本發(fā)明屬于甘蔗組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域。更具體地,涉及一種甘蔗新品種粵糖03-373的組培快繁方法。
背景技術(shù):
甘蔗是我國重要的糖能作物,與其他能源作物相比,能源甘蔗在原料供應(yīng)、乙醇產(chǎn)量、生產(chǎn)成本及加工技術(shù)等方面具有明顯優(yōu)勢;作為食糖,甘蔗是關(guān)系國計(jì)民生的主要農(nóng)產(chǎn)品,甘蔗糖業(yè)是我國重要的經(jīng)濟(jì)產(chǎn)業(yè)。選育和推廣高產(chǎn)抗逆性強(qiáng)的甘蔗新品種是提高我國甘蔗產(chǎn)量以及提高甘蔗品質(zhì)的重要手段?;浱?3-373是申請人單位近年來新育成的又一粵糖系列新品種,該品種是以粵糖92-1287為母本、粵糖93-159為父本通過有性雜交選育出的一個優(yōu)良品種。該品種早中熟、高糖、豐產(chǎn)穩(wěn)產(chǎn)、分蘗力強(qiáng)、宿根性好、抗逆性較強(qiáng)、農(nóng)藝性狀佳。多年多點(diǎn)試驗(yàn)結(jié)果表明,粵糖03-373蔗莖產(chǎn)量為104.03t/hm2,分別比roc16和roc22增產(chǎn)15.2%和0.5%;11月至翌年1月平均蔗糖分15.16%,分別比roc16和roc22高0.39和0.45個百分點(diǎn);含糖量15.67t/hm2,分別比roc16和roc22增糖17.9%和2.6%,于2009-2010參加全國農(nóng)技中心組織的全國區(qū)試,適合在廣東、廣西、云南、福建等地種植,并且于2011年8月通過國家品種審定,選育及示范研究于2015年12月通過湛江市成果鑒定。
我國自2010年起,國家農(nóng)業(yè)部農(nóng)技推廣與服務(wù)中心組織全國幾個主產(chǎn)蔗區(qū)全面開展了“全國甘蔗健康種苗推廣與示范”項(xiàng)目,為期四年的技術(shù)示范與種植推廣服務(wù),快速推動了甘蔗健康種苗技術(shù)應(yīng)用,增產(chǎn)增效十分顯著。因此,高效的組培快繁綜合技術(shù)體系的建立,可為該品種種植推廣和長期利用、脫毒種苗繁育和基因工程育種奠定基礎(chǔ)。
甘蔗組培主要包括愈傷組織途徑和莖尖與腋芽繁殖途徑。在以往研究過程中發(fā)現(xiàn):大多甘蔗組培苗繼代周期均為15-20天,超過20天,植株變黃,增殖能力降低。如專利cn102090340a公布的甘蔗種芽分生組織經(jīng)脫毒處理和病毒檢測后的組培快繁方法,但通過這些途徑獲得的甘蔗組培苗在增值分化過程中,由于培養(yǎng)基配方和培養(yǎng)條件的缺陷,容易出現(xiàn)變異,影響了種苗原有的優(yōu)良遺傳性狀,且成苗率低,阻礙了甘蔗新品種的快速推廣和開發(fā)利用。而且關(guān)于在培養(yǎng)基質(zhì)中添加有機(jī)物對培養(yǎng)物的分化與增殖有明顯的促進(jìn)作用,很多人做了相關(guān)的應(yīng)用研究,但都是闡述了有機(jī)添加物對植物組培過程中的分化與增殖生長的影響,并未對組培物的繼代保持有結(jié)論。如果能延長繼代周期,縮短繼代次數(shù),不但有利于降低變異,工廠化生產(chǎn)也極其便利。因此,對目前現(xiàn)有的培養(yǎng)基進(jìn)行改進(jìn)或?qū)⒛壳艾F(xiàn)有的方法綜合改良是很有必要的。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素:
