí)為止需要的時(shí)間為1年以上，最快也要1年。這一結(jié)果顯示，采用本發(fā)明的凍結(jié)解凍處理方法，能夠顯著提高香蕉的生長(zhǎng)速度。

還有，香蕉和木瓜的原產(chǎn)地均為亞熱帶～熱帶，一般在溫帶地區(qū)栽培時(shí)不能結(jié)果。但在本實(shí)施例中，即使在處于溫帶的日本岡山縣栽培，也可以收獲得到果實(shí)(圖7)。

這一結(jié)果顯示，根據(jù)本發(fā)明的凍結(jié)解凍處理方法，能夠增強(qiáng)香蕉的耐寒性。

栽培地為中國(guó)大連時(shí)也得到在日本岡山縣栽培時(shí)相同的效果。

實(shí)施例4香蕉的特性增強(qiáng)(2)

取香蕉地上部分萌生出的腋芽，除掉葉和根，加工成竹筍狀，然后用與實(shí)施例1相同的方法來(lái)進(jìn)行凍結(jié)和解凍，將解凍后的腋芽轉(zhuǎn)移至盆里種植。之后，莖腐爛消失，萌發(fā)了新芽。栽培該新芽，得到了增強(qiáng)生長(zhǎng)速度和耐寒性的香蕉。

實(shí)施例5咖啡的特性增強(qiáng)

將臺(tái)灣臺(tái)南市中栽培的咖啡樹的種子，用與實(shí)施例1相同的方法來(lái)進(jìn)行凍結(jié)解凍處理，然后使其發(fā)芽后種植在日本的岡山縣(圖8)。結(jié)果顯示，經(jīng)凍結(jié)解凍處理的咖啡樹相對(duì)于未經(jīng)處理的在臺(tái)北臺(tái)南市栽培的咖啡樹，其生長(zhǎng)速度促進(jìn)了3～40％。

這一結(jié)果顯示，采用本發(fā)明的凍結(jié)解凍處理，可以提高咖啡樹的生長(zhǎng)速度。同時(shí)，在比臺(tái)灣的臺(tái)南市氣溫低的日本的岡山縣也能夠正常生長(zhǎng)，說(shuō)明采用本發(fā)明的凍結(jié)解凍處理方法，可以提高咖啡樹的耐寒性。

經(jīng)凍結(jié)解凍處理后的種子種植在中國(guó)大連時(shí)也得到在日本岡山縣栽培時(shí)相同的效果。

實(shí)施例6其他植物種的特性增強(qiáng)

將下述植物的種子用與實(shí)施例1相同的方法來(lái)進(jìn)行凍結(jié)解凍處理，從處理后的植物組織中培育出植物個(gè)體后，進(jìn)行栽培。

所述植物為羅漢果、番石榴、楊桃、無(wú)花果、可可、肉桂、西番蓮、荔枝、山竹、黑肉柿(blacksapote)、白香肉果(whitesapote)、番荔枝、棗椰、紅心火龍果、銀杏。

上述舉例的任何一種植物，通過(guò)本發(fā)明的凍結(jié)解凍處理后，其生長(zhǎng)速度和耐寒性都被增強(qiáng)。這一結(jié)果顯示，本發(fā)明的特性增強(qiáng)方法對(duì)所有的植物種有效。

實(shí)施例7分子生物學(xué)分析

對(duì)于上述實(shí)施例中經(jīng)過(guò)凍結(jié)解凍處理后特性增強(qiáng)的木瓜、香蕉、西番蓮、番石榴以及未經(jīng)處理的同種植物進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組分析。結(jié)果顯示，任何一種植物，經(jīng)過(guò)凍結(jié)解凍處理后，其mrna表達(dá)量提高了32-38倍。

這一結(jié)果表明，凍結(jié)解凍處理可以顯著提高生長(zhǎng)特性以及耐寒性相關(guān)的增強(qiáng)基因的表達(dá)量。

即，該結(jié)果顯示通過(guò)分析由于凍結(jié)解凍處理而提高的mrna，可以鑒定出增強(qiáng)生長(zhǎng)特性、耐寒性等植物特性的增強(qiáng)基因。

同時(shí)，該結(jié)果顯示，將上述增強(qiáng)基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物mrna作為指標(biāo)，可以篩選得到增強(qiáng)生長(zhǎng)特性、耐寒性等植物特性的增強(qiáng)因子。

產(chǎn)業(yè)上的利用可能性：

本發(fā)明適用于農(nóng)作物的生產(chǎn)技術(shù)。