本發(fā)明涉及一種樹木的組織培養(yǎng)技術(shù)，具體為瀕危疙瘩楊的組培繁殖技術(shù)。

背景技術(shù)：

疙瘩楊，是銀白楊的一個(gè)變異品種，因其樹干和大的枝干有環(huán)狀或不規(guī)則的凸起，形似疙瘩，故而得名。它的枝杈稀疏、冠形松散、枝干尖削度大、表皮粗糙。其木材紋理縱橫交錯(cuò)，在縱切面上顯現(xiàn)出自然而無序的各種奇特美麗的圖案，是一種極為珍稀的特種工藝用材樹種。它的用途廣泛，其原木抗縱橫向壓力遠(yuǎn)高于箭桿楊、新疆楊等普通楊樹樹種，可做木碗、木盆和其他器具、木制家具，以及用做室內(nèi)雕刻藝術(shù)品，同時(shí)還是優(yōu)良的綠化觀賞樹種等。

新疆當(dāng)?shù)馗泶駰顬l臨滅絕，搶救野生疙瘩楊的任務(wù)異常緊迫。疙瘩楊的種源稀少，扦插繁殖材料有限，傳統(tǒng)林木繁殖方法無法解決其繁殖保護(hù)問題，需要快速繁殖。

胡受軍等發(fā)表的文章“疙瘩楊組培快繁技術(shù)及苗期管理”（新疆林業(yè)，2010，5）提供了一種利用組織培養(yǎng)快速繁殖疙瘩楊的技術(shù)方法，能夠?qū)崿F(xiàn)疙瘩楊的組培繁殖，但由于其培養(yǎng)基及激素配比選擇及培養(yǎng)控制條件與方法不盡理想，其誘導(dǎo)成苗率低，繁殖系數(shù)、生根系數(shù)不高，并且移栽成活率不高，影響了組織培養(yǎng)的效果。需要進(jìn)一步改進(jìn)開發(fā)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種可高效快速繁殖疙瘩楊的組培技術(shù)方法。

本發(fā)明提供的疙瘩楊組培快繁技術(shù)，包括外植體準(zhǔn)備、誘導(dǎo)、增殖、生根、煉苗、移栽環(huán)節(jié)，其特征在于組織培養(yǎng)條件為PH值5.4-5.8，溫度25℃-28℃，自然光照12h/d，各步驟如下：

（1）外植體準(zhǔn)備。取當(dāng)年生的無蟲害、無病害的健壯的嫩枝條作為外植體，除去多余的葉片和葉柄，抹去枝條上的絨毛，用75%的酒精擦拭莖段和腋芽處，把處理好的莖桿剪成10cm左右，用膜或報(bào)紙包好放在溫度為4℃的冰箱中冷藏12h，將冷藏過后的莖桿在洗潔精水中沖洗干凈，在流動(dòng)的自來水上沖洗1h， 將沖洗干凈的枝條剪成1.5-2cm的莖段，每一個(gè)莖段帶一個(gè)芽；用75%的酒精：0.1%的升汞為1:3的比例混合液對(duì)外枝體進(jìn)行消毒6-8min，取出后用無菌水沖洗5-6次后備用。

（2）誘導(dǎo)。培養(yǎng)基為MS+6BA0.2mg/L+NAA0.01mg/L，蔗糖濃度30g/L，瓊脂5g/L，將前述整備的莖段接種在本培養(yǎng)基上，培養(yǎng)30d，新芽生長(zhǎng)至4㎝高以上，每一節(jié)間約0.5-1㎝左右。

（3）增殖。培養(yǎng)基MS+6BA0.2mg/L+NAA0.01-0.03mg/L，蔗糖濃度30g/L，瓊脂5g/L，將獲得的誘導(dǎo)苗剪成1.5㎝左右的長(zhǎng)度接種在本培養(yǎng)基上，20d后獲得叢生芽。

（4）復(fù)壯。培養(yǎng)基為1/2MS+6BA0.1mg/L+NAA0.01mg/L，蔗糖40g/L，瓊脂5.5g/L，將叢生芽切割分離為單株轉(zhuǎn)接至本培養(yǎng)基上，培養(yǎng)20-30d。（5）生根。培養(yǎng)基為1/2MS+IBA0.1-0.2mg/L，蔗糖40g/L，瓊脂5.5g/L，將復(fù)壯后的單株苗接種到本培養(yǎng)基上培養(yǎng)15d。

（6）煉苗。溫室內(nèi)煉苗，先開瓶煉苗3-4d，然后取出用水洗凈根部的培養(yǎng)基，把洗好的瓶苗移栽到泥炭：珍珠巖為6:1的穴盤中，馴化期30d，前期空氣濕度90%以上，溫度25-28℃，后期空氣濕度降低到75%以上，每7d噴施1次多菌靈1000倍液。

