專利名稱：商陸莖節(jié)快速繁殖的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)領(lǐng)域，具體涉及一種利用植物器官直接誘導(dǎo)其形成完整植株 的快速繁殖植物的方法。
背景技術(shù)：
商陸是具有多種功能的多年生草本植物。隨著商陸的深入應(yīng)用，人們對(duì)商陸的認(rèn)識(shí)和研 究已經(jīng)到達(dá)分子水平,希望通過(guò)分子生物學(xué)方法來(lái)定向改良商陸的性狀，以獲取更大利益。例 如通過(guò)轉(zhuǎn)基因降低或去除其毒性、篩選抗病毒高產(chǎn)植株和色素高產(chǎn)植株等。然而，無(wú)論是 植物的轉(zhuǎn)基因研究還是篩選某種代謝產(chǎn)物的高產(chǎn)植株都是以此種植物的快速繁殖為基礎(chǔ)的。
目前，國(guó)內(nèi)外植物的快速繁殖多采用組織培養(yǎng)和細(xì)胞培養(yǎng)的方法來(lái)實(shí)現(xiàn)，以組織培養(yǎng)應(yīng) 用更多。但是有關(guān)商陸通過(guò)組織培養(yǎng)來(lái)快速繁殖的研究則鳳毛麟角。雖然有人試圖通過(guò)莖尖 繁殖來(lái)到達(dá)快繁的目的，但是對(duì)于一株植物來(lái)說(shuō)莖尖數(shù)量終歸用限，很難達(dá)到短時(shí)間內(nèi)大規(guī) ?？焖俜敝车哪康摹Ｒ灿腥讼胪ㄟ^(guò)培養(yǎng)愈傷組織誘導(dǎo)分化來(lái)進(jìn)行商陸的快繁，但最終沒(méi)有取 得成功。

發(fā)明內(nèi)容
為了解決商陸快速繁殖這一技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供一種商陸快繁方法。此方法能快速有 效的誘導(dǎo)商陸莖節(jié)腋芽的形成，然后誘導(dǎo)腋芽生根，并最終形成一個(gè)完整的商陸植株。
本發(fā)明所依據(jù)的原理是植物細(xì)胞具有全能性即任何具有完整細(xì)胞核的植物細(xì)胞，都 擁有形成一個(gè)完整植珠所必須的全部遺傳信息和發(fā)育成完整植株的能力。這就是植物組織 培養(yǎng)的基本原理，而快速繁殖則是植物組織培養(yǎng)中的一種方式，即利用植物的某種器官直 接或間接誘導(dǎo)其發(fā)芽和生根，并最終形成一個(gè)完整的植株。
本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是用商陸無(wú)菌苗的莖節(jié)作為外植體，將其接種在腋芽分化 增殖培養(yǎng)基上誘導(dǎo)發(fā)芽和增殖，然后將長(zhǎng)到一定高度的分化芽切下插入生根培養(yǎng)基進(jìn)行誘 導(dǎo)生根，待根系發(fā)達(dá)后，進(jìn)行煉苗和移栽，進(jìn)而獲得完整的商陸植株。上述方法中所說(shuō)的腋芽分化增殖培養(yǎng)基成分如下-基本培養(yǎng)基為MS、 1/2MS、 B5、 H或LS; 激素為6-BA: 0.5 2.0mg/L， IBA: 0 1.0mg/L; 蔗糖20g/L;
瓊脂7g/L。
上述方法中所說(shuō)的生根培養(yǎng)基成分如下 基本培養(yǎng)基為MS或1/2MS;
激素為IBA: 0 1.0mg/L;
蔗糖20g/L; 瓊脂7g/L。
本發(fā)明建立了商陸快速繁殖的方法，大大縮短了商陸繁殖的時(shí)間，改變了傳統(tǒng)的繁殖 方式。填補(bǔ)了沒(méi)有關(guān)于商陸快繁研究的空白。
具體實(shí)施例方式
在本發(fā)明中所使用的術(shù)語(yǔ)，除非有另外說(shuō)明， 一般具有本領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常理解的 含義。