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是克服上述現(xiàn)有技術(shù)的缺陷和不足,針對甘蔗新品種粵糖03-373,尋找到高效的適合其幼苗生長發(fā)育的有機(jī)添加物或其組合,可有效提高粵糖03-373組培苗的假植成活率和移栽成活率,降低其變異系數(shù),培養(yǎng)周期短,增殖苗量大,可以滿足工廠化快繁的要求,加速新品種粵糖03-373的快速推廣和開發(fā)利用,是一種更加高效、低成本的粵糖03-373的組培快繁生產(chǎn)方法。
本發(fā)明的目的是提供一種甘蔗新品種粵糖03-373的組培快繁方法。
本發(fā)明上述目的通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn):
一種甘蔗新品種粵糖03-373的組培快繁方法,步驟包括外植體的預(yù)處理與培養(yǎng)、分化誘導(dǎo)培養(yǎng)、繼代增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)與移栽,所述外植體的預(yù)處理與培養(yǎng)包括莖尖培養(yǎng)、腋芽培養(yǎng)或愈傷組織培養(yǎng);其中,誘導(dǎo)莖尖與腋芽萌發(fā)的培養(yǎng)基中ba與iba的濃度比為1:(0~0.08)mg/l,誘導(dǎo)愈傷組織脫分化的培養(yǎng)基中2,4-d的濃度為0.5~2.5mg/l,誘導(dǎo)愈傷組織再分化的培養(yǎng)基中ba與iba的濃度比為1:(0~0.08)mg/l,繼代增殖培養(yǎng)基中ba與iba的濃度比為(0.5~1.5)mg/l:(0.01~0.1)mg/l,生根培養(yǎng)基中abt與iba的濃度比為(0~1.0)g/l:(0~1.5)mg/l。
更優(yōu)地,所述誘導(dǎo)愈傷組織脫分化的培養(yǎng)基包括ms培養(yǎng)基,2,4-d1.0mg/l;所述誘導(dǎo)愈傷組織再分化的培養(yǎng)基包括ms培養(yǎng)基,ba0.5mg/l,iba0.01mg/l;所述誘導(dǎo)莖尖與腋芽萌發(fā)的培養(yǎng)基包括ms培養(yǎng)基,ba1.0mg/l,iba0.04mg/l;所述繼代增殖培養(yǎng)基包括ms培養(yǎng)基,ba1.0mg/l,iba0.04mg/l;所述生根培養(yǎng)基包括1/2ms培養(yǎng)基,abt0.20g/l,iba0.05mg/l,活性碳0.5g/l。
更優(yōu)地,所述誘導(dǎo)愈傷組織脫分化的培養(yǎng)基、誘導(dǎo)愈傷組織再分化的培養(yǎng)基、誘導(dǎo)莖尖與腋芽萌發(fā)的培養(yǎng)基、繼代增殖培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基中均添加有2%~5%蔗糖、0.5%~1.0%卡拉膠,ph值為5.2~6.0。
更優(yōu)地,所述莖尖與腋芽萌發(fā)培養(yǎng)基為:ms培養(yǎng)基+ba1.0mg/l+iba0.04mg/l+蔗糖3%+卡拉膠0.6%,ph值為5.8;所述誘導(dǎo)愈傷組織脫分化的培養(yǎng)基為:ms培養(yǎng)基+2,4-d1.0mg/l+蔗糖3%+卡拉膠0.6%,ph值為5.8;所述誘導(dǎo)愈傷組織再分化的培養(yǎng)基為:ms培養(yǎng)基+ba0.5mg/l+iba0.01mg/l+蔗糖3%+卡拉膠0.6%,ph值為5.8。
更優(yōu)地,所述繼代增殖的培養(yǎng)基為:ms培養(yǎng)基+ba1.0mg/l+iba0.04mg/l+蔗糖3%+卡拉膠0.6%,ph值為5.8。
更優(yōu)地,所述生根培養(yǎng)基為:1/2ms培養(yǎng)基+abt0.2g/l+iba0.05mg/l+活性炭0.5g/l+蔗糖3%+卡拉膠0.6%,ph值為5.8。