（7）移栽。經(jīng)過馴化后的成苗移栽到營(yíng)養(yǎng)缽內(nèi)，基質(zhì)為泥炭：珍珠巖為體積比6：1；30-50d后換大缽，再長(zhǎng)30d后，植株高度30cm左右便可直接移入大田定植。

該方法激素配比合理，培養(yǎng)基經(jīng)過優(yōu)化，誘導(dǎo)率顯著提高，并且增加了誘導(dǎo)后復(fù)壯環(huán)節(jié)，為后續(xù)生根成功打下基礎(chǔ)，生根后經(jīng)煉苗、兩次轉(zhuǎn)移訓(xùn)化，穩(wěn)定后定植大田。誘導(dǎo)率98%，增殖系數(shù)4以上，15d生根率80%以上，生根條數(shù)為2-4條，生長(zhǎng)健壯。移栽成活率95%以上。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1。

疙瘩楊的組培快繁技術(shù)，包括外植體準(zhǔn)備、誘導(dǎo)、增殖、生根、煉苗、移栽環(huán)節(jié)，其特征在于組織培養(yǎng)條件為PH值5.4-5.8，溫度25℃-28℃，自然光照12h/d，各步驟及條件如下：

（1）外植體準(zhǔn)備。取當(dāng)年生的無蟲害、無病害的健壯的嫩枝條作為外植體，除去多余的葉片和葉柄，抹去枝條上的絨毛，用75%的酒精擦拭一遍莖段和腋芽處。把處理好的莖桿剪成10cm左右，用膜包好放在溫度為4℃的冰箱中冷藏12h。將冷藏過后的莖桿在洗潔精水中沖洗干凈，在流動(dòng)的自來水上沖洗1h。將沖洗干凈的枝條剪成1.5-2cm的莖段，每一個(gè)莖段帶一個(gè)芽。用75%的酒精：0.1%的升汞為1:3的比例混合液對(duì)外枝體進(jìn)行消毒6-8min，取出后用無菌水沖洗5-6次后備用。

（2）誘導(dǎo)。培養(yǎng)基為MS+6BA0.2mg/L+NAA0.01mg/L，蔗糖濃度30g/L，瓊脂5g/L。將前述整備的莖段接種在本培養(yǎng)基上，培養(yǎng)30d，新芽生長(zhǎng)至4㎝高以上，每一節(jié)間約0.5-1㎝左右。

（3）增殖。培養(yǎng)基MS+6BA0.2mg/L+NAA0.03mg/L，蔗糖濃度30g/L，瓊脂5g/L，將獲得的誘導(dǎo)苗剪成1.5㎝左右的長(zhǎng)度接種在上述培養(yǎng)基上，20d后獲得叢生芽。

（4）復(fù)壯。培養(yǎng)基為1/2MS+6BA0.1mg/L+NAA0.01mg/L，蔗糖40g/L，瓊脂5.5g/L，將叢生芽切割分離為單株轉(zhuǎn)接至本培養(yǎng)基上，培養(yǎng)30d。

（5）生根。培養(yǎng)基為1/2MS+IBA0.1mg/L，蔗糖40g/L，瓊脂5.5g/L，將復(fù)壯后的單株苗接種到本培養(yǎng)基上培養(yǎng)15d。

（6）煉苗。溫室內(nèi)煉苗，先開瓶煉苗3-4d，然后取出用水洗凈根部的培養(yǎng)基，把洗好的瓶苗移栽到泥炭：珍珠巖為6:1的穴盤中，馴化期30d，前期空氣濕度90%以上，溫度25-28℃，后期空氣濕度降低到75%以上，每7d噴施1次多菌靈1000倍液。

（7）移栽。經(jīng)過馴化后的成苗移栽到營(yíng)養(yǎng)缽內(nèi)，基質(zhì)為泥炭：珍珠巖為體積比6：1；30d后換大缽，再長(zhǎng)30d后，植株高度30cm左右便可直接移入大田定植。

本實(shí)施例為最優(yōu)實(shí)施例。

與本實(shí)施例不同的實(shí)施例為在發(fā)明技術(shù)方案的激素取值范圍內(nèi)以及操作方法相近似的具體實(shí)施方法。包括增殖培養(yǎng)基為MS+6BA0.2mg/L+NAA0.01mg/L或者M(jìn)S+6BA0.2mg/L+NAA0.02mg/L，以及生根培養(yǎng)基為1/2MS+IBA0.2mg/L。