下面結(jié)合具體的實(shí)施例，并參照數(shù)據(jù)進(jìn)一步詳細(xì)地描述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例只 是為了舉例說(shuō)明本發(fā)明，而非以任何方式限制本發(fā)明的范圍。
在以下的實(shí)施例中，未詳細(xì)描述的各種過(guò)程和方法是本領(lǐng)域中公知的常規(guī)方法。所用 試劑的來(lái)源、商品名以及有必要列出其組成成分者，均在首次出現(xiàn)時(shí)標(biāo)明，其后所用相同 試劑如無(wú)特殊說(shuō)明，均以首次標(biāo)明的內(nèi)容相同。
實(shí)施例
按如下成分配制主要培養(yǎng)基
初始培養(yǎng)基
基本培養(yǎng)基為MS; 蔗糖20g/L;
4瓊脂7g/L。 腋芽分化增殖培養(yǎng)基
基本培養(yǎng)基為MS、 1/2MS、 B5、 H或LS; 激素為6-BA: 0.5 2.0mg/L， IBA: 0 1.0mg/L;
蔗糖20g/L; 瓊脂7g/L。 生根培養(yǎng)基
基本培養(yǎng)基為MS或1/2MS;
激素為IBA: 0 1.0mg/L;
蔗糖20g/L; 瓊脂7g/L。
上述培養(yǎng)基用lmol/L的NaOH或HCl調(diào)至pH為5.8，高壓滅菌(15鎊，12rC，20min)。
各種激素采用過(guò)濾滅菌，在培養(yǎng)基高壓滅菌后加入。
1、 種子的表面消毒和無(wú)菌苗的培養(yǎng)
取成熟飽滿的商陸種子，在流水中沖洗3h，然后在濃硫酸中浸泡15min,然后用無(wú)菌 水沖洗5 8次，最后接種到初始培養(yǎng)基(MS+20g/L蔗糖+7g/L瓊脂)上。于26士rC下暗 培養(yǎng)1W，然后轉(zhuǎn)入26士rC， 2000LUX光照培養(yǎng)，光/暗周期為16hr/8hr， 2W后獲得商陸
無(wú)菌實(shí)生苗。
2、 商陸莖節(jié)腋芽增殖的誘導(dǎo)
待商陸成苗后,在超靜工作臺(tái)中切取莖節(jié)部分大約0.5cm作為外植體，將其接種于腋芽分 化增殖培養(yǎng)基(MS+20g/L蔗糖+7g/L瓊脂+0.5mg/L 6-BA+0.2 mg/L IBA)上，于溫度為26 士rC，光照強(qiáng)度為2000LUX培養(yǎng),光/暗周期為16hr/8hr培養(yǎng)一個(gè)月，統(tǒng)計(jì)腋芽增殖情況。
3、 商陸腋芽生根的誘導(dǎo)
當(dāng)腋芽生長(zhǎng)到1 2cm高的時(shí)候，將芽切下，接種到生根培養(yǎng)基上(MS+20g/L蔗糖+7g/L瓊脂+0.2mg/LIBA)誘導(dǎo)腋芽生根。然后將其置于溫度為26± 1'C ，光照強(qiáng)度為2000LUX 培養(yǎng)，光/暗周期為16hr/8hr培養(yǎng)一個(gè)月，統(tǒng)計(jì)腋芽的生根情況。
4、 商陸的煉苗培養(yǎng)
當(dāng)將商陸分化苗培養(yǎng)到10cm高，根系發(fā)達(dá)后，逐步將培養(yǎng)瓶的蓋子打開(kāi)對(duì)其進(jìn)行煉苗 培養(yǎng)。煉苗大約需要3 5天。
5、 商陸分化苗的移栽
當(dāng)煉苗完成后，將小苗從培養(yǎng)瓶中取出，洗去根部殘留的培養(yǎng)基，然后將生根的分化 苗移栽到含有培養(yǎng)土的花缽中。缽?fù)馓咨贤腹庑院玫乃芰媳∧ひ员ＷC濕度，然后將其置于 組培箱中按培養(yǎng)分化苗的條件進(jìn)行培養(yǎng)。 一周后，去除塑料薄膜，并把小商陸植株置于溫 室中培養(yǎng)。此時(shí)植株可正常生長(zhǎng)發(fā)育，完成了整個(gè)生長(zhǎng)過(guò)程。