更優(yōu)地,所述外植體的預(yù)處理與培養(yǎng)中莖尖培養(yǎng)、腋芽培養(yǎng)的條件為:先弱光照1000~2000lux培養(yǎng)5d,然后強(qiáng)光照2000~5000lux下培養(yǎng)5~10d,溫度28±2℃;外植體的預(yù)處理與培養(yǎng)中愈傷組織培養(yǎng)的條件為暗培養(yǎng)5~20d,溫度28±2℃。
更優(yōu)地,所述分化誘導(dǎo)培養(yǎng)的條件為:光照培養(yǎng)20~45d,每15d更換一次培養(yǎng)基,每天光照12h,光照度為1500~30001ux,溫度(28±2)℃。
更優(yōu)地,所述繼代增殖培養(yǎng)的條件為:光照培養(yǎng)15~25d換一次培養(yǎng)基,增殖培養(yǎng)4~5次,每天光照12h,光照度為2000~30001ux,溫度(28±2)℃。
更優(yōu)地,所述繼代增殖培養(yǎng)基中還包括不同濃度的椰汁、水解酪蛋白和酵母提取物。
以上所述中,ms為植物組織培養(yǎng)使用最普遍的一種培養(yǎng)基名稱,主要成分為植物生長所需多種化學(xué)物質(zhì),足以滿足植物在營養(yǎng)上和生理上的需求,其配方公開使用;2,4-d為一種植物生長素,化學(xué)名稱為2,4-二氯苯氧乙酸,ba是一種細(xì)胞分裂素,化學(xué)名稱為芐氨基腺嘌呤;iba化學(xué)名稱為吲哚丁酸,是一種植物生長調(diào)節(jié)劑;abt又叫生根粉,其主要成分為吲哚丁酸鉀和萘乙酸鈉。所述的ms培養(yǎng)基、2,4-d、ba、iba、abt均可在市場上購買到。
與現(xiàn)有技術(shù)相比,本發(fā)明具有如下有益效果:
本發(fā)明通過探討不同植物生長調(diào)節(jié)劑配比對愈傷組織脫分化和再分化誘導(dǎo)、莖尖與腋芽萌發(fā)誘導(dǎo)、叢芽增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)的影響,不斷優(yōu)化關(guān)鍵增殖培養(yǎng)基的配方和關(guān)鍵培養(yǎng)步驟的條件,并在試驗(yàn)中總結(jié)得出適合粵糖03-373甘蔗的最佳綜合組培方案,為粵糖03-373甘蔗的快繁生產(chǎn)提供了理論和技術(shù)支持。
本發(fā)明采用簡易的沙培方式,組培苗的假植成活率達(dá)99%以上;大田移栽成活率達(dá)98%,同時(shí)該綜合組培方案培養(yǎng)生產(chǎn)的組培苗長得粗壯,葉大、嫩綠,根系更為發(fā)達(dá),素質(zhì)高。因此,本發(fā)明通過愈傷組織途徑和莖尖與腋芽繁殖途徑、移栽馴化建立了該品種的組培快繁綜合技術(shù)體系,培養(yǎng)周期短,增殖苗量大,可以滿足工廠化快繁的要求。
附圖說明
圖1為本發(fā)明粵糖03-373甘蔗組培快繁移栽2周后的假植苗圃。
圖2為本發(fā)明粵糖03-373甘蔗組培快繁大田移栽。
具體實(shí)施方式
以下結(jié)合說明書附圖和具體實(shí)施例來進(jìn)一步說明本發(fā)明,但實(shí)施例并不對本發(fā)明做任何形式的限定。除非特別說明,本發(fā)明采用的試劑、方法和設(shè)備為本技術(shù)領(lǐng)域常規(guī)試劑、方法和設(shè)備。
除非特別說明,以下實(shí)施例所用試劑和材料均為市購。
實(shí)施例1甘蔗新品種粵糖03-373的組培快繁生產(chǎn)方法
1、試驗(yàn)材料:以甘蔗新品種粵糖03-373的成熟種莖為外植體進(jìn)行試驗(yàn)。
于2015年9月至2016年12月在廣州甘蔗糖業(yè)研究所湛江甘蔗研究中心的“國家甘蔗健康種苗繁育基地”進(jìn)行。
2、甘蔗新品種粵糖03-373的組培快繁生產(chǎn)方法,步驟如下:
