本發(fā)明涉及到解一株淀粉芽孢桿菌(bacillusamyloliquefaciens)h47和短小芽孢桿菌及蘇云金桿菌微生物發(fā)酵商陸制備植物源殺蟲劑的生產(chǎn)方法，屬于微生物和發(fā)酵技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
商陸(phytolaccaacinosa)系為商陸科多年生宿根草本植物，其干燥塊根是一種應(yīng)用歷史悠久的傳統(tǒng)中藥，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》。商陸一般株高70-100cm，全株無毛，根粗壯、肉質(zhì)、圓錐形，外皮淡黃色；莖直立、多分枝、綠色或紫紅色、具縱溝；葉互生、橢圓形或卵狀橢圓形，長12-25cm，寬5-10cm，先端急尖、基部楔形而下延，全緣，側(cè)脈羽狀，主脈粗壯；葉柄長1.5-3cm，上面具槽，下面半圓形。總狀花序頂生或側(cè)生，長10-15cm；花兩性，徑約8mm，具小梗，小?；坑邪?及小苞片2；萼通常5片、偶為4片，卵形或長方狀橢圓形，初白色，后變淡紅色；無花瓣、雄蕊8，花藥淡粉紅色(少數(shù)成淡紫色)；心皮8-10，離生。漿果扁球形，徑約7mm，通常由8個分果組成，熟時紫黑色。種子腎圓形，扁平，黑色?；ㄆ?-8月。果期8-10月。廣布于長江以南紅壤低丘陵地區(qū)，在中國現(xiàn)有分布的品種中主要有商陸(野蘿卜)和垂序商陸。主產(chǎn)河南，湖北，山東，浙江，江西等。商陸根入藥，以白色肥大者為佳，紅根有劇毒，僅供外用；具有通二便，逐水、散結(jié)，治水腫、脹滿、腳氣、喉痹，外敷治癰腫瘡毒；也可作獸藥及農(nóng)藥。果實含鞣質(zhì)，可提制栲膠。嫩莖葉可供蔬食。
商陸含有多種次生代謝產(chǎn)物，包括美商陸皂苷a、b、d、e、g、f、d2等，美商陸皂苷元，2-羥基商陸酸、商陸酸、美商陸酸、3-氧代-30-甲氧基羰基-23-去甲齊墩果烷-12-烯-28-酸等。另外，有菠菜甾醇、△1-豆甾烯醇等甾醇類成分，以及天冬氨酸、谷氨酸等氨基酸類成分，并含有多糖，尚有美商陸根抗病毒蛋白和美商陸根抗真菌蛋白r1、r2，美商陸毒素，有絲分裂原，組胺等。因而具有滅螺、殺螨、殺蟲作用。
目前，植物性殺蟲劑多用有機溶劑或煎煮提取，不利于節(jié)能且有較大的環(huán)境風(fēng)險；也會影響活性物質(zhì)的穩(wěn)定性和遺失活性物質(zhì)；同時增加成本使得開發(fā)應(yīng)用困難較大，作用效果緩慢，因此給植物源殺蟲劑的研發(fā)和生產(chǎn)帶來了巨大的經(jīng)濟困難。利用合適的植物促生菌發(fā)酵商陸，不僅有利于生理活性物質(zhì)的提取，還不易造成活性物質(zhì)的失活，促生菌本身還有較好的殺蟲防病和促生作用。有利于改善植物生長和增強殺蟲效果，有利于環(huán)境保護和商陸植物本身的有效利用。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
針對現(xiàn)有技術(shù)存在的上述缺陷，本發(fā)明利用商陸植物為原料，用2013年6月24日保存于中國典型培養(yǎng)物保藏中心的，保藏編號為：cctccno：m2013283的解淀粉芽孢桿菌(bacillusamyloliquefaciens)h47(該菌株以下簡稱：解淀粉芽孢桿菌h47cctccm2013283)和市售短小芽孢桿菌及市售蘇云金桿菌發(fā)酵制備植物源殺蟲劑，有利于改善植物生長和增強殺蟲效果，有利于環(huán)境保護。
本發(fā)明的發(fā)酵技術(shù)方案：
1)菌種準(zhǔn)備：將解淀粉芽孢桿菌h47cctccm2013283和市售短小芽孢桿菌、市售蘇云金桿菌分別接種于種子培養(yǎng)基，于30℃，250r/min震蕩培養(yǎng)12h；所述種子培養(yǎng)基成分按g/l計為：蛋白胨10，酵母膏5，nacl10，其余成分為水，121℃高壓滅菌15min，調(diào)整ph至7.0。按一定比例混合做種子。
2)發(fā)酵液準(zhǔn)備：選用質(zhì)量優(yōu)良的商陸，用水沖洗，70％—75％酒精浸泡3min，用水洗凈，經(jīng)攪碎機攪碎后待用。
3)發(fā)酵罐空消及空氣管道消毒：按相關(guān)說明書進行發(fā)酵罐空消。
4)發(fā)酵液實消：將步驟2所得商陸放入發(fā)酵罐中，補充自來水至終體積為10l，按相關(guān)說明書進行實消滅菌。
5)接種培養(yǎng)：當(dāng)發(fā)酵罐溫度降至37℃時，將步驟1所得種子按體積比1％的接種量，接種至裝有商陸的發(fā)酵罐中，25—30℃條件下培養(yǎng)3—12天，設(shè)置工藝要求的通氣量并保持罐壓，設(shè)置各其他培養(yǎng)參數(shù)培養(yǎng)。