6、數(shù)據(jù)處理以及統(tǒng)計(jì)方法
(1) 腋芽分化率(％)=(分化的外植體數(shù)/外植體總數(shù)^100%
(2) 腋芽增殖倍數(shù)=外植體分化出的腋芽數(shù)/外植體總數(shù)
(3) 生根頻率(％)=(生根的分化苗數(shù)/分化苗總數(shù))400%
(4) 平均根數(shù)=分化苗總根數(shù)/生根的分化苗數(shù)
通過(guò)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)處理，我們得到結(jié)果，采用上述方法處理我們成功的誘導(dǎo)了莖節(jié)腋芽的 分化和增殖，誘導(dǎo)一個(gè)月后的腋芽分化率可達(dá)到100%，芽增殖倍數(shù)為2.4。而誘導(dǎo)生根的 狀況更佳，通過(guò)上述培養(yǎng)基的誘導(dǎo)生根，2W后分化芽開(kāi)始生根， 一個(gè)月后根生長(zhǎng)成熟。統(tǒng) 計(jì)結(jié)果為其根的誘導(dǎo)率可達(dá)100%，根系發(fā)達(dá)，平均根數(shù)為4。在此根系發(fā)達(dá)的基礎(chǔ)上進(jìn)行 煉苗和移栽都進(jìn)行的非常順利，最終我們成功的完成了商陸分化苗的整個(gè)生長(zhǎng)過(guò)程。
權(quán)利要求
1、一種商陸莖節(jié)快速繁殖的方法，其特征在于，是用商陸無(wú)菌苗的莖節(jié)作為外植體，將其接種在腋芽分化增殖培養(yǎng)基上誘導(dǎo)發(fā)芽和增殖，然后將長(zhǎng)到一定高度的分化芽切下插入生根培養(yǎng)基進(jìn)行誘導(dǎo)生根，待根系發(fā)達(dá)后，進(jìn)行煉苗和移栽，進(jìn)而獲得完整的商陸植株。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所說(shuō)的商陸莖節(jié)快速繁殖的方法，其特征在于，其中所說(shuō)的腋芽分 化增殖培養(yǎng)基成分如下基本培養(yǎng)基為MS、 1/2MS、 B5、 H或LS; 激素為6-BA: 0.5 2.0mg/L， IBA: 0 1.0mg/L;蔗糖20g/L; 瓊脂7g/L。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所說(shuō)的商陸莖節(jié)快速繁殖的方法，其特征在于，其中所說(shuō)的生根培 養(yǎng)基成分如下基本培養(yǎng)基為MS或1/2MS;激素為IBA: 0 1.0mg/L;蔗糖20g/L; 瓊脂7g/L。
全文摘要
本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)領(lǐng)域，具體涉及一種商陸莖節(jié)快速繁殖的方法。本發(fā)明用商陸無(wú)菌苗的莖節(jié)作為外植體，將其接種在腋芽分化增殖培養(yǎng)基上誘導(dǎo)發(fā)芽和增殖，然后將長(zhǎng)到一定高度的分化芽切下插入生根培養(yǎng)基進(jìn)行誘導(dǎo)生根，待根系發(fā)達(dá)后，進(jìn)行煉苗和移栽，進(jìn)而獲得完整的商陸植株，完成了商陸的整個(gè)生長(zhǎng)過(guò)程。本發(fā)明建立了商陸快速繁殖的方法，大大縮短了商陸繁殖的時(shí)間，改變了傳統(tǒng)的繁殖方式。填補(bǔ)了沒(méi)有關(guān)于商陸快繁研究的空白。
文檔編號(hào)C12N5/04GK101438678SQ20081024323
公開(kāi)日2009年5月27日 申請(qǐng)日期2008年12月26日 優(yōu)先權(quán)日2008年12月26日
發(fā)明者鄭鐵松, 靜 陳 申請(qǐng)人:南京師范大學(xué)