s1:外植體的預(yù)處理與培養(yǎng)
(1)莖尖培養(yǎng)
將供試材料蔗尾截?cái)嗖內(nèi)ネ鈬~片,用75%的酒精表面消毒,剝?nèi)ネ鈱喻[片及心葉,剝出1~2mm大小的莖尖,并迅速接種到莖尖培養(yǎng)基上。弱光照(1000~2000lux)培養(yǎng)5d,置于強(qiáng)光照(3000~5000lux)下培養(yǎng)5~10d,溫度(28±2)℃。
(2)腋芽培養(yǎng)
選取具有飽滿、成熟芽的甘蔗莖,剝?nèi)フ崛~,切成雙芽莖段,清水洗凈,以2%石灰水泡30min,置于河沙中(保證芽點(diǎn)露出),經(jīng)52℃溫湯浸種30~60min、50℃恒溫培養(yǎng)進(jìn)行快速催芽,側(cè)芽萌發(fā)率達(dá)98%,7d左右生長至約7~10cm。小心取下萌發(fā)蔗芽,在超凈工作臺上用75%(v/v)酒精擦拭,剝?nèi)ネ鈱喻[片及心葉,切取1~2mm大小的生長點(diǎn),并迅速接種到腋芽培養(yǎng)基上。弱光照(1000~2000lux)培養(yǎng)5d,置于較強(qiáng)光照(2000~3000lux)下培養(yǎng)5~10d,溫度(28±2)℃。
其中,莖尖培養(yǎng)基、腋芽培養(yǎng)基配方均為ms+ba1.0mg/l+iba0.04mg/l+蔗糖3%+卡拉膠0.6%,ph值5.8。
(3)愈傷組織培養(yǎng)
將供試材料蔗尾為外植體,先剝?nèi)プ钔鈱尤~鞘,用75%酒精輕輕噴洗表面,放人超凈工作臺中,剝至見到甘蔗幼嫩葉片,置于滅菌紙上切成1mm薄片,接種于愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上,每瓶培養(yǎng)基上接種10片,暗培養(yǎng)15~20d,溫度28±2℃。
s2:分化誘導(dǎo)培養(yǎng)
(1)莖尖途徑與腋芽途徑
分化誘導(dǎo)培養(yǎng)45d后,將誘導(dǎo)出的芽轉(zhuǎn)接在叢芽分化培養(yǎng)基上,每個處理重復(fù)8次,每個重復(fù)接種2個叢芽。培養(yǎng)條件同愈傷組織培養(yǎng)。
(2)愈傷組織途徑
將生長良好的愈傷組織隨機(jī)接種于誘導(dǎo)芽分化培養(yǎng)基中,每個組合接種10瓶。每瓶接種10個。光照培養(yǎng)20~25d,光照12h,光照度為2000~30001ux,溫度(28±2)℃。
s3:繼代增殖培養(yǎng)
將分化誘導(dǎo)培養(yǎng)獲得的芽切2~3株一叢,轉(zhuǎn)接到繼代增殖培養(yǎng)基中,每個組合中接種10瓶,每瓶接種5叢。光照培養(yǎng)20~25d換一次培養(yǎng)基,繼代增殖培養(yǎng)4~5次,光照12h,光照度為2000~30001ux,溫度28+2℃。
其中,繼代增殖培養(yǎng)基配方為ms+ba1.0mg/l+iba0.04mg/l+蔗糖3%+卡拉膠0.6%,ph值5.8。
s4:壯苗生根培養(yǎng)
叢生芽長度經(jīng)過繼代培養(yǎng)的側(cè)芽達(dá)到2.0~3.0cm時(shí),切2~3株一叢接種于壯苗生根培養(yǎng)基上,每個處理重復(fù)8次.每個重復(fù)接種10個單芽。培養(yǎng)條件同分化培養(yǎng)。
其中,生根培養(yǎng)基配方為1/2ms+abt0.20g/l+iba0.05mg/l+活性碳0.5g/l+蔗糖3%+卡拉膠0.6%,ph值5.8。
s5:甘蔗組培苗煉苗、移栽和馴化
生根培養(yǎng)后,長勢健壯的植株,開始進(jìn)行馴化移栽。
將高6~10cm生根良好的小苗整瓶置于2500~30001ux自然散射光下煉苗1周后,用自來水沖洗干凈后置于0.1%多菌靈液中消毒1~2min。移栽于鋪設(shè)1~2cm厚河沙的苗床基質(zhì)中,上方設(shè)置50~75%遮蔭網(wǎng),2周后統(tǒng)計(jì)假植成活率達(dá)99%以上(如圖1所示,長勢好、成活率高)。