6)出料：培養(yǎng)完畢，放出發(fā)酵液，過濾，過濾后所得發(fā)酵液即為殺蟲劑成品。
本發(fā)明的有益效果：
本發(fā)明提供了發(fā)酵商陸制得一種生物源殺蟲劑的方法。本發(fā)明制備方法及過程中無污染安全可靠，發(fā)酵時間周期短，工藝環(huán)節(jié)少，簡單易操作，可節(jié)省投資和運行費用。與傳統(tǒng)化學(xué)藥劑相比，其具綠色安全，環(huán)境友好等優(yōu)勢，且促生菌本身還有較好的殺蟲防病和促生作用，擁有廣闊的應(yīng)用前景。
具體實施方法：
下面結(jié)合實施例對本發(fā)明進行進一步描述。以下實施例僅為本發(fā)明的幾個具體實施例，但本發(fā)明的設(shè)計構(gòu)思并不局限于此，凡利用此構(gòu)思對本發(fā)明進行非實質(zhì)性的改動，均應(yīng)屬于侵犯本發(fā)明保護范圍的行為。
實施例1
1)菌種準(zhǔn)備：將解淀粉芽孢桿菌h47cctccm2013283和市售短小芽孢桿菌、市售蘇云金桿菌分別接種于種子培養(yǎng)基，于30℃，250r/min震蕩培養(yǎng)12h；所述種子培養(yǎng)基成分按g/l計為：蛋白胨10，酵母膏5，nacl10，其余成分為水，121℃高壓滅菌15min，調(diào)整ph至7.0。按1:1:1混合做種子。
2)發(fā)酵液準(zhǔn)備：選用質(zhì)量優(yōu)良的商陸，用水沖洗，70％—75％酒精浸泡3min，用水洗凈，經(jīng)攪碎機攪碎后待用。
3)發(fā)酵罐空消及空氣管道消毒：按相關(guān)說明書進行發(fā)酵罐空消。
4)發(fā)酵液實消：將步驟2所得商陸放入發(fā)酵罐中，補充自來水至終體積為10l，按相關(guān)說明書進行實消滅菌。
5)接種培養(yǎng)：當(dāng)發(fā)酵罐溫度降至37℃時，將步驟1所得種子按體積比1％的接種量，接種至裝有商陸的發(fā)酵罐中，25—30℃條件下培養(yǎng)3—12天，設(shè)置工藝要求的通氣量并保持罐壓，設(shè)置各其他培養(yǎng)參數(shù)培養(yǎng)。
6)出料：培養(yǎng)完畢，放出發(fā)酵液，過濾，過濾后所得發(fā)酵液即為殺蟲劑成品。
實施例2
1)菌種準(zhǔn)備：將解淀粉芽孢桿菌h47cctccm2013283和市售短小芽孢桿菌、市售蘇云金桿菌分別接種于種子培養(yǎng)基，于30℃，250r/min震蕩培養(yǎng)12h；所述種子培養(yǎng)基成分按g/l計為：蛋白胨10，酵母膏5，nacl10，其余成分為水，121℃高壓滅菌15min，調(diào)整ph至7.0。按1:2:1混合做種子。
2)發(fā)酵液準(zhǔn)備：選用質(zhì)量優(yōu)良的商陸，用水沖洗，70％—75％酒精浸泡3min，用水洗凈，經(jīng)攪碎機攪碎后待用。
3)發(fā)酵罐空消及空氣管道消毒：按相關(guān)說明書進行發(fā)酵罐空消。
4)發(fā)酵液實消：將步驟2所得商陸放入發(fā)酵罐中，補充自來水至終體積為10l，按相關(guān)說明書進行實消滅菌。
5)接種培養(yǎng)：當(dāng)發(fā)酵罐溫度降至37℃時，將步驟1所得種子按體積比1％的接種量，接種至裝有商陸的發(fā)酵罐中，25—30℃條件下培養(yǎng)3—12天，設(shè)置工藝要求的通氣量并保持罐壓，設(shè)置各其他培養(yǎng)參數(shù)培養(yǎng)。
6)出料：培養(yǎng)完畢，放出發(fā)酵液，過濾，過濾后所得發(fā)酵液即為殺蟲劑成品。
實施例3
1)菌種準(zhǔn)備：將解淀粉芽孢桿菌h47cctccm2013283和市售短小芽孢桿菌、市售蘇云金桿菌分別接種于種子培養(yǎng)基，于30℃，250r/min震蕩培養(yǎng)12h；所述種子培養(yǎng)基成分按g/l計為：蛋白胨10，酵母膏5，nacl10，其余成分為水，121℃高壓滅菌15min，調(diào)整ph至7.0。按1:1:2混合做種子。
2)發(fā)酵液準(zhǔn)備：選用質(zhì)量優(yōu)良的商陸，用水沖洗，70％—75％酒精浸泡3min，用水洗凈，經(jīng)攪碎機攪碎后待用。
3)發(fā)酵罐空消及空氣管道消毒：按相關(guān)說明書進行發(fā)酵罐空消。
4)發(fā)酵液實消：將步驟2所得商陸放入發(fā)酵罐中，補充自來水至終體積為10l，按相關(guān)說明書進行實消滅菌。
5)接種培養(yǎng)：當(dāng)發(fā)酵罐溫度降至37℃時，將步驟1所得種子按體積比1％的接種量，接種至裝有商陸的發(fā)酵罐中，25—30℃條件下培養(yǎng)3—12天，設(shè)置工藝要求的通氣量并保持罐壓，設(shè)置各其他培養(yǎng)參數(shù)培養(yǎng)。
6)出料：培養(yǎng)完畢，放出發(fā)酵液，過濾，過濾后所得發(fā)酵液即為殺蟲劑成品。