1個月后,苗莖稈和葉片顏色濃綠,植株粗壯,根系更為發(fā)達(dá),大田移栽成活率為98%以上(如圖2所示,長勢好、成活率高)。綜上所述方法組培快繁粵糖03-373,生長勢強(qiáng)、抗逆性強(qiáng),在組培過程中表現(xiàn)出較強(qiáng)分化能力、易生根,適應(yīng)性強(qiáng)等特點(diǎn)。
實(shí)施例2不同2,4-d濃度對誘導(dǎo)粵糖03-373甘蔗愈傷組織脫分化的影響
(1)以愈傷組織脫分化培養(yǎng)基中的2,4-d濃度為變量,觀察不同2,4-d濃度對粵糖03-373甘蔗愈傷誘導(dǎo)率、愈傷增重和愈傷組織形態(tài)的影響。
(2)不同2,4-d濃度對誘導(dǎo)粵糖03-373甘蔗愈傷組織脫分化的影響如表1所示。
表1不同2,4-d濃度對粵糖03-373甘蔗愈傷組織脫分化的影響
由表l可以看出,當(dāng)2,4-d濃度較低時(shí),愈傷的誘導(dǎo)率低,且生長增重較慢,質(zhì)地也比較堅(jiān)硬;當(dāng)2,4-d濃度較高時(shí),愈傷的誘導(dǎo)率大幅度增加,生長增重較快,但增加到一定濃度時(shí),其愈傷組織質(zhì)量會下降,長勢逐漸變差,難以分化,甚至分化后出現(xiàn)變異。2號培養(yǎng)基中的愈傷組織長勢良好,且質(zhì)量最好。因此,最適宜誘導(dǎo)粵糖03-373甘蔗愈傷組織脫分化的培養(yǎng)基為ms+2,4-d1.0mg/l。
實(shí)施例3不同激素配比對粵糖03-373甘蔗愈傷組織再分化的影響
(1)以愈傷組織再分化培養(yǎng)基中的激素配比為變量,愈傷組織轉(zhuǎn)接到誘導(dǎo)其再分化的培養(yǎng)基中先暗培養(yǎng)5天,然后置于較強(qiáng)光照下(1500~2000lux)進(jìn)行促芽培養(yǎng)5~10天后,芽點(diǎn)逐漸變?yōu)樽仙虻G色;25~35天后,有新芽長出。
(2)統(tǒng)計(jì)新芽生長情況,結(jié)果如表2。
表2不同激素配比對粵糖03-373甘蔗愈傷組織再分化的影響
+:愈傷組織??;++:愈傷組織一般;+++:愈傷組織較大;++++:愈傷組織大且硬;同列不同字母表示差異分析達(dá)極顯著(大寫,p<0.01)和顯著水平(小寫,p<0.05)。
從表2中可知,在ms基本培養(yǎng)基中添加不同濃度的ba和iba,均可明顯提高芽的誘導(dǎo)分化能力。7種培養(yǎng)基的培養(yǎng)結(jié)果表明:在低濃度的ba處理下,愈傷出芽快、出芽率較高和芽體長勢好;對不同激素配比對芽誘導(dǎo)效果的顯著性分析表明:2號培養(yǎng)基出芽率與其他6種培養(yǎng)基誘導(dǎo)率差異顯著。因此,ms+ba0.5mg/l+iba0.01mg/l是本試驗(yàn)中誘導(dǎo)愈傷組織再分化的適宜培養(yǎng)基。
實(shí)施例4不同激素配比對誘導(dǎo)粵糖03-373甘蔗莖尖和腋芽萌發(fā)的影響
(1)以莖尖和腋芽萌發(fā)培養(yǎng)基中的激素配比為變量,莖尖和腋芽接種到培養(yǎng)基中置于弱光照(1000~2000lux)培養(yǎng)5天,強(qiáng)光下(2000~3000lux)進(jìn)行促芽培養(yǎng)5~10天后,芽原基逐漸膨大突起;10天后新芽長出,觀察記錄出芽數(shù)量情況。
(2)出芽情況結(jié)果如表3所示。
表3不同激素配比對誘導(dǎo)粵糖03-373甘蔗莖尖和腋芽的影響
注:“*”表示經(jīng)t檢驗(yàn)各處理在0.05水平差異顯著。
由表3可知,在ms基本培養(yǎng)基中添加不同濃度的ba和iba,均可明顯提高芽的誘導(dǎo)分化能力。結(jié)果表明:3號培養(yǎng)基誘導(dǎo)的出芽率與其他3種培養(yǎng)基差異顯著。因次,ms+ba1.0mg/l+iba0.04mg/l是本試驗(yàn)中誘導(dǎo)出芽的適宜培養(yǎng)基配方。
實(shí)施例5不同激素配比對粵糖03-373甘蔗叢芽增殖的影響
(1)以繼代增殖培養(yǎng)基中的激素配比為變量,經(jīng)愈傷組織途徑和莖尖與腋芽途徑獲得的芽在繼代增殖培養(yǎng)基上培養(yǎng)15~20天后,分化出叢生芽;再經(jīng)過4~5次轉(zhuǎn)接后,獲得大量叢芽。
(2)不同激素組合配比對粵糖03-373芽增殖的影響如表4所示。
表4不同激素配比對粵糖03-373甘蔗叢芽增殖的影響
同列不同字母表示差異分析達(dá)極顯著(大寫,p<0.01)和顯著水平(小寫,p<0.05)。
由表4可知,ba/iba值越大,芽的增殖率越高,但芽體越細(xì)弱;iba濃度越高,芽伸長越快,但抑制苗的增殖。當(dāng)ba/iba=10~20,ba=(1.0~1.5)mg/l,iba=(0.05~0.1)mg/l時(shí),葉片伸展,芽體生長正常,增殖系數(shù)較高。不同激素配比對叢芽增殖效果經(jīng)顯著性分析表明:5號培養(yǎng)基中芽增殖系數(shù)與其它培養(yǎng)基相比差異達(dá)極顯著水平,芽生長健壯葉片伸展、無玻璃化現(xiàn)象。因此,ms+ba1.0mg/l+iba0.05mg/l是繼代增殖的最佳培養(yǎng)基配方。
實(shí)施例6幾種添加物對粵糖03-373甘蔗組培苗繼代周期的影響
分別在組培苗繼代培養(yǎng)基(增殖培養(yǎng))中添加不同濃度椰汁、水解酪蛋白和酵母提取物,對組培苗繼代時(shí)間影響差異見表5,隨著繼代周期的延長,組培苗黃化率逐漸升高,黃化率由低到高依次為椰汁<水解酪蛋白<酵母提取物<對照。
表5幾種添加物對粵糖03-373甘蔗組培苗的影響
實(shí)施例7不同激素配比對粵糖03-373甘蔗生根的影響
(1)將叢芽分成2~3株一叢,轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)10天后,開始有白色根出現(xiàn);培養(yǎng)2~3周后長出大量白色粗壯的根,觀察記錄生根情況及長勢。
(2)生根情況及長勢結(jié)果如表6所示。
表6不同濃度的abt/iba組合對粵糖03-373組培苗生根的影響
同列不同字母表示差異分析達(dá)極顯著(大寫,p<0.01)和顯著水平(小寫,p<0.05)。
由表6可知,低濃度的abt或iba均比較容易誘導(dǎo)生根,且生根率在98%以上;而較高濃度的abt和iba均抑制組培苗生根。iba協(xié)同abt生根粉,使組培苗的根系發(fā)育良好,莖稈粗壯高大、葉片茂盛且翠綠,比單獨(dú)使用abt生根粉或iba的效果好。對不同激素配比對組培苗生根效果進(jìn)行顯著性分析表明:添加abt與iba的5號培養(yǎng)基生根率、平均每株根數(shù)與其它培養(yǎng)基相比差異達(dá)極顯著水平。因此,1/2ms+abt0.20g/l+iba0.05mg/l+活性碳0.5g/l是本試驗(yàn)中最佳的生根培養(yǎng)基。
上述實(shí)施例為本發(fā)明較佳的實(shí)施方式,但本發(fā)明的實(shí)施方式并不受上述實(shí)施例的限制,其他的任何未背離本發(fā)明的精神實(shí)質(zhì)與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡化,均應(yīng)為等效的置換方式,都包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。